一種石斛發酵原漿及其制備方法與應用
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種石解發酵原漿及其制備方法與應用，屬于生物技術領域。
【背景技術】
[0002] 鐵皮石解(Den化obium off icinale Kimura et Migo)是我國名貴中草藥，系蘭 科石解屬植物，因表皮呈鐵綠色而得名，具有生津滋陰、明目養胃、補腎強身等功效。據文獻 報道，石解屬植物中的主要藥效成分為多糖、生物堿、糖巧、菲類、聯節類和氨基酸等。多糖 在鐵皮石解中的含量高，且具有良好的抗腫瘤、抗氧化、增強免疫力W及降低血糖等生理功 能。
[0003] 國內外對于石解研究中，石解活性物質的提取方法W水提醇沉法為主，還有酶法 提取和超聲波輔助提取等方法。

【發明內容】

[0004] 本發明的目的是提供一種石解發酵原漿及其制備方法與應用。本發明方法利用發 酵工程技術從石解中提取活性物質，操作簡單，且由于不添加任何外來物質，制備得到的石 解發酵原漿對皮膚安全無傷害，將其應用于化妝品中具有很高的抗衰老活性。
[0005] 本發明提供的一種石解發酵原漿的制備方法，包括如下步驟:將石解干粉、水和發 酵菌混合得到初始體系，并對所述初始體系進行發酵培養，即得到石解發酵原漿。
[0006] 本發明中，所述石解干粉采用石解的莖部制成。
[0007] 上述的制備方法中，所述石解干粉、所述水和所述發酵菌的配比可為Ig: (9~20) 1111^:(0.1~1)1111^，具體可為1邑：121111^:0.61111^或1邑：（12~20)1111^:(0.6~1)1111^;
[000引所述發酵菌的濃度可為（IO5~108)CFU/mL。
[0009] 上述的制備方法中，所述發酵培養的溫度可為35~50°C，具體可為38°C、35~40 °C、35~38°C或38~50°C;所述發酵培養的時間可為4.5~6.化，具體可為化、4.5~化或6~ 6. Sho
[0010] 上述的制備方法中，所述石解干粉的粒徑可為20~50目，具體可為40目或40~50 目，所述石解干粉可由粉碎機粉碎后過篩得到；
[0011] 所述發酵菌可為乳桿菌，具體可為德氏乳桿菌，更具體可為德氏乳桿菌保加利亞 亞種Lactobacillus delbrueckii bulgaricus。
[0012] 上述的制備方法中，所述發酵菌可W其培養液或懸浮液的形式存在，所述發酵菌 的培養液或懸浮液的pH值可為4.0~7.0，具體可為5.0、4.0~5.0或5.0~7.0。
[0013] 上述的制備方法中，所述方法中在所述發酵培養之后，還可包括對發酵液依次進 行滅菌、離屯、和取上清液的步驟。
[0014] 上述的制備方法中，所述滅菌的條件如下:所述滅菌的溫度可為115~12rC，具體 可為115°C;所述滅菌的時間可為15~25min，具體可為20min;
[0015] 所述離屯、的條件如下：離屯、轉速可為3000~4000r/min，具體可為3800r/min或 3800~4000r/min;離屯、時間可為15~30min，具體可為20min或20~30min;離屯、半徑可為 9cm〇
[0016] 本發明還提供了由上述的制備方法制備得到的石解發酵原漿。
[0017] 本發明進一步提供了上述的石解發酵原漿在制備具有下述1)和/或2)中功能的產 品中的應用：
[001引1)清除自由基；
[0019] 2)抗衰老。
[0020] 上述的應用中，所述產品可為化妝品、食品和保健品中的至少一種；
[0021] 所述化妝品可為面膜、精華液和爽膚水中的至少一種；
[0022] 所述自由基為DPPH自由基、超氧陰離子和徑基自由基中的至少一種。
[0023] 本發明具有如下有益效果：
[0024] (1)本發明提供的石解發酵原漿的制備方法采用發酵工程技術，通過選擇合適的 菌種及發酵條件，從石解中提取得到活性物質即石解發酵原漿。一方面，可最大程度保留植 物中的活性成分，且相對與傳統的水提法，避免了有機溶劑的引入，安全環保;另一方面，不 需要添加酶等外來物質，不僅節約生產成本，而且最大化的簡化了生產步驟，使該發酵技術 能夠實現大量生產、工業化生產，并能夠充分保證產品質量的穩定性。
[0025] (2)本發明提供的石解發酵原漿富含石解多糖，且由于在制備過程中未引入外來 物質，不含任何化學成分，可W直接作為面膜、精華液或爽膚水的成品使用，更加天然，不會 給肌膚造成任何負作用。
[0026] (3)本發明提供的石解發酵原漿，具有較強的抗氧化能力可清除自由基和超氧陰 離子，促進細胞代謝，增強細胞活力，改善機體的結構和功能，提高機體生命力，從而延緩細 胞老化，具有抗衰老的功效。
【附圖說明】
[0027] 圖1為不同體積百分濃度的石解發酵原漿與DPKl自由基清除率的關系曲線。
[0028] 圖2為不同體積百分濃度的石解發酵原漿與徑基自由基清除率的關系曲線。
[0029] 圖3為不同體積百分濃度的石解發酵原漿與超氧陰離子清除率的關系曲線。
【具體實施方式】
[0030] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。
[0031] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0032] 下述實施例中的液體培養基由溶質和溶劑組成，溶劑為水，溶質及其在液體培養 基中的濃度為:蛋白腺10.Og,牛肉膏10.Og,酵母膏5.Og,巧樣酸氨二錠2.Og,葡萄糖20.Og, 吐溫801.01111^，乙酸鋼（邸3(：0(^3?3肥0)5.0旨，憐酸氨二鐘化2冊04?3肥0)2.0旨，硫酸儀 (MgS04?7H20)0.58g，硫酸儘(MnS04?H20)0.25g，瓊脂18.0g，蒸饋水1000mL，pH6.2~ 6.6。
[0033] 下述實施例中的石解(莖部)來自浙江義烏鮮禾有限公司，粉碎過40目篩。
[0034] 下述實施例中的德氏乳桿菌保加利亞亞種化actobacillus delbrueckii bulgaricus)的ATCC編號為11842，可從ATCC購買得到。
[0035] 下述實施例中的發酵菌菌液按照如下步驟制得：
[0036] 1、菌種的活化
[0037] 挑取德氏乳桿菌保加利亞亞種(Xactobacillus de化rueckii bulgaricus)菌落 一環于液體培養基中，放入搖床中將菌種活化，得到活化后德氏乳桿菌保加利亞亞種菌液。 [003引 2、菌種的純化
[0039] 將步驟1得到的活化后的菌液梯度稀釋鋪板，W便獲取單菌落，得到純化后德氏乳 桿困。
[0040] 3、菌種的擴大培養
[0041 ]將步驟2得到的純化后的菌種接種到MRS培養基(pH值為7.0)中，在25°C的搖床中 培養，當OD值=0.5-1.0時，得到發酵菌菌液(菌種處在對數期，濃度為IO5~IO8CFlVmL)。
[0042] 實施例1、制備石解發酵原漿
[0043] 按照如下步驟制備石解發酵原漿：
[0044] (1)將20mL的9mL濃度為IO5~IO8CFlVmL的發酵菌菌液接種到15g的石解干粉和 ISOmL的水中，得到發酵體系；
[0045] (2)將上述發酵體系在38°C搖床中發酵6小時，得到發酵產物；
[0046] (3)將上述發酵產物115°C下滅菌20min，使菌失活，得到滅菌后的發酵產物;將滅 菌后的發酵產物在3800r/min，離屯、半徑為9cm的條件下離屯、20min，棄沉淀，收集上清液，即 得到石解發酵原漿。
[0047] 實施例2、石解發酵原漿在作為化妝品中的應用
[0048] 一、石解發酵原漿化妝品的性質
[0049] 將本發明實施例1所制備所得的發酵提取物經活性炭脫色、去味后，制得石解發酵 原漿化妝品。其外觀為粘稠液體、顏色為淡黃色至棟黃色。pH值5.0-6.1，粘度200-500CP，可 溶性固含物含量2.0-6.0 %，菌落總數小于50CFU/mL，無致病菌檢出。根據化妝品衛生標準 GB7916-87，化妝品細菌總數不高于1 OOOCFU/ml，所W此發酵原漿符合化妝品質量要求。
[0050] 對該石解發酵原漿化妝品的主要功效成分石解多糖含量進行測量，檢測方法參照 GB/T 5009.8-2008，測得石解多糖含量為