一種復方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法
【專利摘要】本發明公開了一種中藥復方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法，該方法色譜條件：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑色譜柱；流動相A為0.01mol/L～1mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.01mol/L～1mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.1%～5%甲酸溶液或0.02%～5%磷酸溶液；B為乙腈或甲醇；梯度洗脫，流速為0.5～1.5ml/min、檢測波長為190～410nm，柱溫25～55℃。該方法精密度較高，穩定性、重復性良好，能更全面、有效的控制制劑的質量。
【專利說明】一種復方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于藥物質量控制【技術領域】，具體地說，本發明涉及一種復方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法。
【背景技術】
[0002]復方阿膠漿是一種補氣養血的中成藥，在我國以應用多年。該制劑由下述原料藥制成，阿膠5份、紅參6份、熟地8份、黨參12份、山楂5份，將上述各組分制成本發明藥物的制備方法如下:
[0003]①按照上述用量稱取原料中藥材；
[0004]②上述原料中藥材加適量水提取、濃縮、過濾，備用；
[0005]③阿膠加適量水溶化，加入步驟②的藥液中，充分混勻，備用。
[0006]④在步驟③中加入適量的白糖，加熱使溶解，混勻，既得口服液。
[0007]步驟③所得混合溶液，加入藥學上可接受的輔料和/或賦形劑，采用現代工藝還可制成臨床可接受的任何劑型，如片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑等。
[0008]目前，對該制劑的檢測，一般僅以Rgl、Re、Rbl、總氮為檢測指標，但是它根本不能全面反應產品的質量，僅以此來控制中藥復方制劑的質量不是十分合理；如果用別的指標進行控制，一是含量成分較低，二是目前沒有現成的檢測方法和檢測條件，比較難于建立合適的檢測方法。

【發明內容】

[0009]本發明的目的在于提供一種復方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法及其檢測指標。
[0010]該復方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法，包括以下步驟:
[0011](I)供試品溶液的制備:精密稱取待測復方阿膠制劑，加水溶解，加0.5?3倍量乙酸乙酯、0.5?3倍量正丁醇提取，取上清液，慮過，取續濾液作為供試品溶液；
[0012](2)對照品溶液的制備:分別精密稱取人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re、黨參炔苷、毛蕊花糖苷、綠原酸用水或甲醇或乙醇溶解，定容，作為參照物溶液；
[0013](3)色譜條件:采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑色譜柱；流動相A為0.0lmol/L?lmol/L磷酸二氫鈉溶液或0.0lmol/L?lmol/L磷酸二氫鉀溶液或0.1%?5%甲酸溶液或0.02%?5%磷酸溶液；B為乙腈或甲醇；
[0014]梯度洗脫，流速為0.5?1.5ml/min、檢測波長為190?410nm,柱溫25?55°C ；
[0015](4)標準指紋圖譜的制定:以上述方法作為制定以紅參、黨參、熟地黃、山楂一種或幾種成分為主的指紋圖譜的測試手段；依據10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其他共有色譜峰的相對保留時間，其相對標準偏差不得超過±20% ；
[0016](5)以(I)?(3)所述方法檢測待測復方阿膠制劑，制備待測樣品的指紋圖譜；
[0017](6)將待測復方阿膠制劑的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應符合下列要求的部分或全部:
[0018]1.計算待測復方阿膠制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.8?
1.00 ；
[0019]I1.待測復方阿膠制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的15% ；
[0020]II1.除參照物色譜峰之外的其他共有峰與參照物色譜峰的相對保留時間與標準指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±20%。
[0021]優選的，該復方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法包括以下步驟:
[0022](I)供試品溶液的制備:精密稱取待測復方阿膠制劑，加水溶解，加四倍量配比為2:1的乙酸乙酯-正丁醇溶液提取，取上清液，用孔徑為0.45 μ m微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；
[0023](2)對照品溶液的制備:分別精密稱取人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re、黨參炔苷、毛蕊花糖苷、綠原酸，加甲醇制成每Iml含0.2mg的溶液，作為參照物溶液；
[0024](3)色譜條件:采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑色譜柱；流動相為A為
0.03mol/L磷酸二氫鉀溶液；B為乙腈；梯度洗脫，溶劑比例為從O分鐘至10分鐘，流動相B比例為0，從10分鐘至33分鐘，流動相B的比例由O至12%，從33分鐘至51分鐘，流動相B的比例由12%升至16%，從51分鐘至68分鐘，流動相B的比例由16%升至30%,從68分鐘至80分鐘，流動相B的比例由30%升至50%,流速為1.0ml/min、檢測波長為203 +Inm,柱溫，35。。；
[0025](4)標準指紋圖譜的制定:精密吸取參照物溶液與供試品溶液各15 μ 1，分別注入液相色譜儀，依據10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定指紋圖譜，共有峰8?25個，以確定的參照物色譜峰保留時間為基準，計算其他共有色譜峰的相對保留時間，其相對標準偏差不得超過±10%;
[0026](5)以(I)?(3)所述方法作為待測復方阿膠制劑中紅參、黨參、熟地黃、山楂中一種或幾種成分為主的指紋圖譜測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；
[0027](6)將待測復方阿膠制劑的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應符合下列要求的部分或全部:
[0028]1.計算待測復方阿膠制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.9?
1.0O ；
[0029]I1.待測復方阿膠制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10% ；
[0030]II1.除參照物色譜峰之外的其他共有峰與參照物色譜峰的相對保留時間與標準指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±10%。
[0031]該復方阿膠制劑可以為口服液、片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑等。
[0032]有益效果
[0033]該檢測方法包括該組方制劑中紅參、黨參、熟地黃、山楂的指紋圖譜測試方法及其主要代表成分人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re、黨參炔苷、毛蕊花糖苷、綠原酸的含量測定方法，通過指紋圖譜得到量化參數，方法精密度較高，穩定性、重復性良好，能更全面、有效的控制制劑的質量。本發明的測定方法與現有方法相比較，檢測更加準確，操作更加簡便，有效的縮短了檢測時間。【專利附圖】

【附圖說明】
[0034]圖1，0.03mol/L磷酸二氫鉀溶液作流動相的液相色譜圖
[0035]圖2，復方阿膠制劑在203nm下的液相色譜圖
[0036]圖3，復方阿膠制劑160分鐘色譜圖
[0037]圖4，復方阿膠制劑標準指紋圖譜
【具體實施方式】
[0038]實施例1:復方阿膠制劑指紋圖譜
[0039](I)實驗儀器、試劑及樣品
[0040]對照品:人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re、黨參炔苷、毛蕊花
[0041]糖昔、綠原Ife (中國藥品生物制品檢定研究院)
[0042]儀器:AgilentllOO型高效液相色譜儀
[0043](2)色譜系統及實應性試驗
[0044]①流動相的選擇
[0045]該復方阿膠制劑的主藥成分是紅參、黨參、山楂、熟地黃和阿膠的水提取物，成分復雜，有必要應用梯度分離方法使主要成分在盡可能短的洗脫時間內得到較好的分離，采用乙腈為流動相，是為了減少梯度洗脫過程中的基線漂移，有考慮到流動相中適量添加鹽可以改善分離效果，所以又考察了 0.025%磷酸鹽溶液、0.033%磷酸鹽溶液、0.5%甲酸溶液以及0.03mol/L磷酸二氫鉀溶液作為流動相。結果，應用0.03mol/L磷酸二氫鉀溶液為流動相色譜峰分離度較好，確定應用0.03mol/磷酸二氫鉀溶液為流動相。0.03mol/L磷酸二氫鉀溶液作流動相的液相色譜圖見圖1.[0046]②波長選擇
[0047]該復方阿膠制劑中含有皂苷、黃酮、有機酸等有紫外吸收的成分，所以供選擇了203nm、215nm、254那么、280nm及350nm進行對比試驗，結果在350nm和280nm處吸收很弱，峰數較少；254nm和215nm處基線較平穩，峰的數目也較多，但峰高比例差異較大；203nm下的色譜峰響應值和各峰峰高比例也較合適，所有確定203nm為檢測波長。復方阿膠制劑在203nm下的液相色譜圖見圖2
[0048]③梯度時間的設定
[0049]考慮到該復方阿膠制劑成分復雜，不同成分極性差異較大，設定乙腈的起始濃度為0，O?80分鐘進行梯度洗脫，是為了此段色譜峰盡可能的有效分離，在此條件下可使大部分色譜峰達到較好的分離，保留時間適中，且在80分鐘后無其他色譜峰。具體情況見圖3
[0050]④儀器及積分參數
[0051]儀器參數:Agilentll00型高效液相色譜儀,Chemstation色譜工作站。柱溫35°C,流速1.0ml/min。積分參數:最小峰面積為參照物(S)峰峰面積的10%，最小峰高為S峰峰高的10%。如此設定可以避免一些很小面積的色譜峰(單峰面積占總峰面積小于1%)的計算，同時保證與參照物的相關性。
[0052]⑤供試品溶液的制備
[0053]供試品溶液的制備:取待測復方制劑，加四倍量乙酸乙酯:正丁醇(2:1)提取，取上清液，用微孔濾膜(0.45 μ m)慮過，取續濾液作為供試品溶液。⑥參照物溶液的制備
[0054]人參皂苷Rgl、人參皂苷Rb 1、人參皂苷Rd、黨參炔苷、毛蕊花糖苷、綠原酸適量，加甲醇制成每Iml含0.2mg的溶液，作為參照物溶液。
[0055]⑦指紋圖譜及技術參數
[0056]根據16批樣品制定標準指紋圖譜，將供試品指紋圖譜與標準指紋圖譜比較，相似度在0.90?1.00之間。復方阿膠制劑標準指紋圖譜見圖4。
【權利要求】
1.一種復方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法，其特征在于包括以下步驟: (1)供試品溶液的制備:精密稱取待測復方阿膠制劑，加水溶解，加0.5~3倍量乙酸乙酯、0.5~3倍量正丁醇提取，取上清液，慮過，取續濾液作為供試品溶液； (2)對照品溶液的制備:分別精密稱取人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re、黨參炔苷、毛蕊花糖苷、綠原酸用水或甲醇或乙醇溶解，定容，作為參照物溶液； (3)色譜條件:采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑色譜柱；流動相A為0.01mol/L~lmol/L磷酸二氫鈉溶液或0.01mol/L~lmol/L磷酸二氫鉀溶液或0.1%~5%甲酸溶液或0.02%~5%磷酸溶液；B為乙腈或甲醇； 梯度洗脫，流速為0.5~1.5ml/min、檢測波長為190~410nm，柱溫25~55°C ； (4)標準指紋圖譜的制定:以上述方法作為制定以紅參、黨參、熟地黃、山楂一種或幾種成分為主的指紋圖譜的測試手段；依據10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其他共有色譜峰的相對保留時間，其相對標準偏差不得超過±20% ； (5)以(I)~(3)所述方法檢測待測復方阿膠制劑，制備待測樣品的指紋圖譜； (6)將待測復方阿膠制劑的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應符合下列要求的部分或全部: I.計算待測復方阿膠制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.8~1.00; II.待測復方阿膠制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的15%; III.除參照物色譜峰之外的其他共有峰與參照物色譜峰的相對保留時間與標準指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±20%。
2.如權利要求1所述的復方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法，其特征在于包括以下步驟: (1)供試品溶液的制備:精密稱取待測復方阿膠制劑，加水溶解，加四倍量配比為2:1的乙酸乙酯-正丁醇溶液提取，取上清液，用孔徑為0.45 μ m微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液； (2)對照品溶液的制備:分別精密稱取人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re、黨參炔苷、毛蕊花糖苷、綠原酸，加甲醇制成每Iml含0.2mg的溶液，作為參照物溶液； (3)色譜條件:采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑色譜柱；流動相為A為0.03mol/L磷酸二氫鉀溶液為乙腈；梯度洗脫，溶劑比例為從O分鐘至10分鐘，流動相B比例為0，從10分鐘至33分鐘，流動相B的比例由O至12%，從33分鐘至51分鐘，流動相B的比例由12%升至16%，從51分鐘至68分鐘，流動相B的比例由16%升至30%,從68分鐘至80分鐘，流動相B的比例由30%升至50%，流速為1.0ml/min、檢測波長為203±lnm，柱溫，35°C ； (4)標準指紋圖譜的制定:精密吸取參照物溶液與供試品溶液各15μ 1，分別注入液相色譜儀，依據10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定指紋圖譜，共有峰8~25個，以確定的參照物色譜峰保留時間為基準，計算其他共有色譜峰的相對保留時間，其相對標準偏差不得超過±10%; (5)以(I)~(3)所述方法作為待測復方阿膠制劑中紅參、黨參、熟地黃、山楂中一種或幾種成分為主的指紋圖譜測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜； (6)將待測復方阿膠制劑的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應符合下列要求的部分或全部:I.計算待測復方阿膠制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.9~1.0; II.待測復方阿膠制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10%; II1.除參照物色譜峰之外的其他共有峰與參照物色譜峰的相對保留時間與標準指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±10%。
3.根據權利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于，所述的復方阿膠制劑為口服液、片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑。
【文檔編號】G01N30/02GK103645251SQ201310491335
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年10月18日 優先權日:2013年10月18日
【發明者】周祥山, 王春艷, 張淹, 李士棟, 陳慧慧, 張路 申請人:山東東阿阿膠股份有限公司