專利名稱：纖維素酶酶解松針提取白藜蘆醇并進行分離純化的方法
技術領域：
本發明涉及一種白藜蘆醇提取純化的方法，具體涉及一種纖維素酶酶解松針提取白藜蘆醇并進行分離純化的方法。
背景技術：
松針中富含糖類、粗蛋白、粗脂肪、多種氨基酸和多種微量礦元素、多種維生素、生物黃酮類物質、精油、葉綠素、不飽和脂肪酸、酶與輔酶等活性物質。松樹藥用的代表部位是松針，松針的藥用成分高于松樹的其他部位，不但含有大量生物黃酮類物質、前花青素，還富含葉綠素、多種維生素。近年來研究發現松針中還含有白藜蘆醇，但白藜蘆醇的提取工藝復雜且提取率低，而純化過程中會使用丙酮及甲醇具有毒性的試劑，不僅給操作人員帶來危害，還導致提取物中有害物質殘留；洗脫后使用真空干燥濃縮提純并不能保證較高的白藜蘆醇純度。發明內容
為解決以上技術問題，本發明提供了一種提取純化白藜蘆醇的方法，該方法簡便、 提取率高、綠色環保、生產成本低且能獲得高純度的白藜蘆醇。
本發明的目的通過如下技術方案實現纖維素酶酶解松針提取白藜蘆醇并進行分離純化的方法，包括以下步驟(1)松針粉碎細化，加入5^10倍重量的蒸餾水，混勻，加入1/20重量的纖維素酶酶解；(2)酶解結束后向酶解液加入質量濃度為95%的乙 醇溶劑，浸泡2小時，然后進行超聲波提取；(3)將提取液進行真空抽濾，得粗提取液，再進一步將濾渣與75% 95%乙醇溶劑混合， 重復提取2次后，合并粗提取液進行濃縮；(4)將濃縮提取液上聚酰胺樹脂，使用35%乙醇溶劑除雜；使用75%-95%乙醇溶劑洗脫；過程中使用薄層色譜法跟蹤監測，收集富含白藜蘆醇段洗脫液合并；將洗脫液濃縮得到粗結晶；將粗結晶用乙醇重結晶4飛次，真空冷凍干燥得到白藜蘆醇。
上述步驟⑴中所述的酶解溫度為50°C 60°C ;酶解時間為6 12小時。
上述步驟⑵中所述的超聲波提取，其超聲頻率為2000MHz、功率為300W 400W，提取時間為20分鐘。
上述步驟(3)中所述的濃縮條件為真空旋轉蒸發濃縮。
本發明的有益效果是(I)本發明采用了松針為原料先通過纖維素酶酶解后再利用超聲波輔助乙醇提取的方法從花生柏中提取分離出白藜蘆醇，大大提高了花生柏的綜合利用價值。
(2)本發明通過聚酰胺樹脂，乙醇洗脫來純化白藜蘆醇，避免了丙酮、甲醇等毒性試劑的應用，而且得到的白藜蘆醇最高純度可達96. 5%。
具體實施方式
實施例1取IKg松針粉碎細化，加入5倍重量的蒸餾水，混勻，加入1/20重量的纖維素酶酶解， 酶解溫度為50°C ;酶解時間為12小時。酶解結束后向酶解液加入質量濃度為95%的乙醇溶劑，浸泡2小時，然后進行超聲波提取，超聲頻率為2000MHz、功率為300W，時間為20分鐘。將提取液進行真空抽濾，得粗提取液，再進一步將濾渣與75%乙醇溶劑混合，重復提取2 次后，合并粗提取液進行濃縮。將濃縮提取液上聚酰胺樹脂，使用35%乙醇溶劑除雜；使用 75%乙醇溶劑洗脫；過程中使用薄層色譜法跟蹤監測，收集富含白藜蘆醇段洗脫液合并； 將洗脫液濃縮得到粗結晶；將粗結晶用乙醇重結晶4飛次，真空冷凍干燥得到白藜蘆醇，純度為95. 7%。
實施例2取IKg松針粉碎細化，加入7倍重量的蒸餾水，混勻，加入1/20重量的纖維素酶酶解， 酶解溫度為55°C ;酶解時間為9小時。酶解結束后向酶解液加入質量濃度為95%的乙醇溶劑，浸泡2小時，然后進行超聲波提取，超聲頻率為2000MHz、功率為350W，時間為20分鐘。 將提取液進行真空抽濾，得粗提取液，再進一步將濾渣與85%乙醇溶劑混合，重復提取2次后，合并粗提取液進行濃縮。將濃縮提取液上聚酰胺樹脂，使用35%乙醇溶劑除雜；使用 85%乙醇溶劑洗脫；過程中使用薄層色譜法跟蹤監測，收集富含白藜蘆醇段洗脫液合并； 將洗脫液濃縮得到粗結晶；將粗結晶用乙醇重結晶4飛次，真空冷凍干燥得到白藜蘆醇，純度為96. 5%ο
實施例3取IKg松針粉碎細化，加入10倍重量的蒸餾水，混勻，加入1/20重量的纖維素酶酶解， 酶解溫度為60°C ;酶解時間為6小時。酶解結束后向酶解液加入質量濃度為95%的乙醇溶劑，浸泡2小時，然后進行超聲波提取，超聲頻率為2000MHz、功率為400W，時間為20分鐘。 將提取液進行真空抽濾，得粗提取液，再進一步將濾渣與95%乙醇溶劑混合，重復提取2次后，合并粗提取液進行濃縮。將濃縮提取液上聚酰胺樹脂，使用35%乙醇溶劑除雜；使用 95%乙醇溶劑洗脫；過程中使用薄層色譜法跟蹤監測，收集富含白藜蘆醇段洗脫液合并； 將洗脫液濃縮得到粗結晶；將粗結晶用乙醇重結晶4飛次，真空冷凍干燥得到白藜蘆醇，純度為94. 9%ο
上述實施例不作為對本發明的限定，凡在本發明的范圍內所作的任何修改、等同替換、改進等，均屬于本發明的保護范圍。
權利要求
1.纖維素酶酶解松針提取白藜蘆醇并進行分離純化的方法，其特征在于采用如下操作方法(1)松針粉碎細化，加入5^10倍重量的蒸餾水，混勻，加入1/20重量的纖維素酶酶解；(2)酶解結束后向酶解液加入質量濃度為95%的乙醇溶劑，浸泡2小時，然后進行超聲波提取；(3)將提取液進行真空抽濾，得粗提取液，再進一步將濾渣與75% 95%乙醇溶劑混合， 重復提取2次后，合并粗提取液進行濃縮；(4)將濃縮提取液上聚酰胺樹脂，使用35%乙醇溶劑除雜；使用75%-95%乙醇溶劑洗脫；過程中使用薄層色譜法跟蹤監測，收集富含白藜蘆醇段洗脫液合并；將洗脫液濃縮得到粗結晶；將粗結晶用乙醇重結晶4飛次，真空冷凍干燥得到白藜蘆醇。
2.根據權利要求1所述的纖維素酶酶解松針提取白藜蘆醇并進行分離純化的方法，其特征在于步驟(I)中所述的酶解溫度為50°C 60°C ;酶解時間為6 12小時。
3.根據權利要求1所述的纖維素酶酶解松針提取白藜蘆醇并進行分離純化的方法，其特征在于步驟(2)中所述的超聲波提取，其超聲頻率為2000MHz、功率為300W 400W，提取時間為20分鐘。
4.根據權利要求1所述的纖維素酶酶解松針提取白藜蘆醇并進行分離純化的方法，其特征在于步驟(3)中所述的濃縮條件為真空旋轉蒸發濃縮。
全文摘要
本發明涉及一種纖維素酶酶解松針提取白藜蘆醇并進行分離純化的方法。操作步驟是先將松針粉碎細化，加水混勻后再加入纖維素酶酶解，將酶解液加入乙醇溶劑，浸泡后進行超聲波提取；將提取液真空抽濾，得粗提取液；再進一步將濾渣與乙醇溶劑混合，重復提取后，合并粗提取液；再通過聚酰胺樹脂純化后進行干燥得到白藜蘆醇，本發明生產的白藜蘆醇最高純度可達96.5%。本發明工藝簡單，成本低，純化過程綠色環保，產物白藜蘆醇的純度高。
文檔編號C07C37/70GK103012070SQ201210511869
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月4日 優先權日2012年12月4日
發明者荊曉麗 申請人:青島艾華隆生物科技有限公司