一種水產用氨基酸活性肽的生產方法
【專利摘要】本發明涉及微生物發酵技術和特種水產飼料的生產技術，具體的說是一種用微生物發酵方法生產氨基酸活性肽。以魚精膏、豆粕、花生粕、玉米漿干粉為發酵原料，以枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、釀酒酵母菌、海洋紅酵母和嗜酸乳桿菌為微生物發酵菌群，五種微生物液體種子分別采用搖瓶種子培養和發酵罐發酵培養。固體與液體按比例均勻混合后，放置到發酵床上，經通入無菌空氣進行有氧固體發酵，再經烘干、粉碎、過篩得到水產用氨基酸活性肽。本發明具有原料來源廣泛、發酵工藝成熟，產品蛋白含量高、氨基酸組份合理、肽轉化率高、酶系產物多、誘食效果好等特點，在海淡水魚、蝦、蟹和觀賞魚畜等水產動物中應用，可以防病治病，提高成活率和免疫力，提高生長速度和提高品質，還可以改善養殖環境,凈化水質，水產用氨基酸活性肽是一種綠色的功能性的飼料添加劑。
【專利說明】
-種水產用氨基酸活性化的生產方法
技術領域
[0001] 本發明設及微生物發酵技術和特種水產飼料的生產技術，具體的說是一種用微生 物發酵方法生產水產用氨基酸活性膚。
【背景技術】
[0002] 我國是全球最大的水產養殖國，水產養殖產量約占全球的70% W上。2015年我國 水產品總產量達6600萬噸，其中養殖產量5600萬噸，淡水魚類產量3000萬噸，海水魚類產量 2600萬噸。隨著人們膳食結構的改變，對水產品的消費量快速增加，水產養殖業在全球消費 中的地位越來越重要。目前，我國水產飼料產業已進入快速、穩步發展時期。我國養殖魚郵 的總產量約2600萬噸，飼料系數Wl. 5計，理論上需要3900萬噸飼料，但2015年我國的水產 配合飼料產量僅2000萬噸，水產飼料具有巨大發展空間。近年來，我國飼料工業發展很快， 取得了巨大成就，同時，應更加注重新飼料資源的開發利用，飼料安全和食品安全。促進我 國飼料工業的可持續健康發展。
[0003] 目前，在我國的水產養殖和飼料行業面臨的問題是:缺地、缺水、缺蛋白、缺品牌。 缺地、缺水控制不住，缺蛋白、缺品牌是我們為之努力的方向。
[0004] 近年來，在研究和生產實踐中，人們采用豆巧、教皮、米慷為發酵原料，用微生物發 酵法和酶解法生產氨基酸和小膚。眾所周知，動物消化道吸收順序是：小膚、氨基酸、蛋白 質。蛋白質在消化道中最終產物大部分是小膚，少部分是氨基酸，在后期的發酵中，也會降 解成膚類物質。小膚能夠穿過動物的腸壁被吸收入循環系統，小膚比氨基酸更利于促進動 物的消化吸收、生長發育和增強抗病抗力。目前，國內外特種水產飼料發展很不均衡，國外 快，精養郵和海水魚80%使用特種飼料，國內慢，精養郵和海水魚只有30 %左右使用特種飼 料，其它大部分還是飼喂鮮魚郵等鮮活巧料，鮮活巧料極易破壞了水質，使郵魚的發病率大 幅度提高，所W特種水產飼料在水產養殖中有非常大的上升空間，目前，國內每年能有1000 萬噸的需求量，產值可達千億元W上，市場潛力巨大，市場前景非常廣闊。

【發明內容】

[0005] 本發明要解決的上述技術問題，提供一種水產用氨基酸活性膚的生產方法，W魚 精膏、豆巧、花生巧、玉米漿干粉為發酵原料，W枯草芽抱桿菌、納豆芽抱桿菌、釀酒酵母菌、 海洋紅酵母和嗜酸乳桿菌為微生物發酵菌群，各種原料的重量比為;魚精膏20~30份、豆巧 60~70份、花生巧10~15、玉米漿干粉10~15份;各種菌液的重量比為:枯草芽抱桿菌5~10 份、納豆芽抱桿菌5~10份、釀酒酵母菌5~10份、海洋紅酵母5~10份、嗜酸乳桿菌5~10份； 發酵原料與液體種子重量比為：100~120:20~40;均勻混合后，放置到發酵床上，經通入無 菌空氣進行有氧固體發酵，發酵起始溫度為20°C~30°C，控制溫度為50°C~60°C，發酵時間 為100小時~120小時;發酵料開始降溫，溫度降低到20°C~30°C，發酵達到終點；經流化床 進風溫度80°C~60°C，出風溫度40°C~30°C，流化時間8分鐘~12分鐘，烘干到含水量10% ~12%，粉碎60目~100目過篩，得到水產用氨基酸活性膚；
[0006] 上述發酵原料中：魚精膏含水量為30%~40%、豆巧含水量為10%~13%、花生巧 含水量為10 %~13 %、玉米漿干粉含水量為10 %~13 %。其中所述發酵原料的總質量含水 量為 13.60%~19.58%。
[0007] 上述發酵所得產品中，粗蛋白50 %~60 %，其中含短鏈膚20 %~30 % W上(短鏈膚 分子量為2000個道爾頓W下）、賴氨酸3.0 %~4.0 %、蛋氨酸1.0 %~2.0 %、蘇氨酸1.0 %~ 2.0%、色氨酸0.5%~0.9% ;
[000引上述發酵結束所得產品的抑值為4.0~5.0，總酸為200~300° T，發酵料中有酵母 酒香味和乳酸味。
[0009]所述的發酵結束所得產品的pH值為5.0，總酸為200° T，發酵料中有酵母酒香味和 乳酸味；
[0010]所述發酵原料中：魚精膏含水量為40 %、豆巧含水量為10 %、花生巧含水量為 10%、玉米漿干粉含水量為10%、所述發酵原料含水量為16.0%;
[0011] 上述發酵所得產品中，粗蛋白50%，其中含短鏈膚20% W上(短鏈膚分子量為2000 個道爾頓W下）、賴氨酸3.0%、蛋氨酸1.0%、蘇氨酸1.0%、色氨酸0.5%。
[0012] 所述的液體種子是分別經過搖瓶種子培養，再經過發酵罐培養得到的液體種子。
[0013] 所述發酵原料中各種原料的重量比為;魚精膏20份、豆巧60份、花生巧10份、玉米 漿干粉10份;液體種子中各種菌液的重量比為:枯草芽抱桿菌7份、納豆芽抱桿菌7份、釀酒 酵母菌7份、海洋紅酵母7份、嗜酸乳桿菌7份。
[0014] 所述發酵原料與液體種子重量比為：100:35;即發酵原料100份，枯草芽抱桿菌7 份、納豆芽抱桿菌7份、釀酒酵母菌7份、海洋紅酵母7份、嗜酸乳桿菌7份。
[0015] 所述枯草芽抱菌種子液、納豆芽抱桿菌液體種子中每毫升含活菌數為^ 100個億； 釀酒酵母菌液體種子和海洋紅酵母液體種子中每毫升含活菌數為^ 30個億，嗜酸乳桿菌液 體種子中每毫升含活菌數為含50個億。
[0016] 發酵原料放置到發酵床上，經通入無菌空氣進行有氧固體發酵，發酵起始溫度為 20°C，控制溫度為50°C，發酵時間為100小時;發酵結束后，溫度降低到30°C，抑值為5.0,總 酸200°T發酵料中有酵母酒香味和乳酸味產生，發酵達到終點；再經流化床進風溫度80°C， 出風溫度30°C，流化時間10分鐘，烘干、粉碎到含水量10%，100目過篩，得到水產用氨基酸 活性膚。
[0017] 所述枯草芽抱菌種子罐和納豆芽抱桿菌種子罐的培養基和培養條件為:枯草芽抱 菌種子罐和納豆芽抱桿菌種子罐培養基W重量百分比計為:葡萄糖0.5~1.5 %、玉米漿干 粉2.0~4.0 %、硫酸錠0~0.2 %、憐酸氨二鐘0~0.2 %，余量為水;種子罐滅菌條件:滅菌 0.08~0.101?曰、115~1211：、18~20111111;培養條件:接種量10~20%;罐壓0.01~0.101口曰、 風量100:80~100:120則111、轉速100~200巧111、溫度28°(：~32°(：;時間48~6地；
[0018] 所述釀酒酵母菌種子罐和海洋紅酵母種子罐的培養基和培養條件為:釀酒酵母菌 和海洋紅酵母種子罐的培養基W重量百分比計為：葡萄糖2.0~4.0%、玉米漿干粉2.0~ 4.0 %、硫酸錠0~0.2 %、憐酸氨二鐘0~0.2 %，余量為水；種子罐滅菌條件：滅菌0.08~ 0.101化、115~121°(：、18~20111111;培養條件:接種量10~20%;罐壓0.01~0.101?日、風量 100:100~100:150則111、轉速180~220巧111、溫度28°(：~36°(：;時間48~6地；
[0019] 所述嗜酸乳桿菌種子罐的培養基和培養條件為:嗜酸乳桿菌的種子罐培養基W重 量百分比計為:葡萄糖1.0 ~2.0%、玉米漿干粉2.0~4.0 %、硫酸錠O~0.2%、憐酸氨二鐘O ~0.2%，余量為水;種子罐滅菌條件:滅菌0.08~O. lOMPa、115~121°C、18~20min;培養條 件：接種量10~20%;罐壓0.01~O.lOMPa、風量100:0~100:100則111、轉速0~100巧111、溫度 28°C~36°C;時間48~72M乳酸菌24小時后為靜置培養，其它時間為通氣培養）。
[0020] 所述枯草芽抱菌種子罐和納豆芽抱桿菌種子罐的培養基和培養條件為:枯草芽抱 菌種子罐和納豆芽抱桿菌種子罐培養基W重量百分比計為：葡萄糖1.0%、玉米漿干粉 3.0%、硫酸錠0.1 %、憐酸氨二鐘0.1 %、余量為水;種子罐滅菌條件:滅菌0. lOMPa、121°C、 20min;培養條件:接種量20%;罐壓0.051口日、風量100:100則111、轉速150巧111、溫度30°(：、時間 4化；
[0021] 所述釀酒酵母菌種子罐和海洋紅酵母種子罐的培養基和培養條件為:釀酒酵母菌 和海洋紅酵母種子罐的培養基W重量百分比計為:葡萄糖3.0%、玉米漿干粉3.0%、硫酸錠 0.1 %、憐酸氨二鐘0.1 %，余量為水;種子罐滅菌條件:滅菌0.0 SMPa、115°C、ISmin;培養條 件:接種量20 % ;罐壓0.05Mpa、風量100:150vvm、轉速200巧m、溫度28 °C、時間4她；
[0022] 所述嗜酸乳桿菌種子罐的培養基和培養條件為:嗜酸乳桿菌種子罐培養基W重量 百分比計為:葡萄糖1.5%，玉米漿干粉3.0%、硫酸錠0.1%、憐酸氨二鐘0.1%，余量為水； 種子罐滅菌條件:滅菌0.081?3、115°(：、18111111;培養條件:接種量20%;罐壓0.05193、風量 100:50vvm、轉速50巧m、溫度36°C、時間為6地(乳酸菌24小時后為靜置培養）。
[0023] 枯草芽抱桿菌和納豆芽抱桿菌是能夠產生芽抱的好氧微生物。在分類學上屬原核 生物、真細菌，單個細胞(0.7~0.8X2~3WI1)，革蘭氏陽性，無芙膜，周生鞭毛，能運動。芽抱 大(0.6~0.9X 1.0~1.5WI1)，楠圓到柱狀，位于菌體中央或稍偏。芽抱形成后菌體不膨大， 菌落表面粗糖，污白色或微黃色，在液體培養時，常形成皺釀。主要分布在海洋、江河、湖泊、 活性污泥和±壤中。枯草芽抱桿菌繁殖速度快、容易培養，能分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、 多種氨基酸、多種維生素、抗菌膚和生物促長因子，具有生物好氧、調整菌群、抑制病菌、生 物括抗等功能，所W在提高動物機體免疫力、增強消化系統酶活性、防病治病和促進生長中 起著重要作用。其芽抱抗逆性強、耐高溫、耐酸堿、耐擠壓，產品適用范圍廣泛，并且它能作 為模式菌株在生物忍片上進行有效的DNA擴增和蛋白質、氨基酸分離。國內外許多學者研究 表明，枯草芽抱桿菌在醫藥保健、水產養殖、禽畜養殖和生態環保等方面有較高的研究價值 和應用價值。納豆芽抱桿菌主要是分解蛋白能力強。
[0024] 釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)，也是面包酵母或叫出芽酵母，是與人類 關系最廣泛的一種酵母。傳統上用于制作面包及釀酒，現代分子生物學和細胞生物學中用 作真核生物的模式生物菌。釀酒酵母的細胞形態為球形或者卵球形，直徑5-10皿。細胞大小 為2.5~10WHX4.5~21WI1。繁殖的方式為出芽生殖，其碳源氮源利用廣泛，能利用葡萄糖、 麥芽糖、薦糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露醇、班巧酸、巧樣酸、木糖、山梨醇、果糖、乙醇和甘油； 釀酒酵母可W大量的合成酵母蛋白，可W代謝出各種酶系，降解纖維素和蛋白質。有腸道益 生作用。海洋紅酵母主要能產生郵青素和多種維生素。
[00巧]嗜酸乳桿菌化actobacillus acidoP化Ius)屬于乳桿菌屬，革蘭氏陽性桿菌，桿的 末端呈圓形，主要存在小腸中。具有酸甜芳香味，能分泌乳酸、乙酸可W使PH值下降，調整腸 道菌群平衡，產生膚類抗菌素，抑制腸道不良微生物的增殖，對致病微生物有括抗作用。還 可W改善適口性，促進生長，提高飼料轉化率，降低抗生素和酸化劑的使用量，降低成本。特 別是對胃腸功能失調和服用抗菌素而引起胃腸功能失調等癥狀有特效，可W迅速使腸道內 的菌群恢復正常平衡，抑制腐敗菌的增殖，具有很好的營養保健作用。近年來，嗜酸乳桿菌 的應用很廣泛。
[0026] 采用的魚精膏和玉米漿干粉為發酵原料，其主要思考是:魚精膏和有豐富的氨基 酸和小膚，并且有誘食性;玉米漿干粉有豐富氮源、有機憐魚精和微量元素，有助于微生物 的繁殖和生長。
[0027] 魚精膏是魚粉家族中的重要成員，同魚粉一樣，含有動物性蛋白質50% W上，2000 道爾頓短膚鏈達到50 % W上，脫氨酸鹽酸鹽1.0~3.0 %，甘氨酸0.5~1.0 %，丙氨酸0.5~ 1.0%。含有多種動物必須氨基酸、不飽和脂肪酸、多種維生素及微量有機礦物質和未知的 生物素及促生長因子;含有極易吸收的生物活性巧、牛橫酸、魚膠等;并且具有極好的水溶 性、小分子多膚容易被消化道吸收或吸附。具有增強免疫力、抗病力的保健功效，是各種微 生物生長最好的培養基，特別是水溶性維生素 B復合物和各種氨基酸，能被微生物充分吸收 和利用。近年來人們對魚精膏的研究日臻完善，其氨基酸和膚類物質及次生長因子很多，具 有維持生命體的生長發育、新陳代謝等生命活動的正常運轉功能，促進和維持正常生長發 育，提高和調節免疫等功能。在飼料中添加，可W增強免役力營養補充劑和誘食劑。
[00%]玉米漿干粉W鮮玉米漿為原料經低溫瞬間加熱噴霧干燥而成，其水溶性蛋白質保 存完好，保持了玉米漿液的所有特性，加熱方式為蒸汽加熱，產品無雜質。玉米漿干粉用途 廣泛用于抗生素工業，維生素，氨基酸等發酵工業，在生物發酵過程中作水溶性植物蛋白及 水溶性維生素等營養元素補充劑。
[0029] 該方法W魚精膏、豆巧、花生巧、玉米漿干粉為發酵原料，W枯草芽抱桿菌、納豆芽 抱桿菌、釀酒酵母菌、海洋紅酵母和嗜酸乳桿菌為微生物發酵菌群，五種微生物液體種子分 別采用搖瓶種子培養和發酵罐發酵培養。固體與液體按比例均勻混合后，放置到發酵床上， 經通入無菌空氣進行有氧固體發酵，控制溫度為50°C~60°C，若是超過50°C，則進行翻倒降 溫。再經烘干、粉碎、過篩得到水產用氨基酸活性膚。
[0030] 本發明優點是:在種子液體培養中，發酵罐可為1噸罐或2噸罐，為=條(芽抱菌、酵 母菌、乳酸菌)深層發酵生產線;在固體發酵中，可采用車陣式、履帶式、槽式、塔式等發酵方 式，烘干可采用負壓流化床、震動流化床；固液混合、鋪料、發酵、傳送、烘干、粉碎、計量、包 裝等生產環節，采用自動化、程序化控制，屬于規模化生產。
[0031] 本發明特點是：1)五種微生物互補性好，生長繁殖速度快、容易培養、菌體及代謝 產物營養豐富等。2)魚精膏含有豐富的蛋白質、18種氨基酸和小膚等營養物質。3)玉米漿干 粉含有非蛋白氮和有機憐，發酵過程中可W充分利用并將其降解，代謝為動物性蛋白。4)發 酵得到的產品營養豐富，含有蛋白質、氨基酸、有機酸、維生素、不飽和脂肪酸、微量元素和 膚類抗生素等生物活性物質。5)在水產養殖中應用，誘食性、適口性、消化吸收率、免疫力、 抗病力好，可W明顯提高養殖動物的繁殖和存活能力，增強皮膚肌肉色澤，可W促進生長和 品質改善。還可W分解有機物、硫化氨、氨化物等污染物，改善養殖環境，凈化水質，水產用 氨基酸活性膚是一種綠色的功能性的飼料添加劑，具有廣闊的市場前景。 具體實施例方式
[0032] 本發明采用的納豆芽抱桿菌、海洋紅酵母和嗜酸乳桿菌菌種由中國科學院微生物 所提供，魚精膏由山東漁工生物科技有限公司提供、玉米漿干粉由山東鶴伴山生物科技有 限公司提供。
[0033] 本發明各實施例采用的酵母菌為：中國工業微生物菌種保藏管理中屯、保藏的釀酒 酵母(Saccharomyces cereviSiae) ,CICC編號為1355;枯草芽抱桿菌為中國工業微生物菌 種保藏管理中屯、保藏的枯草芽抱桿菌枯草亞種(Bacillus subtilis subsp.subtilis)， CICC 編號為 20822。
[0034] 原料制備步驟如下：
[0035] (1)魚精膏的制備：
[0036] 將購置的鮮魚進行清洗去除雜質，倒入魚漿粉碎機中，將其粉碎打磨成漿糊狀，將 糊狀魚漿注入到密閉的容器中，通入蒸汽，進行熟化和滅菌處理，熟化過程技術參數為:熟 化壓力為:0.5-0.8MPa，熟化時間為：15-18分鐘，泄壓后，魚油和魚漿分離，分離后將魚漿在 離屯、機中在線離屯、，離屯、轉數為：1000-1200轉/分鐘，底部大顆粒為魚粉，上部為魚精膏。魚 精膏含水量為:30%~40 %;
[0037] (2)發酵原料制備:按所需比例將發酵原料中的魚精膏、豆巧、花生巧、玉米漿干粉 充分混合:發酵原料中各種原料的重量比為:魚精膏20~30份、豆巧60~70份、花生巧10~ 15、玉米漿干粉10~15份；
[0038] 發酵原料中的各物質的質量含水量為魚精膏30%~40%、豆巧10%~13%、花生 巧10 %~13 %、玉米漿干粉10 %~13 %，所述發酵原料的總質量含水量為13.60 %~ 19.58%。
[0039] (3)液體種子制備:分別經過搖瓶種子培養，再經過發酵罐培養得到的液體種子， 具體制備步驟見(6)(7)(8)(9)(10)。按所需比例將液體種子中的枯草芽抱桿菌、納豆芽抱 桿菌、釀酒酵母菌、海洋紅酵母、嗜酸乳桿菌充分混合;液體種子中各種菌液的重量比為:枯 草芽抱桿菌5~10份、納豆芽抱桿菌5~10份、釀酒酵母菌5~10份、海洋紅酵母5~10份、嗜 酸乳桿菌5~10份。
[0040] 枯草芽抱桿菌種子液和納豆芽抱桿菌種子液活菌數為100個億/ml、釀酒酵母菌種 子液和海洋紅酵母種子液活菌數為30個億/ml、嗜酸乳桿菌種子液活菌數為50個億/ml;
[0041] (4)固體發酵階段：
[0042] 發酵原料與液體種子按100~120與20~40比例均勻混合，放置到發酵床上，經通 入無菌空氣進行有氧固體發酵。
[0043] 發酵起始溫度為20°C~30°C，控制溫度為50°C~60°C，發酵時間為100小時~120 小時;發酵結束后，溫度降低到20°C~30°C，PH值為4.0~5.0，酸度值200°C~300°C，發酵料 中有酵母酒香味和乳酸味產生，發酵達到終點。
[0044] (5)烘干粉碎階段：
[0045] 再經流化床進風溫度60°C~80°C，出風溫度40°C~30°C，流化時間8分鐘~12分 鐘，烘干、粉碎到含水量10%~12%，60目~100目過篩，得到水產用氨基酸活性膚。
[0046] (6)枯草芽抱桿菌種子液的制備：
[0047] 1)單菌落分離:將經活化的枯草芽抱桿菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖牛肉膏 蛋白腺培養基的培養皿上涂布，在恒溫培養箱中30°C、24小時培養，得到枯草芽抱桿菌單菌 落種子；
[0048] 2)搖瓶種子培養:枯草芽抱桿菌單菌落種子在盛有葡萄糖牛肉膏蛋白腺培養基的 1000 ml搖瓶中接種，在恒溫搖床中30°C、24小時震蕩培養，得到枯草芽抱桿菌搖瓶種子；
[0049] 3)液體種子培養:將枯草芽抱桿菌搖瓶種子按質量分數為10%~20%的接種量接 種到種子罐培養基中，經培養，得到枯草芽抱桿菌種子液;所述種子罐培養基W重量百分比 計為:葡萄糖0.5~1.5%、玉米漿干粉2.0~4.0 %、硫酸錠0~0.2%、憐酸氨二鐘0~0.2 %， 余量為水;種子罐滅菌條件，0.08~0.1 OMPa、115~121°C、18~20min;液體種子培養條件， 罐壓 0.01 ~O.lOMPa、風量 100:100~100:150則111、轉速100~200巧111、溫度28°(：~32°(：、時間 24~36h;枯草芽抱桿菌種子液中含枯草芽抱桿菌活菌數含100億/ml;
[0050] (7)納豆芽抱桿菌種子液的制備：
[0051] 同（6)枯草芽抱桿菌種子液的制備方法一致，所不同的是菌種不一樣。
[0052] (8)釀酒酵母菌種子液的制備：
[0053] 1)單菌落分離:將經活化的釀酒酵母菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖蛋白腺酵 母膏培養基的培養皿上涂布，在恒溫培養箱中3(TC、48小時培養，得到釀酒酵母單菌落種 子；
[0054] 2)搖瓶種子培養：釀酒酵母單菌落種子在盛有葡萄糖蛋白腺酵母膏培養基的 1000 ml搖瓶中接種，在恒溫搖床中30°C、48小時培養，得到酵母菌搖瓶種子；
[0055] 3)液體種子培養:將釀酒酵母搖瓶種子按質量分數為10%~20%的接種量接種到 種子罐培養基中，經培養，得到酵母菌種子液;所述種子罐培養基W重量百分比計為:葡萄 糖2.0~4.0 %、玉米漿干粉2.0~4.0%、硫酸錠0~0.2 %、憐酸氨二鐘0~0.2 %，余量為水； 種子罐滅菌條件:罐壓0.08~O.lOMPa、溫度115~12TC、時間18~20min;液體種子培養條 件：罐壓 0.01 ~O.lOMPa、風量 100:100~100:150^111、轉速180~220巧111、溫度28°(：~36°(：、 時間48~64h;釀酒酵母菌種子液中含釀酒酵母活菌數含30億/ml。
[0056] (9)海洋紅酵母菌種子液的制備：
[0057] 同（8)釀酒酵母菌種子液的制備方法一致，所不同的是菌種不一樣。
[0058] (10)嗜酸乳桿菌種子液的制備：
[0059] 1)單菌落分離:將經活化的嗜酸乳桿菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖蛋白腺牛 肉膏酵母膏培養基的培養皿上涂布，在恒溫培養箱中3(TC、48小時培養，得到嗜酸乳桿菌單 菌落種子；
[0060] 2)搖瓶種子培養:嗜酸乳桿菌單菌落種子在盛有葡萄糖蛋白腺牛肉膏酵母膏培養 基的1000 ml搖瓶瓶中接種，在恒溫培養箱中30°C、48小時培養，得到嗜酸乳桿菌搖瓶種子；
[0061] 3)液體種子培養:將嗜酸乳桿菌搖瓶種子按質量分數為10%~20%的接種量接種 到種子罐培養基中，經培養，得到嗜酸乳桿菌種子液;所述種子罐培養基W重量百分比計 為:葡萄糖2.0~4.0 %、玉米漿干粉2.0~4.0%、硫酸錠0~0.2 %、憐酸氨二鐘0~0.2 %，余 量為水;二級種子罐滅菌條件:罐壓0.08~O.lOMPa、溫度115~12rC、時間18~20min;二級 液體種子培養條件:罐壓0.0 l~0.1 OMPa、風量100:50~100: IOOvvm、轉速100~ISOrpm、溫 度28°C~36°C (優選32°C)、時間48~64h;嗜酸乳桿菌種子液中含嗜酸乳桿菌活菌數>50 億/ml。
[0062] (11)優選的步驟(1)中，魚精膏的制備：
[0063] 將購置的鮮魚進行清洗去除雜質，倒入魚漿粉碎機中，將其粉碎打磨成漿糊狀，將 糊狀魚漿注入到密閉的容器中，通入蒸汽，進行熟化和滅菌處理，熟化過程技術參數為:熟 化壓力為:0.5-0.8MPa，熟化時間為：15-18分鐘，泄壓后，魚油和魚漿分離，分離后將魚漿在 離屯、機中在線離屯、，離屯、轉數為：1000-1200轉/分鐘，底部大顆粒為魚粉，上部為魚精膏。魚 精膏含水量為:30%~50%;優選的步驟(2)中，按所需比例將發酵原料中的魚精膏、豆巧、 花生巧、玉米漿干粉充分混合:發酵原料中各種原料的重量比為:魚精膏20份、豆巧60份、花 生巧10份、玉米漿干粉10份；
[0064] 發酵原料中的各物質的質量含水量為魚精膏40%、豆巧10%、花生巧10%、玉米漿 干粉10%，所述發酵原料含水量為16.0%。
[0065] 優選的步驟(3)中，按所需比例將液體種子中的枯草芽抱桿菌、納豆芽抱桿菌、釀 酒酵母菌、海洋紅酵母、嗜酸乳桿菌充分混合;液體種子中各種菌液的重量比為:枯草芽抱 桿菌7份、納豆芽抱桿菌7份、釀酒酵母菌7份、海洋紅酵母7份、嗜酸乳桿菌7份。
[0066] 枯草芽抱桿菌種子液和納豆芽抱桿菌種子液活菌數為100個億/ml、釀酒酵母菌種 子液和海洋紅酵母種子液活菌數為30個億/ml、嗜酸乳桿菌種子液活菌數為50個億/ml;
[0067] 優選的步驟(4)中，發酵原料與液體種子按100與35比例均勻混合，放置到發酵床 上，經通入無菌空氣進行有氧固體發酵。
[006引發酵起始溫度為20°C，控制溫度為50°C，發酵時間為100小時;發酵結束后，溫度降 低到30°C，PH值為5.0，酸度值200trC，發酵料中有酵母酒香味和乳酸味產生，發酵達到終 點。
[0069] 優選的步驟（5)中，經流化床進風溫度60°C，出風溫度30°C，流化時間10分鐘，烘 干、粉碎到含水量10%，1〇〇目過篩，得到水產用氨基酸活性膚。
[0070] 優選的步驟(6)中，枯草芽抱桿菌種子液的制備：
[0071] 1)單菌落分離:將經活化的枯草芽抱桿菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖牛肉膏 蛋白腺培養基的培養皿上涂布，在恒溫培養箱中30°C、24小時培養，得到枯草芽抱桿菌單菌 落種子；
[0072] 2)搖瓶種子培養:枯草芽抱桿菌單菌落種子在盛有葡萄糖牛肉膏蛋白腺培養基的 1000 ml搖瓶中接種，在恒溫搖床中30°C、24小時培養，得到枯草芽抱桿菌搖瓶種子；
[0073] 3)液體種子培養:將枯草芽抱桿菌搖瓶種子按質量分數為10%~20%的接種量接 種到種子罐培養基中，經培養，得到枯草芽抱桿菌種子液;所述種子罐培養基W重量百分比 計為：
[0074] 葡萄糖1.0 %、玉米漿干粉3.0 %、硫酸錠0.1 %、憐酸氨二鐘0.1 %、余量為水;種子 罐滅菌條件:滅菌0. lOMPa、12TC、20min;培養條件:接種量20% ;罐壓0.05Mpa、風量100: lOOvvm、轉速15化pm、溫度30°C、時間4她。枯草芽抱桿菌種子液中含枯草芽抱桿菌活菌數> 100億/ml;
[0075] 優選的步驟(7)中，納豆芽抱桿菌種子液的制備：
[0076] 同（6)枯草芽抱桿菌種子液的制備方法一致，所不同的是菌種不一樣。
[0077] 優選的步驟(8)中，釀酒酵母菌種子液的制備：
[0078] 1)單菌落分離:將經活化的釀酒酵母菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖蛋白腺酵 母膏培養基的培養皿上涂布，在恒溫培養箱中3(TC、48小時培養，得到釀酒酵母單菌落種 子；
[0079] 2)搖瓶種子培養：釀酒酵母單菌落種子在盛有葡萄糖蛋白腺酵母膏培養基的 1000 ml搖瓶中接種，在恒溫培養箱中30°C、48小時培養，得到酵母菌搖瓶種子；
[0080] 3)液體種子培養:將釀酒酵母搖瓶種子按質量分數為10%~20%的接種量接種到 種子罐培養基中，經培養，得到酵母菌種子液;所述種子罐培養基W重量百分比計為:葡萄 糖3.0 %、玉米漿干粉3.0 %、硫酸錠0.1 %、憐酸氨二鐘0.1 %，余量為水;種子罐滅菌條件： 滅菌0.081?3、115°(：、18111111;培養條件:接種量20%;罐壓0.05193、風量100:150則111、轉速 20化pm、溫度28°C、時間4她。釀酒酵母菌種子液中含釀酒酵母活菌數含30億/ml。
[0081 ]優選的步驟(9)中，海洋紅酵母菌種子液的制備：
[0082] 同（8)釀酒酵母菌種子液的制備方法一致，所不同的是菌種不一樣。
[0083] 優選的步驟(10)中，嗜酸乳桿菌種子液的制備：
[0084] 1)單菌落分離:將經活化的嗜酸乳桿菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖蛋白腺牛 肉膏酵母膏培養基的培養皿上涂布，在恒溫培養箱中3(TC、48小時培養，得到嗜酸乳桿菌單 菌落種子；
[0085] 2)搖瓶種子培養:嗜酸乳桿菌單菌落種子在盛有葡萄糖蛋白腺牛肉膏酵母膏培養 基的1000 ml搖瓶中接種，在恒溫搖床中30°C、48小時培養，得到嗜酸乳桿菌搖瓶種子；
[0086] 3)液體種子培養:將嗜酸乳桿菌固體種子按質量分數為10%~20%的接種量接種 到種子罐培養基中，經培養，得到嗜酸乳桿菌種子液;所述種子罐培養基W重量百分比計 為：
[0087] 葡萄糖1.5 %，玉米漿干粉3.0 %、硫酸錠0.1 %、憐酸氨二鐘0.1 %，余量為水;種子 罐滅菌條件:滅菌0. 〇8MPa、115°C、ISmin;培養條件:接種量20 % ;罐壓0.05Mpa、風量100: 50vvm、轉速50rpm、溫度36°C、時間為64K乳酸菌24小時后為靜置培養）；嗜酸乳桿菌種子液 中含嗜酸乳桿菌活菌數含50億/ml。
[0088] 實施例1
[0089] (1)魚精膏的制備:魚精膏的制備：
[0090] 將購置的鮮魚進行清洗去除雜質，倒入魚漿粉碎機中，將其粉碎打磨成漿糊狀，將 糊狀魚漿注入到密閉的容器中，通入蒸汽，進行熟化和滅菌處理，熟化過程技術參數為:熟 化壓力為:0.5-0.8MPa，熟化時間為：15-18分鐘，泄壓后，魚油和魚漿分離，分離后將魚漿在 離屯、機中在線離屯、，離屯、轉數為：1000-1200轉/分鐘，底部大顆粒為魚粉，上部為魚精膏。魚 精膏含水量為30%~40%; (2)枯草芽抱桿菌種子液的制備：
[0091] 1)單菌落分離:將經活化的枯草芽抱桿菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖牛肉膏 蛋白腺培養基的培養皿上涂布，在恒溫培養箱中30°C、24小時培養，得到枯草芽抱桿菌單菌 落種子；
[0092] 2)搖瓶種子培養:枯草芽抱桿菌單菌落種子在盛有葡萄糖牛肉膏蛋白腺培養基的 1000 ml搖瓶中接種，在恒溫搖床中30°C、24小時培養，得到枯草芽抱桿菌搖瓶種子；
[0093] 3)液體種子培養:將枯草芽抱桿菌搖瓶種子按質量分數為10%~20%的接種量接 種到種子罐培養基中，經培養，得到枯草芽抱桿菌種子液;所述種子罐培養基W重量百分比 計為：
[0094] 葡萄糖1.0 %、玉米漿干粉3.0 %、硫酸錠0.1 %、憐酸氨二鐘0.1 %、余量為水;種子 罐滅菌條件:滅菌0. lOMPa、12TC、20min;培養條件:接種量20% ;罐壓0.05Mpa、風量100: lOOvvm、轉速15化pm、溫度30°C、時間36h。枯草芽抱桿菌種子液中含枯草芽抱桿菌活菌數> 100億/ml;
[0095] 4)菌數的檢測及其發酵結束的評價:采用平板計數法測定枯草芽抱桿菌種子液中 含枯草芽抱桿菌活菌數^ 100億/ml。顯微鏡下檢查枯草芽抱桿菌種子液，菌體運動活潑，健 壯，整齊，無雜菌，無異味，無污染等異常現象，發酵結束，可與其他種子液按照比例混合使 用。
[0096] (3)納豆芽抱桿菌種子液的制備：
[0097] 同（2)枯草芽抱桿菌種子液的制備方法一致，所不同的是菌種不一樣。
[0098] (4)釀酒酵母菌種子液的制備：
[0099] 1)單菌落分離:將經活化的釀酒酵母菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖蛋白腺酵 母膏培養基的培養皿上涂布，在恒溫培養箱中3(TC、48小時培養，得到釀酒酵母單菌落種 子；
[0100] 2)搖瓶種子培養：釀酒酵母單菌落種子在盛有葡萄糖蛋白腺酵母膏培養基的 1000 ml搖瓶中接種，在恒溫搖床中30°C、48小時培養，得到酵母菌搖瓶種子；
[0101] 3)液體種子培養:將釀酒酵母搖瓶種子按質量分數為10%~20%的接種量接種到 種子罐培養基中，經培養，得到酵母菌種子液;所述種子罐培養基W重量百分比計為:葡萄 糖3.0 %、玉米漿干粉3.0 %、硫酸錠0.1 %、憐酸氨二鐘0.1 %，余量為水;種子罐滅菌條件： 滅菌0.081?3、115°(：、18111111;培養條件:接種量20%;罐壓0.05193、風量100:150則111、轉速 20化pm、溫度28°C、時間4她。釀酒酵母菌種子液中含釀酒酵母活菌數含30億/ml。
[0102] 4)菌數的檢測及其發酵結束的評價:酵母菌細胞形態大小約為2-5X5-30皿，酵母 菌多數為單細胞微生物，常呈卵圓形或者圓柱形。釀酒酵母培養皿檢查:平板培養基上的酵 母菌落呈白色粒狀凸起，培養成熟時，有酒香味。
[0103] 采用平板計數法測定釀酒酵母菌種子液中含釀酒酵母活菌數^ 100億/ml。菌體運 動活潑，健壯，整齊，無雜菌，無異味，無污染等異常現象，發酵結束，可與其他種子液按照比 例混合使用。
[0104] (5)海洋紅酵母菌種子液的制備：
[0105] 同（4)釀酒酵母菌種子液的制備方法一致，所不同的是菌種不一樣。
[0106] (6)嗜酸乳桿菌種子液的制備：
[0107] 1)單菌落分離:將經活化的嗜酸乳桿菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖蛋白腺牛 肉膏酵母膏培養基的培養皿上涂布，在恒溫培養箱中3(TC、48小時培養，得到嗜酸乳桿菌單 菌落種子；
[0108] 2)搖瓶種子培養:嗜酸乳桿菌單菌落種子在盛有葡萄糖蛋白腺牛肉膏酵母膏培養 基的1000 ml搖瓶中接種，在恒溫搖床中30°C、48小時培養，得到嗜酸乳桿菌搖瓶種子；
[0109] 3)液體種子培養:將嗜酸乳桿菌搖瓶種子按質量分數為10%~20%的接種量接種 到種子罐培養基中，經培養，得到嗜酸乳桿菌種子液;所述種子罐培養基W重量百分比計 為:葡萄糖1.5 %，玉米漿干粉3.0 %、硫酸錠0.1 %、憐酸氨二鐘0.1 %，余量為水;種子罐滅 菌條件:滅菌0.〇8MPa、115°C、ISmin;培養條件:接種量20% ;罐壓0.05Mpa、風量100:50vvm、 轉速50rpm、溫度36°C、時間為64h(乳酸菌24小時后為靜置培養）；嗜酸乳桿菌種子液中含嗜 酸乳桿菌活菌數^ 50億/ml。
[0110] 4)菌數的檢測及其發酵結束的評價:細胞形態為在PH值5.OW下條件下，菌體呈現 短桿狀，菌體粗壯、兩端純圓，在PH值6.2條件下，菌體變細，桿狀較長。培養皿檢查:平板培 養基上的嗜酸乳桿菌菌落呈無色透明，采用平板計數法測定嗜酸乳桿菌種子液中含嗜酸乳 桿菌活菌數^ 50億/ml。培養成熟時，PH=5W下，具有酸甜芳香味，菌體運動活潑，健壯，整 齊，無雜菌，無異味，無污染等異常現象，發酵結束，可與其他種子液按照比例混合使用。
[0111] (7)固體與液體混合階段:將發酵原料與液體種子按比例均勻混合，其重量比為： 魚精膏20份、豆巧60份、花生巧10份、玉米漿干粉10份、枯草芽抱桿菌7份、納豆芽抱桿菌7 份、釀酒酵母菌7份、海洋紅酵母7份、嗜酸乳桿菌7份;發酵原料總質量含水量為:16.0%。
[0112] (8)固體發酵料培養:將枯草芽抱桿菌、納豆芽抱桿菌、釀酒酵母菌、海洋紅酵母和 嗜酸乳桿菌分別經過搖瓶種子培養，再經過發酵罐培養得到的液體種子。
[0113] 按照枯草芽抱桿菌7份、納豆芽抱桿菌7份、釀酒酵母菌7份、海洋紅酵母7份、嗜酸 乳桿菌7份比例混合;發酵原料按照魚精膏20份、豆巧60份、花生巧10份、玉米漿干粉10份比 例混合;發酵原料與液體種子重量比為：100:35 ;，經過通風發酵培養，得到水產用氨基酸活 性膚。
[0114] (9)不同發酵原料配比對發酵溫度的影響：
[0115] 不同發酵原料配比試驗設計和試驗結果見表1、表2:
[0116] 親1.不同發醇原料配比試輪巧計
[0117]
[0118] 表2.不同發酵原料對發酵溫度的影響rc) LOI20 J 起始溫度 2〇"c±rc
[0121] 通過表2可W看出，試驗組1、試驗組2發酵溫度最好，溫度上升快，持續時間長，50 °C W上持續24小時。試驗組3發酵不理想，可能魚精膏太多的原因。對照組發酵也是起溫快， 持續時間長。
[0122] (10)不同發酵原料對發酵產品指標的影響：
[0123] 不同發酵原料對發酵產品指標的測定結果見表3:
[0124] 表3.不同發酵原料對發酵產品指標的影響：
[01 巧 1
[0126] 通過表3可W看出，試驗組I、試驗組2測定指標好于試驗組3和試驗組4的測定指 標，試驗組2測定指標為：蛋白質53.0 %、小膚26.0 %、賴氨酸3.6 %。蛋氨酸1.2 %、蘇氨酸 1.5%、色氨酸0.6%。
[0127] 在上述試驗組2固體發酵料配方的情況下，試驗結果表明：固體發酵在發酵床上進 行通風有氧培養，起始溫度為20°C~30°C，發酵過程控制溫度為50°C~60°C，發酵時間應控 制在100~120小時；且使發酵溫度于40°C持續48小時W上后，通過翻倒、通風加氧，可使發 酵料溫度下降至30°C W下，物理反應和生化反應結束，發酵料有酒香和乳酸味產生，PH值為 4.0~5.0,發酵達到終點；
[01%]對發酵床上發酵料進行通風，降低質量含水量到20~25%，然后傳輸到流化床上， 在°C~60°C條件下烘干，烘干到質量含水量^ 10%，粉碎、過篩。
[0129] 粉碎處理條件:在無菌潔凈條件下進行，粉碎后粒度100目、含水量10%，為合格產 品。
[0130] (11)固體發酵階段：
[0131] 將按比例均勻混合后發酵料放置到發酵床上，經通入無菌空氣進行有氧固體發 酵。
[0132] 發酵起始溫度為20°C，控制溫度為50°C，發酵時間為100小時;發酵結束后，溫度降 低到30°C，PH值為5.0，酸度值20°C，發酵料中有酵母酒香味和乳酸味產生，發酵達到終點。
[0133] (12)烘干粉碎階段：
[0134] 再經流化床進風溫度60°C，出風溫度30°C，流化時間10分鐘，烘干、粉碎到含水量 10%，100目過篩，得到水產用氨基酸活性膚。
[0135] 實施例2
[0136] 將實施例1獲得的水產用氨基酸活性膚(試驗組2)和氨基酸活性膚(對照組)在特 種水產飼料中半量替代魚粉和豆巧在石斑魚中應用，并觀察測定試驗對飼料報酬率(FCR)、 成活率和增重率效果的影響，試驗設計和試驗結果見表4和表5:
[0137] 表4.水產用氨基酸活性膚半量替代魚粉和豆巧在石斑魚應用的試驗設計
[013 引
[0139 ] *基本原料量:原料中不包括蛋白量。基礎蛋白量:包括魚粉和豆巧；
[0140]表5.水產用氨基酸活性膚半量替代魚粉和豆巧對石斑魚增重量和成活率的影響 (30 天） 「01411
[0143] 通過表4和表5可W看出，在正常的條件和同等的管理水平下，經過30天的喂養，試 驗組飼料報酬率(FCR)0.798，對照組飼料報酬率(FCR) 1.062，試驗組較對照組飼料報酬率 (FCR)降低0.264;試驗組成活率96.0%，對照組成活率93.0%，試驗組較對照組成活率提高 1.03 % ;試驗組總增重2175.4g/30日，對照組總增重2168.3g/30日，試驗組較對照組增重率 提高109.28%。試驗結果表明：水產用氨基酸活性膚特種水產飼料(發酵原料中含魚精膏） 與氨基酸活性膚(發酵原料中不含魚精膏））膚特種水產飼料在石斑魚中進行比較性應用試 驗，飼料報酬率(FCR)和提高增重率效果明顯。
[0144] 實施例3
[0145] 將實施例1獲得的水產用氨基酸活性膚在特種水產飼料中半量替代魚粉和豆巧， 在南美白對郵中進行應用試驗，并觀察測定試驗對飼料報酬率(FCR)、成活率和增重率效果 的影響，試驗設計和試驗結果見表6、表7和表8、表9、表10:
[0146] 表6.水產用氨基酸活性膚半量替代魚粉和豆巧對南美白對郵應用試驗設計
[0147]
12 *基本原料量:原料中不包括蛋白量。基礎蛋白量:包括魚粉和豆巧； 2 表7.含氨基酸活性膚特種水產飼料對南美白對郵的成活率和增重量的影響（30 天） 「01 加 I
[0151] * 水溫 26°C;
[0152] *養殖池水體面積:長X寬X高=5m X 4m X 1.5m = 30m3;池邊為圓角。
[0153] *養殖地點：山東省濰坊市寒亭區大家法孫劍雄
[0154] *試驗時間：2015年8月19日到9月18日
[01W] 在水溫26 °C時，經過30天的喂養，試驗結果經過方差和T檢驗，其結果見表8、9、10:
[0156] 表8. t-檢驗:飼料報酬率(FCR)成對雙樣本均值分析
[0157]
[015引 *試驗組與對照組t檢驗P值小于0.01差異極顯著。
[0159] 通過表8可W看出，t-檢驗:飼料報酬率(FCR)成對雙樣本均值分析，試驗組與對照 組t檢驗P值小于0.0 l差異極顯著。
[0160] 表9. t-檢驗:成活率成對雙樣本均值分析
[0161]
[0162] *試驗組與對照組t檢驗P值大于0.05差異不顯著。
[0163] 通過表9可W看出.t-檢驗:成活率成對雙樣本均值分析，試驗組與對照組t檢驗P 值大于0.05差異不顯著。
[0164] 表10. t-檢驗增重率成對雙樣本均值分析
[01 化]
[0166]
[0167] *試驗組與對照組t檢驗P值小于0.05差異顯著。
[0168] 通過表10可W看出，t-檢驗增重率成對雙樣本均值分析，試驗組與對照組t檢驗P 值小于0.05差異顯著。
[0169] 通過表6、表7和表8、表9、表10可W看出，在正常的條件和同等的管理水平下，經過 30天的喂養，試驗組飼料報酬率(FCR)0.88，對照組飼料報酬率(FCR) 1.03，試驗組較對照組 飼料報酬率(FCR)降低0.15;試驗組成活率96.67 %，對照組成活率94.67 %，試驗組較對照 組成活率提高1.02% ;試驗組總增重115.15g/30日，對照組總增重104.89g/30日，試驗組較 對照組增重率提高9.78%。試驗結果表明：氨基酸活性膚特種水產飼料在南美白對郵中進 行應用，飼料報酬率(FCR)和提高增重率效果明顯。
[0170] 實施例4
[0171] 將實施例1獲得的水產用氨基酸活性膚在特種水產飼料中半量替代魚粉和豆巧在 甲魚中應用，并觀察測定試驗對飼料報酬率(FCR)、成活率和增重率效果的影響，試驗設計 和試驗結果見表11、表12:
[0172] 表11.水產用氨基酸活性膚半量替代魚粉和豆巧對甲魚應用試驗設計
[0173]
[0174] *基本原料量:原料中不包括蛋白量。基礎蛋白量:包括魚粉和豆巧
[0175] 表12.水產用氨基酸活性膚半量替代魚粉和豆巧對對甲魚增重量的影響(30天）
[0176]
[0177] 通過表12可W看出，在正常的條件和同等的管理水平下，經過30天的喂養，試驗組 飼料報酬率(FCR)O. 9707,對照組飼料報酬率(FCR)I. 2019,試驗組較對照組飼料報酬率 (FCR)降低0.2312;試驗組較對照組成活率提高1.02%;試驗組總增重1217.2g/30日，對照 組總增重1134.9g/30日，試驗組較對照組增重率提高107.25 %。試驗結果表明：水產用氨基 酸活性膚特種水產飼料(發酵原料中含魚精膏)試驗組與不含水產用氨基酸活性膚特種水 產飼料特種水產飼料對照組在甲魚中進行比較性應用試驗，飼料報酬率(FCR)和提高增重 率效果明顯。
[0178] 本發明具有生產工藝簡單，易于操作、生產原料來源廣泛，成本低易于推廣、生產 周期短發酵產物多，產品質量好，易于應用等特點。在水產養殖中應用，可W提高免疫力和 成活率，可W加快生長發育和提高產量，可W凈化水質和改善養殖環境，是一種綠色的功能 性的飼料添加劑。
[0179] 與實施例1-4不同之處在于，為提高產品質量，縮短生產周期，分離、純化并鑒定 的高活性微生物菌株，其應用效果更佳。
[0180] 目前，經過我們生產應用，其應用效果非常好，已在山東的青島、煙臺、濰坊、荷澤， 河北的秦皇島、迂寧的葫蘆島等地區應用，取得了很好的經濟效益，我們已將產品實現了商 品化生產。
【主權項】
1. 一種水產用氨基酸活性肽的生產方法，其特征在于：以魚精膏、豆柏、花生柏、玉米漿 干粉為發酵原料，以枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、釀酒酵母菌、海洋紅酵母和嗜酸乳桿菌 為微生物發酵菌群，各種原料的重量比為;魚精膏20~30份、豆柏60~70份、花生柏10~15、 玉米漿干粉10~15份;各種菌液的重量比為:枯草芽孢桿菌5~10份、納豆芽孢桿菌5~10 份、釀酒酵母菌5~10份、海洋紅酵母5~10份、嗜酸乳桿菌5~10份;發酵原料與液體種子重 量比為：100~120:20~40;均勻混合后，放置到發酵床上，經通入無菌空氣進行有氧固體發 酵，發酵起始溫度為20°C~30°C，控制溫度為50°C~60°C，發酵時間為100小時~120小時； 發酵料開始降溫，溫度降低到20°C~30°C，發酵達到終點；經流化床進風溫度80°C~60°C， 出風溫度40 °C~30 °C，流化時間8分鐘~12分鐘，烘干到含水量10 %~12 %，粉碎60目~100 目過篩，得到水產用氨基酸活性肽； 上述發酵原料中：魚精膏含水量為30 %~40 %、豆柏含水量為10 %~13 %、花生柏含水 量為10%~13%、玉米漿干粉含水量為10%~13%。2. 按照權利要求1所述的生產方法，其特征在于:上述發酵所得產品中，粗蛋白50%~ 60 %，其中含短鏈肽20 %~30 %以上(短鏈肽分子量為2000個道爾頓以下）、賴氨酸3.0 %~ 4.0%、蛋氨酸1.0%~2.0%、蘇氨酸1.0%~2.0%、色氨酸0.5%~0.9%; 上述發酵結束所得產品的pH值為4.0~5.0，總酸為200~300° T，發酵料中有酵母酒香 味和乳酸味。3. 按照權利要求1或2所述的生產方法，其特征在于:所述的發酵結束所得產品的pH值 為5.0，總酸為200° T，發酵料中有酵母酒香味和乳酸味； 所述發酵原料中：魚精膏含水量為40%、豆柏含水量為10%、花生柏含水量為10%、玉 米漿干粉含水量為10 %; 上述發酵所得產品中，粗蛋白50%，其中含短鏈肽20%以上(短鏈肽分子量為2000個道 爾頓以下）、賴氨酸3.0%、蛋氨酸1.0%、蘇氨酸1.0%、色氨酸0.5%。4. 按照權利要求1所述的生產方法，其特征在于:所述的液體種子是分別經過搖瓶種子 培養，再經過發酵罐培養得到的液體種子。5. 按照權利要求1所述的生產方法，其特征在于：所述發酵原料中各種原料的重量比 為；魚精膏20份、豆柏60份、花生柏10份、玉米漿干粉10份;液體種子中各種菌液的重量比 為:枯草芽孢桿菌7份、納豆芽孢桿菌7份、釀酒酵母菌7份、海洋紅酵母7份、嗜酸乳桿菌7份。6. 按照權利要求1所述的生產方法，其特征在于:所述發酵原料與液體種子重量比為： 100:35;即發酵原料100份，枯草芽孢桿菌7份、納豆芽孢桿菌7份、釀酒酵母菌7份、海洋紅酵 母7份、嗜酸乳桿菌7份。7. 按照權利要求1、4、5或6所述的方法，其特征在于:所述枯草芽孢菌種子液、納豆芽孢 桿菌液體種子中每毫升含活菌數為2 100個億;釀酒酵母菌液體種子和海洋紅酵母液體種 子中每毫升含活菌數為2 30個億，嗜酸乳桿菌液體種子中每毫升含活菌數為2 50個億。8. 按照權利要求1所述的方法，其特征在于:發酵原料放置到發酵床上，經通入無菌空 氣進行有氧固體發酵，發酵起始溫度為20°C，控制溫度為50°C，發酵時間為100小時;發酵結 束后，溫度降低到30°C，pH值為5.0，總酸200° T發酵料中有酵母酒香味和乳酸味產生，發酵 達到終點；再經流化床進風溫度80°C，出風溫度30°C，流化時間10分鐘，烘干、粉碎到含水量 10%，100目過篩，得到水產用氨基酸活性肽。9. 照權利要求1所述的方法，其特征在于:所述枯草芽孢菌種子罐和納豆芽孢桿菌種子 罐的培養基和培養條件為:枯草芽孢菌種子罐和納豆芽孢桿菌種子罐培養基以重量百分比 計為:葡萄糖〇. 5~1.5%、玉米漿干粉2.0~4.0 %、硫酸銨0~0.2%、磷酸氫二鉀0~0.2 %， 余量為水;種子罐滅菌條件:滅菌〇. 08~0. lOMPa、115~121°C、18~20min;培養條件:接種 量 10~20% ;罐壓0.01 ~O.lOMPa、風量 100:80~100:120vvm、轉速 100~200rpm、溫度28°C ~32°C;時間48~64h; 所述釀酒酵母菌種子罐和海洋紅酵母種子罐的培養基和培養條件為:釀酒酵母菌和海 洋紅酵母種子罐的培養基以重量百分比計為:葡萄糖2.0~4.0%、玉米漿干粉2.0~4.0%、 硫酸銨0~0.2%、磷酸氫二鉀0~0.2%，余量為水;種子罐滅菌條件:滅菌0.08~0 . lOMPa、 115~121°(：、18~2〇111丨11;培養條件：接種量10~20% ;罐壓0.01~0.1010^、風量100:100~ 100:150vvm、轉速 180 ~220rpm、溫度 28°C ~36°C;時間 48 ~64h; 所述嗜酸乳桿菌種子罐的培養基和培養條件為:嗜酸乳桿菌的種子罐培養基以重量百 分比計為：葡萄糖1.0~2.0 %、玉米漿干粉2.0~4.0%、硫酸銨0~0.2 %、磷酸氫二鉀0~ 0.2%，余量為水;種子罐滅菌條件:滅菌0.08~0.1010^、115~121°(：、18~2〇11^11 ;培養條 件：接種量10~20% ;罐壓0.01~O.lOMPa、風量100:0~100:100vvm、轉速0~lOOrpm、溫度 28°C~36°C;時間48~72h(乳酸菌24小時后為靜置培養，其它時間為通氣培養）。10. 照權利要求9所述的方法，其特征在于:所述枯草芽孢菌種子罐和納豆芽孢桿菌種 子罐的培養基和培養條件為:枯草芽孢菌種子罐和納豆芽孢桿菌種子罐培養基以重量百分 比計為:葡萄糖1.0%、玉米漿干粉3.0%、硫酸銨0.1 %、磷酸氫二鉀0.1 %、余量為水;種子 罐滅菌條件：滅菌0. l〇MPa、121°C、20min;培養條件：接種量20 % ;罐壓0.05Mpa、風量100: lOOvvm、轉速 150rpm、溫度30°C、時間48h; 所述釀酒酵母菌種子罐和海洋紅酵母種子罐的培養基和培養條件為:釀酒酵母菌和海 洋紅酵母種子罐的培養基以重量百分比計為：葡萄糖3.0 %、玉米漿干粉3.0 %、硫酸銨 0.1 %、磷酸氫二鉀0.1 %，余量為水;種子罐滅菌條件:滅菌0.08MPa、115 °C、18min;培養條 件:接種量20 % ;罐壓0.05Mpa、風量100:150vvm、轉速200rpm、溫度28 °C、時間48h; 所述嗜酸乳桿菌種子罐的培養基和培養條件為:嗜酸乳桿菌種子罐培養基以重量百分 比計為:葡萄糖1.5%，玉米漿干粉3.0%、硫酸銨0.1 %、磷酸氫二鉀0.1 %，余量為水;種子 罐滅菌條件：滅菌0. 〇8MPa、115 °C、18min;培養條件：接種量20 % ;罐壓0.05Mpa、風量100: 50vvm、轉速50rpm、溫度36°C、時間為64h(乳酸菌24小時后為靜置培養）。
【文檔編號】C12P21/00GK105861615SQ201610259632
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月22日
【發明人】閆大鳳, 葛明巧
【申請人】閆大鳳