專利名稱：一種調控板栗實生樹階段轉變的方法
技術領域：
本發明涉及一種利用生理標記輔助調控板栗實生樹階段轉變的方法。
技術背景縮短成年營養生長期是指通過采取有效措施降低實生樹成花節位。目前還沒有專 用的降低果樹實生樹成花節位的方法，實踐中一般采用與促花有關的技術措施，包括 低溫、生長調節劑、嫁接、扦插、環剝、環割、絞縊、限根、斷根等等。這方面的研 究報道很多，許多促花的技術可以顯著提高果樹實生樹成花率，但并非所有促花措施 都能有效地降低實生樹的成花節位。板栗實生樹的個體發育周期較長，板栗育種實踐中，要縮短實生樹開花結果所需 的時間，前期需要促進營養生長，使其快速通過童期，當實生樹進入成年營養生長期 之后則應抑制營養生長，以降低成花節位，提早開花結果，從而縮短育種周期。因此， 確定實生樹成年營養生長期開始與結束的臨界點十分重要，但是，因為成年營養生長 期的臨界節位在不同雜交組合中不能通用，所以僅找到臨界點還不夠，只有應用合適 的生理生化標記輔助，適時對實生樹采取適宜的調控措施，才能達到上述目的。關于板栗階段轉變的生理標記，有相關論文報道板栗組培苗的多酚含量可作為童期或返童(Rejuvenation)的生化標記；以及板栗成年區枝條組培苗中有2條特異蛋 白質譜帶(童期枝條組培苗中沒有)是板栗成年區的標記等等內容；而實生樹階段轉 變的調控技術尚無相關報道。 發明內容本發明所要解決的技術問題是提出一種利用生理標記輔助調控板栗實生樹階段轉 變的方法，為解決上述技術問題，所提供的技術方案 一種調控板栗實生樹階段轉變的方法，該方法包括有以下步驟采樣板栗實生幼樹于春季從根頸部選留1個萌蘗，8 9月份剪取選留的萌蘗， 從實生樹基部起分別采取萌蘗的葉片樣品和韌皮樣品，每3節為l樣品，每30株實生 樹的樣品混合，重復1 2次，清洗后冷凍保藏；多酚測定樣品凍干并研成細粉，測定細粉中的多酚U1、多酚U2、對-羥基苯甲 酸、綠原酸和兒茶素的含量；實生樹階段轉變的確定根據上述不同節位樣品中多酚含量的連續測定結果進行 分析a. 在實生樹某節位葉片樣品中出現多酚U1或者葉片中的兒茶素、綠原酸、多 酚U2含量升高，且韌皮部中的兒茶素、綠原酸含量下降，即可判定為實生樹從該節位起已經開始階段轉變，進入成年營養生長期；b. 而當實生樹某節位葉片樣品中多酚U1、多酚U2、對-羥基苯甲酸含量都達到高的穩定水平，且葉片和韌皮部中的綠原酸達到最低穩定水平，則可以判定為實生 樹在該節位起已經完成階段轉變，進入生殖生長期；實生樹階段轉變的調控在板栗實生樹進入了成年營養生長期時，即開始實施階段轉變調控，調控措施為在下一年的6月中旬 7月中旬整株噴施植物生長調節劑。本發明具有的優點采用本項目的技術，板栗實生樹接受調控提前完成階段轉變， 翌年可以在階段轉變開始的節位之上，階段轉變結束節位之下大量開花結果；從而促 進了板栗實生樹盡早地開花結果。


圖1為本發明中對-羥基苯甲酸含量的檢測數據圖； 圖2為本發明中多酚Ul含量的檢測數據圖； 圖3為本發明中多酚U2含量的檢測數據圖； 圖4為本發明中兒茶素含量的檢測數據圖； 圖5為本發明中綠原酸含量的檢測數據圖。
具體實施例方式一種調控板栗實生樹階段轉變的方法，適用于板栗實生樹階段轉變的監測和調控。 具體技術細節如下采樣板栗實生幼樹于春季從根頸部選留l個萌蘗，8 9月份剪取選留的萌蘗，從實生樹基部起采取樣品，每3節為1樣品，每30株實生樹的樣品混合，重復1 2次，置冰盒中帶回實驗室，自來水清洗后取下葉片和韌皮部，用紗布包好投入液氮中待觀lj多酚測定樣品凍干并研成細粉，用石油醚浸泡洗滌后，80%丙酮提取，高效液相色譜法測定多酚U1、多酚U2、對-羥基苯甲酸、綠原酸和兒茶素的含量。高效液相色譜條件，C18反相柱，柱溫30°C。采用梯度洗脫，流動相A: 5%乙酸水，流動相B:甲醇。洗脫梯度為0 15分鐘，B含量10 40。/。， 15 25分鐘，40 60%， 25 35分鐘，60 100%， 35 38分鐘，100%， 38 40分鐘，100 10%，40 50分鐘，10 10%。檢測波長280納米。實生樹階段轉變的確定根據上述不同節位樣品中多酚含量的連續測定結果進行分析a. 在實生樹某節位葉片樣品中出現多酚U1或者葉片中的兒茶素、綠原酸、多 酚U2含量升高，且韌皮部中的兒茶素、綠原酸含量下降，即可判定為實生樹該節位 起已經進入成年營養生長期；b. 而當實生樹某節位葉片樣品中多酚U1、多酚U2、對-羥基苯甲酸含量都達到 高的穩定水平，且葉片和韌皮部中的綠原酸達到最低穩定水平，則可以判定為實生樹 在該節位起已經完成階段轉變，進入生殖生長期。實生樹階段轉變的調控如果板栗實生樹階段轉變開始，進入了成年營養生長期，即可實施階段轉變調控。調控措施為在下一年的6月中旬 7月中旬整株噴施1 3次激動素(KT30) 1亳克/千克水和多效唑1000毫克/千克水或6-卞氨基腺嘌呤50毫克/ 千克水和多效唑1000毫克/千克水，至生殖生長期停止調控。采用本項目的技術，板栗實生樹接受調控提前完成階段轉變，翌年可以在階段轉 變開始的節位之上，階段轉變結束節位之下大量開花結果。如果不實施調控處理開花 結果的節位不低于階段轉變結束的節位。實施例于2004年采樣監測燕明X早豐和2399X燕山短枝2個2年生板栗雜種群體，9 月中旬采樣測定，發現實生樹39 41節及以上節位葉片樣品中出現多酚U1，判定為 實生樹39 41節已經進入成年營養生長期，開始階段轉變。2005年7月7日整株噴 施1次激動素(KT30) 1.0毫克/千克水和多效唑1000毫克/千克水。2006年春季調查， 2群體平均最低開花節位42節，開花株率74.93%，結果株率35.61%，雌花量平均5.43 個/株。其中，各種成分含量檢測如圖1至5所示板栗實生樹葉片中對-羥基苯甲酸含量變化曲線如圖l所示。35 37節以下對-羥 基苯甲酸含量無顯著變化，從36 38節到51 53節對-羥基苯甲酸含量明顯高于33 35節以下。54 56節以上對-羥基苯甲酸含量激增到更高水平。說明板栗實生樹36 38節和54 56節分別是2個生理轉折點。如圖2所示，從板栗實生樹的39 41節開始，葉片樣品中檢測到一種未知多酚 U,，并且從39 41節到51 53節之間U,的含量隨節位升高緩慢升高，但到54 56 節以上U,含量突然急劇升高。說明39 41節和54-56節分別是板栗實生樹的2個生 理轉折點。板栗實生樹葉片中檢測到另一種未知多酚U2。如圖3所示，36 38節以下，未知 多酚U2含量無顯著變化。從39 41節到51 53節，112含量顯著高于36 38節以下。 54 56節以上U2含量突然急劇升高。說明39 41節和54 56節分別是板栗實生樹 的2個生理轉折點。如圖4所示，板栗實生樹11 35節韌皮部中兒茶素含量未見顯著變化，但從36-38 節開始含量驟降，直到48 50節維持在較低水平，之后，51 53節以上韌皮部中兒 茶素含量又恢復到33 35節以下的水平。說明36 38節和51 53節分別是板栗實生 樹的2個生理轉折點。葉片中兒茶素含量36 38節之前隨節位升高變化幅度很小，從 39-40節開始含量顯著高于36 38節以下。說明39 41節是板栗實生樹的生理轉折 點。板栗實生樹葉片和韌皮部中綠原酸含量隨節位升高的動態曲線如圖5所示。韌皮 部中綠原酸含量呈梯度下降趨勢，36 38節到48 50節的含量顯著低于33 35節以 下，而51 53節以上綠原酸含量又進一步顯著降低。說明36 38節和51 53節分別 是板栗實生樹的2個生理轉折點。36 38節以下的葉片中綠原酸含量較低，從39 41節到48 50節含量較高，51 53節之后又降低到更低水平。說明39 41節和51 53 節分別是板栗實生樹的2個生理轉折點。通過本項研究，板栗實生樹播種后第3年實施階段轉變調控，第4年開花結果， 第6年完成雜種初選。較常規技術提早3年，節省育種成本33.3%。
權利要求
1. 一種調控板栗實生樹階段轉變的方法，該方法包括有以下步驟采樣板栗實生幼樹于春季從根頸部選留1個萌蘗，8～9月份剪取選留的萌蘗，從實生樹基部起分別采取萌蘗的葉片樣品和韌皮樣品，每3節為1樣品，每30株實生樹相同節位的樣品混合，重復1～2次，清洗后冷凍保藏；多酚測定樣品凍干并研成細粉，測定細粉中的多酚U1、多酚U2、對-羥基苯甲酸、綠原酸和兒茶素的含量；實生樹階段轉變的確定根據上述不同節位樣品中多酚含量的連續測定結果進行分析a.在實生樹某節位葉片樣品中出現多酚U1或者葉片中的兒茶素、綠原酸、多酚U2含量升高，且韌皮部中的兒茶素、綠原酸含量下降，即可判定為實生樹從該節位起已經開始階段轉變，進入成年營養生長期；b.而當實生樹某節位葉片樣品中多酚U1、多酚U2、對-羥基苯甲酸含量都達到高的穩定水平，且葉片和韌皮部中的綠原酸達到最低穩定水平，則可以判定為實生樹在該節位起已經完成階段轉變，進入生殖生長期；實生樹階段轉變的調控在板栗實生樹進入了成年營養生長期時，即開始實施階段轉變調控，調控措施為在下一年的6月中旬～7月中旬整株噴施植物生長調節劑。
2、 根據權利要求1所述的調控板栗實生樹階段轉變的方法，其特征在于所述多 酚測定為高效液相色譜法測定。
全文摘要
本發明公開了一種調控板栗實生樹階段轉變的方法，該方法包括有以下步驟采樣、多酚測定、實生樹階段轉變的確定和實生樹階段轉變的調控。本發明明確了果樹實生樹的生理轉折點和實生樹階段轉變的臨界點，從而找到了實生樹階段轉變的生理標記，利用生理標記監測大規模雜交群體，階段轉變開始后實施調控。板栗實生樹播種后第3年實施階段轉變調控，第4年開花結果，第6年完成雜種初選。較常規技術提早3年，節省育種成本33.3％。
文檔編號G01N30/02GK101228835SQ20071000255
公開日2008年7月30日 申請日期2007年1月26日 優先權日2007年1月26日
發明者劉慶香, 孔德軍, 常瑞豐, 張新忠, 李春敏, 王廣鵬 申請人:河北省農林科學院昌黎果樹研究所