一種生活垃圾除臭滅害復合菌劑及其制備方法
【專利摘要】本發明屬于環境環保【技術領域】，特別涉及一種用于垃圾除臭滅害的復合微生物制劑及其制備方法，其含有球孢白僵菌(Beauveriabassiana)、啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、植物乳桿菌（Lactobacillusplantar）、沼澤紅假單胞菌(RhodopseudomonasPalustris)和蘇云金芽孢桿菌(Bacillusthuringiensis)。本發明提供了一種能夠去除垃圾異味和消滅垃圾蚊蠅、蟑螂等害蟲的具有綜合功能的除臭滅害復合菌劑，可以在垃圾中轉站、化糞池、公共廁所和垃圾填埋場等場所進行去除異味和消滅害蟲，在五種微生物協同作用下，可以迅速降級垃圾的惡臭氣體，抑制腐敗細菌的繁殖，消滅垃圾堆的蚊蠅、蟑螂害蟲，改善垃圾堆的微生態環境，具有重大的經濟意義和環保意義。
【專利說明】一種生活垃圾除臭滅害復合菌劑及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于環境環保【技術領域】，特別涉及一種用于垃圾除臭滅害的復合微生物制劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002]隨著我國城市化進程的加快和人口數量增加，城市生活垃圾的產生和其帶來的環境污染已經引起人們的重視，特別是在城市中心垃圾收集點和城市垃圾中轉站，生活垃圾所引發的惡臭散發，蚊蠅孳生，病蟲害傳播等問題，已經對居民生活質量和當地生態環境造成一定的影響。城市生活垃圾收集和中轉的管理不規范，會嚴重破壞城市的生態，造成人們心理不快。
[0003]當前，城市生活垃圾處理過程存在以下問題:
(I)堆放的垃圾中的有機質腐爛分解，不可避免會產生大量的惡臭氣體，使人惡心、頭暈和嘔吐，嚴重會引起人們呼吸道疾病。
[0004](2).生活垃圾是病害微生物的集源地，這些病原微生物不僅是產生惡臭氣體當地主力軍，他們也可以通過空氣、污水，蟲害，工作活動等各種途徑繁殖和傳播，嚴重時，會威脅到環境衛生和人的健康。
[0005](3).垃圾堆中有大量的有機物質，必然為蚊、蠅、蟑螂等有害生物提供場所，而垃圾堆放過程中所產生的垃圾滲濾液是蚊蟲產卵、孵化的場所，這些害蟲是病原菌傳播媒介，時刻威脅到人們健康。另外，垃圾的收集與堆放，不僅會產生大量的惡臭氣體，也會影響到土壤的生態環境及地下水的質量。
[0006]然而，城市生活垃圾是人類活動不可避免的產物，隨著社會文化、經濟的發展，城市人口密度增大、需求食品原料量大和多樣性、排泄物和生活垃圾不斷增加，人們對城市生活垃圾處理強度要求不斷提高，對生活垃圾中所產生的病源微生物，惡臭氣體及蚊蠅蟲害的去除壓力不斷增大。
[0007]目前，國內外生活垃圾處理技術主要集中對垃圾的惡臭氣體去除，對病源蟲害的綜合治理技術研究較少。常用方法分為物理法、化學法和生物法。其中，(I)物理法主要包括吸附和掩蔽等，具有操作簡單、見效快等優點，但該法僅適合處理低濃度、小范圍的垃圾，無法從源頭解決垃圾存在問題。(2)化學方法主要包括消毒、噴灑化學藥劑，具有效率高、適用范圍廣，但該方法存在嚴重的二次污染。(3)生物治理法是主要采用微生物菌群對垃圾的生態位的改變而改善垃圾環境，環保無污染，是目前最為理想的垃圾處理方法，但目前已知的微生物制劑主要針對去除垃圾臭味而開發的，不能治理生活垃圾存在的病菌及病蟲害的傳播。
[0008]所以， 針對上述問題，城市垃圾處理單位急需一種能夠對抑制有害細菌生長，改善垃圾生態環境，消除惡臭氣體的產生，殺滅蚊蠅、蟑螂等害蟲的綜合性垃圾處理微生物制劑。
【發明內容】

[0009]本發明要解決的技術問題就是，針對現有的目前環保生物制劑不能全面解決垃圾存放或中轉過程出現異味和蚊蠅病蟲害的問題，提供一種高效的生活垃圾除臭滅害的復合菌劑，該復合微生物菌劑不僅能夠迅速去除垃圾異味的產生，還能有效抑制有害微生物的生長和消滅蟑螂蚊蠅，加速垃圾的有氧分解，本發明的另一目的是提供該復合微生物菌劑的其制備方法。
[0010]為了實現上述目的，本發明的技術方案是:一種生活垃圾除臭滅害的復合菌劑，由下述以重量份計的原料制成:球孢白僵菌培養液10~20份、啤酒酵母培養液10~17份、植物乳桿菌培養液5~10份、沼澤紅假單胞菌培養液30~39份、蘇云金芽孢桿菌24~33份。
[0011]其中，所述的球孢白僵菌是屬于白僵菌屬的真菌，優選菌種為球孢白僵菌ACCC30765, ACCC30878, ACCC30704中的一種或兩種。球孢白僵菌是一種昆蟲病原真菌，對700多種有害昆蟲都能寄生，致病性強，適應性強，無污染環境，不產生抗藥性，藥效期長，其主要用在農林業害蟲的防治，把其用在生活垃圾害蟲治理尚屬于首次。球孢白僵菌主要通過其分生孢子在害蟲表皮、氣孔、消化道上，遇到適宜條件開發萌發并生出芽管，同時產生脂肪酶、蛋白酶和幾丁質酶溶解害蟲表皮，再由芽管進入害蟲體內進行大量生長與繁殖，消耗害蟲體內營養成分，并產生毒素白僵素和卵孢白僵素，感染死掉的害蟲會產生大量的分生孢子進而感染其他害蟲。 [0012]其中，所述的啤酒酵母是屬于酵母菌，優選菌種為啤酒酵母ACCC20165，ACCC21135中的一種或兩種。啤酒酵母可以分解利用環境中的糖類、硫化氫、氨氣等，代謝工程中產生促進細胞分裂的活性物質，能夠促進復合菌群中其他有效微生物(乳酸菌、沼澤紅假單胞菌、蘇云金芽孢桿菌和球孢白僵菌)增殖，有利于復合菌群的快速增殖。
[0013]其中，所述的植物乳桿菌是屬于乳酸菌，優選菌種為植物乳桿菌ACCC11118，ACCC11016中的一種或者兩種。植物乳桿菌以攝取光合細菌、酵母菌產生的糖類等物質為基礎，在厭氧狀態發酵條件下產生乳酸，能有效抑制有害微生物的活動，降低有機物腐敗分解過程。乳酸菌還能夠使常態下不易分解的木質素和纖維素等變得容易分解，并且消除未分解有機物產生的種種弊端，它也能夠將未腐熟的有機物質轉化成對生物的營養成分，促進有益微生物的生長，改善環境中的微生物群落。
[0014]其中，所述的沼澤紅假單胞菌優選菌種為沼澤紅假單胞菌ACCC10649。沼澤紅假單胞菌屬于光合細菌(英文縮寫PSB)的一種，是地球上最古老的微生物之一。光合細菌在光合作用過程中，以H2S作為供氫體，把硫化氫分解為無害的H2和H20 ;沼澤紅假單胞菌能以垃圾中的有機物、痕量有害氣體(硫化氫等)及二氧化碳、氮等為基質，合成糖類、氨基酸類、維生素類、氮素化合物、抗病毒物質和生理活性物質等。另外光合細菌代謝的物質可以為其他有益微生物生長提供養分，促進有益生物群的增殖。
[0015]其中，所述的蘇云金芽孢桿菌是屬于芽孢桿菌屬的細菌，優選菌種為蘇云金芽孢桿菌ACCC01480，CICC23650中的一種或者兩種。蘇云金芽孢桿菌是當前生產量最大，應用最為廣泛的細菌殺蟲劑，能夠在對3000多類昆蟲和原生動物產生毒性，特別在對蚊蠅消滅一直受到科研者的研究。蘇云金芽孢桿菌主要通過胃毒作用，其可以產生大量的芽孢和毒蛋白，芽孢被昆蟲吞食后，可以再昆蟲腸道大量繁殖進入血腔，進而引起昆蟲敗血癥。蘇云金產生的毒素可以分為內毒素和外毒素，內毒素即為δ-內毒素,也稱伴孢晶體,其可以在昆蟲腸道分解大量的小分子毒素而殺死昆蟲，外毒素即為α-毒素和β-毒素,其中α-毒素是昆蟲腸道破壞酶，β_毒素是熱穩定外毒素，對蚊蠅有特異治病作用。然而，蘇云金芽孢桿菌單獨使用效果并不佳，但與球孢白僵菌組合使用具有良好的殺蟲效果，能夠彌補球孢白僵菌受環境影響，藥效慢的不足，因此，發展復合微生物菌劑是不僅是克服單一菌劑存在的缺陷，也是未來環境治理生物制劑發展的方向。
[0016]本發明所述的除臭滅害復合菌劑中，微生物的總菌數較佳的為2.0X IO9個/mL以上。
[0017]本發明含有的球抱白僵菌(Beauveria bassiana)、啤酒酵母{^3ccharomycescerevisiae)、植物乳桿菌{Lactobacillus沼澤紅假單胞菌{Rhodop seudomonasPalustris)和蘇云金芽孢桿菌{Bacillus,都是現有常規菌種,均可在中國農業微生物菌種保藏管理中心及中國工業微生物菌種保藏管理中心購買。
[0018]所用的菌種斜面菌種保藏培養基為微生物研究常用的培養基，球孢白僵菌和啤酒酵母斜面活化培養基PDA培養基，蘇云金芽孢桿菌斜面活化培養基牛肉膏培養基，植物乳桿菌斜面活化培養基為MRS培養基，沼澤紅假單胞菌斜面活化培養基YP培養基。
[0019]本發明所述的除臭滅害復合菌劑中，有益微生物菌種所用的種子培養基配方和原料是實驗室常用的。球孢白僵菌孢子懸浮液采用PDA培養基，啤酒酵母種子液培養基為液體PDA培養基，蘇云金芽孢桿菌種子液培養基為YG培養基，植物乳桿菌種子液培養基為MRS培養基，沼澤紅假單胞菌種子液培養基配方為研究光合細菌常用的配方，具體配方為:醋酸鈉0.5 wt%,氯化鈉0.1 wt%,硫酸銨0.03 wt%,磷酸二氫鉀0.05 wt%,磷酸氫二鉀0.04 wt%,硫酸鎂0.04 wt%,氯化鈣0.0 05 wt%,硫酸錳0.05 wt%,硫酸亞鐵0.0005 wt%,酵母膏0.05 wt%,蛋白胨0.05 wt%，其余為水，pH值為7.6~7.8，121。。，滅菌20min。
[0020]本發明所述的除臭滅害復合菌劑中，第一發酵培養基配方為第一發酵培養基由蛋白腺0.4~0.8wt%,糖蜜15~25wt%,葡萄糖0.8~1.5wt%,憐酸二氫鈉0.6~1.2wt%,硫酸鎂0.04~0.06wt%，硫酸錳0.01~0.03wt%以及余量為水，pH為6.8~7.2 ;所述的第二發酵培養基由糖蜜10~18wt%,玉米浸提液1.0~1.5wt%,磷酸二氫鉀1.0~1.7wt%,硫酸鎂0.4~0.8wt%，氯化鈣0.01~0.03wt%,吐溫-80 1.0~1.5wt%，以及余量為水，pH為
6.8 ~7.5。
[0021 ] 本發明的除臭滅害復合菌劑中含有的有益微生物之間存在良好的協同作用，其能夠把生活垃圾中腐敗生物的腐敗降解向發酵分解轉變，對已經產生的惡臭氣體硫化氫和氨氣吸收降解，消除垃圾和垃圾滲濾液的惡臭。同時有益菌植物乳桿菌能夠產生乳酸抑制腐敗細菌的生長，從根本解決惡臭氣體的產生，球孢白僵菌和蘇云金芽孢桿菌代謝的毒素能夠殺死對攜帶病害的蚊子、蒼蠅和蟑螂等害蟲,并建立起害蟲之間相互傳播,形成一個能夠消除臭味和無病害傳播垃圾堆放環境。
[0022]本發明還涉及本發明的除臭滅害復合菌劑的制備方法:按照本領域常規方法，分別將啤酒酵母、植物乳桿菌、蘇云金芽孢桿菌、沼澤紅假單胞菌進行放大液體培養，按照發酵液體積的比例接入第一發酵培養基中培養；按照本領域常規方法將球孢白僵菌按照接種比例接入到第二發酵培養基培養，然后按所需比例混合，裝桶或瓶，即可制得成品。
[0023]具體操作可以依照如下方法進行:步驟1:制得啤酒酵母、植物乳桿菌、蘇云金芽孢桿菌和沼澤紅假單胞菌復合培養液:分別將瓊脂斜面活化好的啤酒酵母菌、蘇云金芽孢桿菌、植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種到121°c高溫滅菌后的三角瓶液體種子培養基，放大培養，制得各有益菌2.0X IO9個/mL的種子液；將啤酒酵母菌和蘇云金芽孢桿菌接種于經過121°C高溫滅菌的第一發酵培養基中，接種量分別為第一發酵液的2.0~5.0%和6.0~8.0%，在28~32°C下，轉速100~250rpm,恒壓通氣培養6~IOh后,然后將植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種于該發酵液中，接種量的分別為第一發酵液的1.0~3.0%和7.0~10.0%，在28~35°C下靜止厭氧培養72~96h。
[0024]步驟2:制得球孢白僵菌液體發酵液:
將瓊脂活化的球孢白僵菌接種PDA平板上，在20~26°C下培養7~14d，然后再在無菌條件下加入含0.05~0.2%吐溫80的無菌水，在無菌條件下打散孢子，制得2.0X IO9個/mL白僵菌孢子懸浮液；將制的球孢白僵菌的孢子懸浮液接種于121°C高溫滅菌的第二發酵培養基中，接種量為2.0~5.0%，在20~26°C下，轉速100~200rpm，培養84~108h。
[0025]步驟3:制得除臭滅害復合菌劑:
發酵培養結束后，在無菌條件下，將所述步驟I和步驟2所得菌液按照80~90%和10~20%比例混合，按活菌計數，有益菌總數達到2.0X IO9個/mL以上，灌裝，制得所述生活垃圾除臭滅害復合菌劑。
[0026]步驟I和步驟2中所述的有益微生物液體培養發酵的操作按本領域常規操作，其中各個有益菌種的種子液培養基均采用本領域常用配方。其中球孢白僵菌孢子懸浮液制備采用為PDA培養基，在22°C下培養9d，然后再在無菌條件下加入含0.1%吐溫-80無菌水，在無菌條件下打散孢子，制得2.0X IO9個/mL白僵菌孢子懸浮液；啤酒酵母菌種子液培養基為液體PDA培養基，在28°C下，轉速180rpm培養48h ;蘇云金芽孢桿菌種子液培養基為YG培養基，在30°C下，轉速180rpm培養72h ;植物乳桿菌種子液培養基為MRS培養基，在28°C下，密封靜止培養48h;沼澤紅假單胞菌種子液培養基為光合細菌培養常用的配方，具體配方為:醋酸鈉0.5 wt%，氯化鈉0.1 wt%，硫酸銨0.03 wt%，磷酸二氫鉀0.05 wt%，磷酸氫二鉀
0.04 wt%,硫酸鎂0.04 wt%,氯化鈣0.005 wt%,硫酸錳0.05 wt%,硫酸亞鐵0.0005 wt%,酵母膏0.05 wt%，蛋白胨0.05 wt%，其余為水，pH值為7.8，121°C滅菌20min，在光照30001x下，30°C下，密封靜止培養72h。
[0027]所述的第一發酵培養基配方最佳為:蛋白胨0.5wt%,糖蜜20wt%,葡萄糖1.0wt%,磷酸二氫鈉1.0wt%，硫酸鎂0.06wt%，硫酸錳0.01wt%以及余量為水，pH為7.0。
[0028]所述的第二發酵培養基最佳配方為:由糖蜜10wt%，玉米浸提液1.0wt%,磷酸二氫鉀1.5wt%，硫酸鎂0.5wt%，氯化鈣0.01wt%,吐溫-80 1.0wt%,以及余量為水，pH為6.8。
[0029]一種所述除臭滅害復合菌劑的使用方法，將所述除臭滅害復合菌劑與潔凈的水按1:10~1:15的比例稀釋，均勻噴灑在垃圾的底部和表面，每天噴灑一次，連續噴灑3d~5d。
[0030]本發明所述的復合微生物制劑主要用于生活垃圾中轉站、公共廁所、垃圾填埋場等地方惡臭氣體去除和蚊蠅和蟑螂等有害生物消滅。可以將本發明的除臭滅害復合菌劑按照1: 10~1: 50比例(重量比)與水混合噴灑在垃圾堆或垃圾滲濾液上，使用量也可以根據惡臭氣體或者害蟲多少調整使用量。除臭滅害復合菌劑的功效不僅可以有效去除垃圾的異味，抑制腐敗細菌的惡性繁殖，減少惡臭氣味再生，還能夠殺死蚊蠅、蟑螂等害蟲，在很大程度降低疾病的傳播，改善垃圾發酵的生態環境。
[0031]本發明所用的原料或試劑除特別說明之外，均市售可得。
本發明的有益效果是:相比于現有技術，本發明提供了一種能夠去除垃圾異味和消滅垃圾蚊蠅、蟑螂等害蟲的具有綜合功能的除臭滅害復合菌劑，彌補現有垃圾處理生物制劑僅去除垃圾異味，而不能對垃圾害蟲滅害的缺陷，避免垃圾物理劑和化學處理制劑在垃圾使用除臭滅害帶來的二次污染風險。其可以在垃圾中轉站、化糞池、公共廁所和垃圾填埋場等場所進行去除異味和消滅害蟲，在五種微生物協同作用下，可以迅速降級垃圾的惡臭氣體，抑制腐敗細菌的繁殖，消滅垃圾堆的蚊蠅、蟑螂害蟲，改善垃圾堆的微生態環境，具有重大的經濟意義和環保意義。本產品用于垃圾除臭滅害，綜合治理垃圾惡臭氣體產生和病蟲害的傳播，生態環保，使用方便，生產成本低，對環境無二次污染，具有廣闊的應用前景。
[0032]【專利附圖】

【附圖說明】
下面參照附圖結合實施例對本發明作進一步的描述。
圖1為本發明對垃圾處理效果的對比圖。
【具體實施方式】
[0033]下面用實施例來進一步說明本發明，但并不因此把本發明限制實施例的范圍之中。實施例中，所述的球孢白僵菌、啤酒酵母、植物乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和蘇云金芽孢桿菌都是現有常規菌種，均可在中國農業微生物菌種保藏管理中心，中國工業微生物菌種保藏管理中心購買。
[0034]實施例1
步驟1:制得啤酒酵母、植物乳桿菌、蘇云金芽孢桿菌和沼澤紅假單胞菌復合培養液。
[0035]分別將瓊脂斜面活化好的啤酒酵母、蘇云金芽孢桿菌、植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種到121°C高溫滅菌后的三角瓶液體種子培養基(啤酒酵母:PDA培養基，在28°C下，轉速180rpm培養48h ;蘇云金芽孢桿菌:YG培養基，在30°C下，轉速180rpm培養72h ；植物乳桿菌=MRS培養基，在28°C下，密封靜止培養48h ;沼澤紅假單胞菌:在光照30001x下，30°C下，密封靜止培養72h，培養基配方:醋酸鈉0.5 wt%,氯化鈉0.1 wt%,硫酸銨0.03wt%,磷酸二氫鉀0.05 wt%,磷酸氫二鉀0.04 wt%,硫酸鎂0.04 wt%,氯化鈣0.005 wt%,硫酸錳0.05 wt%jt酸亞鐵0.0005 wt%，酵母膏0.05 wt%，蛋白胨0.05 wt%，其余為水，pH值為7.6-7.8，121°C滅菌20min)，制得各有益菌2.0 X IO9個/mL的種子液；將啤酒酵母菌和蘇云金芽孢桿菌接種于經過121°C高溫滅菌的第一發酵培養基(蛋白胨0.6wt%，糖蜜20wt%，葡萄糖1.2wt%，磷酸二氫鈉1.2wt%，硫酸鎂0.05wt%，硫酸錳0.02wt%以及余量為水，pH為7.0)中，接種量分別為第一發酵液的2.0%和8.0%，在30°C下，轉速200rpm，恒壓通氣培養8h后，然后將植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種于該發酵液中，接種量的分別為第一發酵液的1.5%和10.0%，在30°C下靜止厭氧培養72h。
[0036]步驟2:制得球孢 白僵菌液體發酵液
將瓊脂活化的球孢白僵菌接種PDA平板上，在22°C下培養10d，然后再在無菌條件下加入含0.1%吐溫-80無菌水，在無菌條件下打散孢子，制得2.0X IO9個/mL白僵菌孢子懸浮液。將制的球孢白僵菌的孢子懸浮液接種于121°C高溫滅菌的第二發酵培養基(糖蜜15wt%,玉米浸提液1.2wt%,磷酸二氫鉀1.2wt%,硫酸鎂0.6wt%,氯化鈣0.02wt%,吐溫-801.2wt%，以及余量為水，pH為7.0)中，接種量為2.0%，在22°C下，轉速150rpm，培養96h。
[0037]步驟3:制得除臭滅害復合菌劑
發酵培養結束后，在無菌條件下，將步驟I和步驟2所述的2組發酵罐中的菌液按照80%和20%比例混合，活菌計數，有益菌總數達到2.0 X IO9個/mL以上，灌裝，制得生活垃圾除臭滅害復合菌劑。
[0038]實施例2
步驟1:制得啤酒酵母、植物乳桿菌、蘇云金芽孢桿菌和沼澤紅假單胞菌復合培養液。
[0039]分別將瓊脂斜面活化好的啤酒酵母、蘇云金芽孢桿菌、植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種到121°C高溫滅菌后的三角瓶液體種子培養基(啤酒酵母:PDA培養基，在28°C下，轉速180rpm培養48h ;蘇云金芽孢桿菌:YG培養基，在30°C下，轉速180rpm培養72h ；植物乳桿菌=MRS培養基，在28°C下，密封靜止培養48h ;沼澤紅假單胞菌:在光照30001x下，30°C下，密封靜止培養72h，培養基配方:醋酸鈉0.5 wt%，氯化鈉0.1 wt%，硫酸銨0.03wt%,磷酸二氫鉀0.05 wt%,磷酸氫二鉀0.04 wt%,硫酸鎂0.04 wt%,氯化鈣0.005 wt%,硫酸錳0.05 wt%jt酸亞鐵0.0005 wt%，酵母膏0.05 wt%，蛋白胨0.05 wt%，其余為水，pH值為7.6-7.8，121°C滅菌20min)，制得各有益菌2.0 X IO9個/mL的種子液；將啤酒酵母菌和蘇云金芽孢桿菌接種于經過121°C高溫滅菌的第一發酵培養基(蛋白胨0.5wt%，糖蜜20wt%，葡萄糖1.0wt%,磷酸二氫鈉1.0wt%,硫酸鎂0.06wt%,硫酸猛0.01wt%以及余量為水，pH為7.2)中，接種量分別為第一發酵液的5.0%和6.0%，在28°C下，轉速180rpm，恒壓通氣培養IOh后，然后將植物乳桿菌 和沼澤紅假單胞菌接種于該發酵液中，接種量的分別為第一發酵液的1.0%和9.0%，在28°C下靜止厭氧培養96h。
[0040]步驟2:制得球孢白僵菌液體發酵液
將瓊脂活化的球孢白僵菌接種PDA平板上，在20°C下培養14d，然后再在無菌條件下加入含0.2%吐溫-80無菌水，在無菌條件下打散孢子，制得2.0X IO9個/mL白僵菌孢子懸浮液。將制的球孢白僵菌的孢子懸浮液接種于121°C高溫滅菌的第二發酵培養基(糖蜜10wt%,玉米浸提液1.0wt%,磷酸二氫鉀1.5wt%,硫酸鎂0.5wt%,氯化鈣0.01wt%,吐溫-801.0wt%，以及余量為水，pH為6.8)中，接種量為5%，在22°C下，轉速200rpm，培養108h。
[0041]步驟3:制得除臭滅害復合菌劑
發酵培養結束后，在無菌條件下，將步驟I和步驟2所述的2組發酵罐中的菌液按照85%和15%比例混合，活菌計數，有益菌總數達到2.0 X IO9個/mL以上，灌裝，制得生活垃圾除臭滅害復合菌劑。
[0042]實施例3
步驟1:制得啤酒酵母、植物乳桿菌、蘇云金芽孢桿菌和沼澤紅假單胞菌復合培養液。
[0043]分別將瓊脂斜面活化好的啤酒酵母、蘇云金芽孢桿菌、植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種到121°C高溫滅菌后的三角瓶液體種子培養基(啤酒酵母:PDA培養基，在28°C下，轉速180rpm培養48h ;蘇云金芽孢桿菌:YG培養基，在30°C下，轉速180rpm培養72h ；植物乳桿菌=MRS培養基，在28°C下，密封靜止培養48h ;沼澤紅假單胞菌:在光照30001x下，30°C下，密封靜止培養72h，培養基配方:醋酸鈉0.5 wt%,氯化鈉0.1 wt%,硫酸銨0.03wt%,磷酸二氫鉀0.05 wt%,磷酸氫二鉀0.04 wt%,硫酸鎂0.04 wt%,氯化鈣0.005 wt%,硫酸錳0.05 Wt%jt酸亞鐵0.0005 wt%，酵母膏0.05 wt%，蛋白胨0.05 wt%，其余為水，pH值為7.6-7.8，121°C滅菌20min)，制得各有益菌2.0X109f/mL的種子液；將啤酒酵母菌和蘇云金芽孢桿菌接種于經過121°C高溫滅菌的第一發酵培養基(蛋白胨0.8wt%，糖蜜15wt%，葡萄糖1.5wt%,磷酸二氫鈉0.8wt%,硫酸鎂0.04wt%,硫酸猛0.03wt%以及余量為水，pH為
6.8)中，接種量分別為第一發酵液的4.0%和7.0%，在32°C下，轉速250rpm，恒壓通氣培養6h后，然后將植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種于該發酵液中，接種量的分別為第一發酵液的3.0%和7.0%，在32 °C下靜止厭氧培養72h。
[0044]步驟2:制得球孢白僵菌液體發酵液
將瓊脂活化的球孢白僵菌接種PDA平板上，在26°C下培養12d，然后再在無菌條件下加入含0.15%吐溫-80無菌水，在無菌條件下打散孢子，制得2.0X IO9個/mL白僵菌孢子懸浮液。將制的球孢白僵菌的孢子懸浮液接種于121°C高溫滅菌的第二發酵培養基(糖蜜18wt%,玉米浸提液1.5wt%,磷酸二氫鉀1.7wt%,硫酸鎂0.8wt%,氯化鈣0.03wt%吐溫-80
1.3wt%，以及余量為水，pH為7.5)中，接種量為3.0%，在26°C下，轉速180rpm，培養84h。
[0045]步驟3:制得除臭滅害復合菌劑
發酵培養結束后，在無菌條件下，將步驟I和步驟2所述的2組發酵罐中的菌液按照90%和10%比例混合，活菌計數，有益菌總數達到2.0 X IO9個/mL以上，灌裝，制得生活垃圾除臭滅害復合菌劑。
[0046]實施例4
步驟1:制得啤酒酵母、植物乳桿菌、蘇云金芽孢桿菌和沼澤紅假單胞菌復合培養液。
[0047]分別將瓊脂斜面活化好的啤酒酵母、蘇云金芽孢桿菌、植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種到121°C高溫滅菌后的三角瓶液體種子培養基(啤酒酵母:PDA培養基，在28°C下，轉速180rpm培養48h ;蘇云金芽孢桿菌:YG培養基，在30°C下，轉速180rpm培養72h ；植物乳桿菌=MRS培養基，在28°C下，密封靜止培養48h ;沼澤紅假單胞菌:在光照30001x下，30°C下，密封靜止培養72h，培養基配方:醋酸鈉0.5 wt%,氯化鈉0.1 wt%,硫酸銨0.03wt%,磷酸二氫鉀0.05 wt%,磷酸氫二鉀0.04 wt%,硫酸鎂0.04 wt%,氯化鈣0.005 wt%,硫酸錳0.05 wt%jt酸亞鐵0.0005 wt%，酵母膏0.05 wt%，蛋白胨0.05 wt%，其余為水，pH值為
7.6-7.8，121°C滅菌20min)，制得各有益菌2.0X109f/mL的種子液；將啤酒酵母菌和蘇云金芽孢桿菌接種于經過121°C高溫滅菌的第一發酵培養基(蛋白胨0.4wt%，糖蜜25wt%，葡萄糖0.8wt%,磷酸二氫鈉0.6wt%,硫酸鎂0.04wt%,硫酸猛0.01wt%以及余量為水，pH為
7.1)中，接種量分別為第一發酵液的3.0%和7.0%，在30°C下，轉速150rpm，恒壓通氣培養9h后，然后將植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種于該發酵液中，接種量的分別為第一發酵液的2.5%和7.5%，在35 °C下靜止厭氧培養84h。
[0048]步驟2:制得球孢白僵菌液體發酵液
將瓊脂活化的球孢白僵菌接種PDA平板上，在24°C下培養7d，然后再在無菌條件下加入含0.05%吐溫-80無菌水，在無菌條件下打散孢子，制得2.0X IO9個/mL白僵菌孢子懸浮液。將制的球孢白僵菌的孢子懸浮液接種于121°C高溫滅菌的第二發酵培養基(糖蜜12wt%,玉米浸提液1.3wt%,磷酸二氫鉀1.0wt%,硫酸鎂0.4wt%,氯化鈣0.02wt%吐溫-80
1.0wt%，以及余量為水，pH為7.2)中，接種量為4.0%，在22°C下，轉速lOOrpm，培養108h。
[0049]步驟3:制得除臭滅害復合菌劑發酵培養結束后，在無菌條件下，將步驟I和步驟2所述的2組發酵罐中的菌液按照80%和20%比例混合，活菌計數，有益菌總數達到2.0 X IO9個/mL以上，灌裝，制得生活垃圾除臭滅害復合菌劑。
[0050]下面通過效果實施例來進一步說明本發明的有益效果。
[0051]效果實施例1
本發明與常用的生物殺蟲劑和除臭滅蠅劑對垃圾除臭滅害效果對比。
[0052]選用市場銷售的生物殺蟲劑，生物除臭滅蠅劑，生物除臭劑與本發明(實施例2)在垃圾中轉除臭效果對比分析實驗。選用的除臭滅蠅劑為命名為生物制劑A，主要成分為沼澤紅假單胞菌、枯草芽孢桿菌、德氏乳酸菌和中草藥混合的生物制劑；選用的生物殺蟲劑命名為生物制劑B，主要成分為:球孢白僵菌、放線菌、沼澤紅假單胞菌、枯草芽孢桿菌、酵母菌等發酵液與中草藥、大蒜、蜜糖混合發酵的生物制劑。選用的生物除臭劑命名為生物制劑C，主要成分為光合細菌、酵母菌、乳酸菌、硝化細菌、放線菌混合發酵的生物除臭劑。選擇大學城4個高校食堂垃圾收集點作為除臭滅害對象，未使用前對各個收集點NH3、H2S、臭氣濃度、蒼蠅數量、蟑螂數量等做好測定和調查，將本品和對照品按照與水1:10的比例稀釋，均勻噴灑垃圾收集點的底部和垃圾表面，每天噴灑一次，連續5d，檢測惡臭和害蟲去除情況，如圖1所示。
[0053]由圖1可以看出，本發明(實施例2)在生活垃圾使用5d后的除臭滅害綜合效果優于其他對比的三組生物制劑，對氨氣的去除率為78.56%，對硫化氫去除率為56.85%，惡臭去除率為72.38%，蒼蠅去除率達72.4%，蟑螂的去除率為54.32%。在除臭綜合效果方面，本發明最佳，略優于生物制劑C，主要由于本發明不僅降解掉垃圾中的惡臭有機物，抑制腐敗抑菌的生長，還能夠控制蒼蠅蟑螂的繁殖，減少有害生物的傳播，改變生活垃圾的整個生態環境。在消滅蒼蠅和蟑螂方面，本發明的效果優于生物制劑B，主要由于本發明所選用的球孢白僵菌ACCC30765，ACCC30878, ACCC30704在殺滅蒼蠅和蟑螂方面效果突出，特別是配合使用蘇云金芽孢桿菌，能夠彌補球孢白僵菌的殺蟲藥效慢的缺陷。
[0054]效果實施例2
本發明在合肥蜀山區某垃圾中轉站除臭滅害實際應用效果。
[0055]將本產品(實施例3制備)與自來水(陽光暴曬去除水中氯離子)按照1:15的比例混合，均勻噴灑在垃圾中轉站部底部垃圾滲濾液和垃圾上，每次傾倒垃圾后噴灑一次。使用2d后已經無明顯臭味，5d后在垃圾中轉站角落處發現死的蟑螂和蒼蠅，對死的蟑螂和蒼蠅體內病源微生物檢測，發現有蘇云金芽孢桿菌和球孢白僵菌，環衛工人的工作環境得到明顯改善。
[0056]效果實施例3
本發明在合肥市大楊鎮農貿集市公共廁所除臭滅害應用效果。
[0057]將本產品(實施例4制備)與自來水(陽光暴曬去除水中氯離子)按照1:10的比例混合，每天均勻噴灑廁所內各個角落，每天下午噴灑一次。連續使用2d后已經廁所內異味消除，可以明顯感覺到無惡臭異味，使用4d后在公共廁所內發現死的蟑螂和蒼蠅，對死的蟑螂和蒼蠅體內病源微生物檢測，發現有蘇云金芽孢桿菌和球孢白僵菌，公共廁所的周邊環境得到明顯改善。
[0058]盡管已經示出和描述了本發明的實施例，對于本領域的普通技術人員而言，可以理解在不脫離本發明的原理和精神的情況下可以對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本發明的范圍由所附權利要求及其等同物限定。
【權利要求】
1.一種生活垃圾除臭滅害復合菌劑，其特征在于:該復合菌劑由下述以重量份計的原料制成:球孢白僵菌培養液10~20份、啤酒酵母培養液10~17份、植物乳桿菌培養液5~10份、沼澤紅假單胞菌培養液30~39份、蘇云金芽孢桿菌24~33份。
2.根據權利要求1所述一種生活垃圾除臭滅害復合菌劑，其特征在于:所述球孢白僵菌培養液所用菌種為球孢白僵菌、Beauveria bassiana) ACCC30765, ACCC30878, ACCC30704中的一種或兩種。
3.根據權利要求1所述一種生活垃圾除臭滅害復合菌劑，其特征在于:所述啤酒酵母培養液所用菌種為啤酒酵母iSacclmromyces cerevisiae)ACCC20165,ACCC21135中的一種或兩種。
4.根據權利要求1所述一種生活垃圾除臭滅害復合菌劑，其特征在于:所述的植物乳桿菌培養液所用菌種植物乳桿菌(Zacio如&77狀plantar) kCCCllllS, ACCC11016中的一種或者兩種。
5.根據權利要求1所述一種生活垃圾除臭滅害復合菌劑，其特征在于:所述的沼澤紅假單胞菌培養液所用菌種為沼澤紅假單胞菌{Rhodop seudomonasACCC10649。
6.根據權利要求1所述一種生活垃圾除臭滅害復合菌劑，其特征在于:所述的蘇云金芽孢桿菌培養液所用菌種為蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis) ACCCO1480,CICC23650中的一種或者兩種。
7.一種制備權I所述復合菌劑的方法，其特征在于包括以下步驟:.步驟1:分別將瓊脂斜面活化好的啤酒酵母菌、蘇云金芽孢桿菌、植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種到121°C高溫滅菌后的三角瓶液體種子培養基，放大培養，制得各有益菌.2.0 X IO9個/mL的種子液；將啤酒酵母菌和蘇云金芽孢桿菌接種于經過121 °C高溫滅菌的第一發酵培養基中，接種量分別為第一發酵液的2.0~5.0%和6.0~8.0%，在28~32°C下，轉速100~250rpm,恒壓通氣培養6~IOh后,然后將植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種于該發酵液中，接種量的分別為第一發酵液的1.0~3.0%和7.0~10.0%，在28~35°C下靜止厭氧培養72~96h ； 步驟2:將瓊脂活化的球孢白僵菌接種PDA平板上，在20~26°C下培養7~14d，然后再在無菌條件下加入含0.05~0.2%吐溫-80的無菌水，在無菌條件下打散孢子，制得2.0X IO9個/mL白僵菌孢子懸浮液；將制得的球孢白僵菌的孢子懸浮液接種于121°C高溫滅菌的第二發酵培養基中，接種量為2.0~5.0%，在20~26°C下，轉速100~200rpm，培養84 ~108h ； 步驟3:發酵培養結束后，在無菌條件下，將所述步驟I和所述步驟2所得菌液按照80~90%和10~20%比例混合，按活菌計數，有益菌總數達到2.0 X IO9個/mL以上，灌裝，制得權I所述的生活垃圾除臭滅害復合菌劑。
8.根據權利要求7所述一種生活垃圾除臭滅害復合菌劑，其特征在于:所述步驟I所用的第一發酵培養基，以重量百分比計算，包括以下組分:蛋白胨0.4~0.8wt%，糖蜜15~25wt%,葡萄糖0.8~1.5wt%，磷酸二氫鈉0.6~1.2wt%，硫酸鎂0.04~0.06wt%,硫酸錳0.01 ~0.03wt%，余量為水，pH 為 6.8 ~7.2。
9.根據權利要求7所述一種生活垃圾除臭滅害復合菌劑，其特征在于:所述步驟I所用的第二發酵培養基，以重量百分比計算，包括以下組分:糖蜜10~18wt%，玉米浸提液.1.0 ~1.5wt%,磷酸二氫鉀 1.0 ~1.7wt%,硫酸鎂 0.4 ~0.8wt%,氯化鈣 0.01 ~0.03wt%,吐溫-80 1.0~1.5wt%，余量為水，pH為6.8~7.5。
10.一種權I所述除臭滅害復合菌劑的使用方法，其特征在于:將權I所述除臭滅害復合菌劑與潔凈的水按1:10~1:15的比例稀釋，均勻噴灑在垃圾的底部和表面，每天噴灑一次，連續噴灑3d~ 5d。
【文檔編號】B09B3/00GK103992968SQ201410160437
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2014年4月22日 優先權日:2014年4月22日
【發明者】趙海泉, 胡子全, 柴化建, 田春, 周理君, 曾蘇 申請人:安徽清明環保科技有限公司