軟組織植入物的制作方法
【專利說明】軟組織植入物
[0001]相關申請的交叉引用
本申請要求2013年7月I日提交且具有標題“軟組織植入物(Soft Tissue Implant)”的美國臨時專利申請序列號61/841，601的權益，所述申請的公開內容以其整體并入本文。
[0002]背景
軟組織中的變化作為自然老化過程以及創傷性事件諸如外科手術、疾病或其他狀況的結果而發生。這些軟組織中的變化可以生成不期望的軟組織缺損。例如，隨著老化發生，臉部的脂肪和其他軟組織的損失導致皺紋。此外，炎癥和纖維組織形成可以在添加任何類型的植入物之后響應于異物存在而發生。
[0003]在此類情況下，軟組織植入物對于解決一些軟組織變化的有害后果是期望的。目前獲得軟組織用于軟組織植入物的基礎的方法依賴于在收獲之后從軟組織植入物移取幾種重要的細胞組分(包括關鍵蛋白)的方法。因此，需要改進的軟組織植入物以及制備軟組織植入物的方法。
[0004]概述
在一個方面，本文描述的軟組織植入物含有脂肪細胞的生物活性的胞內組分和載體基材，其中所述軟組織植入物通過以下制備:從供體收獲脂肪細胞，選擇性裂解脂肪細胞以獲得生物活性的胞內組分和將生物活性的胞內組分與載體基材組合。在一些實施方案中，所述生物活性的胞內組分是生長因子。在進一步實施方案中，所述供體是自體供體、同種異體供體、異種供體或同系供體。在額外實施方案中，選擇性裂解的步驟包括通過化學破碎或機械破碎裂解脂肪細胞。在一些實施方案中，所述化學破碎涉及將脂肪細胞與溶液接觸，其中所述溶液含有酸或堿。在進一步實施方案中，選擇性裂解的步驟包括將生物活性的胞內組分與其他脂肪細胞組分選擇性分離。在一些實施方案中，所述載體基材是完整的細胞外基質、脫細胞的細胞外基質、細胞外基質組分、水凝膠、聚合物固體、聚合物半固體、碳水化合物、自組裝肽、碳納米管、殼聚糖、藻酸鹽、透明質酸、骨粉、軟骨粉、蛋白、糖、塑料、金屬或其組合。在一個實施方案中，所述漿料中含有生物活性的胞內內容物，其中漿料與載體基材的比率為約1: l(v/v)至約1:100 (v/v) O
[0005]在另一個方面，該方法涉及從供體收獲脂肪細胞，選擇性裂解脂肪細胞以獲得生物活性的胞內組分和將生物活性的胞內組分與載體基材組合以形成組合的生物活性的胞內組分-載體基材。在一些實施方案中，所述生物活性的胞內組分是生長因子。在進一步實施方案中，所述供體是自體供體、同種異體供體、異種供體或同系供體。在額外實施方案中，選擇性裂解的步驟包括通過化學破碎或機械破碎裂解脂肪細胞。在一些實施方案中，所述化學破碎涉及將脂肪細胞與溶液接觸，其中所述溶液含有酸或堿。在進一步實施方案中，選擇性裂解的步驟包括將生物活性的胞內組分與其他脂肪細胞組分選擇性分離。在一些實施方案中，所述載體基材是完整的細胞外基質、脫細胞的細胞外基質、細胞外基質組分、水凝膠、聚合物固體、聚合物半固體、碳水化合物、自組裝肽、碳納米管、殼聚糖、藻酸鹽、透明質酸、骨粉、軟骨粉、蛋白、糖、塑料、金屬或其組合。在一個實施方案中，所述漿料中含有生物活性的胞內內容物，其中漿料與載體基材的比率為約1: l(v/v)至約1:100 (v/v)。在其他實施方案中，所述方法還包括將防腐劑、抗生素、抗病毒劑、抗真菌劑、pH穩定劑、滲透穩定劑(osmostablizer)、抗炎劑、抗腫瘤劑、生長因子、血管生成化合物、血管形成性化合物、化療劑、免疫調節劑、化學引誘物或其組合添加至胞內組分、載體基材或組合的生物活性的胞內組分-載體基材。在又進一步實施方案中，所述方法包括將組合的生物活性的胞內組分-載體基材施用于有需要的主體。
[0006]在另一個方面，試劑盒含有包括脂肪細胞的生物活性的胞內組分和載體基材的軟組織植入物，其中所述軟組織植入物通過以下生成:從供體收獲脂肪細胞，選擇性裂解脂肪細胞以獲得生物活性的胞內組分和將生物活性的胞內組分與載體基材組合，以及實體表達媒介中含有的說明書，其中所述說明書提供用于將軟組織植入物施用于有需要的主體的指導。在其他實施方案中，所述試劑盒含有具有中空容器和柱塞的遞送設備，其中所述柱塞機械地連接至所述中空容器，且其中所述遞送設備被配置為在中空容器內含有軟組織植入物。
[0007]附圖簡述
當結合附圖時，本公開的進一步方面將在閱讀下述其各個實施方案的詳述之后被容易地理解。
[0008]圖1是說明用于收獲軟組織細胞和保留內源性胞內組分的方法的實施方案的流程圖。
[0009]圖2是說明將圖1的儲存或未儲存的漿料并入載體基材的方法的實施方案的流程圖。
[0010]圖3是說明將圖1的儲存或未儲存的漿料并入軟組織移植物的方法的實施方案的流程圖。
[0011]圖4顯示含有如根據本文描述的方法產生的漿料的遞送設備的一個實施方案。
[0012]圖5顯示含有如根據本文描述的方法產生的漿料的遞送設備的另一個實施方案。
[0013]圖6表明與脂肪來源的胞內化合物組合的載體基材(LipoAmp)與對照相比增加的生長因子含量。
[0014]圖7顯示與脂肪來源的胞內化合物組合的載體基材(LipoAmp)與供體匹配的對照植入物相比隨著時間的體內植入體積。
[0015]圖8a和Sb顯示對照染色(圖8a)和蘇木精和伊紅染色，其表明在含有脂肪來源的胞內化合物的載體基材(LipoAmp)的植入位置的異位脂肪形成。
[0016]詳述
在更詳細描述本公開之前，應當理解，本公開不限于描述的具體實施方案，且因此當然可以變化。也應當理解，本文使用的術語僅出于描述具體實施方案的目的，而不非意欲限制。
[0017]當提供數值范圍時，應當理解，本發明內涵蓋該范圍的上限和下限之間的各中間數值(至下限單位的十分之一，除非上下文另外明確指明)和該規定范圍中的任何其他規定或中間數值。這些較小范圍的上限和下限可以獨立地包括在較小范圍中，且也涵蓋于本公開內，服從規定范圍內任何被明確排除的限值。當規定范圍包括一個或兩個限值時，排除那些包括的限值中的任一或兩者的范圍也包括在本公開中。
[0018]除非另有定義，本文使用的所有技術和科學術語具有與本公開所屬領域的普通技術人員通常理解的相同的含義。盡管與本文描述的方法和材料類似或等同的任何方法和材料也可以用于本公開的操作或測試中，現在描述優選的方法和材料。
[0019]本說明書中引用的所有出版物和專利都通過引用并入本文，如同各單獨的出版物或專利被特定且單獨地提到通過引用并入，并且通過引用并入本文以公開和描述與引用所述出版物相關的方法和/或材料。任何出版物的引用用于在申請日之前的其公開內容，并且不應解釋為承認本發明沒有資格憑借在先公開而先于此出版物。進一步，提供的公開日可以與可以需要獨立證實的實際公開日不同。
[0020]如本領域技術人員在閱讀本公開之后將顯而易見，本文描述和說明的各單獨實施方案具有離散的組分和特征，其可以容易地與任何其他幾個實施方案的特征分開或與其組合，而不脫離本公開的范圍或精神。任何所述方法可以以所述事件的順序或以邏輯上可能的任何其他順序實施。
[0021]本公開的實施方案將采用，除非另有說明，在本領域技術內的分子生物學、生理學、現代外科手術技術、微生物學、納米技術、有機化學、生物化學、植物學等的技術。文獻中充分解釋此類技術。
[0022]定義
在描述公開的主題中，以下術語將根據下文記載的定義使用。
[0023]如本文所使用，“約”、“近似”等，當與數字變量結合使用時，通常是指該變量的值，和該變量的實驗誤差內(例如，平均值的95%置信區間內)或所示值的.+-.10%內(無論哪個更大)的所有值。
[0024]如本文所使用，“有效量”是足以實現有益或期望結果的量。有效量可以在一次或多次施用、應用或劑量中施用。
[0025]如本文所使用，“治療性”是指治療或治愈疾病或病況。
[0026]如本文所使用，“預防性”是指在疾病或病況發生之前或在疾病或病況仍處于亞臨床階段的同時阻礙或停止疾病或病況。
[0027]如本文所使用，關于分子、化合物或組合物(包括，但不限于，化學化合物、多核苷酸、肽、多肽、蛋白、抗體或其片段)的量使用的“濃縮的”表明樣品與其天然存在的對應物的區別在于濃度或每體積的分子數大于其天然存在的對應物的濃度或每體積的分子數。
[0028]如本文所使用，“分離的”意指與多核苷酸、肽、多肽、蛋白、抗體或其片段通常天然結合的細胞或其他組分分離。非天然存在的多核苷酸、肽、多肽、蛋白、抗體或其片段不需要“分離”以將其與其天然存在的對應物區分開。
[0029]如本文所使用，關于分子、化合物或組合物(包括，但不限于，化學化合物、多核苷酸、肽、多肽、蛋白、抗體或其片段)的量使用的“稀釋的”表明樣品與其天然存在的對應物的區別在于濃度或每體積的分子數小于其天然存在的對應物的濃度或每體積的分子數。
[0030]如本文可互換使用，“主體”、“個體”或“患者”是指脊椎動物，優選哺乳動物，更優選人。哺乳動物包括，但不限于，鼠、猿、人、農場動物、運動動物和寵物。術語“寵物”包括狗、貓、豚鼠、小鼠、大鼠、兔、雪貂等。術語農場動物包括馬、綿羊、山羊、雞、豬、牛、驢、美洲駝、羊馬它、火雞等。
[0031 ]如本文所使用，“生物相容的”或“生物相容性”是指材料被患者使用而不在患者中引發對物質或其衍生物(諸如代謝物)的不利或其他不當的宿主反應(與正常或對照患者中的宿主反應相比)的能力。
[0032]如本文所使用，“細胞”、“細胞系”和“細胞培養物”包括后代。還應當理解，由于有意或無意的突變，所有后代可能無法在DNA含量中精確地相同。包括與在初始轉化的細胞中篩選具有相同的功能或生物學特性的變體后代。
[0033]如本文所使用，“特異性結合”是指在配對種類諸如酶/底物、受體/激動劑、抗體/抗原和凝集素/碳水化合物之間發生的結合，其可以由共價或非共價相互作用或共價和非共價相互作用的組合介導。當兩個種類的相互作用產生非共價結合的復合物時，發生的結合通常是靜電、氫鍵鍵合或親脂相互作用的結果。因此，在配對種類之間發生“特異性結合”，其中在產生具有抗體/抗原或酶/底物相互作用的特征的結合復合物的兩者之間存在相互作用。具體而言，特異性結合的特征在于配對的一個成員結合至結合成員的相應成員所屬的化合物家族內的特定種類且不結合至其他種類。因此，例如，抗體優選地結合至蛋白家族內的單一表位且不結合至其他表位。
[0034]如本文所使用，“對照”是實驗中用于比較目的使用且包括以盡可能降低或區分除了獨立變量以外的變量的效果的替代對象或樣品。
[0035]如本文所使用，“陽性對照”是指被設計以產生期望結果的“對照”，條件是所有試劑都適當地發揮功能且適當地進行實驗。
[0036]如本文所使用，“陰性對照”是指被設計以不產生效果或結果的“對照”，條件是所有試劑都適當地發揮功能且適當地進行實驗。與“陰性對照”可