一種糖基功能化咪唑型離子液體固定相的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及高效液相色譜固定相的技術領域，特別涉及一種糖基功能化咪唑型離 子液體固定相的制備方法。
【背景技術】
[0002] 目前大部分離子液體-功能化高效液相色譜固定相是基于咪唑類或吡啶陽離子， 本發明通過葡萄糖基離子液體的合成受到啟發，通過簡單的糖基化鍵合反應，將糖基和咪 唑型離子液體有機結合，產生基于糖基的新咪唑離子液體硅膠固定相，獲得的糖基咪唑功 能化固定相被用于HILIC模式下分析物的評價。有文獻報道類似的葡萄糖基離子液鍵合體 固定相，例如：葡萄糖基季胺型表面固載離子液體硅膠固定相、葡糖銨離子液體固定相，前 者合成步驟復雜，工藝難度大；后者可分離分化合物很少，分離范圍窄。本發明的這種新的 糖基功能化離子液體除可以分離上述兩種固定相提到的分析物，還對核苷、黃酮類化合物 和人體多肽有很好的分離效果。

【發明內容】

[0003] 綜上所述，為了克服現有技術問題的不足，本發明提供了一種糖基功能化咪唑型 離子液體固定相的制備方法，解決了功能化咪唑類離子液體高效液相色譜固定相在溶劑、 緩沖液等條件下穩定性受限且目標分析物單一的問題，實現對同類生物分子化合物的高效 率分尚分析。
[0004] 為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：
[0005] -種糖基功能化咪唑型離子液體固定相的制備方法，所述制備方法包括以下步 驟：
[0006] 步驟一:色譜用多孔球形硅膠經鹽酸酸化處理后，水洗至中性，真空干燥后得到表 面活化的硅膠，溶于甲醇，得到甲醇勻漿，備用；
[0007] 步驟二:相等摩爾的D-葡萄糖酸內酯和N-(3_氨基丙基)咪唑溶解在乙醇里，加熱 回流，進行環氧開環反應，得到N-咪唑丙基葡糖酰胺；
[0008] 步驟三:將相等摩爾的N-咪唑丙基葡糖酰胺和3-異氰酸酯基丙基三甲氧基硅烷混 合溶于乙醇，繼續回流，進行甲基化反應，得到N-三甲基硅基丙基-Ν'-葡糖酰胺丙基咪唑+ 碘咼子；
[0009] 步驟四：將步驟三中所得N-三甲基硅基丙基-Ν'-葡糖酰胺丙基咪唑+碘離子溶液 進行機械攪拌，攪拌過程中添加步驟一中制備的硅膠的甲醇勻漿，所得懸浮液回流加熱反 應，得到的產物即為Ν，Ν'_三甲氧基丙基葡糖酰胺咪唑離子液體鍵合硅膠色譜固定相的乳 白色懸濁液；
[0010] 步驟五:將步驟四中所得的乳白色懸濁液過濾，真空干燥，避光保存，所得產物即 為Ν，Ν'_三甲氧基丙基葡糖酰胺咪唑離子液體鍵合硅膠色譜固定相。
[0011] 具體地，所述步驟一中，硅膠的酸化條件為用濃鹽酸加熱回流4~6h，用水洗至中 性，在真空120°C，干燥6~8h，得到表面活化的硅膠，溶于甲醇，得到甲醇勻漿，備用。
[0012]具體地，所述步驟二中，將40~60mM的D-葡萄糖酸內酯和同等摩爾的N-(3-氨基丙 基）咪唑同時溶解在200~300ml的乙醇里，加熱至70~90°C，回流20~30h，得到N-咪唑丙基 葡糖酰胺。
[0013] 具體地，所述步驟三中，將5mM~8mM的N-咪唑丙基葡糖酰胺和同等摩爾的3-異氰 酸酯基丙基三甲氧基硅烷混合溶于乙醇，回流2~4天，進行甲基化反應，得到N-三甲基硅基 丙基-Ν'-葡糖酰胺丙基咪唑+碘離子。
[0014] 具體地，所述步驟四中，將步驟三中得到的N-三甲基硅基丙基-Ν'-葡糖酰胺丙基 咪唑+碘離子溶液加入磁子進行機械攪拌，并加入步驟一中制備的含有2.5~3.5g硅膠的甲 醇勻漿15~25ml，攪拌均勻后，攪拌10~15h后，加熱至65~75°C，回流24h，得到乳白色懸濁 液。
[0015] 具體地，所述步驟五中，將步驟四所得乳白色懸濁液過濾，并用體積比均為1:1的 乙醇:水溶液和甲醇:水溶液進行清洗，過濾后所得的產物即為N，N'_三甲氧基丙基葡糖酰 胺咪唑離子液體鍵合硅膠色譜固定相。將所得的產物放入真空干燥箱，在溫度為70~100 °C 的情況下干燥8~12h，并且在進行表征之前存儲在琥珀色的小瓶中。
[0016] N，N'_三甲氧基丙基葡糖酰胺咪唑離子液體鍵合硅膠色譜固定相，中文慣稱為糖 基功能化咪唑型離子液體固定相，英文簡稱為Sil-GLy-Imdzl，以下簡稱為糖基功能化咪唑 型離子液體固定相或者Si I-GLy-Imdz 1。
[0017] 本發明采用的技術方案帶來的有益效果是：
[0018] Sil-GLy-Imdzl色譜填料既具有硅膠基質的優異物理結構又具有功能化糖基的特 殊色譜性能，由于硅膠表面鍵合的功能化糖基長鏈的結構使得SiI-GLy-Imdzl具有很強的 親水性能，因此對水溶性的生物大分子化合物具有較強的分離性能，不同流動相的選擇可 以減弱對核苷和核苷酸、人體多肽和黃酮苷類化合物的保留，并且通過將功能化糖基鍵合 的方法修飾到硅膠表面上，實現分離的穩定性，耐高溫，耐有機溶劑等優勢，實現目標分離 的高效性，從而獲得具有優良的分離分析性能的糖基功能化咪唑型離子液體固定相。
[0019] 采用本發明實施例提供的一種糖基功能化咪唑型離子液體固定相的制備方法所 制得的固定相具有以下優點：
[0020] 1)制備的Sil-GLy-Imdzl高效液相色譜填料既具有硅膠基質的優異物理結構又具 有葡萄糖的特殊色譜性能；
[0021] 2)Sil-GLy-Imdzl硅膠表面鍵合葡萄糖基長鏈的結構，說明該固定相具有很強的 親水性能，所以對生物分子化合物具有較強的分離性能；
[0022] 3)并且通過將功能化糖基鍵合的方法修飾到硅膠表面上，實現分離的穩定性，耐 有機溶劑，耐酸性，耐高溫等優勢，分離效率高，應用廣泛。
【附圖說明】
[0023]圖1是本發明的制備過程圖；
[0024]圖2是本發明對實施例中制備的Sil-GLy-Imdzl抽樣進行參數表征的紅外光譜圖； [0025]圖3是本發明對實施例中制備的Sil-GLy-Imdzl抽樣進行參數表征的熱重力分析 圖；
[0026] 圖4是本發明實施例2提供的對11種核苷和核苷酸的色譜分析圖；
[0027] 圖5是本發明實施例2提供的對7種黃酮苷類化合物的色譜分析圖；
[0028] 圖6是本發明實施例2提供的對6種人體多肽在7種不同流動相色譜條件下的色譜 分析圖。
【具體實施方式】
[0029]下面結合附圖和具體的實施例對本發明作進一步詳細的說明，但本發明的保護范 圍并不限于此。
[0030] 為了更清楚地說明本發明實施例中的技術方案，下面對實施例描述中所需要使用 的附圖作簡單的介紹，顯而易見，下面描述中的附圖僅僅是本發明的一些實施例，對于本領 域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附 圖。
[0031] 下述實施例中所涉及的儀器、試劑、材料等，若無特別說明，均為現有技術中已有 的常規儀器、試劑、材料等，可通過正規商業途徑獲得，下述實施例中所涉及的實驗方法，檢 測方法等，若無特別說明，均為現有技術中已有的常規實驗方法，檢測方法等。
[0032] 實施例1
[0033]如圖1所示，一種糖基功能化咪唑型離子液體固定相的制備方法，按照如下步驟進 行操作：
[0034] 步驟一:將3g硅膠用濃鹽酸加熱回流4h，用水洗至中性，120 °C下真空干燥6h，得到 表面活化的硅膠；
[0035]步驟二:稱重50mM的D-葡萄糖酸內酯和同等摩爾的N-(3-氨基丙基)咪唑，將二者 同時溶解在250ml的乙醇里，加熱至80 °C，回流24h，冰箱里靜置一天，得到N-咪唑丙基葡糖 酰胺；
[0036] 步驟三:將6mM的N-咪唑丙基葡糖酰胺和等摩爾的3-異氰酸酯基丙基三甲氧基硅 烷混合溶于在50ml乙醇，回流2天，進行甲基化反應，生成N-三甲基硅基丙基-Ν'-葡糖酰胺 丙基咪唑+碘離子；
[0037]步驟四，在步驟三中所得溶液里加入磁子進行機械攪拌12h，并加入含有3g硅膠的 甲醇勻漿20ml，攪拌1