一種用于防治中晚期肺腺癌的馬尾松嫩枝皮提取物及其制備方法與其組合物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及中藥提取物技術領域，具體設及一種用于防治中晚期肺腺癌的馬尾松 嫩枝皮提取物及其制備方法與其組合物。
【背景技術】
[0002] 癌癥對人類的威脅日益增大，日漸成為危及人類健康與生命的"頭號殺手"。征服 癌癥已成為全人類面臨的一項迫在眉睫的任務，各國都把它作為重要課題，并投入巨資進 行攻關。由于癌癥的手術治療、放射治療、化學藥品治療均存在一定程度的局限性，且化學 藥品治療癌癥的毒副作用不斷出現，國際科學界開始把目光轉向更為安全的天然植物提取 物，并成為治療癌癥的研究熱點。
[000引 20世紀50年化法國Masquelier博±首次從法國海松的樹皮中提取得到一種黃 酬類天然抗氧化劑混合物-原花青素，其抗氧化活性為V。的50倍、V。的20倍，并能清除體 內過多的活性氧自由基，降低機體脂質過氧化程度，具有抗氧化、延緩衰老、增加免疫能力 等功效。50年代后期，上述法國海松樹皮提取物被注冊為Pycnogenol藥物，用于提高血管 抵抗力，降低毛細血管脆性和通透性，防止血管內皮損傷等用途。1999年化ynh等化uynh et al，Anticancer Res, 1999)發現上述法國海松樹皮提取物能抑制癌活性代謝物NNK活 化，可防止抽煙誘發的肺癌。
[0004] 盡管國外存在關于法國海松、新西蘭福射松樹皮提取物生物學活性的研究報道， 但我國松樹生存環境獨特，其體內次生代謝物種類、含量和性質與前兩者相比存在諸多差 異。吳杰等人研究了中國松科中不同品種松樹皮中活性成分的差異，結果顯示不同品種松 樹皮活性物質的含量差異顯著，其中，馬尾松樹皮提取物中的總多酪含量、總黃酬含量、原 花青素和水溶性多糖含量最高。并且，有關馬尾松樹皮提取物的研究多集中在由馬尾松樹 皮提取原花青素等活性物質方面，其提取工藝也各有差異。
[0005] 崔映宇等（《食品科學》，2004年）從馬尾松樹皮中制備獲得了馬尾松樹皮提取 物，其提取過程包括將馬尾松樹皮經篩選、烘干和粉碎后，用純水加熱浸提，浸提液經粗濾、 離屯、分離和微濾后，除去懸浮物和大分子雜質，再用中空纖維膜超濾，得到含有前花青素等 生物活性成分的透過液，納濾濃縮，去除糖類、無機鹽等雜質和水后，干燥，即得。但上述提 取過程采用熱水浸提，提取溫度較高，導致松樹皮中含有的揮發性物質丟失，影響萃取物活 性，且純化過程中W單一原花青素作為目標物，其過濾濃縮條件W及對糖類等物質的去除， 將導致馬尾松樹皮提取物無法保持其有效成分的完整性。
[0006] 薄采穎等使用超聲法從馬尾松樹皮中提取多酪類物質，包括將馬尾松樹皮切碎、 干燥和粉碎后，得到松樹皮粉末，W 70%乙醇為溶劑，在30°C條件下，料液比為20:1 (ml : g)，超聲提取40min，提取液離屯、過濾，測多酪得率。該方法采用乙醇作為提取溶劑，提取溫 度略高，與水作為提取溶劑低溫提取相比，提取物組分將會有較大差異。
[0007] CN1923830A通過水溶劑從馬尾松樹皮中提取原花青素，具體包括W松樹皮內皮層 為原料，加入5-10倍的水，沸騰回流1-化，經過300目管道過濾器，放出浸提液，重復一次， 合并浸提液；離屯、，過柱，濃縮，干燥得到粉末。該方法采用沸騰回流收取提取物，將導致有 效成分的損失。
[0008] CN101468121A公開了將紫花首猜、覆盆子、小橫柳和馬尾松樹皮按照1:1:1:1混 合，加入3倍重量的凈水浸泡4她，在> 100°C下煎煮化，然后初濾、精濾和微孔阻菌精濾，濃 縮后，噴霧干燥，得到粉末。該方法提取原料除馬尾松樹皮外還包括紫花首猜、覆盆子、小橫 柳，將導致提取物混合組分與單獨馬尾松樹皮提取物有較大差異，且采用了高溫煎煮、噴霧 干燥的方法，使得部分有效組分揮發物不能鎖定被流失。
[0009] 杜酷等研究了回流、索氏提取、超聲提取等不同的浸提方法及不同提取條件，通過 水溶劑從馬尾松樹皮中提取原花青素的效率，結果表明不同的浸提方法，不同的提取條件 都會影響原花青素得率。且在使用超聲法提取原花青素時其最佳提取溫度為50°c，并給出 了低溫條件會影響原花青素提取效率的不利教導。
[0010] CN101701013A公開了用水作為溶劑從松樹皮中提取原花青素，W松樹皮為原料， 水為提取溶劑，進行超聲波強化浸提，得到原花青素浸提液；再用微濾除雜、超濾純化、納濾 濃縮的膜分離技術處理，得到濃縮液；再經真空干燥或冷凍干燥，得到原花青素產品。該方 法記載了提取過程在低溫條件下操作，但其【具體實施方式】選擇了 45°C和50°C進行超聲提 取，并仍然W提取原花青素作為主要目標物，純化過程中選擇了與原花青素相適應的截留 分子量，得到的凍干產品中原花青素的含量可W達到67-68% wt，總酪含量可達到85-87% Wt 〇
[0011] 綜上，馬尾松樹皮提取物含有多種酪類、糖類等多種成分組合而成的復合物，且不 同的提取溶劑、提取過程、提取條件、分離純化操作等，均會導致最終提取物中組分及組分 比例的差異。并且，馬尾松樹皮的研究均采用馬尾松樹主桿老皮作為提取原料，尚未見特異 選擇馬尾松嫩枝皮作為提取原料的相關報道。由于嫩枝皮與主桿老樹皮植物組織處于不同 的生長階段，其所含有的生物活性物質有所不同，且主桿老樹皮生長時間較久，受環境因素 影響較大，導致嫩枝皮與老樹皮提取物活性成分的差異。崔映宇等使用馬尾松樹皮提取物 抑制肺腺癌的啟示，馮東茹等通過提取馬尾松樹皮中的原花青素，用于抑制肺腺癌細胞株 Glc-82的增殖活性；李偉等使用松樹皮提取物促進人肺腺癌細胞A549的調亡，但上述抑制 肺腺癌細胞株的活性成分為原花青素。

【發明內容】

[0012] 本發明的目的在于提供一種用于防治肺腺癌的馬尾松嫩枝皮提取物的制備方法， 包括下述步驟：1)將馬尾松嫩枝皮粉碎至200-800目，制得馬尾松嫩枝皮粉，其中，所述的 馬尾松嫩枝皮為馬尾松枝頭枝條當年發出的嫩枝在春夏季節采摘得到的松樹皮；2)在4~ 25Γ條件下，在馬尾松嫩枝皮粉中加入水，浸泡1-lOh，其中，馬尾松嫩枝皮粉與水的質量體 積比為1 :2-1:15,制得馬尾松嫩枝皮粉水浸泡液；3)將馬尾松嫩枝皮粉水浸泡液超聲提取 5min-2h，過濾，制得馬尾松嫩枝皮水提液；4)馬尾松嫩枝皮水提取液經干燥，即得。
[0013] 本發明的優選技術方案中，所述馬尾松嫩枝皮粉碎前經篩選、除雜、烘干處理，優 選所述烘干溫度為30~80°C，更優選為40-70°C，最優選為50-60°C。
[0014] 本發明的優選技術方案中，所述馬尾松嫩枝皮粉碎至250-700目，優選為300-600 目，更優選為350-500目。
[0015] 本發明的優選技術方案中，所述馬尾松嫩枝皮的采摘時間為3-6月，優選為4-5 月。
[0016] 本發明的優選技術方案中，所述提取溫度為8-20°C，優選為10-15°c。
[0017] 本發明的優選技術方案中，所述浸泡2-化，優選浸泡3-化，更優選浸泡4-化。
[001引本發明的優選技術方案中，馬尾松嫩枝皮粉與提取用水的質量體積比為 1:4-1:12,優選為 1:6-1:10。
[0019] 本發明的優選技術方案中，所述水選自軟水、蒸饋水、去離子水的任一種或其組 合。
[0020] 本發明的優選技術方案中，超聲提取次數為1-6次，優選為2-5次，更優選為3-4 次。
[0021] 本發明的優選技術方案中，所述超聲提取條件為，超聲lO-lOOmin，優選超聲 15-80min，更優選超聲2〇-60min，最優選超聲25-40min。
[0022] 本發明的優選技術方案中，所述超聲提取條件為，超聲功率為200-1000W，優選為 350-900W，更優選為 500-750W。
[0023] 本發明的優選技術方案中，所述超聲提取條件為，超聲1-lOOs，間隙1-lOOs，優 選超聲5-80S，間隙5-80S，更優選超聲10-70S，間隙10-70S，最優選超聲15-60S，間隙 15-60s〇
[0024] 本發明的優選技術方案中，所述過濾依次為初濾、精濾、膜阻菌過濾，優選初 濾用100目篩網過濾，精濾使用生白布反復吸附過濾4-6次，膜阻菌過濾的孔徑為 0. 22 μηι-〇. 45 μηι。
[0025] 本發明的優選技術方案中，所述干燥選自減壓濃縮干燥、冷凍干燥或噴霧干燥的 任一種或其組合。
[0026] 本發明的優選技術方案中，所述提取物中有效成分包括多酪、總堿和多糖，優選所 述有效成分含有2-5%的多酪，15-25%的總堿和60-80%的