本(ben)申請(qing)屬于(yu)核酸檢測，尤(you)其涉及一種川貝(bei)母和(he)平貝(bei)母的檢測區分方法、裝置(zhi)及終端(duan)設(she)備。

背景技術：

1、隨著中醫藥(yao)產業的(de)蓬勃(bo)發展，消費(fei)者(zhe)對中藥(yao)材(cai)的(de)需(xu)求量逐步增加。而(er)川貝母和(he)平(ping)貝母作為常用的(de)中藥(yao)材(cai)存在(zai)以次充好的(de)現(xian)象，普通(tong)消費(fei)者(zhe)很(hen)難通(tong)過(guo)外部形(xing)態對二者(zhe)進行鑒別，因此亟(ji)需(xu)尋(xun)求一種簡便(bian)快捷的(de)檢測方法以快速區分川貝母和(he)平(ping)貝母。

技術實現思路

1、本(ben)申請目的(de)在于提(ti)供一(yi)種川(chuan)貝母(mu)和平貝母(mu)的(de)檢測區(qu)分方法、裝置及終端設(she)備(bei)，能夠實(shi)現(xian)簡(jian)便快捷地區(qu)分川(chuan)貝母(mu)和平貝母(mu)。

2、本申(shen)請實施例的(de)第(di)一(yi)方(fang)面(mian)提供(gong)了一(yi)種川貝母和平(ping)貝母的(de)檢測(ce)區(qu)分方(fang)法，其(qi)特征在于，所述檢測(ce)區(qu)分方(fang)法包括(kuo)：

3、根(gen)據cas蛋白對(dui)(dui)應(ying)的pam序(xu)列，在所述(shu)川貝(bei)母(mu)和(he)平(ping)貝(bei)母(mu)的特異dna片段(duan)中篩選得到至少一對(dui)(dui)向(xiang)導序(xu)列；

4、根據每對(dui)向(xiang)導序(xu)列和所述cas蛋白對(dui)應的(de)蛋白錨定序(xu)列，生成每對(dui)向(xiang)導序(xu)列對(dui)應的(de)crrna；

5、根據每對(dui)crrna對(dui)所述川貝母和(he)平貝母的特異dna片段的檢測對(dui)比度，篩選出(chu)其中的一(yi)對(dui)crrna；

6、根(gen)據所(suo)述(shu)crrna、所(suo)述(shu)cas蛋白以及待(dai)(dai)測(ce)樣(yang)本，結(jie)合(he)測(ce)試探針，生成測(ce)試結(jie)果，區分所(suo)述(shu)待(dai)(dai)測(ce)樣(yang)本內的川貝母和平貝母。

7、在可選的(de)實(shi)施例(li)中，所(suo)述根據每對向(xiang)導(dao)(dao)序(xu)列和所(suo)述cas蛋白(bai)對應的(de)蛋白(bai)錨(mao)定(ding)序(xu)列，生成每對向(xiang)導(dao)(dao)序(xu)列對應的(de)crrna，包括：

8、根據每對向(xiang)導序列(lie)和所述cas蛋白(bai)對應(ying)的蛋白(bai)錨(mao)定序列(lie)，生成每對向(xiang)導序列(lie)對應(ying)的crdna；

9、根據所述(shu)每對(dui)向導序列對(dui)應(ying)(ying)的(de)crdna，生(sheng)成(cheng)對(dui)應(ying)(ying)的(de)crrna。

10、在可選(xuan)的實施例中(zhong)，所述根據所述每(mei)對向導序列對應的crdna，生成對應的crrna，包括：

11、將一對向導序列對應的crdna、啟動子、rna聚(ju)合酶、ntp溶液(ye)以及轉錄反應緩(huan)沖液(ye)混合，得到預混物；

12、將所(suo)(suo)述預混物(wu)置(zhi)于第(di)一(yi)預設反應(ying)條(tiao)件下，反應(ying)生成所(suo)(suo)述向導序列對應(ying)的crrna；

13、重復(fu)上述操(cao)作(zuo)，直(zhi)至得(de)到(dao)每對向導序列對應的crrna。

14、在可選的(de)(de)實(shi)施例(li)中，所(suo)述檢測對(dui)(dui)比度包(bao)括熒光對(dui)(dui)比度，對(dui)(dui)應(ying)的(de)(de)，所(suo)述根(gen)據每對(dui)(dui)crrna對(dui)(dui)所(suo)述川(chuan)貝母和平(ping)貝母的(de)(de)特異dna片段(duan)的(de)(de)檢測對(dui)(dui)比度，篩選出其中的(de)(de)一對(dui)(dui)crrna，包(bao)括：

15、測試得到每對crrna對所(suo)述川貝母和平貝母的特異(yi)dna片段的熒光(guang)對比度(du)；

16、將所述(shu)熒光對比度按照(zhao)數值由大到小進(jin)行排列(lie)；

17、選擇排名第一的熒光對比度對應的crrna。

18、在可選的實施例中，所(suo)(suo)(suo)述(shu)根據所(suo)(suo)(suo)述(shu)crrna、所(suo)(suo)(suo)述(shu)cas蛋白以及待(dai)測樣(yang)本，結(jie)合測試探針，生成測試結(jie)果，區分所(suo)(suo)(suo)述(shu)待(dai)測樣(yang)本內的川(chuan)貝母和(he)平貝母，包括：

19、對待測(ce)樣本(ben)的dna片(pian)段(duan)進行擴(kuo)增(zeng)(zeng)，得到(dao)擴(kuo)增(zeng)(zeng)產(chan)物：

20、根據所(suo)(suo)述(shu)(shu)crrna、所(suo)(suo)述(shu)(shu)cas蛋白以(yi)及所(suo)(suo)述(shu)(shu)擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)，結(jie)合測試探針，生(sheng)成測試結(jie)果(guo)，區分所(suo)(suo)述(shu)(shu)待測樣本內的川(chuan)貝母和(he)平貝母。

21、在可(ke)選的實施例中，所述測(ce)試探(tan)針包括熒光(guang)探(tan)針和電(dian)化學探(tan)針中的一種。

22、本申請(qing)實施例的第二(er)方(fang)面提供了一種(zhong)川貝母和平貝母的檢測(ce)區分(fen)裝(zhuang)置(zhi)，所述檢測(ce)區分(fen)裝(zhuang)置(zhi)包括：

23、選擇模塊，用于根(gen)據cas蛋白(bai)對(dui)應的(de)pam序列，在所述(shu)川貝母和(he)平貝母的(de)特異dna片段中篩選得到至少(shao)一(yi)對(dui)向導序列；

24、生成模塊，用于根據每對向導(dao)序(xu)列(lie)和(he)所(suo)述cas蛋白對應的蛋白錨定序(xu)列(lie)，生成每對向導(dao)序(xu)列(lie)對應的crrna；

25、篩(shai)選模塊，用于根據(ju)每對(dui)crrna對(dui)所述川貝母和(he)平貝母的(de)特異dna片(pian)段的(de)檢測(ce)對(dui)比度，篩(shai)選出其中的(de)一對(dui)crrna；

26、測試模塊，用于根據所(suo)述(shu)(shu)crrna、所(suo)述(shu)(shu)cas蛋(dan)白(bai)以及待測樣本(ben)，結合測試探針(zhen)，生成測試結果，區分所(suo)述(shu)(shu)待測樣本(ben)內的川貝(bei)母和平貝(bei)母。

27、本申(shen)請(qing)實施例的第二方(fang)面提供了一種(zhong)川貝母和平貝母的檢(jian)測(ce)試劑盒，所述檢(jian)測(ce)試劑盒包括：

28、第(di)一檢測模(mo)(mo)塊，所(suo)述第(di)一檢測模(mo)(mo)塊包括第(di)一crrna、cas蛋白(bai)以及測試探針(zhen)，所(suo)述第(di)一crrna的序(xu)列為：

29、5’-accaauuucuacuaaguguagauggccgagggcacgccugccuggg-3’；

30、第二(er)檢測(ce)(ce)模塊(kuai)，所述(shu)第二(er)檢測(ce)(ce)模塊(kuai)包括第二(er)crrna、cas蛋白(bai)以(yi)及測(ce)(ce)試(shi)探針，所述(shu)第二(er)crrna的序列為：

31、5’-accaauuucuacuaaguguagaugguugagggcacgccugccuggg-3’。

32、本申請實施例(li)的第(di)四方面(mian)(mian)提供(gong)了一(yi)種(zhong)終端設備，包括存(cun)儲器(qi)(qi)、處(chu)理(li)器(qi)(qi)以(yi)及存(cun)儲在所(suo)述(shu)存(cun)儲器(qi)(qi)中并可在所(suo)述(shu)處(chu)理(li)器(qi)(qi)上運行(xing)的計(ji)算機程序(xu)，所(suo)述(shu)處(chu)理(li)器(qi)(qi)執行(xing)所(suo)述(shu)計(ji)算機程序(xu)時實現(xian)上述(shu)第(di)一(yi)方面(mian)(mian)所(suo)述(shu)的方法。

33、本申請(qing)實施(shi)例的第(di)五方面(mian)提(ti)供了(le)一種計(ji)(ji)算機可讀存(cun)儲(chu)(chu)介質(zhi)，所(suo)述(shu)計(ji)(ji)算機可讀存(cun)儲(chu)(chu)介質(zhi)存(cun)儲(chu)(chu)有(you)計(ji)(ji)算機程序(xu)(xu)，所(suo)述(shu)計(ji)(ji)算機程序(xu)(xu)被處理器執(zhi)行時實現上述(shu)第(di)一方面(mian)所(suo)述(shu)的方法。

34、本(ben)申請實施(shi)例的第六方(fang)面(mian)提(ti)供了(le)一種計算(suan)機程(cheng)序產品(pin)，當所(suo)述計算(suan)機程(cheng)序產品(pin)在終端設(she)備上(shang)運行時，使得所(suo)述終端設(she)備執行上(shang)述第一方(fang)面(mian)所(suo)述的方(fang)法。

35、本申請有益效(xiao)果

36、本申請提供的(de)(de)川貝(bei)(bei)母(mu)和(he)(he)平(ping)貝(bei)(bei)母(mu)的(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)測區(qu)分(fen)(fen)方法、裝置及終端設備，利用川貝(bei)(bei)母(mu)和(he)(he)平(ping)貝(bei)(bei)母(mu)的(de)(de)特異(yi)dna片(pian)段(duan)，結合(he)cas蛋白(bai)對(dui)(dui)應的(de)(de)pam序列和(he)(he)蛋白(bai)錨定序列，設計(ji)得到多對(dui)(dui)crrna，再根據(ju)每對(dui)(dui)crrna對(dui)(dui)所述川貝(bei)(bei)母(mu)和(he)(he)平(ping)貝(bei)(bei)母(mu)的(de)(de)特異(yi)dna片(pian)段(duan)的(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)測對(dui)(dui)比度(du)，篩選(xuan)出其中檢(jian)(jian)(jian)測對(dui)(dui)比度(du)最(zui)高并且區(qu)分(fen)(fen)效果最(zui)明顯(xian)的(de)(de)一對(dui)(dui)crrna，后續利用該對(dui)(dui)crrna結合(he)cas蛋白(bai)、測試(shi)探針和(he)(he)待測樣本形成(cheng)檢(jian)(jian)(jian)測體系，該crrna能夠(gou)根據(ju)堿基互補原(yuan)則識別待測樣本內(nei)(nei)川貝(bei)(bei)母(mu)和(he)(he)平(ping)貝(bei)(bei)母(mu)的(de)(de)特異(yi)dna片(pian)段(duan)，在識別成(cheng)功(gong)后，cas蛋白(bai)的(de)(de)反(fan)式切割功(gong)能被激活，會對(dui)(dui)測試(shi)探針進行(xing)切割，從而形成(cheng)可視化的(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)測反(fan)應，由(you)此能夠(gou)實現簡便(bian)快捷(jie)地區(qu)分(fen)(fen)待測樣本內(nei)(nei)的(de)(de)川貝(bei)(bei)母(mu)和(he)(he)平(ping)貝(bei)(bei)母(mu)。

技術特征：

1.一種川貝母和(he)平貝母的檢測區(qu)分方法(fa)，其(qi)特征(zheng)在于(yu)，所述檢測區(qu)分方法(fa)包括：

2.根(gen)據(ju)權利要(yao)求1所述的檢測區分方法，其(qi)特征在于，所述根(gen)據(ju)每對向導(dao)序列(lie)和(he)所述cas蛋(dan)白(bai)對應(ying)(ying)的蛋(dan)白(bai)錨定序列(lie)，生(sheng)成每對向導(dao)序列(lie)對應(ying)(ying)的crrna，包(bao)括：

3.根(gen)據權(quan)利要求2所述的檢(jian)測區分(fen)方法(fa)，其(qi)特征在于，所述根(gen)據所述每對向導序列對應的crdna，生成對應的crrna，包括：

4.根(gen)據權利要(yao)求1所(suo)述(shu)(shu)的(de)檢測(ce)(ce)區分方法(fa)，其(qi)特征在(zai)于，所(suo)述(shu)(shu)檢測(ce)(ce)對比(bi)度(du)(du)包括熒(ying)光(guang)對比(bi)度(du)(du)，對應(ying)的(de)，所(suo)述(shu)(shu)根(gen)據每對crrna對所(suo)述(shu)(shu)川貝(bei)母(mu)和平貝(bei)母(mu)的(de)特異dna片段(duan)的(de)檢測(ce)(ce)對比(bi)度(du)(du)，篩(shai)選出(chu)其(qi)中的(de)一對crrna，包括：

5.根據權利要求1所(suo)述(shu)的檢(jian)測(ce)區分方法，其特征在于，所(suo)述(shu)根據所(suo)述(shu)crrna、所(suo)述(shu)cas蛋(dan)白以及待測(ce)樣(yang)本，結(jie)合測(ce)試探針，生(sheng)成測(ce)試結(jie)果(guo)，區分所(suo)述(shu)待測(ce)樣(yang)本內的川貝母和(he)平貝母，包括：

6.根據權利要求(qiu)1所述的檢測區分方(fang)法，其特征(zheng)在于(yu)，所述測試探(tan)針包(bao)括熒光探(tan)針和電(dian)化學(xue)探(tan)針中的一種(zhong)。

7.一種川貝母(mu)(mu)和平貝母(mu)(mu)的檢測區分裝(zhuang)(zhuang)置，其(qi)特(te)征在于，所述檢測區分裝(zhuang)(zhuang)置包括：

8.一種川貝母(mu)和(he)平貝母(mu)的檢(jian)(jian)測試劑盒，其特征在于，所述檢(jian)(jian)測試劑盒包括：

9.一種終端設備，包括存(cun)儲(chu)(chu)器(qi)、處理器(qi)以及(ji)存(cun)儲(chu)(chu)在所(suo)述(shu)(shu)存(cun)儲(chu)(chu)器(qi)中并可在所(suo)述(shu)(shu)處理器(qi)上運行的計(ji)算(suan)機程序，其特征在于，所(suo)述(shu)(shu)處理器(qi)執行所(suo)述(shu)(shu)計(ji)算(suan)機程序時實現如權利要求1至6任一項所(suo)述(shu)(shu)的方(fang)法。

10.一(yi)種計(ji)(ji)算機(ji)可讀(du)存(cun)(cun)儲(chu)介質，所述計(ji)(ji)算機(ji)可讀(du)存(cun)(cun)儲(chu)介質存(cun)(cun)儲(chu)有(you)計(ji)(ji)算機(ji)程序(xu)，其特征(zheng)在于，所述計(ji)(ji)算機(ji)程序(xu)被處理器(qi)執行時實現如權(quan)利要求1至6任一(yi)項所述的方法。

技術總結
本申請適用于核酸檢測技術領域，提供了一種川貝母和平貝母的檢測區分方法、裝置及終端設備，所述檢測區分方法包括：根據Cas蛋白對應的PAM序列，在所述川貝母和平貝母的特異DNA片段中篩選得到至少一對向導序列；根據每對向導序列和所述Cas蛋白對應的蛋白錨定序列，生成每對向導序列對應的crRNA；根據每對crRNA對所述川貝母和平貝母的特異DNA片段的檢測對比度，篩選出其中一對crRNA；根據所述crRNA、所述Cas蛋白以及待測樣本，結合測試探針，生成測試結果，區分所述待測樣本內的川貝母和平貝母。通過上述方案，能夠實現簡便快捷地區分川貝母和平貝母。

技術研發人員：馬文哲,楊彥超,楊冬璠,林婉君,石美娜,黃紫烽,張雪寧,鄒薇,郎松平,劉貝佳
受保護的技術使用者：澳門科技大學
技術研發日：
技術公布日：2024/8/1