大規模培養綠色巴夫藻的大量元素營養鹽配方的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于水產養殖領域，尤其是一種適用于大規模培養綠色巴夫藻的大量元素營養鹽配方。
【背景技術】
[0002]微藻作為可再生的生物質能源也得到了越來越多的關注，規模化培養微藻產業化也有相關的研究并取得一定進展，，但由于規模化培養微藻容易受到光照、培養條件等因素的影響，現有的微藻產業化模式仍存在效率低、成本高的不足。
[0003]綠色巴夫藻屬于金藻門、巴夫藻目，由于其無細胞壁、個體微小、繁殖快、營養豐富，適于幼體攝食和消化，并且具有合成高度不飽和脂肪酸的能力，最突出的是富含水產經濟動物幼體生長和發育所必需的二十二碳六烯酸，在餌料強化方面起了直接或間接作用。因而它是一種優質的單胞藻餌料，廣泛應用于蝦、蟹、貝類幼體及海水仔魚的人工育苗。
[0004]目前實驗室及生產上培養綠色巴夫藻多采用基礎的F/2培養基進行培養，F/2培養基主要是由 NaN03、NaH2PO4.H20、Na2S13.9H20、Na2EDTA、FeCl3.6H20、CuSO4.5H20、ZnSO4.7H20、CoCl2.6H20、MnCl.4H20、Na2MoO4.2H20、維生素 B1、維生素 B12、生物素、自然海水組成。F/2培養基存在著易受污染、培養密度低等缺點，容易導致培養效率低下，所培養的細胞營養成分不穩定，嚴重影響育苗進程和育苗質量。
[0005]現有的技術未能解決綠色巴夫藻培養過程中的這一不足。
【發明內容】
[0006]本發明的目的是針對目前綠色巴夫藻培養的現狀，提供一個適合綠色巴夫藻大規模培養的大量元素的營養鹽培養基礎及制備，本發明的培養基用于綠色巴夫藻的規模化培養，可以促進綠色巴夫藻的生長、提高培養密度、提高培養效率，獲得的綠色巴夫藻細胞營養成分穩定，還具有培育密度高、培育持續時間長、降低養殖成本低的特點。
[0007]本發明的技術方案如下:一種適用于大規模培養綠色巴夫藻的大量元素營養鹽配方，其中各組分及其含量以每m3海水中含有該組分g數計，如下=(NH2)2CO 25~35g/m3，NH4HCO3 55?65g/m3，Na2HPO4 8~12g /m3，FeCl3 2.2-2.8g /m3，EDTA_2Na 9.0-1Og/ m3。
[0008]優選的配方組成可以是:該營養鹽配方以每m3海水中含有該組分g數計，如下:(NH2)2CO 30g/m3，NH4HCO3 60g/m3，Na2HPO4 1g /m3，FeCl3 2.5g /m3，EDTA_2Na 9.5g/ m3。
[0009]優選的配方組成還可以是:該營養鹽配方以每m3海水中含有該組分g數計，如下:(NH2)2CO 32g/m3，NH4HCO3 58g/m3，Na2HPO4 8g /m3，FeCl3 2.8g /m3，EDTA_2Na 10g/m3。
[0010]優選的配方組成還可以是:該營養鹽配方以每m3海水中含有該組分g數計，如下:(NH2)2CO 28g/m3，NH4HCO3 62g/m3,Na2HPO4 Ilg /m3，FeCl3 2.4g /m3，EDTA_2Na 9.6g/ m3。
[0011]本發明的營養鹽配方用于綠色巴夫藻的大規模培養方法包括如下步驟:
(O將用于大規模培養綠色巴夫藻的面積為200m2跑道式生物反應器進行徹底的清理和消毒，而后將經過砂濾、泡沫分離、精密過濾器和紫外線消毒的海水引入，海水水深25~30cm，再按照20ppm的劑量將強氯精加入海水中，進行消毒和曝氣一晝夜；
(2)海水經步驟(I)處理后，按照30ppm的劑量加入硫代硫酸鈉；
(3)根據權利要求1所述配方，按海水水體體積，稱量以下各組分:(NH2)2OKNH4HCO3,Na2HPO4, FeCl3, EDTA_2Na，將各組分加入海水中，接入經過檢測的合格的綠色巴夫藻藻種，接種量按體積比為藻種:海水=1:50~100，接種完畢，使用輪漿進行攪拌，輪漿由電動機驅動，同時通入CO2以調節pH值。
[0012]所述攪拌速度為:50~100rpm。
[0013]所述pH 值為 8-8.2。
[0014]所述組分的加入方式可以是:依次加入二分之一的(NH2)2OK二分之一的Na2HPO4、二分之一的EDTA_2Na、二分之一的NH4HC03、二分之一的FeCl3, 1min后，再加入二分之一的(NH2)2C0、二分之一的 Na2HPO4、二分之一的 NH4HC03、二分之一的 FeCl3、二分之一的EDTA-2Na。
[0015]所述組分加入海水后，將海水在頻率60~80Hz條件下進行超聲處理10~20min。
[0016]本發明具有如下有益效果:本發明可以促進綠色巴夫藻的生長、提高培養密度、提高培養效率，獲得的綠色巴夫藻細胞營養成分穩定，還具有培育密度高、培育持續時間長、降低養殖成本低的特點，相對于現有技術，可以明顯提高綠色巴夫藻的細胞密度，明顯延長綠色巴夫藻的培養時間；在培養過程中，將營養鹽加入海水后再結合超聲波處理海水，利用超聲波的空化作用促進營養液的有效、快速、均勻溶解，且可控制海水中營養鹽成分微小顆粒的均勻分布，有利于微藻的吸收，促進其良好代謝，獲得良好的生長。
【具體實施方式】
[0017]下面通過實施例對本發明做進一步詳細說明，這些實施例僅用來說明本發明，并不限制本發明的范圍。
[0018]為了使本發明的目的、技術方案和優點更加明確，下面對本發明的優選實施例進行詳細的描述。
[0019]實施例1采用以下步驟進行綠色巴夫藻的大規模培養:
(1)將用于面積為200m2跑道式生物反應器進行徹底的清理和消毒，而后將經過砂濾、泡沫分離、精密過濾器和紫外線消毒的海水引入，海水水深25cm，再按照20ppm的劑量將強氯精加入海水中，進行消毒和曝氣一晝夜；
(2)海水經步驟(I)處理后，按照30ppm的劑量加入硫代硫酸鈉；
(3)按以下配方，根據海水水體體積，稱量各組分，以每m3海水中含有該組分g數計:(NH2)2CO 30g/m3，NH4HCO3 60g/m3，Na2HPO4 1g /m3，FeCl3 2.5g /m3，EDTA_2Na 9.5g/
3
m ；
(4)將各組分加入海水中，開啟輪漿以轉速50r/min攪拌lOmin，再以頻率70Hz進行超聲處理15min，靜置5min后，接入經過檢測的合格的綠色巴夫藻藻種，接種量按體積比為藻種:海水=1:50，接種完畢，使用輪漿進行攪拌，轉速50rpm，輪漿由電動機驅動，同時通入CO2以調節海水pH值8。
[0020]實施效果:本實驗方式所培養的綠色巴夫藻細胞密度高，達到了 6X 16個/ml，培養時間持續了 5天。