本發明屬于寄生(sheng)蟲(chong)分子檢(jian)測技(ji)術領(ling)域，更具體地，涉(she)及(ji)一(yi)種(zhong)檢(jian)測伊氏錐蟲(chong)的引物對(dui)及(ji)其檢(jian)測方法和試劑盒。

背景技術：

在自然界中，伊氏錐蟲（trypanosomaevansi）是一種呈(cheng)全球性分布的寄生原蟲(chong)，借助吸(xi)血昆(kun)蟲(chong)在馬、牛、駱駝等(deng)家(jia)畜中進(jin)(jin)行(xing)傳播，引(yin)起蘇拉病（surra），該病臨床表現為(wei)進(jin)(jin)行(xing)性消瘦、貧血、黃(huang)痘、高熱、心機能衰退等(deng)，嚴重(zhong)時(shi)可造(zao)成家(jia)畜死亡(wang)，使(shi)畜牧業造(zao)成嚴重(zhong)損失(shi)。在我國(guo)，伊氏錐蟲(chong)感(gan)染(ran)水(shui)牛等(deng)家(jia)畜的概(gai)率達到10%。因此(ci)有必要對其進(jin)(jin)行(xing)錐蟲(chong)早期感(gan)染(ran)的監測，并(bing)進(jin)(jin)行(xing)藥物治療(liao)。

由于伊氏錐蟲與其他家畜血液寄生錐蟲，特別是親緣關系較近的布氏錐蟲（trypanosomabrucei）在形態和(he)分子特性上非(fei)常相似，很難通過顯(xian)微鏡觀察和(he)常規(gui)的分子標簽進行鑒定。

技術實現要素：

本發明所要解決的技術問題是克服現有伊氏錐蟲檢測技術方面存在的缺陷和不足，提供一種檢測伊氏錐蟲的引物對。所述引物對能夠快速準確的將伊氏錐蟲從其他錐蟲以及利什曼原蟲（leishmaniaspp）中鑒定出(chu)來，不需要昂貴的顯微鏡和(he)(he)專業的病原(yuan)學(xue)知識，檢(jian)測快速方便，可用于動物錐(zhui)(zhui)蟲感染的檢(jian)測和(he)(he)混(hun)合(he)感染的鑒定，有利于開展(zhan)流行病學(xue)調查，預防和(he)(he)控制伊氏錐(zhui)(zhui)蟲的傳播。

本發明(ming)的目的是提供(gong)一(yi)種檢測伊氏錐蟲的引物對。

本(ben)發明的(de)再一(yi)目的(de)在于提供(gong)一(yi)種檢測伊(yi)氏錐蟲的(de)方(fang)法(fa)。

本發明的(de)再一目的(de)是提供含有所(suo)述引物(wu)的(de)檢測(ce)試劑盒。

本發明的(de)上述目的(de)是通過以下技術方案予以實(shi)現的(de)：

一(yi)種檢測(ce)伊氏(shi)錐蟲的引(yin)物對(dui)，包含上下游(you)引(yin)物pag3-f和pag3-r，其序列分別如seqidno：1和seqidno：2所(suo)示：

上游(you)引物pag3-f：5’-gtttgacaccgtggagtt-3’（seqidno.1）；

下游引物pag3-r：5’-aacagccacaaacaaccc-3’（seqidno.2）。

由于pag3（procyclinassociatedgene3）基因在伊氏錐蟲中部分特異缺失，與其它的錐蟲在該基因上表現出序列差異，因此本發明通過伊氏錐蟲pag3基因特異性設計(ji)pcr引物(wu)對和pcr反應程序，從而實(shi)現對伊氏錐蟲的快(kuai)速鑒定。

所(suo)述pcr引物(wu)可用(yong)來特(te)異性檢測(ce)鑒(jian)定(ding)待(dai)測(ce)樣品中是否含有伊(yi)氏(shi)(shi)錐(zhui)(zhui)蟲(chong)；或(huo)用(yong)于(yu)鑒(jian)定(ding)伊(yi)氏(shi)(shi)錐(zhui)(zhui)蟲(chong)；因此，所(suo)述引物(wu)對pag3-f和(he)pag3-r在檢測(ce)和(he)/或(huo)鑒(jian)定(ding)伊(yi)氏(shi)(shi)錐(zhui)(zhui)蟲(chong)中的應用(yong)，以及在制(zhi)備伊(yi)氏(shi)(shi)錐(zhui)(zhui)蟲(chong)檢測(ce)試劑(ji)或(huo)試劑(ji)盒中的應用(yong)，均應在本發明的保護(hu)范圍之內。

一(yi)種(zhong)檢測/鑒定伊氏錐蟲的(de)方法(fa)，所述方法(fa)具體包括如下步驟：

s1.提取(qu)待測(ce)樣品dna或血液溶解液；

s2.以步(bu)驟(zou)s1所述dna或血液溶解液為(wei)模(mo)板，以pag3-f和pag3-r為(wei)引物進行pcr擴增反應；

s3.將擴(kuo)增產物電泳檢測，若擴(kuo)增出單(dan)一(yi)250bp大小的條(tiao)帶，則待(dai)測樣品中含有伊氏錐蟲(chong)(chong)，反之則待(dai)測樣品中沒有伊氏錐蟲(chong)(chong)。

優選地，所述pcr擴增反應體系為：引物pag3-f和引物pag3-r，100ng樣品dna或5μl樣品血液溶解液，2.5unitseasytaqdnapolymerase，10×easytaqbuffer(1×)、0.2mmdntps、滅菌雙蒸水補齊至25μl，引(yin)物(wu)pag3-f和引(yin)物(wu)pag3-r在反應體(ti)系(xi)中的終(zhong)濃度(du)分別(bie)為0.2μm。

更優選地，所述pcr反應體系為：100ng/μldna1μl或血液溶解液5μl，10μmpag3-f0.5μl，10μmpag3-r0.5μl，10×easytaqbuffer2.5μl，2.5mmdntps2μl，5units/μleasytaqdnapolymerase0.5μl，滅菌(jun)雙蒸水補充(chong)至25μl。

優(you)選地，所述pcr擴增反應(ying)條件為：94℃3min；94℃30s，65℃10s，共(gong)30個反應(ying)循環；

此外，上述伊氏錐蟲檢測引(yin)物對pag3-f和pag3-r及其檢測放在在制(zhi)備伊氏錐蟲檢測試(shi)劑或試(shi)劑盒中的應(ying)用亦在本發(fa)明保護(hu)范圍內。

同時(shi)，本發(fa)明還提(ti)供(gong)一種伊氏錐蟲(chong)檢測試(shi)(shi)劑盒，所述(shu)試(shi)(shi)劑盒包含伊氏錐蟲(chong)檢測引物(wu)對pag3-f和pag3-r。

優選地，所(suo)(suo)(suo)(suo)述試劑盒還含有(you)pcr擴增(zeng)(zeng)反(fan)(fan)應所(suo)(suo)(suo)(suo)需(xu)試劑；所(suo)(suo)(suo)(suo)述pcr擴增(zeng)(zeng)反(fan)(fan)應所(suo)(suo)(suo)(suo)需(xu)試劑是指能夠使得樣本(ben)dna在(zai)上(shang)述引物(wu)對的作(zuo)用(yong)下(xia)進(jin)行pcr擴增(zeng)(zeng)反(fan)(fan)應的試劑，現有(you)技術中常規pcr擴增(zeng)(zeng)反(fan)(fan)應試劑均(jun)可用(yong)于本(ben)發明。

所述pcr擴增反應試劑可用商品化的試劑，例如easytaqdnapolymerase。

優選地，所述試劑盒中包含引物pag3-f和引物pag3-r，伊氏錐蟲陽性對照，easytaqdnapolymerase，10×easytaqbuffer，dntps和滅(mie)菌雙(shuang)蒸水。

優(you)選地，所述(shu)試劑盒還包含待測樣品dna提(ti)取(qu)所需試劑及血液溶解液制備(bei)所需試劑。

作(zuo)為一種優選地可(ke)實施方式，所(suo)述伊氏錐蟲檢測試劑(ji)盒的使用方法為：

s1.提取(qu)待測樣品dna或血液(ye)溶解液(ye)；

s2.以步(bu)驟s1所述dna或(huo)血液(ye)溶(rong)解液(ye)為模板(ban)，以pag3-f和(he)pag3-r為引物進行pcr擴增反(fan)應；

s3.將擴增(zeng)產物電泳(yong)檢測，若擴增(zeng)出(chu)單一250bp大小的條帶(dai)，則待測樣品中(zhong)含有(you)伊(yi)氏錐(zhui)蟲(chong)，反之(zhi)則待測樣品中(zhong)沒有(you)伊(yi)氏錐(zhui)蟲(chong)。

所述pcr擴增反應體系為：100ng/μldna1μl或血液溶解液5μl，10μmpag3-f0.5μl，10μmpag3-r0.5μl，10×easytaqbuffer2.5μl，2.5mmdntps2μl，5units/μleasytaqdnapolymerase0.5μl，滅菌雙蒸水補(bu)充至25μl。

所述pcr擴增反應(ying)條件為：94℃3min；94℃30s，65℃10s，共(gong)30個反應(ying)循環。

與(yu)現有技(ji)術相比，本發明(ming)具有以下有益效果(guo)：

本發明利用伊氏錐蟲序列特異的pag3基因，篩選出一對能夠特異性檢測伊氏錐蟲的引物對，該引物對能特異性擴增出伊氏錐蟲的pag3片段，且靈敏度高，能夠檢測出僅僅含有50個錐蟲的樣本，或者是0.1ng的dna樣本；利用該引物對能夠快速準確的將其從其他錐蟲以及利什曼原蟲（leishmaniaspp）中鑒定出來(lai)，不(bu)需要昂貴的(de)顯微鏡和專(zhuan)業的(de)病(bing)原(yuan)學(xue)知識，檢(jian)測快速方便，可用于動物錐蟲(chong)感(gan)染和混合感(gan)染的(de)檢(jian)測，有利于開展流(liu)行(xing)病(bing)學(xue)調查(cha)，預防和控制伊氏錐蟲(chong)的(de)傳(chuan)播(bo)。

附圖說明

圖1為引物對特異性檢測結果；圖中：泳道m：dl2000marker，泳道1為t.evansi（伊氏錐蟲）、2為t.brucei（布氏錐蟲）、3為t.cruzi（枯氏錐蟲）、4為t.lewisi（路氏錐蟲）、5為t.musculi（小鼠錐蟲）、6為l.amazonensis（利什(shen)曼亞馬遜屬）、泳(yong)道(dao)n為陰性對照。

圖2為引物對特異性檢測結果；圖中：泳道m：dl2000marker，泳道1為t.evansistib805（伊氏錐蟲）、2為t.evansistib806（伊氏錐蟲）、3為t.evansistib810（伊氏錐蟲）、4為t.bruceitreu920（布氏錐蟲）、5為t.bruceistib777（布氏錐蟲）、6為t.bruceitreu927（布氏錐蟲）、7為t.lewisicpo02(路氏錐蟲)、8為t.lewisicpo04(路氏錐蟲)、9為t.lewisicpo06(路氏錐蟲)、10為t.musculifra（小鼠錐蟲）、11為t.musculiatcc30148（小鼠錐蟲）、12為t.musculiatcc30181（小鼠錐蟲）、13為lv78（利什曼原蟲）、14為l.amazonensis（利什曼原蟲）、15為t.cruzi（枯氏(shi)錐(zhui)蟲）、泳道n為陰性對照(zhao)。

圖3為引(yin)物對在伊(yi)氏錐蟲dna的pcr檢測靈敏度結果；圖中：泳(yong)(yong)道m：dl2000marker，泳(yong)(yong)道1～6分別為200ng、100ng、50ng、10ng、1ng、0.1ng，泳(yong)(yong)道n為陰性對照。

圖4為(wei)(wei)引(yin)物(wu)對在伊氏錐(zhui)蟲(chong)血液pcr檢測靈(ling)敏度結果；圖中：泳道m：dl2000marker，泳道1～6分別為(wei)(wei)50,000個(ge)錐(zhui)蟲(chong)、5,000個(ge)錐(zhui)蟲(chong)、500個(ge)錐(zhui)蟲(chong)、50個(ge)錐(zhui)蟲(chong)、5個(ge)錐(zhui)蟲(chong)、0.5個(ge)錐(zhui)蟲(chong)，泳道n為(wei)(wei)陰性(xing)對照。

圖5為pcr檢測血液樣本的流(liu)程圖。

圖6為(wei)(wei)pcr擴增目的片段，下(xia)劃線(xian)英文(wen)字母標注的序列(lie)為(wei)(wei)引(yin)物(wu)結合區域。

具體實施方式

下(xia)面結合說(shuo)明(ming)(ming)書附圖和具體實(shi)(shi)(shi)施例進一步(bu)闡述本(ben)發(fa)明(ming)(ming)。這些實(shi)(shi)(shi)施例僅(jin)用于(yu)說(shuo)明(ming)(ming)本(ben)發(fa)明(ming)(ming)而(er)不用于(yu)限制本(ben)發(fa)明(ming)(ming)的范圍。下(xia)例實(shi)(shi)(shi)施例中未注明(ming)(ming)具體條件的實(shi)(shi)(shi)驗方法，通常按(an)照(zhao)本(ben)領域(yu)常規條件或按(an)照(zhao)制造廠商建議(yi)的條件。除非另行定義，文中所使用的所有專業與科學用語與本(ben)領域(yu)技術人員熟悉的意義相同。

snet緩沖液：100mmnacl，10mmtris·hcl，ph8.0，25mmedta，ph8.0，0.5%sds。

伊氏錐蟲（t.evansistib805）總dna的提取(qu)：

（1）在(zai)純化過的錐蟲(chong)樣品中加入(ru)300μlsnet緩沖液（在(zai)snet緩沖液中再加入(ru)蛋白(bai)酶k，蛋白(bai)酶k的終(zhong)濃度為200μg/ml），56℃金屬浴(yu)消化3～5h；

（2）將(jiang)步(bu)驟(zou)（1）的樣品取出，加入rna酶，37℃金屬(shu)浴消化0.5h；

（3）將步驟(zou)（2）的樣品去出，加入體積比為25：24：1的酚：氯仿(fang)：異(yi)戊醇，室溫(wen)下震蕩混勻成乳狀液后靜置2～5min；

（4）將步(bu)驟(zou)（3）的混合(he)液用12,000rpm離心10min，轉移上(shang)層(ceng)水相到(dao)新的離心管中(zhong)；

（5）向步驟(zou)（4）的(de)水相中加(jia)入等體積的(de)異(yi)丙醇(chun)沉淀dna，12,000rpm離心5分鐘后棄上清；

（6）將(jiang)步(bu)驟（5）收集到的(de)沉淀，用300μl預冷的(de)70%乙醇洗滌，再12000rpm高(gao)速離心5min，棄上清(qing)，室溫揮發酒精；

（7）用100μlte溶(rong)解(jie)dna樣品，測定dna含量。

實施例1引物設計

研究發現，由于pag3（procyclinassociatedgene3）基因在伊氏錐蟲中部分特異缺失，與其它的錐蟲在該基因上表現出序列差異，因此本實施例通過伊氏錐蟲pag3基因來設計特異性擴(kuo)增伊(yi)氏錐蟲的pcr引物對。

首先，在tritrypdb（//tritrypdb.org/tritrypdb/）上搜索pag3基因序列。

再根據伊氏錐蟲（tevstib805.6.480;tevstib805.6.540）與布氏錐蟲（tb927.6.460;tb927.6.490;tb927.6.530;tb427.06.530）的基因序列進行比對設計伊氏錐蟲pag3特(te)異(yi)引物(wu)(wu)，引物(wu)(wu)序列見表1。

其中，tubulin為內(nei)參(can)基因。

表1引物序列

實施例2伊氏錐蟲pag3檢測方法特(te)異性實驗（58℃）

1、pcr反應條件如下(xia)：

（1）建立pcr擴增反應體系：100ng/μldna1μl，10μmpag3-f0.5μl，10μmpag3-r0.5μl，10×easytaqbuffer2.5μl，2.5mmdntps2μl，5units/μleasytaqdnapolymerase0.5μl，滅菌雙蒸水補充至25μl。

（2）pcr擴(kuo)增反應條件：94℃3min；94℃30s，58℃30s，72℃1min共30個循環；72℃5min。

（3）擴增(zeng)產(chan)物(wu)分析：采(cai)用瓊(qiong)脂(zhi)糖凝膠電(dian)泳檢測擴增(zeng)產(chan)物(wu)。取25μl聚(ju)合(he)酶鏈式反(fan)(fan)應(ying)pcr擴增(zeng)的最終反(fan)(fan)應(ying)產(chan)物(wu)5μl，加入(ru)6×loadingbuffer，點樣至含有溴化乙錠（etbr）染料的1.5%的瓊(qiong)脂(zhi)糖凝膠中，120v電(dian)泳25min，在凝膠成(cheng)相(xiang)系統上(shang)成(cheng)像觀察結果。

2、結果如圖1所(suo)示(shi)，所(suo)設計的引物(wu)對在(zai)上(shang)述pcr條(tiao)件下(xia)能(neng)夠(gou)特異性的擴增出伊氏錐蟲單(dan)一250bp的片段。

另外，枯氏錐蟲(chong)和利什曼原蟲(chong)均被擴增出弱的(de)單一1300bp的(de)條帶(dai)，而布氏錐蟲(chong)、路(lu)氏錐蟲(chong)以及小鼠錐蟲(chong)均出現一些雜帶(dai)，且(qie)都大于500bp，表明擴增體(ti)系或擴增程序需進一步優化。我(wo)們嘗(chang)試改變pcr反應程序，提高引(yin)物對(dui)的(de)特(te)異(yi)性(xing)，具體(ti)實(shi)驗(yan)方(fang)式見實(shi)施(shi)例3。

實施例3伊氏錐蟲pag3檢測方法特異性實(shi)驗（65℃）

1、經(jing)過優化，pcr反應條件如下：

（1）建立pcr擴增反應體系：100ng/μldna1μl，10μmpag3-f0.5μl，10μmpag3-r0.5μl，10×easytaqbuffer2.5μl，2.5mmdntps2μl，5units/μleasytaqdnapolymerase0.5μl，滅菌雙蒸水補充至25μl。

（2）pcr擴增反應(ying)條件(jian)：94℃3min；：94℃30s，65℃10s，共30個反應(ying)循環；

（3）擴(kuo)增(zeng)(zeng)產(chan)物(wu)分析(xi)：采用瓊脂糖(tang)凝膠電泳檢測擴(kuo)增(zeng)(zeng)產(chan)物(wu)。取25μl的(de)聚(ju)合酶鏈式反應(ying)pcr擴(kuo)增(zeng)(zeng)的(de)最終反應(ying)產(chan)物(wu)5μl，加入6×loadingbuffer，點樣至含有溴化(hua)乙(yi)錠(ding)（etbr）染料的(de)1.5%的(de)瓊脂糖(tang)凝膠中，120v電泳25min，在凝膠成(cheng)相系統上成(cheng)像(xiang)觀察結(jie)果。

2、結(jie)果如圖2所示，該引物對(dui)在改善(shan)后(hou)的pcr條件(jian)下(xia)擴增出(chu)伊(yi)氏(shi)錐(zhui)蟲(chong)250bp的片(pian)段，而布氏(shi)錐(zhui)蟲(chong)、路氏(shi)錐(zhui)蟲(chong)、小鼠錐(zhui)蟲(chong)、枯氏(shi)錐(zhui)蟲(chong)或者(zhe)利什曼原蟲(chong)均擴增不出(chu)片(pian)段，顯示出(chu)良好的特(te)異性。

實施例4pcr檢測方法靈(ling)敏度(du)實驗（dna樣品）

1、按照實施(shi)例3的(de)(de)方法(fa)進行pcr擴增(zeng)(zeng)，其中25μl體系中加入1μl不同濃度（200ng/μl、100ng/μl、50ng/μl、10ng/μl、1ng/μl、0.1ng/μl）的(de)(de)dna（pcr的(de)(de)擴增(zeng)(zeng)條件同實施(shi)例3）。

2、按照實施例(li)3中的(de)pcr檢(jian)測方法，結果如圖3所示(shi)，至少可以檢(jian)測到0.1ng的(de)dna模板。

實(shi)施例5pcr檢測(ce)方(fang)法靈敏(min)度實(shi)驗（血液樣品(pin)）

收集(ji)1ml感染伊氏錐(zhui)蟲(chong)的小鼠(shu)血(xue)液于小離心管中，分別用未(wei)接種錐(zhui)蟲(chong)的小鼠(shu)血(xue)液以10倍逐級稀釋(shi)；

一、皂(zao)素處理尾血得(de)血液溶解液

（1）吸取50μl待測血液樣品于離心管中(zhong)；

（2）向步驟（1）的待(dai)測樣品加入(ru)300μlsaponinlysisbuffer（0.22%nacl，0.015%saponin，1mmedta）；

（3）將步驟（2）的混合液用4℃,12000g離心1min，棄上清；

（4）將步(bu)驟（3）的(de)沉淀用saponinlysisbuffer清洗(xi)三(san)遍，用50μl1xpcrbuffer（50mmkcl，10mmtris-hcl，ph8.0，0.5%tween20，100μgofproteinasekperml）重(zhong)懸；

（5）將(jiang)步驟（4）的混合(he)液(ye)置于56℃金屬恒溫酶(mei)解(jie)反(fan)應(ying)1h；

（6）將(jiang)步驟(zou)（5）的混合液(ye)置于95℃金屬恒溫酶變性(xing)失活反(fan)應5min；

（7）將步驟（6）的混合液(ye)用(yong)12,000g離心(xin)1min得血液(ye)溶解液(ye)用(yong)于pcr反應(ying)。

二、建(jian)立pcr擴增(zeng)反應體系

（1）pcr擴增反應體系：血液溶解液5μl，10μmpag3-f0.5μl，10μmpag3-r0.5μl，10×easytaqbuffer2.5μl，2.5mmdntps2μl，5units/μleasytaqdnapolymerase0.5μl，滅(mie)菌(jun)雙蒸水(shui)補充至25μl；其中陰性對照為滅(mie)菌(jun)雙蒸水(shui)。

（2）pcr擴增反應條件：同(tong)實施例3。

（3）擴增(zeng)產物分析(xi)：取25μl的聚合酶鏈式反(fan)應pcr擴增(zeng)的最終反(fan)應產物5μl，加入6×loadingbuffer，點樣至含有溴化乙(yi)錠（etbr）染料的1.5%的瓊脂糖凝膠中，120v電泳25min，在凝膠成(cheng)相系統上成(cheng)像觀察結(jie)果；

（4）結果如圖4所(suo)示，按照(zhao)實施(shi)例(li)3中的pcr檢測(ce)方(fang)法，至少能(neng)夠(gou)檢測(ce)含有50個錐蟲的血(xue)液樣品，相當于(yu)蟲血(xue)癥10000個錐蟲/ml，低于(yu)顯微鏡(jing)(jing)鏡(jing)(jing)檢的最低濃度，因此該pcr檢測(ce)方(fang)法可(ke)用于(yu)早期伊氏錐蟲感染的檢測(ce)。

實(shi)施例6伊氏錐蟲的(de)試劑盒檢測的(de)建立

1、一種伊氏錐蟲檢測試劑盒，所述試劑盒中含有以下各試劑：引物pag3-f和引物pag3-r，伊氏錐蟲陽性對照，easytaqdnapolymerase，10×easytaqbuffer，dntps和滅菌雙蒸(zheng)水；

pag3-f和pag3-r的引物序列如下：

上游引(yin)物(wu)pag3-f：5’-gtttgacaccgtggagtt-3’（seqidno.1）；

下游引物pag3-r：5’-aacagccacaaacaaccc-3’（seqidno.2）。

2、所述試(shi)劑盒的(de)使用方法如(ru)下(xia)：

以待測樣品dna或血液為模板，利用pag3-f和pag3-r為引物(wu)進行pcr擴增反(fan)應。

pcr擴增反應體系為：引物pag3-f和引物pag3-r、100ng樣品dna或5μl樣品血液溶解液，2.5unitseasytaqdnapolymerase，10×easytaqbuffer(1×)、0.2mmdntps、滅菌雙蒸水(shui)補(bu)齊至25μl，引物(wu)pag3-f和(he)引物(wu)pag3-r在反應體系中的終濃度分別為0.2μm。

具體pcr擴增反應體系為：100ng/μldna1μl或血液溶解液5μl，10μmpag3-f0.5μl，10μmpag3-r0.5μl，10×easytaqbuffer2.5μl，2.5mmdntps2μl，5units/μleasytaqdnapolymerase0.5μl，滅(mie)菌雙蒸(zheng)水補(bu)充至25μl。

所述pcr擴增反(fan)應條件為：94℃3min；94℃30s，65℃10s.共30個反(fan)應循環；

擴增結束(shu)后，電泳(yong)檢測，若擴增出單一250bp大(da)小的條(tiao)帶(dai)，則待測樣品中(zhong)含(han)有(you)伊(yi)氏錐蟲，反之則待測樣品中(zhong)沒(mei)有(you)伊(yi)氏錐蟲。

sequencelisting

<110>中山大學

<120>一(yi)種檢測伊氏錐蟲的引物對及其檢測方法和試(shi)劑(ji)盒

<130>2017

<160>2

<170>patentinversion3.3

<210>1

<211>18

<212>dna

<213>人工(gong)序列

<400>1

gtttgacaccgtggagtt18

<210>2

<211>18

<212>dna

<213>人工序列(lie)

<400>2

aacagccacaaacaaccc18