專利名稱：Hplc波長切換技術測定中藥制劑中多種成分含量方法
技術領域：
本發明涉及一種HPLC波長切換技術同時測定丹參、丹參酚酸提取物、丹參山楂藥對及含丹參山楂藥對的中藥制劑中廣5種成分的含量的方法，可同時測定丹參、丹參酚酸提取物、丹參山楂藥對及含丹參山楂藥對的中藥制劑中的I一5種成分，且測量精度高。
背景技術：
同時測定丹參、丹參酚酸提取物、丹參山楂藥對及含丹參山楂藥對的中藥制劑中
1-5種成分的含量，是建立丹參、丹參酚酸提取物、丹參山楂藥對及含丹參山楂藥對的中藥制劑質量標準的重要組成部分，為全面評價中藥質量提供依據。目前《中國藥典》(2010版)僅采用HPLC固定波長法對丹參中水溶性成分丹酚酸B和脂溶性成分丹參酮II A的含量分別進行了測定。但丹參中有效物質并不是單一的成分，而且每種成分的最大吸收波長是不 一樣的。通過測定中藥的某一個成分含量的高低對該中藥進行質量控制不夠全面。

發明內容
本發明的目的是提供一種HPLC波長切換技術同時測定丹參、丹參酚酸提取物、丹參山楂藥對及含丹參山楂藥對的中藥制劑中1-5成分含量的方法，該方法較其他含量檢測方法，如單一成分含量檢測、非切波長檢測等方法，可以做到更全面，準確的控制丹參、丹參酚酸提取物、丹參山楂藥對及含丹參山楂藥對的中藥制劑質量的效果。采用的技術方案是
一種HPLC波長切換技術同時測定丹參、丹參酚酸提取物、丹參山楂藥對及含丹參山楂藥對的中藥制劑中1-5成分含量的方法，包括下述工藝步驟
I、丹參酚酸提取物的制備，取丹參藥材加水12，10，10倍量，回流提取1-3次，每次l_3h，濾過，合并濾液，并濃縮至藥材濃度0. 2 -0. 5 g/ml，通過AB-8大孔吸附樹脂柱，用
2-5BV水以2-6V/h的速率洗脫，棄去水洗液，用2-6BV30-70%乙醇以4_8BV/h的速率洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮，干燥，即得。2、制備供試品溶液，其制備方法如下取丹參藥材0.5 g_1.5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水10-30倍量，回流提取2-3次，每次1-3小時，濾過，合并濾液，并濃縮至相對密度為I. 0-1. 5，通過5g-15g的AB-8大孔吸附樹脂柱，用2-5BV水以3_8BV/h的速率洗脫，棄去水洗液，用2-5BV30-70%乙醇以2BV/h-6BV/h的速率洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮，濾過，即得丹參供試品溶液；
或者采用丹參酚酸提取物、丹參山楂藥對或含丹參山楂藥對的中藥制劑中的一種制備成供試品溶液，具體方法是取相當于丹參藥材0. 6-2. 6g的丹參酚酸提取物、丹參山楂藥對或含丹參山楂藥對的中藥制劑精密稱定，并分別置具塞錐形瓶中，精密加入30-80%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用30-80%甲醇補足損失的重量，搖勻，濾過，即得。3、丹參、丹參酚酸提取物、丹參山楂藥對及含丹參山楂藥對的中藥制劑中1-5種成分的含量測定，采用高效液相色譜法，應用波長切換及梯度洗脫技術取上述制備的一份供試品溶液，上ODS色譜柱(150-250 X 4. 6-6. 0mm, 2_5ii m)，梯度洗脫；洗脫液為乙腈與
0.1%-0. 5%磷酸水混合液；第一梯度洗脫采用乙腈5 —10% :磷酸水95—90%的混合液，第二梯度洗脫米用乙腈10—15% :磷酸水90—85%的混合液，第二梯度洗脫米用乙腈15—18% 磷酸水85— 72%的混合液；第四梯度洗脫采用乙腈18 —18% :磷酸水72— 72%的混合液；第五梯度洗脫采用乙腈18 — 40% :磷酸水72— 67%的混合液；洗脫液流速為0. 8-1. 2ml/min ;檢測波長第一時間段為280nm，第二時間段為330nm，第三時間段為286nm，可依次測定并計算出丹參、丹參酚酸提取物、丹參山楂藥對及含丹參山楂藥對的中藥制劑中1-5種成分的含量，在上述色譜條件下，理論塔板數以丹酚酸B計不低于10000，分離度> 1.5。4、制備對照品儲備液，其制備方法如下分別精密稱取丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B等1-5個對照品適量，加甲醇制成每Iml含丹參素鈉0. 2-0. 6mg、原兒茶醒0. 5-1. Omg、迷迭香酸0. 2-1. 8mg、紫草酸0. 4-0. 8mg、 丹酹酸BO. 8-1. 5mg的對照品儲備液，備用。分別精密量取上述1-5個對照品儲備液適量，加甲醇制成每I mL含丹參素鈉10-20吒、原兒茶醛10-20吒、迷迭香酸50-100吒、紫草酸100 _200吒、丹酚酸B500 _800吒的混合對照品溶液。5、方法學考察
線性范圍的考察分別精密吸取混合對照品溶液適量，在上述色譜條件下分別進樣進行測定。以進樣量Cr，u D為橫坐標，峰面積(10為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。精密度考察精密吸取供試品溶液10 Ul，連續進樣5次，測得丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B等f 5種成分峰面積的RSD均應小于3%。穩定性考察取供試品溶液，分別在24h內進樣10 yl，測得丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B等1-5種成分峰面積的RSD均應小于3%。重復性考察取丹參0.5-1. 5 g或丹參酚酸提取物30-80mg或丹參山楂藥對相當于藥材0. 6-2. 6g或含丹參山楂藥對的中藥制劑相當于藥材0. 6-2. 6g5份，精密稱定，按步驟一方法平行制備5份供試品溶液，分別進樣10 進行測定。結果丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B等1-5種成分的RSD均應小于3%。加樣回收率考察取已知含量的丹參0. 5-1. 5 g或丹參酚酸提取物30_80mg或丹參山楂藥對相當于藥材0. 6-2. 6g或含丹參山楂藥對的中藥制劑相當于藥材0. 6-2. 6g 5份，精密稱定，分別置圓底燒瓶中，精密加入丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B等1-5種成分對照品儲備液適量。按“步驟3的方法操作，在上述色譜條件下進行測定后計算回收率均應在95-105%。
本發明的優點在于
能同時測定丹參、丹參酚酸提取物、丹參山楂藥對及含丹參山楂藥對的中藥制劑中1-5種成分，并且利用同一種檢測條件和波長切換的方法，這樣既可以達到增加質量覆蓋面的目的，又可以保證每種成分在最大吸收波長處被檢測，提高檢測靈敏度。
具體實施例方式實施例一
一種HPLC波長切換技術同時測定丹參中5種成分含量的方法，其特征在于采用波長切換和梯度洗脫同時測定5種成分，包括下述工藝步驟
I、制備供試品溶液，其制備方法如下取丹參藥材I. 2g，精密稱定，置圓底燒瓶中，力口水20倍量，回流提取2次，每次I小時，濾過，合并濾液，并濃縮，通過8g的AB-8大孔吸附樹脂柱，用4BV水以5BV/h的速率洗脫，棄去水洗液，用3BV60%乙醇以2BV/h的速率洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮，濾過，即得丹參供試品溶液。2、取上述制備的供試品溶液，上ODS色譜柱進行梯度洗脫；洗脫液為乙腈與0. 1%磷酸水混合液；第一梯度洗脫采用乙腈7% :磷酸水93%的混合液，第二梯度洗脫采用乙腈10% :磷酸水90%的混合液，第三梯度洗脫采用乙腈16% :磷酸水84%的混合液；第四梯度洗脫采用乙腈18% :磷酸水82%的混合液；第五梯度洗脫采用乙腈32% :磷酸水68%的混合液；洗脫液流速為I. Oml/min ;檢測波長第一時間段為280nm，第二時間段為330nm，第三時間段為286nm，可測定出丹參中5種成分的含量，在上述色譜條件下，理論塔板數以丹酚酸B計不低于10000，分離度> I. 5，上述百分比為體積百分比。
實施例二
一種HPLC波長切換技術同時測定丹參酚酸提取物中5種成分含量的方法，其特征在于采用波長切換和梯度洗脫同時測定5種成分，包括下述工藝步驟
I、丹參酚酸提取物的制備，取丹參藥材加水12，10，10倍量，回流提取1-3次，每次l_3h，濾過，合并濾液，并濃縮至藥材濃度0. 2 -0.5 g/ml，通過AB-8大孔吸附樹脂柱，用
2-5BV水以2-6V/h的速率洗脫，棄去水洗液，用2-6BV30-70%乙醇以4_8BV/h的速率洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮，干燥，即得。2、制備供試品溶液，取丹參酚酸提取物50mg (相當于丹參藥材I. Og)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用30%甲醇補足損失的重量，搖勻，濾過，即得。3、取上述制備的供試品溶液，上ODS色譜柱進行梯度洗脫；洗脫液為乙腈與0. 2%磷酸水混合液；第一梯度洗脫采用乙腈10% :磷酸水90%的混合液，第二梯度洗脫采用乙腈15% :磷酸水85%的混合液，第三梯度洗脫采用乙腈15% :磷酸水85%的混合液；第四梯度洗脫采用乙腈18% :磷酸水82%的混合液；第五梯度洗脫采用乙腈30% :磷酸水70%的混合液；洗脫液流速為0. 8ml/min ;檢測波長第一時間段為280nm，第二時間段為330nm，第三時間段為286nm，可測定出丹參酚酸提取物中1_5種成分的含量，在上述色譜條件下，理論塔板數以丹酚酸B計不低于10000，分離度> I. 5，上述百分比為體積百分比。實施例三
一種HPLC波長切換技術同時測定丹參山楂藥對中5種成分含量的方法，其特征在于采用波長切換和梯度洗脫同時測定5種成分，包括下述工藝步驟
I、制備供試品溶液，取丹參山楂藥對適量(相當于丹參藥材I. 0g)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用30%甲醇補足損失的重量，搖勻，濾過，即得。2、取上述制備的供試品溶液，上ODS色譜柱進行梯度洗脫；洗脫液為乙腈與0. 5%磷酸水混合液；第一梯度洗脫采用乙腈8% :磷酸水92%的混合液，第二梯度洗脫采用乙腈12% :磷酸水88%的混合液，第三梯度洗脫采用乙腈16% :磷酸水84%的混合液；第四梯度洗脫采用乙腈18% :磷酸水82%的混合液；第五梯度洗脫采用乙腈35% :磷酸水75%的混合液；洗脫液流速為o. 9ml/min ;檢測波長第一時間段為280nm，第二時間段為330nm，第三時間段為286nm，可測定出丹參山楂藥對中5種成分的含量，在上述色譜條件下，理論塔板數以丹酚酸B計不低于10000，分離度> I. 5，上述百分比為體積百分比。實施例四
一種HPLC波長切換技術同時測定含丹參山楂藥對的中藥制劑中4種成分含量的方法，其特征在于采用波長切換和梯度洗脫同時測定4種成分，包括下述工藝步驟
I、制備供試品溶液，取消瘀片適量(相當于含丹參藥材I. 0g )，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用30%甲醇補足損失的重量，搖勻，濾過，即得。2、取上述制備的供試品溶液，上ODS色譜柱進行梯度洗脫；洗脫液為乙腈與0. 3%磷酸水混合液；第一梯度洗脫采用乙腈10% :磷酸水90%的混合液，第二梯度洗脫采用乙腈13% :磷酸水87%的混合液，第三梯度洗脫采用乙腈15% :磷酸水85%的混合液；第四梯度洗脫采用乙腈18% :磷酸水82%的混合液；第五梯度洗脫采用乙腈33% :磷酸水67%的混合液；洗脫液流速為I. Oml/min ;檢測波長第一時間段為280nm，第二時間段為330nm，第三時間段為286nm，可測定出消瘀片中4種成分的含量，在上述色譜條件下，理論塔板數以丹酚酸B計不低于10000，分離度> I. 5，上述百分比為體積百分比。
權利要求
1. 一種HPLC波長切換技術同時測定丹參、丹參酚酸提取物、丹參山楂藥對及含丹參山楂藥對的中藥制劑中1-5成分含量的方法，其特征在于包括下述工藝步驟 (1)、制備供試品溶液，其制備方法如下取丹參藥材0.5g_1.5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水10-30倍量，回流提取2-3次，每次1-3小時，濾過，合并濾液，并濃縮，通過5-15g的AB-8大孔吸附樹脂柱，用2-5BV水以3-8BV/h的速率洗脫，棄去水洗液，用2_5BV30_70%乙醇以2 -6BV/h的速率洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至相對密度為I. 0-1. 5，濾過，即得供試品溶液；或取丹參酚酸提取物、丹參山楂藥對、含丹參山楂藥對的中藥制劑中的一種，相當于丹參藥0. 6-2. 6g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入30-80%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用30-80%甲醇補足損失的重量，搖勻，濾過，即得，供試品溶液； (2)、取上述制備的一份供試品溶液，上ODS色譜柱，ODS色譜柱規格為150-250X4. 6-6. Omm, 2-5 u m,梯度洗脫；洗脫液為乙腈與0. 1%-0. 5%磷酸水混合液；第一梯度洗脫米用乙腈5—10% :磷酸水95—90%的混合液，第二梯度洗脫米用乙腈10—15% 磷酸水90— 85%的混合液，第三梯度洗脫采用乙腈15 —18% :磷酸水85— 72%的混合液；第四梯度洗脫米用乙腈18—18% :磷酸水72—72%的混合液；第五梯度洗脫米用乙腈18—40% :磷酸水72—67%的混合液；洗脫液流速為0. 8-1. 2ml/min ;檢測波長第一時間段為280nm，第二時間段為330nm，第三時間段為286nm，可依次測定并計算出丹參、丹參酚酸提取物、丹參山楂藥對及含丹參山楂藥對的中藥制劑中1-5種成分的含量，在上述色譜條件下，理論塔板數以丹酚酸B計不低于10000，分離度> I. 5。
全文摘要
一種HPLC同時測定丹參、丹參酚酸提取物、丹參山楂藥對及含丹參山楂藥對的中藥制劑中1-5種成分含量的方法，包括制備供試溶液和1-5種成分含量的測定。供試品溶液制備是取丹參藥材0.5-1.5g，采用回流提取和提取液通過5-15gAB-8大孔吸附樹脂柱，用2-5BV水以3-8V/n的洗脫后再用2-5BV30-70%乙醇以2-6BV/n的速率洗脫制成。而1-5種成分測定是取供試品溶液一份，上ODS色譜柱、用乙腈與0.1-0.5%磷酸水混合液梯度洗脫和HPLC波長切換測量丹參、丹參酚酸提取物、丹參山楂藥對及含丹參山楂藥對的中藥制劑中1-5種成分含量。本發明既可以達到增加質量覆蓋面的目的，又可以保證每種成分在最大吸收波長處被檢測，提高了檢測靈敏度和檢測質量。
文檔編號G01N30/88GK102680623SQ20121007907
公開日2012年9月19日 申請日期2012年3月23日 優先權日2012年3月23日
發明者劉威, 劉玉強, 呂佳, 張振秋, 暴風偉, 李可強, 李峰, 梁朔, 王海波, 王飛 申請人:遼寧中醫藥大學