桑葉中提取γ-氨基丁酸的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及桑葉技術領域，是一種桑葉中提取γ-氨基丁酸的方法。
【背景技術】
[0002]γ -氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,簡稱GABA)是一種非蛋白質組成的天然氨基酸，分布十分廣泛，在動物、植物和微生物中均有GABA存在，是一種重要的抑制性神經傳遞物質。研宄表明GABA具有降血壓、調節心率失常、調節激素分泌、健腦、控制哮喘、治療癲癇、抗驚厥、抗焦慮、鎮痛和改善記憶等多種藥理作用。隨著GABA的深入研宄，GABA被作為一種新型功能性因子，廣泛運用于醫藥、食品、保健、化工及農業等行業。新疆吐魯番地區桑樹資源豐富，研宄發現桑葉中含有高含量的GABA，10g桑葉干品中GABA平均含量為226mg，所以從桑葉中提取γ-氨基丁酸越來越受到人們的重視，市場前景廣闊。申請號為200910040513.4的中國專利文獻公開了桑葉γ -氨基丁酸提取方法及其運用；以鮮桑葉為原料，經烘干粉碎，加水浸泡，超聲波萃取，無水乙醇沉淀，三級分離純化等工序制得γ -氨基丁酸白色晶體；但該方法存在生產成本高，桑葉的利用率低。

【發明內容】

[0003]本發明提供了一種桑葉中提取γ-氨基丁酸的方法，克服了上述現有技術之不足，其能有效解決現有γ-氨基丁酸提取方法存在生產成本高和桑葉的利用率低的問題。
[0004]本發明的技術方案是通過以下措施來實現的:一種桑葉中提取γ-氨基丁酸的方法，按下述方法進行:第一步，將洗凈的新鮮桑葉在溫度為25°C至35°C下遮光密閉厭氧處理6h至8h，厭氧處理后在避光陰涼處自然風干，自然風干后粉碎成50目至100目細粉得到桑葉細粉；
第二步，按I克桑葉細粉中加入5毫升至50毫升乙醇水溶液計，在桑葉細粉中加入乙醇水溶液進行一次浸提，一次浸提的時間為0.5h至3h，一次浸提后固液分離得到一次浸提液和一次濾渣，按I克桑葉細粉中加入5毫升至50毫升乙醇水溶液計，在一次濾渣中加入乙醇水溶液進行二次浸提，二次浸提的時間為0.5h至3h，二次浸提后固液分離得到二次浸提液和二次濾渣，按I克桑葉細粉中加入5毫升至50毫升乙醇水溶液計，在二次濾渣中加入乙醇水溶液進行三次浸提，三次浸提的時間為0.5h至3h，三次浸提后固液分離得到三次浸提液和三次濾渣，將一次浸提液、二次浸提液和三次浸提液混合后得到混合浸提液，將混合浸提液濃縮至混合浸提液體積的1/20至1/50后得到一次濃縮液，在一次濃縮液中加入一次濃縮液體積的3倍至5倍蒸餾水浸提0.3h至0.5h,過濾后得到一次濾液和一次濾餅，
一次濾液濃縮至質量百分含水量等于2%至5%后得到提取液；
第三步，在提取液中加入提取液3倍至4倍體積的無水乙醇在溫度為70°C至80°C下混合均勻，冷卻至常溫后過濾得到二次濾液和二次濾餅，二次濾餅用無水乙醇萃取2次至5次，萃取后將二次濾液和各萃取液合并后得到三次濾液，三次濾液濃縮至三次濾液體積的1/20至1/50后得到三次濃縮液； 第四步，在三次濃縮液中加入活性炭并混合均勻，三次濃縮液中固形物和活性炭的質量比為80:1至100:1，靜置Ih至3h后過濾得到四次濾液，四次濾液濃縮至四次濾液體積的1/20至1/50后得到粗提液；
第五步，將粗提液用檸檬酸水溶液調節PH值為3至5，將調節PH值后的1.1倍至1.3倍樹脂柱體積的粗提液加入到裝有樹脂的玻璃層析柱中吸附30分鐘至50分鐘，加入pH為8的氨水溶液進行洗脫，控制從玻璃層析柱中流出的液體流速為2.5mL/min至3.5mL，在洗脫過程中不斷用茚三酮檢測從玻璃層析柱中流出的洗脫液，茚三酮顯紫紅色時開始收集洗脫液，直至茚三酮顯色反應消失為止，合并洗脫液，然后對合并后的洗脫液進行濃縮、冷凍干燥粉碎后得到γ-氨基丁酸淡黃色或白色粉末。
[0005]下面是對上述發明技術方案的進一步優化或/和改進:
上述新鮮桑葉為果桑健壯枝條上部葉位3片至5片無病蟲害新鮮桑葉。
[0006]上述乙醇水溶液為體積百分比為80%的乙醇水溶液。
[0007]上述檸檬酸水溶液為lmol/L的檬酸水溶液。
[0008]上述樹脂為732磺酸型陽離子樹脂。
[0009]上述第一步中，厭氧處理后在避光陰涼處自然風干5天至7天，間隔2天翻動一次，避光陰涼處自然風干溫度為25°C至30°C。
[0010]上述第二步中，一次浸提、二次浸提和三次浸提均在密閉容器中進行的。
[0011]上述第二步中，混合浸提液濃縮的溫度為55°C至70°C，一次濾液濃縮的溫度為55°C至70°C ;第三步中，三次濾液濃縮的溫度為55°C至70°C ;第四步中，四次濾液濃縮的溫度為55°C至70°C ;第五步中，洗脫液濃縮的溫度為55°C至70°C。
[0012]上述第五步中，冷凍干燥的溫度為-15°C至_40°C ;冷凍干燥的時間為8h至12h。
[0013]本發明桑葉中提取γ-氨基丁酸的方法中，桑葉經過避光陰干處理從而使γ-氨基丁酸含量大大提高，本發明不需要購置萃取設備和烘干設備，利用氣候自然資源進行晾曬；同時本發明中只需要用活性炭吸附色素后，直接用732型陽離子樹脂分離純化即可；通過本發明得到的γ-氨基丁酸淡黃色或白色粉末中γ-氨基丁酸的含量和現有桑葉γ-氨基丁酸提取方法及其運用中γ-氨基丁酸白色結晶體中γ-氨基丁酸的含量相當；從而大大降低了生產成本，節約了能耗，提高了桑葉的利用率。
【具體實施方式】
[0014]本發明不受下述實施例的限制，可根據本發明的技術方案與實際情況來確定具體的實施方式。
[0015]實施例1，該桑葉中提取γ-氨基丁酸的方法，按下述方法進行:第一步，將洗凈的新鮮桑葉在溫度為25°C至35°C下遮光密閉厭氧處理6h至8h，厭氧處理后在避光陰涼處自然風干，自然風干后粉碎成50目至100目細粉得到桑葉細粉；
第二步，按I克桑葉細粉中加入5毫升至50毫升乙醇水溶液計，在桑葉細粉中加入乙醇水溶液進行一次浸提，一次浸提的時間為0.5h至3h，一次浸提后固液分離得到一次浸提液和一次濾渣，按I克桑葉細粉中加入5毫升至50毫升乙醇水溶液計，在一次濾渣中加入乙醇水溶液進行二次浸提，二次浸提的時間為0.5h至3h，二次浸提后固液分離得到二次浸提液和二次濾渣，按I克桑葉細粉中加入5毫升至50毫升乙醇水溶液計，在二次濾渣中加入乙醇水溶液進行三次浸提，三次浸提的時間為0.5h至3h，三次浸提后固液分離得到三次浸提液和三次濾渣，將一次浸提液、二次浸提液和三次浸提液混合后得到混合浸提液，將混合浸提液濃縮至混合浸提液體積的1/20至1/50后得到一次濃縮液，在一次濃縮液中加入一次濃縮液體積的3倍至5倍蒸餾水浸提0.3h至0.5h,過濾后得到一次濾液和一次濾餅，
一次濾液濃縮至質量百分含水量等于2%至5%后得到提取液；
第三步，在提取液中加入提取液3倍至4倍體積的無水乙醇在溫度為70°C至80°C下混合均勻，冷卻至常溫后過濾得到二次濾液和二次濾餅，二次濾餅用無水乙醇萃取2次至5次，萃取后將二次濾液和各萃取液合并后得到三次濾液，三次濾液濃縮至三次濾液體積的1/20至1/50后得到三次濃縮液；
第四步，在三次濃縮液中加入活性炭并混合均勻，三次濃縮液中固形物和活性炭的質量比為80:1至100:1，靜置Ih至3h后過濾得到四次濾液，四次濾液濃縮至四次濾液體積的1/20至1/50后得到粗提液；
第五步，將粗提液用檸檬酸水溶液調節PH值為3至5，將調節PH值后的1.1倍至1.3倍樹脂柱體積的粗提液加入到裝有樹脂的玻璃層析柱中吸附30分鐘至50分鐘，加入pH為8的氨水溶液進行洗脫，控制從玻璃層析柱中流出的液體流速為2.5mL/min至3.5mL，在洗脫過程中不斷用茚三酮檢測從玻璃層析柱中流出的洗脫液，茚三酮顯紫紅色時開始收集洗脫液，直至茚三酮顯色反應消失為止，合并洗脫液，然后對合并后的洗脫液進行濃縮、冷凍干燥粉碎后得到γ-氨基丁酸淡黃色或白色粉末。避光陰干比直接曬干處理的桑葉的γ-氨基丁酸含量要高，實驗結果表明，經過避光陰干處理的桑葉，有助于鮮葉中L-谷氨酸轉化為γ-氨基丁酸，從而使GABA含量大大提高，提高了桑葉的利用率；一次浸提、二次浸提和三次浸提便于將一些色素和糖類雜質去除，使固形物含量降低，這樣有利于浸提液的進一步純化。
[0016]實施例2，該桑葉中提取γ-氨基丁酸的方法，按下述方法進行:第一步，將洗凈的新鮮桑葉在溫度為25°c或35°C下遮光密閉厭氧處理6h或8h，厭氧處理后在避光陰涼處自然風干，自然風干后粉碎成50目或100目細粉得到桑葉細粉；
第二步，按I克桑葉細粉中加入5毫升或50毫升乙醇水溶液計，在桑葉細粉中加入乙醇水溶液進行一次浸提，一次浸提的時間為0.5h或3h，一次浸提后固液分離得到一次浸提液和一次濾渣，按I克桑葉細粉中加入5毫升或50毫升乙醇水溶液計，在一次濾渣中加入乙醇水溶液進行二次浸提，二次浸提的時間為0.5h或3h，二次浸提后固液分離得到二次浸提液和二次濾渣，按I克桑葉細粉中加入5毫升或50毫升乙醇水溶液計，在二次濾渣中加入乙醇水溶液進行三次浸提，三次浸提的時間為0.5h或3h，三次浸提后固液分離得到三次浸提液和三次濾渣，將一次浸提液、二次浸提液和三次浸提液混合后得到混合浸提液，將混合浸提液濃縮或混合浸提液體積的1/20或1/50后得到一次濃縮液，在一次濃縮液中加入一次濃縮液體積的3倍或5倍蒸餾水浸提0.3h或0.5h,過濾后得到一次濾液和一次濾餅，
一次濾液濃縮至質量百分含水量等于2%或5%后得到提取液；
第三步，在提取液中加入提取液3倍或4倍體積的無水乙醇在溫度為70°C或80°C下混合均勻，冷卻至常溫后過濾得到二次濾液和二次濾餅，二次濾餅用無水乙醇萃取2次或5次，萃取后將二次濾液和各萃取液合并后得到三次濾液，三次濾液濃縮至三次濾液體積的1/20或1/50后得到三次濃縮液； 第四步，在三次濃縮液中加入活性炭并混合均勻，三次濃縮液中固形物和活性炭的質量比為80:1或100:1，靜置Ih或3h后過濾得到四次濾液，四次濾液濃縮至四次濾液體積的1/20或1/50后得到粗提液；
第五步，將粗提液用檸檬酸水溶液調節PH值為3或5，