試樣的分析方法、其中使用的溶液以及試樣分析用盒的制作方法
【專利摘要】本發明提供一種能夠提高分析精度的使用毛細管電泳的試樣的分析方法、其中使用的溶液以及試樣分析用盒。在一種方式中涉及試樣分析方法，包括通過毛細管電泳進行試樣中的分析對象物質的分離和／或檢測，在pH緩沖物質和非表面活性劑型的兩性離子物質的存在下進行分析對象物質的分離和／或檢測。另外，在另一種方式中涉及毛細管電泳用溶液，含有pH緩沖物質、非表面活性劑型的兩性離子物質和水。
【專利說明】試樣的分析方法、其中使用的溶液以及試樣分析用盒
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種試樣的分析方法、毛細管電泳用溶液及試樣分析用盒(kit)。
【背景技術】
[0002]作為利用了毛細管電泳法的血中蛋白質的分析方法，W公開了通過毛細管電泳法分析血紅蛋白的方法。W公開了含有富馬酸、硫氰酸鈉、精氨酸和硫酸軟骨素C的pH4.8的電泳液。另外，該文獻還公開了血中蛋白質的分析時間在35秒以下。
[0003]JPA公開了通過毛細管電泳法測定穩定型HbAlc的方法。作為電泳緩沖液，JPA公開了含有亞硝酸鈉和表面活性劑的檸檬酸緩沖液(pH6.0)或含有亞硝酸鉀和硫酸葡聚糖的蘋果酸緩沖液(PH5.2)。
[0004]JPA公開了通過使用含有脂肪族二胺或脂肪族多胺等的流動抑制劑的兩性離子緩沖液的毛細管電泳法分析血紅蛋白的方法。作為分析緩沖溶液，JPA公開了三(羥甲基)甲基甘氨酸/ 1，4-二氨基丁烷緩沖液(ρΗ9.37)、三(羥甲基)甲基甘氨酸/ 1，5_ 二氨基戊烷緩沖液(ρΗ9.37)、三(羥甲基)甲基甘氨酸/ 二乙烯三胺緩沖液(ΡΗ9.40)、三(羥甲基)甲基甘氨酸/ Ν，Ν，Ν’，Ν’_四甲基-1，4-丁二烯胺緩沖液(ρΗ9.19)。
[0005]JP09(1997)-510792A中作為適合糖化血紅蛋白的毛管電泳檢測的緩沖液，公開了含有水、糖絡合化合物(硼酸、硼砂等)、為了使緩沖液為PH9?12的充分的堿化合物、以及pKa是9?12的兩性離子化合物的緩沖液。
[0006]W公開了通過毛細管電泳法進行的血紅蛋白的分析方法。W中作為毛細管中所含的緩沖液，公開了將非離子性表面活性劑(十二烷基麥芽糖苷等)添加到含有富馬酸、精氨酸和硫酸軟骨素C的緩沖液(pH4.8)中的緩沖液。

【發明內容】

[0007]使用毛細管電泳法的試樣的分析方法有需要的試樣少和裝置能夠小型化等優點。另一方面，從用于臨床檢查的觀點看，更期待著提高精度和縮短分析時間。
[0008]可是，當要謀求縮短分析時間時，會引起電流值的增加和/或發熱，有血紅蛋白熱變性、峰寬度增大、高鐵血紅蛋白發生、毛細管內中的氣泡發生等的可能，存在分析精度不足的問題。例如，在W中血紅蛋白的熱變性成為問題，在JPA中由亞硝酸鹽的添加引起電流值的增加導致的發熱量的增加成為問題，任一個都難以提高分析精度。另外，在JPA和JP09 (1997)-510792A中存在測定時間長(例如，10分鐘以上)、實質上不能適用于希望在短時間內處理多個試樣的臨床檢查的問題。而且，在W的方法中有由于表面活性劑的作用從而血紅蛋白變性、峰寬度增大、高鐵血紅蛋白發生等的可能，存在分析精度不足的問題。
[0009]因此，本發明在一個方式中提供一種能夠提高分析精度的使用毛細管電泳的試樣的分析方法、毛細管電泳用溶液、以及試樣分析用盒。
[0010]本發明在一個方式中涉及試樣分析方法，包括通過毛細管電泳進行試樣中的分析對象物質的分離和/或檢測，在pH緩沖物質和非表面活性劑型的兩性離子物質的存在下進行分析對象物質的分離和/或檢測。
[0011]本發明在其它方式中涉及毛細管電泳用溶液，該毛細管電泳用溶液含有pH緩沖物質、非表面活性劑型的兩性離子物質和水。
[0012]本發明在其它方式中涉及試樣分析用盒，該試樣分析用盒包括本發明的毛細管電泳用溶液和毛細管電泳芯片，所述毛細管電泳芯片是包括試樣保持槽、電泳緩沖液保持槽和毛細管流路，所述試樣保持槽和所述電泳緩沖液保持槽通過所述毛細管流路連通的電泳
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[0013]根據本發明，在一種方式中，可以提供一種能夠提高分析精度的使用了毛細管電泳的試樣的分析方法、毛細管電泳用溶液、或試樣分析用盒。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1 (A)是示出毛細管電泳芯片的一種實施方式的平面圖，圖1 (B)是從1-1方向觀察圖1(A)所示的電泳芯片的截面圖；
[0015]圖2的(A)示出通過使用實施例1的毛細管電泳用溶液的毛細管電泳法得到的電泳圖譜的一例，圖2的(B)示出通過使用實施例2的毛細管電泳用溶液的毛細管電泳法得到的電泳圖譜的一例，圖2的(C)示出通過使用比較例I的毛細管電泳用溶液的毛細管電泳法的電泳圖譜的一例；
[0016]圖3的(A)示出通過使用實施例3的毛細管電泳用溶液的毛細管電泳法得到的電泳圖譜的一例，圖3的(B)示出通過使用實施例4的毛細管電泳用溶液的毛細管電泳法得到的電泳圖譜的一例，圖3的(C)示出通過使用比較例2的毛細管電泳用溶液的毛細管電泳法得到的電泳圖譜的一例；
[0017]圖4的(A)示出通過使用實施例5的毛細管電泳用溶液的毛細管電泳法得到的電泳圖譜的一例，圖4的(B)示出通過使用比較例3的毛細管電泳用溶液的毛細管電泳法得到的電泳圖譜的一例，圖4的(C)示出通過使用比較例4的毛細管電泳用溶液的毛細管電泳法得到的電泳圖譜的一例；
[0018]圖5示出通過使用實施例3的毛細管電泳用溶液的毛細管電泳法得到的電泳圖譜的一例。
【具體實施方式】
[0019]本發明在一種方式中，基于以下見解:在毛細管電泳法的泳動中當使分離對象的物質組和非表面活性劑型的兩性離子物質存在時，可以通過使電泳中的電流值降低來防止發熱，由此可以提高分析精度。即，本發明在一種方式中涉及試樣分析方法，包括通過毛細管電泳進行試樣中的分析對象物質的分離和/或檢測，在pH緩沖物質和非表面活性劑型的兩性離子物質的存在下進行分析對象物質的分離和/或檢測。另外，本發明在其它方式中涉及試樣分析方法，包括將試樣導入填充有電泳緩沖液的毛細管流路，以及對所述流路的全部或一部分施加電壓來進行毛細管電泳，進行所述試樣中的分析對象物質的分離和/或檢測，在pH緩沖物質和非表面活性劑型的兩性離子物質的存在下進行分析對象物質的分離和/或檢測。[非表面活性劑型的兩性離子物質]
[0020]在本發明中“非表面活性劑型的”是指在一種或多種實施方式中，不形成膠團。在本發明中“不形成膠團”是指在一種或多種實施方式中，在水性介質中不形成膠團或者實質上不形成膠團。在本發明中，“不形成膠團或者實質上不形成膠團”是指在一種或多種實施方式中，從提高分析精度的觀點考慮，優選為臨界膠團濃度(CMC)在200mmol / L以上，更優選為在300mmol / L以上，進一步優選為兩性離子物質不帶有臨界膠團濃度。另外，非表面活性劑型的兩性離子物質在一種或多種實施方式中，從提高分析精度的觀點考慮，優選為不具有PH緩沖作用的物質，更優選為在泳動條件的PH中不發揮或者實質上不發揮pH緩沖作用的物質。在不被限定的一種或多種實施方式中，當作為后述的PH緩沖物質在泳動條件的pH附近具有pKa的物質的濃度是40mmol / L時，即使添加IOOmmol / L非表面活性劑型的兩性離子物質，也優選為PH保持在0.2以下或0.1以下的變動，更優選為不使pH變動或不使PH實質上變動。在本發明中“泳動條件的pH”是指在一種或多種實施方式中，在泳動前被填充在毛細管內的電泳緩沖液(電泳緩沖液)的pH、或者試樣或用于調制試樣的試樣調制液的pH。
[0021]在本發明中，作為“兩性離子物質”，在不被限定的一種或多種實施方式中，可以舉出兩性離子或甜菜堿。在本發明中，“兩性離子”也稱作分子內鹽，在一種或多種實施方式中，是指在I分子內帶有正電荷和負電荷兩者的分子。在本發明中，“甜菜堿”是指在同一分子內的不相鄰隣位置帶有正電荷和負電荷，不在帶有正電荷的原子上結合可解離的氫原子，作為分子全部不帶有電荷的化合物。在本發明中，“甜菜堿”在一種或多種實施方式中包括:給出負電荷基團是磺酸基(-SO3-)的磺酸甜菜堿、給出負電荷的基是羧基(-C00-)的羧基甜菜堿、給出負電荷的基是磷酸基(-PO4-)的磷酸甜菜堿。非表面活性劑型的兩性離子物質在一種或多種實施方式中，從提高分析精度的觀點考慮，優選為非表面活性劑型的甜菜堿，更優選地，可舉出非表面活性劑型的磺酸甜菜堿和羥基甜菜堿，進一步優選為在同一分子內的不相鄰位置具有季銨陽離子和磺酸基(-SO3-)或羧基(-C00-)的非表面活性劑型的物質，更進一步優選為非表面活性劑型磺酸甜菜堿(NDSB)。作為NDSB的不被限定的一種或多種實施方式，可以舉出
[0022]
【權利要求】
1.一種試樣的分析方法,包括: 通過毛細管電泳進行試樣中的分析對象物質的分離和/或檢測，其中， 在pH緩沖物質和非表面活性劑型的兩性離子物質的存在下進行分析對象物質的分離和/或檢測。
2.一種試樣的分析方法，包括: 將試樣導入填充有電泳緩沖液的毛細管流路，以及 對所述流路的全部或一部分施加電壓來進行毛細管電泳，并進行所述試樣中的分析對象物質的分離和/或檢測，其特征在于， 在PH緩沖物質和非表面活性劑型的兩性離子物質的存在下進行分析對象物質的分離和/或檢測。
3.如權利要求1或2所述的試樣分析方法，其中，在離子性的準固定相、pH緩沖物質和非表面活性劑型的兩性離子物質的存在下進行分析對象物質的分離和/或檢測。
4.如權利要求1至3中任一項所述的試樣分析方法，其中，所述試樣含有pH緩沖物質和非表面活性劑型的兩性離子物質。
5.如權利要求1至4中任一項所述的試樣分析方法，其中，所述試樣含有離子性的準固定相、PH緩沖物質和非表面活性劑型的兩性離子物質。
6.如權利要求1至5中任一項所述的試樣分析方法，其中，非表面活性劑型的兩性離子物質是不形成膠團的兩性離子物質。
7.如權利要求1至6中任一項所述的試樣分析方法，其中，非表面活性劑型的兩性離子物質是不具有PH緩沖作用的物質。
8.如權利要求1至7中任一項所述的試樣分析方法，其中，非表面活性劑型的兩性離子物質是非表面活性劑型的甜菜堿。
9.如權利要求1至8中任一項所述的試樣分析方法，其中，非表面活性劑型的兩性離子物質是在同一分子內的不相鄰位置具有季銨陽離子以及磺酸基(-SO3-)或羧基(-C00-)的物質。
10.如權利要求1至9中任一項所述的試樣分析方法，其中，pH緩沖物質是其PKa或PKb的值被包含在泳動條件的pH的±2.0的范圍內的物質。
11.如權利要求3至10中任一項所述的試樣分析方法，其中，離子性的準固定相是陰離子性或陽尚子性的聞分子。
12.如權利要求1至11中任一項所述的試樣分析方法，其中，試樣是含有血紅蛋白的試樣。
13.如權利要求1至12中任一項所述的試樣分析方法，其中，試樣作為分析對象物質，含有被選自由穩定型HbAlc(S-HbAlc)、血紅蛋白AO (HbAO)、血紅蛋白Ala(HbAla)、血紅蛋白Alb(HbAlb)、血紅蛋白Ald(HbAld)、血紅蛋白Ale(HbAle)、血紅蛋白A2 (HbA2)、血紅蛋白S(HbS、鐮狀紅細胞血紅蛋白)、血紅蛋白F(HbF、胎兒血紅蛋白)、血紅蛋白M(HbM)、血紅蛋白C(HbC)、血紅蛋白D(HbD)、血紅蛋白E(HbE)、高鐵血紅蛋白、氨甲酰化血紅蛋白、乙酰化血紅蛋白、醛化血紅蛋白和不穩定型HbAlc(l — HbAlc)構成的組中的物質。
14.如權利要求1至13中任一項所述的試樣分析方法，其中，毛細管電泳的電泳緩沖液的pH是3.0~6.9。
15.如權利要求1至14中任一項所述的試樣分析方法，其中，離子性的準固定相是具有陰離子性基的多糖類。
16.—種毛細管電泳用溶液，含有pH緩沖物質、非表面活性劑型的兩性離子物質和水。
17.如權利要求16所述的毛細管電泳用溶液，其中，還含有離子性的準固定相。
18.如權利要求16或17所述的毛細管電泳用溶液，其中，非表面活性劑型的兩性離子物質是不形成膠團的兩性離子物質。
19.如權利要求16至18中任一項所述的毛細管電泳用溶液，其中，非表面活性劑型的兩性離子物質是不具有PH緩沖作用的物質。
20.如權利要求16至19中任一項所述的毛細管電泳用溶液，其中，非表面活性劑型的兩性離子物質是非表面活性劑型的甜菜堿。
21.如權利要求16至20中任一項所述的毛細管電泳用溶液，其中，非表面活性劑型的兩性離子物質是在同一分子內的不相鄰位置具有季銨陽離子以及磺酸基(-SO3-)或羧基(-C0CT)的物質。
22.如權利要求16至21中任一項所述的毛細管電泳用溶液，其中，pH緩沖物質是其PKa或pKb的值被包含在泳動條件的pH的±2.0的范圍內的物質。
23.如權利要求17至22中任一項所述的毛細管電泳用溶液，其中，離子性的準固定相是陰離子性或陽離子性的高分子。
24.如權利要求17至23中任一項所述的毛細管電泳用溶液，其中，離子性的準固定相是具有陰離子性基的多糖類。
25.如權利要求16至24中任一項所述的毛細管電泳用溶液，其中，電泳緩沖液的pH是3.0 ~6.9 ο
26.—種試樣分析用盒,包括權利要求16至25中任一項所述的毛細管電泳用溶液和毛細管電泳芯片， 所述毛細管電泳芯片是包括試樣保持槽、電泳緩沖液保持槽和毛細管流路，所述試樣保持槽和所述電泳緩沖液保持槽通過所述毛細管流路連通的電泳芯片。
27.如權利要求26所述的試樣分析用盒，其中，還包含校正用物質和/或精度對照用物質。
28.—種試樣分析方法,包括: 將試樣導入填充有電泳緩沖液的毛細管流路，以及 對所述流路的全部或一部分施加電壓來進行毛細管電泳，并進行所述試樣中的分析對象物質的分離和/或檢測，還包括: 使含有陰離子性的準固定相以及具有2個以上酸性官能基的酸的液體，或者含有I個堿性官能基以及具有容易變成陰離子性的官能基的弱堿化合物的液體與以陽離子性物質覆蓋毛細管內壁的毛細管接觸。
【文檔編號】G01N27/447GK103940887SQ201410030477
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年1月22日 優先權日:2013年1月22日
【發明者】大沼直嗣 申請人:愛科來株式會社