專利名稱：一種來自鵪鶉的同源異型盒基因qBrn-1及其應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于基因工程領域，具體地說，本發明涉及一種新的同源異型盒基因qBrn-1。本發明還涉及該基因編碼的轉錄調節因子、含有上述基因序列的重組載體及其亞克隆和重組微生物，以及由這些亞克隆獲得到的反義探針。此外，本發明還涉及該基因在臨床醫學中調控神經系統發育中的應用。
背景技術：
神經系統是動物胚胎發育中最早形成的系統之一，它在動物的生長發育、再生、衰老及行為和學習等多種生命現象中起著十分重要的作用。神經發育生物學是發育生物學的一個重要分支，是目前系統動物發育基因研究的主要領域。對中樞神經系統的形態發生、細胞分化和功能區域定位過程中的基因水平的調控機制的認識是分子神經發育生物學中的關鍵問題之一。發育基因的研究是一門綜合性的邊緣學科，不僅涉及生物學和醫學從基礎理論研究，同時在提高我國人口素質、優生優育、減少和控制與神經系統有關的遺傳疾病方面有著廣泛的應用前景。發育基因的研究至今不過幾十年，卻已經取得了驚人的發展。現已證明，發育基因在動物胚胎發育過程中對形態發生和器官形成起直接的調控作用。該領域的研究成果可用于基于遺傳工程手段的遺傳疾病的防治和新的高科技藥物市場。
大量研究表明，在神經系統的發育過程中，同源盒基因(homeoboxgene，Hox)家族對神經系統的發育和分化具有關鍵的作用，這類基因的產物作為重要的轉錄調節因子(transcription factor)參與神經細胞命運的決定、神經細胞分化的時間與空間控制，以及神經系統的格局化等。迄今已發現了650多種Hox基因，它們廣泛分布于從酵母得到人類的各種真核生物中。
根據保守區內外序列的保守性，可將Hox基因分為42類，研究較多的是HOX/HOM、Pax、POU和Wnt四個家族。其中，在脊椎動物發育過程中，POU基因主要在胚胎發育早期中樞神經系統和成體大腦的特定區域表達。POU蛋白在發育過程中的特定時間和空間表達，并且集中于發育中的神經系統和處于增殖及多能狀態的細胞，顯示其在胚胎特別是神經發育中的重要作用(He et al.，(1989)Nature 340(6228)，35-41；Rosenfeld(1991)Genes Dev.5(6)，897-907)。POU家族轉錄因子對神經系統的發育也起著非常重要的作用。如，這一家族的Tst-1/Oct-6/SCIP主要在少樹突神經膠質細胞的前體和發育中的施旺氏細胞中表達，這兩種細胞分別負責中樞神經系統和外周神經系統覆蓋髓鞘的過程。當這一基因被敲除后，中樞神經系統的髓鞘雖未受明顯影響，但外周神經系統的髓鞘卻受到嚴重損傷(Bermingham et al(1996)Genes Dev 101751-1762；Jaegle et al(1996)Science 273507-510)。又如，Brn-2在胚胎早期發生中的神經管廣泛表達，其正常的生理功能對于下丘腦和垂體后葉的某些神經元的發育是必須的(Nakai et al(1995)Genes Dev.93109-3121；Schonemann et al(1995)Genes Dev.93122-3135)。在人類中，某些POU轉錄因子發生突變可以引起神經系統的疾病，如與鐙骨相關的耳聾就是POU3F4突變所致(deKok et al(1995)Science267685-688)。
用鳥類為實驗模型的優勢在于(1)鳥類的發育過程與哺乳動物相似，其結果可用于哺乳動物發育模式的研究；(2)鳥類的胚胎發育在體外進行，因此易于觀察和收集，并且可進行體外培養；(3)鵪鶉和雞胚可以很方便的移植(grafting)，而鵪鶉細胞和雞細胞可通過細胞核來區分(Le Deourin，1982，《神經嵴》劍橋出版社)，這為研究細胞譜系提供了極大的方便。
到目前為止，盡管已經在許多動物種類中發現了POU蛋白并對其功能做了大量研究，但在鳥類中這方面的工作卻很少。根據果蠅、大鼠和小鼠的POU結構域的保守性，本發明人從孵化5天的鵪鶉胚胎cDNA文庫中篩選到一個新的POU結構域基因，命名為qBrn-1，并且對其限制性酶譜和序列進行了分析。此外，本發明人還研究了該基因的在鵪鶉胚胎中的表達模式，發現該基因對神經系統的發育具有重要的調控作用。

發明內容
本發明提供一種從鵪鶉胚胎cDNA文庫中篩選得到的基因qBrn-1和該基因編碼的轉錄調節因子、含有上述基因序列的重組載體及其亞克隆和重組微生物，以及由這些亞克隆獲得的反義探針。該基因屬于一種新的同源異型盒基因，其表達產物屬于一種新的轉錄調節因子，本領域已部分了解同源異型盒基因及轉錄調節因子在基因的調控和胚胎發育過程中的重要功能。本發明的目的是通過提供該新基因的研究來進一步闡釋上述功能。此外，本發明還提供該基因在臨床醫學中調控神經系統發育方面的應用。
本發明提供的基因qBrn-1具有如SEQ ID NO.1所示的多核苷酸分子序列。另一方面，該基因中的一個或多個堿基的缺失、插入或替代產生具有與SEQ ID NO.1所示序列具有相同功能的變異體也應包括在本發明的內容之內。因此，本發明應當包括具有SEQ ID NO.1所示序列的多核苷酸分子的變異體，這些變異體的序列與SEQ ID NO.1所示序列的同源性至少為80％，優選的至少為90％。
所以本發明還提供了該基因的變異體的片段。
另一方面，本發明提供含有該基因及其變異體或其片段的重組載體。選擇的載體通常能在使用的特定宿主細胞內發揮功能，也就是說，載體與宿主細胞兼容，從而能實現基因的擴增和(或)基因的表達。在本發明的一個實施方案中，上述載體是pBluescript II KS，插入的是qBrn-1或其片段，插入位點可以是EcoR I和BarnH I或Cla I和Sca I等。
用于實現本發明的優選載體是能夠與細菌、酵母和哺乳動物宿主細胞相容的那些載體。其中尤其包括pCRII、pCR3和pcDNA3.1(Invitrogen.San Diego，CA)、pBSII(Stratagene，La Jolla，CA)、pET15(Novagen，Madison，WI)、pGEX(Pharmacia Biotech，Piscataway，NJ)、pEGFP-N2(Clontech，PaloAlto，CA)、pETL(BlueBacII，Invitrogen)、pDSR-α(PCT Pub.No.WO90/14363)和pFastBacDual(Gibco-BRL，Grand Island，NY)。
另一方面，本發明還提供含有上述重組載體的重組微生物。當載體構建完成，即將本發明多核苷酸分子插入到載體的適當部位之后，就可以將所得載體插入到適當的宿主細胞內，用于本發明多核苷酸的擴增和(或)表達。可以用本領域熟知的方法將載體轉化到選定的宿主細胞內，這些方法包括，例如，轉染法、感染法、氯化鈣法、電穿孔法、顯微注射法、脂轉染法、DEAE-葡聚糖法，或已知的其他方法。選擇的方法會根據所用宿主細胞的類型而有部分變化。這些方法以及其他適當的方法已為該領域的技術人員所熟知，并且在Sambrook等的《分子克隆實驗手冊》(Cold Spring Harbor Laboratories，1989)和Davis等的《分子生物學基本方法》(Elsevier，1986)中均有所描述。
本發明的多核苷酸分子的擴增和(或)表達可以在原核宿主細胞、酵母宿主細胞、昆蟲宿主細胞(桿狀病毒系統)和(或)真核宿主細胞中進行。表達宿主細胞的選擇在某種程度上取決于是否要對IL-1ra-L多肽進行翻譯后修飾(如糖基化和(或)磷酸化)。如果需要，則優選的是酵母宿主細胞、昆蟲宿主細胞或哺乳動物宿主細胞。有關表達載體的綜述，可參考Meth.Enz.，Vol.185(D.V. Goeddel，ed.，Academic Press 1990)。
另一方面，本發明提供一種具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。
另一方面，該氨基酸序列中的一個或多個氨基酸殘基的缺失、插入或取代產生具有與SEQ ID NO.2所示序列相同功能的衍生物也應包括在本發明的內容之內。因此，本發明應當包括具有SEQ ID NO.2所示序列的蛋白質分子的衍生物，這些衍生物的序列與SEQ ID NO.2所示序列的同源性至少為80％，優選的至少為90％。
另一方面，本發明還提供一種方法，用以獲得本發明的轉錄調節因子。該方法包括培養宿主細胞以合成該蛋白，然后收集和裂解宿主細胞，再用本領域熟知的方法選擇性地回收產物。
另一方面，本發明還提供該基因及其變異體或其片段的反義核酸探針。在本發明的實施方案中，使用地高辛標記的核糖核苷三磷酸(DIG-NTP)作為底物來合成這些反義核酸探針，并且這些標記的反義核酸探針用于原位雜交以研究本發明的基因qBrn-1的表達模式，但不局限于此。


圖1示本發明多核苷酸分子的限制性酶切圖譜。其中方框內為本發明基因的可讀框，并且在該可讀框中標示出保守的POU盒。POUSD指POU sepecific domain，POUHD指POU homeodomain。
圖2示本發明基因在發育中的鵪鶉中的表達模式。第13期的鵪鶉原位雜交的結果，顯示在前腦、中腦、菱腦節以及側板中胚層有信號。A示整胚的結果；B示頭部，在聽窩有較弱的信號；C示尾部及體節，在神經管的信號強，在側板中胚層的信號較弱。
圖3通過SDS-PAGE檢測純化的本發明基因的表達產物。A標準分子量；B未純化的宿主細胞全蛋白；C純化的本發明蛋白質，其分子量約為29Kda。
圖4獲得qBrn-1不同片段大小的亞克隆9種。
具體實施方案以下結合優選的實施例對本發明作詳細的說明，但并不意味著對本實施例1qBrn-1的cDNA的分子克隆及序列測定步驟1篩庫探針的制備化學合成如下寡核苷酸序列引物15’CGACCTGGAGCAGTTCGCCAA 3’引物25’AACCAGACACGCACCACCT 3，取孵化五天的鵪鶉胚胎，采用mRNA purification Kit和cDNA synthesisKit(Pharmacia Biotech)，按照說明書所述方法來制備cDNA。利用引物1和引物2，使用Taq DNA聚合酶進行PCR反應，97℃保溫10分鐘后，進入如下循環55℃退火1分鐘，72℃延伸2分鐘，94℃變性1分鐘，循環35次，得到篩庫DNA片段，它克隆于pBluescriptII SK-質粒EcoRI位點，總長402 bp，其序列如下圖
1CGACCTGGAG CAGTTCGCCA AGCAGTTCAA GCAACGACGC ATCAAGCTGG51 GCTTCACCCA GGCCGACGTG GGACTGGCGC TGGGCACCCT CTACGGTAAC101 GTGTTCTCGC AGACCACCAT CTGCCGTTTC GAGGCCCTGC AGCTGAGCTT151 CAAGAACATG TGCAAGCTCA AGCCGCTGCT CAACAAGTGG CTGGAGGAGA201 CCGACTCGTC CAGCGGCAGC CCCACCAACC TGGACAAGAT CGCGGCGCAG251 GGCCGCAAGC GCAAGAAGCG CACGTCCATC GAGGTGGGTG TCAAAGGCGC301 GCTCGGCCGT CTGCAGAGCC ACTTTCTCAA GTGTCCCAAG CACGAGATCA351 CCGGCCTGGC CGACAGCCTG CAACTGGAGA AGGAGGTGGT GCGTGTCTGG401 TT采用隨機引物標記法，將該DNA片段進行32P標記，制備成篩庫探針。
步驟2孵化五天的鵪鶉的全胚胎cDNA文庫的構建取孵化五天的鵪鶉胚胎，按步驟1的方法制備cDNA，并且在其末端連接EcoRI adaptor，然后克隆至pBluescript II KS(Srtatagene)載體中，轉化XL1-Blue(Stratagene)菌株感受態細胞，構建成孵化五天的鵪鶉全胚胎cDNA文庫。
步驟3用步驟1制備的探針對步驟2制備的文庫進行篩選，采用常規方法(《Molecular Cloning》，Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)，得到POU家族基因qBrn-1的cDNA克隆。
步驟4根據載體pBluescript II KS的特性，采用T3primer和T7primer為引物，分別用T3聚合酶和T7聚合酶對qBrn-1的正反兩個方向進行測序(上海生工)，該基因的cDNA總長2013bp。其基因部分核甘酸序列(即全部的可讀框)結果見SEQ ID NO.1，由該核甘酸序列所推導的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
實施例2qBrn-1cDNA的限制性酶切圖譜的的確定和各種亞克隆的構建步驟1對本發明的qBrn-1克隆進行單酶切、雙酶切及多酶切，并通過瓊脂糖凝膠電泳計算各酶切片段大小，并分析其多克隆位點，繪制出限制性酶切圖譜，見圖1。
步驟2，用Cla I和Sac I對qBrn-1進行雙酶切，并通過瓊脂糖凝膠電泳回收該酶切片段，然后以pBluescript II KS為載體，用同樣的酶(ClaI和Sac I)將其雙酶切，最后通過連接反應構建得到亞克隆A；以同樣方法，用BamHI和EcoR I對qBrn-1雙酶切，構建得到亞克隆B；用EcoRI和Cla I對qBrn-1進行雙酶切，構建得到亞克隆C；用Pst I對qBrn-1單酶切，構建得到亞克隆D、E、F和G；用Pst I和Cla I對qBrn-1雙酶切，構建得到亞克隆H；用BamHI和ClaI對qBrn-1雙酶切，構建得到亞克隆I。共獲得qBrn-1不同片段大小的亞克隆9種，但不局限于此，見附圖4。
實施例3反義核酸探針的制備選用亞克隆B、C和D中的基因片段為模板來制備多種反義核酸探針。本發明的多核苷酸分子的各種亞克隆見實施例2中附圖，選用三種探針的目的是為了相互驗證其結果的可靠性。具體制備方法包括選擇一種適當的限制性內切酶將環形的重組載體(即亞克隆B、C和D)線性化，該限制性內切酶的酶切位點位于qBrn-1的cDNA正鏈5’端，再用該cDNA正鏈3’端上游所對應的聚合酶(T3聚合酶或T7聚合酶)在體外對線性化模板進行轉錄，轉錄產物即為所需反義核酸探針。
本發明中，在體外轉錄中，所用的轉錄底物是地高辛標記的NTP。目的是為了在原位雜交實驗中，采用非放的方法進行檢測。具體地說，地高辛標記的探針與目的mRNA雜交后，用抗地高辛的抗體再與雜交體孵育，該抗體上又耦聯了堿性磷酸酶，最后就可以用堿性磷酸酶的生色底物使之顯色(信號)。
實施例4整胚原位雜交以研究qBrn-1的表達模式步驟1由本實驗室孵化獲得不同發育時期的鵪鶉胚胎。孵化條件溫度保持38±1℃，濕度約70％，日翻蛋3-4次，在空氣流通的恒溫培養箱內孵化，并定時地收集所需的鵪鶉胚胎。方法是用彎頭眼科剪由鵪鶉蛋的鈍端將蛋開口，然后將卵黃和蛋清輕倒于預冷的PBS緩沖液(8g NaCl，0.2g KCl，1.44g Na2HPO4，0.24g KH2PO4，pH7.4)中，用彎頭眼科剪小心地將胚胎剪下來，盡可能去除卵黃膜，立即用4％的多聚甲醛固定。所收集的胚胎的具體發育期按體節數判定。
步驟2在進行整胚原位雜交過程中，所用的器皿和溶液都要嚴格的防止RNase的污染。所用探針為上述地高辛標記的cRNA探針，抗體為堿性磷酸酶標記的抗-DIG抗體(Roche 1093 274)，生色底物為BMpurple(Roche 1442 074)。具體的實施方法參照Robert et al.，(1993)Cell，Vol.75，1401-1416以及Wilkinson，(1992)In Situ HybridizationA PracticalApproach，Oxford University Press中所述。
步驟3進行顯色后的胚胎用4％多聚甲醛固定，PBS清洗，為了使胚胎更為透明以提高攝影效果，可將其逐級置換到含80％的甘油和1％的Tween-20的PBS中，最后用體視顯微鏡進行顯微攝影，分析結果可得qBrn-1在發育中的鵪鶉胚胎中的表達模式。所得部分照片見圖2。
實施例4qBrn-1全長基因的表達與純化。
步驟1表達質粒的構建。用BstXI和SacII酶切qBrn-1 cDNA，同時將所用的表達載體pBluescript II KS也用這兩種酶進行雙酶切，然后用T4 DNA連接酶將上述片段連接起來，命名為pBS/qBrn-1。酶切圖譜和DNA測序結果表明表達質粒的構建準確無誤。
步驟2重組多肽的的表達和純化。用CaCl2法將pBS/qBrn-1轉化XL1-Blue(Stratagene)菌株感受態細胞，用LB培養基37℃液體培養。當OD600＝0.6時，加入IPTG(終濃度0.4mM)開始誘導本發明基因的表達，繼續培養3小時，離心收集菌體。用添加蛋白酶抑制劑的磷酸緩沖液(pH7.3，aprotinin 1μg/ml，PMSF 100μg/ml)懸浮菌體，每1升培養液用50ml緩沖液懸浮，于冰浴中超聲裂解菌體。隨后，加入Triton X-100(終濃度1％)，輕輕攪拌均勻30分鐘。離心取上清(4℃，10000rpm)，用Ni++-chelating Sepharose 4B柱親和吸附，用50mM咪唑洗脫除去雜蛋白。然后收集200mM咪唑洗脫組分，透析，冰凍干燥，最后用SDS-PAGE實驗來驗證該樣品，結果顯示其分子量與預期一致(約為29KDa)，并且其純度在90％以上，見圖3。
實施例5應用純化的qBrn-1產物以制備抗體。經純化的重組表達的qBrn-1產物用SDS-PAGE進一步純化后，用干凈小刀將目的條帶切下，直接溶于水中，這樣得到的混合物可用本領域所熟知的方法免疫動物以制備抗體。
實施例6純化的qBrn-1產物適用于發育生物學。已知該基因的產物是一種具有調控發育功能的轉錄調節因子，因此應用該蛋白產物可研究其與DNA和蛋白質的相互作用，以進一步明確胚胎發育過程中的調控網絡。
實施例7qBrn-1產物的抗體適用于免疫組織化學。按照Liu Wei et al.，2001，Int J. Dev.Biol. 45415-420中所述方法，應用該抗體可檢測整胚或切片的鵪鶉胚胎中qBrn-1基因的表達模式以及執行功能的時間和部位，以及表達強度。
序列表<110>中國科學院生物物理所<120>一種來自鵪鶉的同源異型盒基因qBrn-1及其應用<130>一種來自鵪鶉的同源異型盒基因qBrn-1及其應用<160>2<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>783<212>DNA<213>Coturnix japonica<400>1atggcctccc tgtactcgca gcccgggggc ttcacggtga acggcatgct gagccccgcg 60ggcggcggac agagcctggt gcaccccggg ctggtgcgcg gcggagagac ggcggagctg120ggcgagcacc ccgggcatca ccatcaccac caccacccgc accccgggca ccacgcgccg180caccacggcg ccgtcaacag ccacgaggcg cactcggacg aggacacgcc gacctcggac240gacctggagc agttcgccaa gcagttcaag cagcggcgga ttaagctggg cttcacgcag300gccgacgtgg ggctggcgct gggcaccctg tacggcaacg tcttctcgca gaccaccatc360tgccgcttcg aggccctgca gctcagcttc aagaacatgt gcaagctgaa gcctttgttg420aacaagtggc tggaggaagc cgactcctcc accggcagcc ccaccagcat cgacaagatc480gcggcgcagg gcaggaagag gaagaagcgg acctccatcg aggtgagtgt caagggggcc540ttggagagcc actttctgaa atgccccaag ccctccgccc aggagattac gaacctagcg600gacagcctgc agctggagaa ggaggtggtc agggtttggt tttgcaatcg gaggcagaaa660gagaaacgca tgaccccgcc ggggatccag cagcagaccc ccgacgatgt ctactcgcag720gtcggcgccg tcagctccga cacgccgccc cctcaccacg gactgcagag cggcgtgcag780tga 783<210>2<211>260
<212>PRT<213>Coturnix japonica<400>2Met Ala Ser Leu Tyr Ser Gln Pro Gly Gly Phe Thr Val Asn Gly Met1 5 10 15Leu Ser Pro Ala Gly Gly Gly Gln Ser Leu Val His Pro Gly Leu Val20 25 30Arg Gly Gly Glu Thr Ala Glu Leu Gly Glu His Pro Gly His His His35 40 45His His His His Pro His Pro Gly His His Ala Pro His His Gly Ala50 55 60Val Asn Ser His Glu Ala His Ser Asp Glu Asp Thr Pro Thr Ser Asp65 70 75 80Asp Leu Glu Gln Phe Ala Lys Gln Phe Lys Gln Arg Arg Ile Lys Leu85 90 95Gly Phe Thr Gln Ala Asp Val Gly Leu Ala Leu Gly Thr Leu Tyr Gly100 105 110Asn Val Phe Ser Gln Thr Thr Ile Cys Arg Phe Glu Ala Leu Gln Leu115 120 125Ser Phe Lys Asn Met Cys Lys Leu Lys Pro Leu Leu Asn Lys Trp Leu130 135 140Glu Glu Ala Asp Ser Ser Thr Gly Ser Pro Thr Ser Ile Asp Lys Ile145 150 155 160Ala Ala Gln Gly Arg Lys Arg Lys Lys Arg Thr Ser Ile Glu Val Ser165 170 175
Val Lys Gly Ala Leu Glu Ser His Phe Leu Lys Cys Pro Lys Pro Ser180 185 190Ala Gln Glu Ile Thr Asn Leu Ala Asp Ser Leu Gln Leu Glu Lys Glu195 200 205Val Val Arg Val Trp Phe Cys Asn Arg Arg Gln Lys Glu Lys Arg Met210 215 220Thr Pro Pro Gly Ile Gln Gln Gln Thr Pro Asp Asp Val Tyr Ser Gln225 230 235 240Val Gly Ala Val Ser Ser Asp Thr Pro Pro Pro His His Gly Leu Gln245 250 255Ser Gly Val Gln260
權利要求
1.一種多核苷酸分子，該多核苷酸分子的序列與SEQ ID NO.1所示序列的同源性至少為80％。
2.根據權利要求1所述的一種多核苷酸分子，其中，該多核苷酸分子的序列與SEQ ID NO.1所示序列的同源性至少為90％。
3.一種具有SEQ ID NO.1所示序列多核苷酸分子。
4.一種蛋白質分子，該蛋白質分子的氨基酸序列與SEQ ID NO.2所示序列的同源性至少為80％。
5.根據權力要求4所述的一種蛋白質分子，其中，該蛋白質分子的氨基酸序列與SEQ ID NO.2所示序列的同源性至少為90％。
6.一種具有SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的蛋白質分子。
7.一種重組載體，該重組載體的特征在于含有權利要求1-3任一項所述的多核苷酸分子。
8.一種含有權力要求7所述的重組載體的宿主細胞。
9.根據權利要求8所述的宿主細胞，其中，選自原核細胞或真核細胞。
10.一種獲得轉錄調節因子的方法，該方法包括1)首先，培養一種權力要求8所述的宿主細胞；以及2)回收宿主細胞所表達的轉錄調節因子。
11.一種反義核酸探針，該反義核酸探針的特征在于它是以權利要求1-3中任一項所述的多核苷酸分子為模板得到的。
12.根據權利要求1-3中任一項所述的多核苷酸分子在臨床醫學調控神經系統發育中的應用。
13.根據權利要求4-6中任一項所述的蛋白質分子在調控發育功能的轉錄調節因子或免疫組織化學或制備抗體中的應用。
全文摘要
本發明提供一種從鵪鶉胚胎cDNA文庫中篩選得到的基因qBrm－1和該基因編碼的轉錄調節因子、含有上述基因序列的重組載體及其亞克隆和重組微生物，以及由這些亞克隆獲得的反義探針。該基因屬于一種新的同源異型盒基因，其表達產物屬于一種新的轉錄調節因子，本領域已部分了解同源異型盒基因及轉錄調節因子在基因的調控和胚胎發育過程中的重要功能。本發明的目的是通過提供該新基因的研究來進一步闡釋上述功能。此外，本發明還提供該基因在臨床醫學中調控神經系統發育方面的應用。
文檔編號C07H21/00GK1511841SQ02160808
公開日2004年7月14日 申請日期2002年12月30日 優先權日2002年12月30日
發明者蘭蕾, 劉陽, 劉纓, 薛金曉, 薛志剛, 赫榮喬, 蘭 蕾 申請人:中國科學院生物物理研究所