專利名稱：一種血細胞染液的制作方法
技術領域：
本發明涉及染料領域，具體涉及一種血細胞染液。
背景技術：
在疾病的診斷過程中，經常需要觀察細胞內部結構，識別各種細 胞及其異常變化，常需要對血涂片進行染色，細胞的染色過程既有物 理的吸附作用，又有化學的親和作用，各種細胞成分化學性質不同， 對各種染料的親和力也不一樣。目前常用瑞氏染料進行瑞氏染色。
用瑞氏染料液染色后，在同一血涂片上，可以看到各種不同的顏 色，例如血紅蛋白，嗜酸性顆粒為堿性蛋白質，與酸性染料伊紅結果，
染粉紅色；細胞核蛋白和淋巴細胞胞漿為酸性，與堿性染料美藍或天 青結合，染紫藍色；中性顆粒呈等電狀態與伊紅和美藍均可結合，染 淡紫色。
瑞氏染料是由酸性染料伊紅和堿性染料亞曱藍組成的復合染料。 亞甲藍為四曱基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結構，通常為氯鹽， 即氯化美藍。伊紅通常為鈉鹽，伊紅和美藍混合后，產生一種難溶性 膠體伊紅美藍中性沉淀。
瑞氏染料對氫離子濃度是十分敏感的，據觀察pH值的改變，可使 蛋白質與染料形成的化合物重新離解，由于細胞中各種蛋白質均為兩 性電解質，所帶電荷隨溶液pH而定。對一蛋白質而言，如環境pfKpI(蛋 白質的等電點)，則該蛋白質帶正電荷，即在酸性環境中正電荷增多. 易與酸性伊紅結合，染色偏紅；相反，則易與美藍結合，染色偏藍。 故緩沖液須保持一定的pH使染色穩定，要求pH —般在6. 4-6. 8,偏堿性染料可與緩沖液中酸基起中和作用，偏酸性染料則與緩沖液中的堿
基起中和作用，使pH恒定。
瑞氏染料配制的過程是先稱干燥的瑞氏染料經多次研磨至細粉 末，加曱醇研磨呈一面鏡光亮，靜置后，將上層液體倒入清潔儲存瓶 內，搖勻，密封瓶口，存室溫暗處，儲存愈久，則染料溶解、分解就
越好， 一般需儲存3個月以上。
瑞氏染料是臨床細胞學分析中最基本和常用的染料，在臨床實驗 室細胞學尤其是骨髓細胞學的研究中起到舉足輕重的作用，因其著色 效果佳，操作方便等特點，在臨床實驗室廣泛應用，且用量很大。
瑞氏染料的配制需經過多次研磨、稀釋和沖洗等多種工序，而且
要用到大量曱醇，曱醇有毒，服入IO毫升能使雙目失明，30毫升則 能致死。當廢舊染液排出后，必將嚴重污染環境，造成社會危害。

發明內容
本發明針對現有的瑞氏染料需提前配制且用量大、消耗快的缺陷， 提供一種即配即用、且可重復使用的血細胞染液。
為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案 一種血細胞染液，包括
A液:伊紅l-3g/L，磷酸二氫鉀10-15g/L，磷酸氫二鈉8-12g/L, 石石友酸10-20 ml/L;
B液亞甲藍l-3g/L，磷酸二氫鉀12-13g/L，磷酸氫二鈉9-13 g/L， 天青l-4g/L,高錳酸鉀2-4g/L。
作為優選，本發明所述血細胞染液的A液組成為伊紅2g/L，磷 酸二氫鉀12-13g/L,磷酸氫二鈉10g/L,石碳酸20 ml/L;B液亞甲藍1. 6g/L，磷酸二氫鉀12-13g/L，磷酸氫二鈉10 g/L, 天青2g/L，高錳酸鉀2. 4g/L。
更優選的，本發明所述血細胞染液的組成為
A液伊紅2g/L，磷酸二氫鉀13g/L,磷酸氫二鈉10g/L,石碳 酸20 ml/L;
B液亞曱藍1.6g/L，磷酸二氫鉀13g/L，磷酸氫二鈉10 g/L， 天青lg/L,高錳酸鉀2. 4g/L。
本發明所述血細胞染液的使用方法如下 (1)取干燥血涂片浸入A液中靜置10-20秒鐘，水洗、吸干； (2 )將步驟(1)的血涂片浸入所述B液中，靜置2-3分鐘，水洗、 吸干備鏡檢。
本發明所述血細胞染液染色原理與瑞氏染液相同，但加強了天青 的作用。其對單核細胞、紅細胞和血小板、淋巴細胞、嗜酸性粒細胞 的染色結果分別如圖1、圖3、圖5、圖7所示，其對各種類型的血細 胞的染色特點如下
紅細胞染色后呈淡灰藍色，中央有相當于細胞直徑1/3-2/5的淡 染區；
血小板為圓形或不規則形，呈淡紫紅色，內含細小的嗜天青顆粒； 白細胞核著深紫色，程度適中，細胞核結構和色澤清晰艷麗，對
核結構的識別較佳，對胞漿著色偏酸，色澤偏紅，對細胞漿內顆粒特
別是嗜天青顆粒及嗜中性顆粒著色較差。
以上特點與瑞氏染液對血細胞染色特點一致，且效果相當。 本發明所述染料與現有的瑞氏染料相比，具有以下優點
1、 配制步驟簡單，即配即用；
2、 本發明所述染料的A液和B液均可重復使用，節省資源；3、 無需用到有害物質甲醇，減少污染；
4、 染色效果與瑞氏染液相當，染色時間大大縮短，僅需2-3分鐘， 可很好地滿足臨床對于血液檢驗報告及時性的需要。


圖1箭頭示用本發明所述血細胞染液染色的單核細胞；
圖2箭頭示瑞氏染料染色的單核細胞；
圖3箭頭示用本發明所述血細胞染液染色的紅細胞和血小板；
圖4箭頭示瑞氏染料染色的紅細胞和血小板；
圖5箭頭示用本發明所述血細胞染液染色的淋巴細胞；
圖6箭頭示用瑞氏染料染色的淋巴細胞；
圖7箭頭示用本發明所述血細胞染液染色的嗜酸性粒細胞；
圖8箭頭示用瑞氏染料染色的嗜酸性粒細胞。
具體實施例方式
下面結合實施例，進一步闡述本發明
實施例1:本發明所述血細胞染液的配制
準確稱取伊紅0.5g，磷酸二氬鉀5g，磷酸氫二鈉4g,石碳酸5 ml， 加水至500ml，即配置為A液。
準確稱取亞曱藍0.5g，磷酸二氫鉀6g，磷酸氫二鈉4.5g,天青0.5g, 高錳酸鉀1.0 g,加水至500ml，即配制為B液。
實施例2:本發明所述血細胞染液的配制
準確稱取伊紅1.5g,磷酸二氫鉀7.5g,磷酸氫二鈉6g,石碳酸10ml,加水至500ml,即配置為A液。
準確稱取亞曱藍1.5g,磷酸二氫鉀6.5g,磷酸氫二鈉6.5g,天青 2g,高錳酸鉀2.0g,加水至500ml，即配制為B液。
實施例3:本發明所述染液的染色方法
(1)取自然干燥的待檢血涂片，浸入實施例1或實施例2制備的A 液中靜置10秒鐘，水洗、吸干；此步驟中用過的A液可重復使用。
(2 )把步驟(1)的血涂片浸入實施例1或實施例2制備的B液中， 靜置2分鐘，水洗、吸干，此步驟中用過的B液可重復使用。
(3)血涂片鏡檢。
實施例4:本發明所述血細胞染液的配制
準確稱取伊紅lg,磷酸二氫鉀6.5g,磷酸氫二鈉5g,石碳酸10 ml， 加水至500ml,即配置為A液。
準確稱取亞甲藍0.8g,磷酸二氫鉀6.5g，磷酸氫二鈉5g，天青0.5g， 高錳酸鉀1.2 g,加水至500ml,即配制為B液。
實施例5:本發明所述染液與瑞氏染液的染色效果比4交
取同一批制作的血涂片，分別用實施例1、實施例2或實施例4 制備的血細胞染液和市售瑞氏染料進行染色。 瑞氏染色法步驟如下 (1)取自然干燥的血涂片，滴加瑞氏染液染1分鐘，固定標本； (2 )加等量PH6. 4的磷酸鹽緩沖液輕輕晃動玻片，混勻靜置l5分鐘; (3)水洗、吸干、鏡檢。
本發明所述染液的染色方法參照實施例3。本發明所述血細胞染液的對單核細胞、紅細胞和血小板、淋巴細 胞、嗜酸性粒細胞的染色結果分別如圖1、圖3、圖5、圖7所示，瑞 氏染料對單核細胞、紅細胞和血小板、淋巴細胞、嗜酸性粒細胞的染
色結果分別如圖2、圖4、圖6、圖8所示。 效果大致相當
紅細胞染色后呈淡灰藍色，中央有相當于細胞直徑1/3-2/5的淡 染區；
血小板為圓形或不規則形，呈淡紫紅色，內含細小的嗜天青顆粒； 白細胞核著深紫色，程度適中，細胞核結構和色澤清晰艷麗，對核
結構的識別較佳，對胞漿著色偏酸，色澤偏紅，對細胞漿內顆粒特別是
嗜天青顆粒及嗜中性顆粒著色較差。
以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領 域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出 若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。
權利要求
1、一種血細胞染液，包括A液伊紅1-3g/L，磷酸二氫鉀10-15g/L，磷酸氫二鈉8-12g/L，石碳酸10-20ml/L；B液亞甲藍1-3g/L，磷酸二氫鉀12-13g/L，磷酸氫二鈉9-13g/L，天青1-4g/L，高錳酸鉀2-4g/L。
2、 根據權利要求1所述的血細胞染液，其特征在于，A液伊紅2g/L,磷酸二氫鉀12-13g/L，磷酸氫二鈉10g/L，石 碳酸20 ml/L;B液亞甲藍1. 6g/L，磷酸二氫鉀12-13g/L，磷酸氫二鈉10 g/L, 天青2g/L,高錳酸鉀2. 4g/L。
3、 根據權利要求1所述的血細胞染液，其特征在于，A液伊紅2g/L,磷酸二氫鉀13g/L,磷酸氫二鈉10g/L，石碳 酸20 ml/L;B液亞曱藍1.6g/L,磷酸二氫鉀13g/L,磷酸氫二鈉10 g/L, 天青lg/L,高錳酸鉀2. 4g/L。
4、 一種血細胞染色方法，包含以下步驟(1 )取干燥血涂片浸入權利要求1所述A液中靜置10-30秒鐘，水 洗、吸干；(2 )將血涂片浸入權利要求1所述B液中，靜置2-3分鐘，水洗、 吸干備鏡檢。
全文摘要
本發明涉及染料領域，公開了一種血細胞染液，包括A液和B液，A液的組成為伊紅1-3g/L，磷酸二氫鉀10-15g/L，磷酸氫二鈉8-12g/L，石碳酸10-20ml/L；B液的組成為亞甲藍1-3g/L，磷酸二氫鉀12-13g/L，磷酸氫二鈉9-13g/L，天青1-4g/L，高錳酸鉀2-4g/L。本發明所述血細胞染液染色效果與瑞氏染液相當，即配即用，同時縮短了染色時間，且可重復使用，節省資源，具有廣泛的臨床應用前景。
文檔編號G01N1/30GK101587039SQ20091014021
公開日2009年11月25日 申請日期2009年7月7日 優先權日2009年7月7日
發明者杜春蘭, 蒲曉允, 衡 閻, 項貴明 申請人:中國人民解放軍第三軍醫大學第二附屬醫院