一種細胞培養瓶的制作方法
【技術領域】
[0001]本實用新型涉及生物制藥設備領域的一種細胞培養瓶。
【背景技術】
[0002]細胞培養瓶是生物制藥行業進行細胞培養生產藥物的重要耗材，特別是在重組蛋白生產領域，對細胞培養瓶的無菌、透氣性要求相當高，因而受到醫藥行業和醫療器械行業研究人員的廣泛青睞。細胞培養瓶，可以根據材質分為玻璃細胞培養瓶和塑料細胞培養瓶；根據培養瓶底部形狀可以分為圓形、正方形、長方形、三角形等。根據細胞培養瓶的容積可以有5-1000ml等多種規格。根據細胞生長方式可分為的貼壁細胞培養瓶和懸浮細胞培養瓶。
[0003]生物制藥業的迅速發展，使哺乳動物細胞懸浮培養成為主流的重組蛋白生產技術。哺乳動物細胞懸浮培養通常使用一次性塑料細胞培養瓶，因為這種培養瓶安全性高、發展成熟，瓶蓋有密封蓋、透氣蓋等可供選擇；然而一次性培養瓶的使用成本也非常高，不僅給研究者帶來沉重的經濟負擔，也造成研究和生產過程中的嚴重資源浪費；而玻璃細胞培養瓶可以反復高壓滅菌，使用成本大大降低，但目前玻璃細胞培養瓶只有螺旋式密封蓋，在進行細胞培養時需要將密封蓋旋松，以保證細胞培養物的通所量和PH穩定，這樣的操作不僅不方便，還會使培養過程中的污染風險大大增加。
[0004]因此，需要一種可反復使用的玻璃細胞培養瓶，其同時具有無菌透氣瓶蓋，以滿足培養過程中在無菌條件下進行氣體交換。
【實用新型內容】
[0005]本實用新型的目的是為了克服現有技術的不足，提供一種可以反復使用的細胞培養瓶，其能保證在細胞培養過程中無菌條件的氣體交換。
[0006]實現上述目的的一種方案是，一種細胞培養瓶，包括瓶體和瓶蓋，所述瓶蓋通過螺口與瓶體連接。
[0007]所述瓶蓋材質為高密度聚乙烯(High Density Polyethylene，簡稱為“HDPE”)，利用沖壓床在瓶蓋中心開環形孔，在瓶蓋內安裝直徑與瓶蓋內徑相同的圓片形疏水微孔濾膜，以便為細胞培養瓶中進行培養的細胞提供無菌氣體交換，減少細胞培養瓶中細胞被污染的風險。所述疏水微孔濾膜可從市場購買，過濾孔徑通常為0.1-0.45 μ m，優選0.22ym;所述濾膜為常用于細胞開放培養的疏水濾膜，尤其適合在CO2培養箱中進行細胞培養，尤其適用于需要進行長期細胞培養的實驗。
[0008]進一步地，為了固定安裝在瓶蓋內的微孔濾膜，使用直徑與瓶蓋內徑相同的硅膠密封墊，沖壓出相同孔徑的環形孔，用于壓緊固定濾膜；硅膠密封墊可用平頭鑷子取出和放回，便于濾膜的更換。
[0009]進一步地，為了保證無菌條件下的透氣性，同時防止培養基過度蒸發，需要根據瓶體的容積限制瓶蓋開孔大小，一般開孔直徑為瓶蓋直徑的1/10-1/3，優選1/5。
[0010]進一步地，安裝于瓶蓋內的疏水微孔濾膜可在反復高壓10-20次后更換新的濾膜，以保證無菌條件下的氣體交換。
[0011]進一步地，瓶體是由玻璃制成的；
[0012]進一步地，瓶體是由硼硅玻璃制成的。
[0013]再進一步地，瓶口為外螺紋口 ；瓶蓋相應地為內螺紋口。
[0014]再進一步地，所述瓶體可以進行硅烷化以減少細胞吸附。
[0015]采用了本實用新型的一種細胞培養瓶的技術方案，即玻璃制可反復高壓的瓶體、通過外螺紋瓶口與可反復高壓的內螺紋瓶蓋連接，所述瓶蓋中間適當開孔，瓶蓋內安裝優選0.22 μπι孔徑的疏水微孔濾膜，并用同樣開孔的硅膠密封墊壓緊固定。因此，所述細胞培養瓶在無菌條件下可實現良好的透氣性，并且可以避免培養基過度蒸發，整個細胞培養瓶可經徹底清洗、高壓滅菌后反復使用，大大降低了懸浮細胞培養成本，為使用懸浮細胞培養制備的生物藥物研制和開發提供了經濟的細胞培養模式。
【附圖說明】
[0016]圖1為本實用新型的一種細胞培養瓶的主視圖。
[0017]圖2為本實用新型的一種細胞培養瓶的組成部件圖。其中
[0018]1:瓶身；2:螺紋瓶口 ；3:開孔螺紋瓶蓋
[0019]圖3為本實用新型的一種細胞培養瓶的瓶蓋俯視圖。
[0020]3:開孔螺紋瓶蓋；4:環形開孔密封墊；5:疏水微孔濾膜。
[0021]圖4為使用本實用新型的一種細胞培養瓶培養CHO的細胞活率和細胞密度圖。其中a為商品化一次性細胞培養瓶培養細胞；b為本實用新型細胞培養瓶清洗消毒I次后培養細胞；c為本實用新型細胞培養瓶清洗消毒10次后培養細胞。
[0022]【具體實施方式】:
[0023]請參閱圖1、圖2和圖3，本實用新型的發明人為了能更好地對本實用新型的技術方案進行闡述，下面通過具體的實施例，并結合附圖進行詳細說明。
[0024]請參閱圖1和圖2，本實用新型的一種細胞培養瓶(圖1)，包括瓶體I和外螺紋瓶口 2，特殊的內螺紋瓶蓋3，瓶蓋3通過螺紋與瓶口 2緊密連接(圖2)，構造無菌條件防止細胞培養瓶內培養的細胞受到污染。
[0025]瓶蓋3的中心有環形開孔(圖3)，內部安裝疏水微孔濾膜，并用同樣開孔的硅膠密封墊壓緊固定。這樣設計的目的在于，既保證瓶蓋的透氣性，又可以創造無菌條件，并防止培養基蒸發，同時可通過清洗、更換疏水微孔濾膜后經高壓滅菌，實現細胞培養瓶可反復使用的目的，大大降低懸浮細胞培養的成本，減少生物制藥研究開發的資源損耗。
[0026]本實施例中，不同容積的細胞培養瓶，配備不同直徑的瓶蓋(圖2)，這樣設計的目的在于保證細胞培養瓶內與外部環境的氣體交換，特別適合在CO2培養箱中進行細胞培養。
[0027]本實施例中，采用經過清洗和高壓滅菌的所述細胞培養瓶，在CO2培養箱中培養CHO細胞，溫度控制在37 °C，0)2所濃度為5%，搖床轉速為120rpm，初始細胞密度為3X 105cells/ml ;每24小時取樣，進行細胞計數和活率測定，結果如附圖4所示，細胞活率均保持在95%以上，細胞生長曲線也與商品化一次性細胞培養瓶相當，證實所述細胞培養瓶的設計是合理可行的。
【主權項】
1.一種細胞培養瓶，包括瓶體、瓶口和瓶蓋，所述瓶蓋通過瓶口的螺紋與所述瓶體連接，其特征在于，所述瓶蓋為開孔設計，開孔直徑為瓶蓋直徑的1/10-1/3，瓶蓋內安裝大小與瓶蓋直徑相同的微孔濾膜，所述瓶體由玻璃制成，瓶體的徑高比為2:1?1:1。2.根據權利要求1所述的細胞培養瓶，其特征在于所述瓶蓋的材質為高密度聚乙烯，為中心開環形孔設計。3.根據權利要求1所述的細胞培養瓶，其特征在于開孔直徑為瓶蓋直徑的1/5。4.根據權利要求1所述的細胞培養瓶，其特征在于，微孔濾膜的過濾孔徑為0.1?0.45 μ m。5.權利要求4所述的細胞培養瓶，其特征在于，微孔濾膜的過濾孔徑為0.22 μ m06.權利要求4或5所述的細胞培養瓶，其特征在于，所述微孔濾膜以同樣開孔的硅膠密封圈壓緊固定。7.根據權利要求6所述的細胞培養瓶，其特征在于，微孔濾膜安裝1-3層且濾膜可隨意更換。8.根據權利要求1所述的細胞培養瓶，其特征在于所述瓶體由硼硅玻璃制成。9.根據權利要求1所述的細胞培養瓶，其特征在于:所述瓶體的徑高比為3:2。
【專利摘要】本實用新型公開了可應用于生物制藥領域的一種細胞培養瓶，由玻璃制可反復高壓的瓶體、通過外螺紋瓶口與可反復高壓的內螺紋瓶蓋連接構成，所述瓶蓋中間適當開孔，瓶蓋內安裝疏水微孔濾膜，并用同樣開孔的硅膠密封墊壓緊固定。其技術效果在于，疏水微孔濾膜可以定期更換，玻璃瓶體可以反復清洗，所有部件可以反復高壓滅菌，使得所述細胞培養瓶在無菌條件下可實現良好的透氣性，并且可以避免培養基過度蒸發，所述細胞培養瓶可以反復使用，大大降低了懸浮細胞培養成本，為使用懸浮細胞培養制備的生物藥物研制和開發提供了經濟的細胞培養模式。
【IPC分類】C12M1/12, C12M3/02, C12M1/24
【公開號】CN204918617
【申請號】CN201520384970
【發明人】萬德有, 劉蘊慧, 馮紅茹, 崔新玲, 高新
【申請人】北京和實康明醫藥科技有限公司
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年6月5日