一種從披堿草中提取得到的化合物及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種從披堿草中提取得到的化合物及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 我國草地業發展緩慢，最直接的影響就是造成畜牧業發展也減速，因而致使每年 我國從國外進口牧草以及購買嬰兒奶制品的數量逐年上升。究其原因主要是因為我國缺少 具有抗性的優異牧草品種，如有殺蟲活性的牧草。每年我國牧草由于各種昆蟲的危害，造成 大面積減產和生長緩慢，并且還影響奶制品的安全。雖然現階段化學合成的殺蟲藥物在植 物病害防治中起著不可代替的作用，但是大家對農藥毒性和農藥對環境的污染問題越來越 重視，從微生物中尋找新的無毒、無污染、可持續利用的生物源殺蟲劑已成為現代農藥研究 開發的一個熱點。
[0003] 植物源殺蟲劑是指利用植物及其代謝產物來防治害蟲。由于這類植物微源殺蟲劑 不會對生態環境產生污染，還具有可持續性，所以，將是殺蟲藥物研制與生產單位重要的工 作方向。

【發明內容】

[0004] 本發明提供了一種從披堿草中提取得到的化合物，是一種新穎骨架的環肽化合 物，具有良好的殺蟲活性;并且提供其制備方法和應用。
[0005] 禾草的很多草已成為具有殺蟲活性的優異牧草，如醉馬草，中華羊茅等，根據本申 請人分析，其抗性特點來源于自身的內生真菌為其宿主提供的此利益。如果能從 帶內生真菌沙的禾草中找到具有殺蟲活性的代謝物，那么可以從這些具有殺蟲活性 的牧草中篩選出具有抗蟲性的優良牧草，這將解決我國缺乏具有殺蟲抗性的優良牧草問 題;同時，得到一種對生態環境無污染的植物源生物農藥。
[0006] 本發明的第一個目的是提供一種從披堿草中提取分離得到的化合物，其結構式如 式(I)所示：
[0007]
[0008] 本發明還提供上述化合物的制備方法，所述化合物是從帶內生真菌iiwWW bromicola的披堿草中提取分離得到的。
[0009] 作為優選，將帶內生真菌bromicola的披堿草干燥粉碎后，先用甲醇提 取，再用乙酸乙酯萃取，然后用大孔樹脂柱和反相色譜柱分離，重結晶得到的。
[0010] 作為優選，步驟如下：
[0011] (1)收集帶內生真菌你 iWWbromicola的披堿草并晾干粉碎，得到干草；
[0012] (2)用工業甲醇在室溫下浸泡3-7天，浸泡3-4次；作為優選，所述干草(kg)與工業 甲醇(L)的用量比為1:2-1:6;
[0013] (3)去除溶劑，得到粗浸膏；
[0014] ⑷將粗浸膏溶解后，用乙酸乙酯萃取，合并萃取液，去除溶劑，得到浸膏；
[0015] 作為優選，所述粗浸膏(g)和乙酸乙酯(mL)的用量比為1:5-1:10;
[0016] 作為優選，萃取的次數為3-5次；
[0017] (5)將浸膏以水-甲醇作溶劑過大孔樹脂柱，再以反相色譜柱和重結晶分離，得到 化合物。
[0018] 作為優選，所述大孔樹脂柱的規格為:外徑10 · Ocm，長60 · Ocm;
[0019] 作為優選，過大孔樹脂柱時水和甲醇的體積比為1:1-3:1。
[0020] 作為優選，所述反相色譜柱的規格為:外徑2 · Ocm，長30 · Ocm;
[0021 ] 作為優選，過反相色譜柱時水和甲醇的體積比為3:2-5: 2。
[0022] 本發明的第三個目的是提供上述化合物在制備殺蟲劑中的應用。
[0023] 作為優選，所述蟲為甘藍蚜。
[0024]本發明的第四個目的是提供一種植物源殺蟲劑，所述殺蟲劑的有效成分為權利要 求1所述的化合物。
[0025]本發明的第五個目的是提供上述化合物在檢測披堿草抗蟲性和篩選具有殺蟲活 性的披堿草中的應用。
[0026 ]本申請人首次從帶內生真菌bromi co la的披堿草中提取分離得到本發明 的化合物，并通過一系列的譜圖（高分辨質譜、氫譜、碳譜、二維核磁)以及X射線單晶衍射分 析，最終確定了它的結構，是一種首次分離得到的新穎骨架的大環肽化合物。通過對其進行 實驗，發現其有很好的殺蟲效果，尤其對于甘藍蚜有良好的殺蟲效果，因此，該化合物是一 種極有前景的可持續利用的植物源農藥。并且，以帶有內生真菌^AAiMbromicola的披堿 草為種子，可以培育出具有殺蟲活性的優勢草，為草地業的發展做出貢獻。
【附圖說明】
[0027]附圖用來提供對本發明的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與本發明的實 施例一起用于解釋本發明，并不構成對本發明的限制。在附圖中：
[0028]圖1為本發明化合物的氫譜圖；
[0029]圖2為本發明化合物的碳譜圖；
[0030]圖3為本發明化合物的DEPT譜圖；
[00311圖4為本發明化合物的1H-1!! COSY譜圖；
[0032] 圖5為本發明化合物的HSQC譜圖；
[0033] 圖6為本發明化合物的HMBC譜圖；
[0034] 圖7為本發明化合物的高分辨質譜圖；
[0035]圖8為本發明化合物的X射線單晶衍射圖。
【具體實施方式】
[0036]以下的實施例便于更好地理解本發明，但并不限定本發明。下述實施例中的實驗 方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為市 售。
[0037]本發明化合物的制備過程如下：
[0038] 1)播種帶bromicola內生真菌的披喊草(Elymus dahuricus)種子，該 ￡)jicW(Wbromicola內生真菌選用文獻Origin,Divergence,and Phylogeny of Asexual EpichloeEndophyte in Elymus Species from Western China，10(5): e0127096 · doi : 10.1371/journal, pone. 0127096中標號為NI_201306的菌株，上述披堿草是從甘肅采集的， 十月份左右將帶你』^7f^bromicola內生真菌的披堿草進行收集；
[0039] 2)將步驟1)得到的披堿草放置陰涼處進行晾干，得到干草；
[0040] 3)將步驟2)得到的干草粉碎，用工業甲醇在室溫下進行浸泡，每次3-7天，共浸泡 3-4次;干草(kg)與工業甲醇(L)的用量比為1:2-1:6;
[0041] 4)將步驟3)得到的浸泡液體用旋轉蒸發儀去除溶劑，得到粗浸膏；
[0042] 5)將步驟4)得到的粗浸膏用蒸餾水溶解，再用乙酸乙酯進行萃取，萃取3-5次，合 并萃取液體，用旋轉蒸發儀去除溶劑得到浸膏;粗浸膏(g)和乙酸乙酯(mL)的用量比為1:5-1:10；
[0043] 6)將浸膏以水-甲醇（體積比1:1-3:1)作溶劑過大孔樹脂柱子(柱子規格為外徑 10.0〇11，長60.0〇11 ;型號為即-20，日本三菱），再經反相色譜柱(型號1^-18，德國默克)水-甲 醇（體積比3 : 2-5 : 2)(外徑2.0cm，長30.0cm)和重結晶分離得到本發明的化合物： dahurelmusin A〇
[0044] 實施例1本發明的化合物的制備實施例
[0045] 1)播種帶你/(^_/〇(^131'0111；[(301&內生真菌的披喊草^171]1118(1&11111'；[(3118)種子，該 i^ic/zioi^bromicola內生真菌選用文獻Origin,Divergence,and Phylogeny of Asexual Epichloe Endophyte in Elymus Species from Western China，10(5): e0127096 · doi : 10.1371/journal, pone. 0127096中標號為NI_201306的菌株，上述披堿草是從甘肅采集的， 十月份左右將帶你 idioP bromicola內生真菌的披堿草進行收集；
[0046] 2)將步驟1)得到的披堿草放置陰涼處進行晾干，得到干草4.0kg;
[0047] 3)將步驟2)得到的干草粉碎，用16L工業甲醇在室溫下進行浸泡，每次6天，共浸泡 3次；
[0048] 4)將步驟3)得到的浸泡液體用旋轉蒸發儀去除溶劑，得到粗浸膏40g;
[0049] 5)將步驟4)得到的粗浸膏用350mL蒸餾水溶解，再用350mL的乙酸乙酯進行萃取， 萃取3次，合并萃取液體，用旋轉蒸發儀去除溶劑得到浸膏25.0g;
[0050] 6)將浸膏以水-甲醇（體積比1:1)作溶劑過大孔樹脂柱子（柱子規格為外徑 10.0〇11，長60.0〇11 ;型號為即-20，日本三菱），再經反相色譜柱(型號1^-18，德國默克)水-甲 醇(體積比3:2)(外徑2.0cm，長30.0cm)和重結晶分離得到本發明的化合物:dahurelmusin 八，重量為9.211^。
[0051 ]實施例2本發明的化合物的制備實施例
[0052] 1)播種帶 bromicola 內生真菌的披喊草（Elymus dahuricus)種子，該 i^j'cA_/Wbromicola內生真菌選用文獻Origin,Divergence,and Phylogeny of Asexual EpichloeEndophyte in Elymus Species from Western China，10(5): e0127096 · doi : 10.1371/journal, pone. 0127096中標號為NI_201306的菌株，上述披堿草是從甘肅采集的， 十月份左右將帶拉^'dif^bromicola內生真菌的披堿草進行收集；
[0053] 2)將步驟1)得到的披堿草放置陰涼處進行晾干，得到干草4.0kg;
[0054] 3)將步驟2)得到的干草粉碎，用8L工業甲醇在室溫下進行浸泡，每次7天，共浸泡4 次；
[0055] 4)將步驟3)得到的浸泡液體用旋轉蒸發儀去除溶劑，得到粗浸膏40g;
[0056] 5)將步驟4)得到的粗浸膏用300mL蒸餾水溶解，再用200mL的乙酸乙酯進行萃取， 萃取5次，合并萃取液體，用旋轉蒸發儀去除溶劑得到浸膏25.0g;
[0057] 6)將浸膏以水-甲醇（體積比3:1)作溶劑過大孔樹脂柱子（柱子規格為外徑 10.0〇11，長60.0〇11 ;型號為即-20，日本三菱），再經反相色譜柱(型號1^-18，德國默克)水-甲 醇(體積比5:2)(外徑2.0〇11，長30.0〇11)和重結晶分離得到本發明的化合物 :(^1111代11]1118；[11 八，重量為9.011^。
[0058] 實施例3本發明的化合物的制備實施例
[0059] 1)播種帶崩iaWc^bromicola內生真菌的披喊草（Elymus dahuricus)種子，該 內生真菌選用文獻Origin,Divergence,and Phylogeny of Asexual Epichloe Endophyte in Elymus Species from Western China，10(5): e0127096 · doi : 10.1371/journal, pone. 0127096中標號為NI_201306的菌株，上述披堿草是從甘肅采集的， 十月份左右將帶你 bromicolaR生真菌的披堿草進行收集；
[0060] 2)將步驟1)得到的披堿草放置陰涼處進行晾干，得到干草4.0kg;
[0061] 3)將步驟2)得到的干草粉碎，用24L工業甲醇在室溫下進行浸泡，每次3天，共浸泡 3次；
[0062] 4)將步驟3)得到的浸泡液體用旋轉蒸發儀去除溶劑，得到粗浸膏40g;
[0063] 5)將步驟4)得到的粗浸膏用380mL蒸