用于治療慢性髓細胞性白血病的含有北美鵝掌楸提取物的藥物組合物的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及用于對慢性髓細胞性白血病進行治療的藥物組合物，該藥物組合物含有來自北美鵝掌楸樹皮的提取物作為活性成分。具體而言，本發明涉及含有來自北美鵝掌楸樹皮的提取物作為活性成分的藥物組合物以及來自北美鵝掌楸樹皮的提取物(含有表美鵝掌楸內酯(ep1-tulipinolide)作為活性成分)的制藥用途，該藥物組合物用于選擇性地抑制由BCR-ABL融合基因產生的T315I酶變體。
【背景技術】
[0002]北美鶴掌揪(Lir1dendrontulipifera L.，Yellow-poplar)是屬于木蘭科(Magnoliaceae)的一種落葉闊葉喬木。已知北美鸛掌楸的樹皮中含有生物堿、倍半蔽稀和/或木酚素。
[0003]此外，北美鵝掌楸的提取物中含有倍半萜烯內酯化合物，包括木香烯內酯、郁金香酯、表美鶴掌揪內酯、ep1-tulipdienolide 和 / 或 γ -lir1denolide。
[0004]此外，已知這些倍半蔽稀內酯中的小白菊內酯(parthenolide)作為調節核轉錄因子NF- κ B、p21和/或細胞周期蛋白(cyclin)Dl的抗癌劑和/或抗炎劑。特別地，已知小白菊內酯和/或LC-1 (二甲基氨基-小白菊內酯)作為用于急性髓系白血病(AML)的抗癌劑，通過阻抑核轉錄因子NF- κ B的活性誘導細胞凋亡。
[0005]白血病是一種由血細胞、尤其是白血細胞的異常增殖引起的血癌。在白血病患者的血液中，存在大量未成熟的白血細胞。與白血細胞的異常增殖相比，正常血細胞的數量嚴重下降，血液的基本功能(例如氧氣攜帶和供給)和免疫功能無法實現。此外，白血細胞的異常增殖可能導致正常組織的破壞，如同自身免疫疾病的類似癥狀。
[0006]慢性髓系白血病的形式的特征在于:骨髓中主要的髓系細胞增高的、不受調控的生長，以及血液中這些細胞的累積。此外，白血病的種類可分為:急性髓系白血病、慢性髓系白血病、急性淋巴細胞性白血病(ALL)和慢性淋巴細胞性白血病(CLL)。
[0007]此外，在慢性髓系白血病的情況下，看似成熟的異常髓系細胞無法發揮它們的作用。此類慢性髓系白血病與被稱為費城染色體(Philadelphia chromosome)的特征性染色體易位有關。
[0008]相比其它類型的白血病，慢性髓系白血病顯示出一些癥狀差別。特別是，從慢性增殖期(顯示出異常髓系細胞的緩慢增殖進展)向加速期(顯示出嚴重的癥狀進展)的癥狀轉變可突然發生。另一方面，慢性增殖期可能持續3-4年。因此，對處于慢性增殖期的慢性髓系白血病進行的治療勢必集中在防止從慢性期向加速期的癥狀轉變的發生，而并非完全康復。當然，遭受快速轉變的大多數患者不可能容易治愈。
[0009]慢性髓系白血病由具有BCR-ABL融合基因的費城染色體引起，其中，9號染色體上的ABL基因與22號染色體上的BCR基因易位。此類BCR-ABL融合基因可誘發顯示出酪氨酸激酶活性的融合蛋白的表達，已知該融合蛋白涉及P210蛋白的生物合成。由于生物合成的p210蛋白能夠抑制髓系祖細胞的細胞調亡，髓系祖細胞可能異常增殖，從而引起髓系白血病。
[0010]伊馬替尼(作為格列衛(Gleevec)進行市售)被用作治療髓系白血病的第一代治療劑，抑制了 BCR-ABL蛋白的酪氨酸激酶。然而，伊馬替尼存在以下問題:出現了具有伊馬替尼耐藥性的患者。幸運的是，已開發出了第二代治療劑(例如達沙替尼、尼羅替尼和博舒替尼)，該第二代治療劑能夠克服對伊馬替尼的耐藥性。然而，由于通過BCR-ABL的突變基因表達的T315I酶變體的出現，此類第二代治療劑不再能夠顯示出足夠的功效。因此，需要克服第一代治療劑以及第二代治療劑的不足的第三代治療劑，以有效治療由T315I酶變體弓丨起的慢性髓系白血病。
[0011]為了這一目的，本申請的發明人從北美鵝掌楸的樹皮中分離出了具有藥理學活性的組分，該組分包括表美鵝掌楸內酯和木香烯內酯。此外，對于來自北美鵝掌楸樹皮的各組分進行實驗，以查明所述組分針對慢性髓系白血病的藥效。
[0012]因此，本申請的發明人測量并確認了，對于顯示出對第一代治療劑(伊馬替尼)和第二代治療劑二者的耐藥性的慢性髓系白血病(CML)的治療而言，來自北美鵝掌楸樹皮提取物的表美鵝掌楸內酯是有效的。最后，通過開發出含有來自北美鵝掌楸樹皮提取物的表美鵝掌楸內酯作為活性成分的藥物組合物以用于治療通過T315I酶變體引起的慢性髓系白血病，完成了本發明。

【發明內容】

[0013]技術問題
[0014]待解決的問題是開發用于治療對第一代治療劑(伊馬替尼)和第二代治療劑二者顯示出耐藥性的慢性髓系白血病(CML)的藥物組合物，該藥物組合物含有來自北美鵝掌楸樹皮提取物的表美鵝掌楸內酯作為活性成分。因此，實施了用于治療由T315I酶變體引起的慢性髓系白血病的藥物組合物的開發，該藥物組合物含有來自北美鵝掌楸樹皮提取物的表美鵝掌楸內酯作為活性成分。
[0015]技術方案
[0016]本申請的目的是提供用于通過選擇性地抑制由BCR-ABL融合基因表達的T315I酶變體來治療慢性髓系白血病的藥物組合物，該藥物組合物含有來自北美鵝掌楸樹皮提取物的表美鵝掌楸內酯作為活性成分。
[0017]此外，所述藥物組合物選擇性地抑制由T315I酶變體引起的伊馬替尼耐藥性慢性髓系白血病細胞的生長，并通過DNA斷裂(fragmentat1n)誘導伊馬替尼耐藥性慢性髓系白血病細胞的細胞凋亡。
[0018]此外，所述藥物組合物進一步包含藥學上可接受的載體。
[0019]本申請的另一目的是提供含有所述藥物組合物的口服制劑，其中，所述制劑為選自如下中的至少一種:片劑、丸劑、散劑、硬膠囊劑、明膠帶束硬膠囊劑(gelatin bandinghard capsule)、軟膠囊劑、處于焦糖或膠狀物形式的咀嚼片劑和/或口服液。
[0020]此外，所述口服制劑選自軟膠囊劑或含有水性溶液的口服液。
[0021]有益效果
[0022]本申請顯著有益的效果是提供能夠阻抑T315I酶變體表達、用于有效治療對第一代治療劑(伊馬替尼)和第二代治療劑二者顯示出耐藥性的慢性髓系白血病(CML)的藥物組合物，該藥物組合物含有來自北美鵝掌楸樹皮提取物的表美鵝掌楸內酯。因此，開發了可用于治療由T315I酶變體引起的慢性髓系白血病的藥物組合物，該藥物組合物含有來自北美鵝掌楸樹皮提取物的表美鵝掌楸內酯作為活性成分。此外，包含本發明所述的北美鵝掌楸樹皮提取物作為活性成分的藥物組合物選擇性地抑制了包含T315I的慢性髓系白血病細胞，并具有通過DNA斷裂引起細胞凋亡的作用。
【附圖說明】
[0023]圖1示出了相對于以下3種組分的處理而言的慢性髓系白血病細胞系的細胞存活率:作為第一代治療劑的伊馬替尼；北美鵝掌楸樹皮提取物CD-200，該提取物用于選擇性抑制來自BCR-ABL融合基因的T315I酶變體；以及主要成分為表美鵝掌楸內酯的⑶-200 (下稱⑶-EPT)。用上述3種組分處理慢性髓系白血病細胞系后，采用XTT分析來測量細胞存活率。
[0024]圖la為示出了根據伊馬替尼的濃度，相對于伊馬替尼處理的Ba/F3母細胞系、Ba/F3 (BCR/ABL)細胞系和Ba/F3 (BCR/ABL-T315I)細胞系的細胞存活率的圖表。
[0025]圖lb為示出了根據⑶-200的濃度，相對于⑶-200處理的Ba/F3母細胞系、Ba/F3 (BCR/ABL)細胞系和Ba/F3 (BCR/ABL-T315I)細胞系的細胞存活率的圖表。
[0026]圖lc為示出了根據⑶-EPT的濃度，相對于⑶-EPT處理的Ba/F3母細胞系、Ba/F3 (BCR/ABL)細胞系和Ba/F3 (BCR/ABL-T315I)細胞系的細胞存活率的圖表。
[0027]圖2示出了相對于以下3種組分的處理而言的慢性髓系白血病細胞系的細胞存活率:伊馬替尼、⑶-200和⑶-EPT。用上述3種組分處理慢性髓系白血病細胞系后，采用XTT分析來測量IC5。(抑制濃度50)。
[0028]圖2a為示出了相對于伊馬替尼濃度而言的Ba/F3母細胞系、Ba/F3 (BCR/ABL)細胞系和Ba/F3(BCR/ABL-T315I)細胞系的細胞存活率的圖表。
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