一種細胞分層共培養的裝置的制造方法
【專利摘要】本實用新型涉及一種細胞分層共培養的裝置。本實用新型提供的細胞分層共培養裝置包括培養瓶(1)和設置在培養瓶(1)內的隔板(2)，所述隔板(2)與所述培養瓶(1)側壁相接，所述隔板(2)平行于培養瓶瓶底(4)。本實用新型提供的培養瓶不僅能夠實現浮力不同的細胞的共培養，模擬動物細胞的內環境，而且還能夠節省原料、有利于氣體的內外交換、避免漏液，有效防止細胞污染等。
【專利說明】
一種細胞分層共培養的裝置
技術領域
[0001 ]本實用新型涉及一種細胞分層共培養的裝置。
【背景技術】
[0002]動物體內的脂肪組織是決定動物產品生產性能及其肉的品質的主要因素。按照脂肪在動物體內分布位置的不同，脂肪組織可以分為皮下脂肪、內臟脂肪和肌內脂肪，不同部位脂肪沉積主要來自于前體脂肪細胞的增殖和分化。隨著對動物發育規律的不斷研究和認識，人們發現動物體內的前體脂肪細胞可以分化為成熟脂肪細胞，而成熟脂肪細胞還可以去分化為前體脂肪細胞，甚至可以向肌肉細胞，成骨細胞進行轉化。
[0003]將同一動物的脂肪細胞和其它細胞在同一培養液中共培養，可以更好的模擬動物體內環境，便于更好地觀察細胞與細胞、細胞與培養環境之間的相互作用以及探討藥物的作用機制和可能作用的靶點，填補了單層細胞培養的整體動物實驗的鴻溝。針對于此，現有技術中已公開利用兩種細胞浮力的差異在培養瓶中進行共培養的方法，稱為“天花板”法。但該培養方法存在明顯的缺點，一是耗費較大，需要將整個培養瓶都充滿細胞培養液，容易造成浪費;二是培養過程瓶口蓋子必須擰緊，否則液體會漏出，不利于細胞培養過程中氣體內外交換;三是操作過程中容易出現漏液，加大了細胞污染的危險。

【發明內容】

[0004]本實用新型的目的在于提供一種細胞分層共培養的裝置，實用新型提供的細胞分層共培養的裝置，成本低、氣體交換好、細胞污染風險小，還能夠實現動物細胞內環境的模擬，使實驗環境更接近于體內狀態，從而提高細胞與細胞、細胞與培養環境之間的相互作用以及探討藥物的作用機制和可能作用的靶點結果的精準性與可信度。
[0005]本實用新型提供了一種細胞分層共培養的裝置，包括培養瓶(I)和設置在培養瓶(I)內的隔板(2)，所述隔板(2)與所述培養瓶(I)側壁相接，所述隔板(2)平行于培養瓶瓶底⑷。
[0006]優選的是，所述隔板與培養瓶除瓶口方向的三側側壁相接。
[0007]優選的是，所述隔板將培養瓶內空間隔為上部的氣體交換空間和下部的細胞培養空間，所述細胞培養空間的體積與所述氣體交換空間的體積之比為4:1?1:1，更優選為2:1o
[0008]優選的是，所述培養瓶側壁設置有瓶口，所述瓶口與相接隔板的側壁相對設置，與瓶口臨近的隔板側邊緣低于所述瓶口的底邊緣(3)且，垂直距離為O?lcm。
[0009]優選的是，所述隔板的水平長度為培養瓶水平長度的2/3?5/6，更優選為3/4，所述隔板的厚度為0.3?Icm，更優選為0.5cm。
[0010]本實用新型提供了一種細胞分層共培養的裝置，包括培養瓶(I)和設置在培養瓶
(I)內的隔板(2)，所述隔板(2)與所述培養瓶(I)側壁相接，所述隔板(2)平行于培養瓶瓶底
(4)。本實用新型在傳統培養瓶的中間部位加入一層隔板，用隔板代替了“天花板”，有效的減少了利用“天花板”法共培養不同浮力細胞時所用培養液量，既達到了兩種細胞在同一體系中共培養的效果又避免了不必要的浪費。同時，由于培養過程中瓶內培養液不會充盈瓶口，使得瓶內外氣體交換良好，操作過程中也不會出現漏液等現象，有效的防止了細胞污染。
【附圖說明】
[0011]圖1為本實用新型實施例提供的細胞分層共培養裝置的結構示意圖；
[0012]圖2為圖1所示裝置的俯視圖。
【具體實施方式】
[0013]本實用新型提供了一種細胞分層共培養的裝置，包括培養瓶(I)和設置在培養瓶
(I)內的隔板(2)，所述隔板(2)與所述培養瓶(I)側壁相接，所述隔板(2)平行于培養瓶瓶底⑷。
[0014]本實用新型的細胞分層共培養裝置的結構示意圖具體參見圖1和圖2，其中，圖1為本實用新型實施例提供的細胞分層共培養裝置的結構示意圖:(I)表示培養瓶，(2)為隔板，
(3)為瓶口的底邊緣，(4)為培養瓶瓶底，(5)為培養瓶瓶蓋。
[0015]本實用新型的培養瓶與隔板一體化制成，所用材料沒有特殊的限制，采用本領域技術人員熟知的制備動物細胞培養瓶的材料即可。
[0016]本實用新型對培養瓶的體積沒有特殊的限制，本領域技術人員根據需求進行設置。本實用新型所述的細胞培養瓶的體積是指培養瓶的總體積，包括上部的氣體交換空間和下部的細胞培養空間。
[0017]在本實用新型中，所述隔板(2)與所述培養瓶(I)側壁相接，所述隔板(2)平行于培養瓶瓶底(4)，所述隔板與培養瓶除瓶口方向的三側側壁相接;所述隔板將培養瓶內空間隔為上部的氣體交換空間和下部的細胞培養空間，減少了培養液的使用，且提升了瓶內外氣體交換的效率，還解決了培養過程中漏液以及細胞污染的問題。在本實用新型中，所述細胞培養空間的體積與所述氣體交換空間的體積之比為4:1?1:1，更優選為2:1。
[0018]在本實用新型的實施例中，所述隔板的水平長度為培養瓶水平長度的2/3?5/6，更優選為3/4，所述隔板的厚度為0.3?I cm，更優選為0.5cm。
[0019]培養瓶側壁設置有瓶口，所述瓶口與相接隔板的側壁相對設置，與瓶口臨近的隔板側邊緣低于所述瓶口的底邊緣(3)且，垂直距離為O?lcm;上述設置使得細胞培養液的液面始終低于瓶口的底邊緣，在細胞培養過程中不會出現漏液的問題，避免了細胞污染。
[0020]下面結合實施例，對本實用新型提供的細胞分層共培養的裝置進行詳細的描述，但是不能將它們理解為對本申請保護范圍的限定。
[0021]實施例1
[0022]如圖1、2所示，設置培養裝置，包含培養瓶(I)和設置在培養瓶(I)內的隔板(2)，所述隔板(2)與所述培養瓶(I)側壁相接，所述隔板(2)平行于培養瓶瓶底(4)。
[0023]在細胞進行原代培養過程中
[0024]1、取動物肌肉樣組織，除去可見的結締組織和血管，PBS緩沖液沖洗。
[0025]2、超凈臺內將組織剪成小塊，加入濃度為0.25 %的胰蛋白酶消化液消化2min，并用含1 %胎牛血清的DMEM培養基(完全培養基)等體積終止消化。
[0026]3、隨后選取體積為25cm3的培養瓶，預先灌入完全培養基，加入后，培養基液面垂直距離隔板下表面0.8cm，在37 °C、5 % CO2培養箱中靜置孵育5h，使培養瓶內保持均衡。培養瓶放入培養箱內時要水平回旋兩圈。然后用孔徑為250μπι的尼龍網篩過濾細胞懸液，1200r/min離心1min，取頂層懸浮成熟脂肪細胞液加入25cm3培養瓶中，置于37 °C、5 % CO2培養箱中靜置培養；
[0027]4、取上述步驟3中離心的下層細胞，向其中加入紅細胞裂解液洗滌，輕輕吹打5min裂解紅細胞，1200r/min離心3min，棄上清。PBS稀釋洗滌下層細胞，再用孔徑為80μπι的尼龍網篩過濾，收集濾液，1000r/min離心5min，棄上清;加入完全培養基吹打成單細胞懸液后接種于培養皿中，置于37°C、5%C02培養箱中靜置培養。接種后2h，取出細胞培養皿，輕輕吹打培養皿底部，吸出含肌細胞的培養液，轉移到3中的25cm3培養瓶中，置于37°C,5%CO2培養箱中靜置培養。
[0028]5、成熟的脂肪細胞由于浮力小將漂浮貼壁到中間隔板的底面，而骨骼肌細胞會下沉到瓶底生長，24h后實現了在同一培養瓶中獲得來自同一動物同一組織的分層共培養的骨骼肌細胞和肌內脂肪細胞。
[0029]實施例2
[0030]如圖1、2所示，設置培養培養裝置，包含培養瓶(I)和設置在培養瓶(I)內的隔板
(2)，所述隔板(2)與所述培養瓶(I) 一側壁相接，所述隔板(2)平行于培養瓶瓶底(4)。
[0031 ]在細胞傳代培養過程中
[0032]實施例1中原代培養細胞培養2天后，待細胞匯合度達到80%時，進行傳代。
[0033]1、擰緊25cm3培養瓶瓶蓋，從培養箱中取出需要傳代的細胞，置于超凈臺內，小心吸棄培養瓶中原有的培養液，加入培養瓶體積8 %的PBS緩沖液沖洗2次。
[0034]2、向培養瓶中加入培養瓶體積4%的濃度為0.25 %的胰酶消化液，靜置消化3min左右，待細胞呈花斑狀時，向其中加入與胰酶消化液等體積的完全培養液中止消化，并輕輕吹打，轉移細胞懸液于EP管中，1200r/min離心3min，棄上清。
[0035]3、向步驟2中離心管內加入培養瓶體積4 %的完全培養液，輕輕吹打成均勻的細胞懸液，分別接種于兩個預先灌入完全培養基的培養瓶內，在37°C、5%C02培養箱中靜置孵育6h0
[0036]4、將步驟3中的培養瓶倒置，按步驟I和2繼續消化隔板層的肌內脂肪細胞，同樣分別接種于新的預先灌入完全培養基的培養瓶中，置于37°C、5%C02培養箱中靜置培養6h即可見細胞貼壁，隨后每3d換液一次即可。培養瓶放入培養箱內時要水平回旋兩圈。
[0037]實施例3
[0038]如圖1、2所示，設置培養裝置，包含培養瓶(I)和設置在培養瓶(I)內的隔板(2)，所述隔板(2)與所述培養瓶(I)側壁相接，所述隔板(2)平行于培養瓶瓶底(4)。
[0039]在細胞進行原代培養過程中
[0040]1、取動物肌肉樣組織，除去可見的結締組織和血管，PBS緩沖液沖洗。
[0041 ] 2、超凈臺內將組織剪成小塊，加入濃度為0.2 %的胰蛋白酶消化液消化5min，并用含12 %胎牛血清的DMEM培養基(完全培養基)等體積終止消化。
[0042]3、隨后選取體積為75cm3的培養瓶，預先灌入完全培養基，加入后，培養基液面垂直距離隔板下表面0.5cm，在37 °C、5 % CO2培養箱中靜置孵育4h，使培養瓶內保持均衡。培養瓶放入培養箱內時要水平回旋兩圈。然后用孔徑為200μπι的尼龍網篩過濾細胞懸液，1500r/min離心8min，取頂層懸浮成熟脂肪細胞液加入75cm3培養瓶中，置于37 °C、5 % CO2培養箱中靜置培養；
[0043]4、取上述步驟3中離心的下層細胞，向其中加入紅細胞裂解液洗滌，輕輕吹打Smin裂解紅細胞，1500r/min離心5min，棄上清。PBS稀釋洗滌下層細胞，再用孔徑為10ym的尼龍網篩過濾，收集濾液，1500r/min離心5min，棄上清;加入完全培養基吹打成單細胞懸液后接種于培養皿中，置于37°C、5%C02培養箱中靜置培養。接種后3h，取出細胞培養皿，輕輕吹打培養皿底部，吸出含肌細胞的培養液，轉移到3中的75cm3培養瓶中，置于37°C,5%CO2培養箱中靜置培養。
[0044]5、成熟的脂肪細胞由于浮力小將漂浮貼壁到中間隔板的底面，而骨骼肌細胞會下沉到瓶底生長，24h后實現了在同一培養瓶中獲得來自同一動物同一組織的分層共培養的骨骼肌細胞和肌內脂肪細胞。
[0045]實施例4
[0046]如圖1、2所示，設置培養培養裝置，包含培養瓶(I)和設置在培養瓶(I)內的隔板
(2)，所述隔板(2)與所述培養瓶(I) 一側壁相接，所述隔板(2)平行于培養瓶瓶底(4)。
[0047]在細胞傳代培養過程中
[0048]實施例3中原代培養細胞培養3天后，待細胞匯合度達到90%時，進行傳代。
[0049]1、擰緊75cm3培養瓶瓶蓋，從培養箱中取出需要傳代的細胞，置于超凈臺內，小心吸棄培養瓶中原有的培養液，加入培養瓶體積4%的PBS緩沖液沖洗2次。
[0050]2、向培養瓶中加入培養瓶體積4%的胰酶消化液，靜置消化5min左右，待細胞呈花斑狀時，向其中加入與胰酶消化液等體積的完全培養液中止消化，并輕輕吹打，轉移細胞懸液于EP管中，1000r/min離心5min，棄上清。
[0051 ] 3、向步驟2中離心管內加入培養瓶體積4%的完全培養液，輕輕吹打成均勻的細胞懸液，分別接種于兩個預先灌入完全培養基的培養瓶，在37°C、5%C02培養箱中靜置孵育6h0
[0052]4、將步驟3中的培養瓶倒置，按步驟I和2繼續消化隔板層的肌內脂肪細胞，同樣分別接種于新的預先灌入完全培養基的培養瓶中，置于37°C、5%C02培養箱中靜置培養6h即可見細胞貼壁，隨后每2d換液一次即可。培養瓶放入培養箱內時要水平回旋兩圈。
[0053]以上所述僅是本實用新型的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本實用新型原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本實用新型的保護范圍。
【主權項】
1.一種細胞分層共培養的裝置，其特征在于，包括培養瓶(I)和設置在培養瓶(I)內的隔板(2)，所述隔板(2)與所述培養瓶(I)側壁相接，所述隔板(2)平行于培養瓶瓶底(4)。2.根據權利要求1所述的細胞分層共培養的裝置，其特征在于，所述隔板與培養瓶除瓶口方向的三側側壁相接。3.根據權利要求1所述的細胞分層共培養的裝置，其特征在于，所述隔板將培養瓶內空間隔為上部的氣體交換空間和下部的細胞培養空間，所述細胞培養空間的體積與所述氣體交換空間的體積之比為4:1?1:1。4.根據權利要求1所述的細胞分層共培養的裝置，其特征在于，所述培養瓶側壁設置有瓶口，所述瓶口與相接隔板的側壁相對設置，與瓶口臨近的隔板側邊緣低于所述瓶口的底邊緣(3)且，垂直距離為O?Icm05.根據權利要求1所述的細胞分層共培養的裝置，其特征在于，所述隔板的水平長度為培養瓶水平長度的2/3?5/6，所述隔板的厚度為0.3?lcm。
【文檔編號】C12M1/24GK205528844SQ201620189898
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年3月11日
【發明人】屈長青, 姬云濤, 曹美霞, 劉佳, 童旭
【申請人】阜陽師范學院