秦皮甲素在制備防治骨質疏松藥物中的應用
【技術領域】
:
[0001]本發明屬于醫藥領域，具體涉及秦皮有效成分在防治骨質疏松中的應用。
【背景技術】
:
[0002]骨質疏松是一種以骨量減少，骨微結構破壞，導致骨脆性增加，容易發生骨折為特征的全身代謝性骨病。骨質疏松可發生于任何人群和任何年齡，在絕經后婦女和老年人中極為常見，是威脅老年人健康和降低生活質量的重要因素。
[0003]骨質疏松已成為當今全球僅次于心血管疾病、受害人群最多、最具危害性且尚未能治愈的慢性疾病。據世界衛生組織估計，全球患者可達到2億例，其發病率已經躍居世界各種常見病的第7位，嚴重威脅著人類的身心健康，帶來了沉重的家庭、社會與經濟負擔。
[0004]骨代謝平衡是由成骨細胞介導的骨形成和破骨細胞介導的骨吸收兩個動態過程精妙地調控的。當骨吸收超過骨形成時，會出現骨量減少，可發生骨丟失，和骨質疏松。因此，任何能夠直接或間接作用于成骨細胞和/或破骨細胞，有助于保持其代謝動態平衡的物質，均有可能具有防治骨質疏松的作用。
[0005]破骨細胞是來源于單核-巨噬細胞系具有吸收能力的多核細胞[TeitelbaumSL.Science, 2000, 289:1504 - 8.]。成熟的破骨細胞有多種分子標記物，包括抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、組織蛋白酶K (Cath印sin K)、空破質子v-ATP (v_ATPased2)等。由于破骨細胞能分泌抗酒石酸酸性磷酸酶，TRAP染色呈陽性，所以TRAP染色陽性可作為體外培養破骨細胞最具特異性的指標。
[0006]RANKL是由成骨細胞/基質細胞合成的一種具有刺激集落刺激因子群分化成破骨細胞作用的細胞因子。RANKL與下游的TRAP集合后，可以活化NF- κ B，從而導致破骨相關基因的表達。NF-K B是參與破骨細胞分化和成熟的關鍵性轉錄因子[Chaisson ML et al.JB1l Chem, 2004，279:54841-48]。
[0007]基質金屬蛋白酶(MMP)，屬于鋅結合蛋白肽鏈內切酶家族，為包括組織在內的多種組織細胞外機制降解所必須。MMP，尤其是MMP9在破骨細胞中高表達，是降解細胞外基質，參與骨重建的重要蛋白酶，在破骨活性增加的骨吸收中起重要作用。
[0008]骨質疏松的藥物治療已經成為世界性課題。目前臨床治療骨質疏松的藥物主要分為:促進骨形成藥、抑制骨吸收藥和改善骨組織藥等3種類型。
[0009]促進骨形成藥主要有:氟化物、甲狀旁腺激素及類似化合物、維生素D及其衍生物、生長因子、他汀類藥物、前列腺素E2類藥物、鍶鹽等；
[0010]抑制骨吸收藥主要有:雌激素類、降鈣素、雙膦酸鹽類等；
[0011]改善骨組織藥藥主要有:鈣劑、蛋白質、維生素C等。
[0012]此外，由于中藥具有整體調治、療效好、毒副作用小等優點，如何利用中藥現代化技術從傳統中藥里尋找新的高效低毒的骨質疏松治療藥物，已成為目前治療骨質疏松癥藥物研發的重要方向。常用的中藥主要有淫羊藿、熟地、杜仲、黃芪、補骨脂、當歸、骨碎補、龜甲、山藥、丹參、茯苓、菟絲子、鹿角膠、山茱萸、肉蓯蓉、枸杞子等。動物實驗及臨床實驗均顯示，從傳統中藥中通過藥理實驗(包括高通量篩選)篩選治療骨質疏松的有效成分，具有巨大的開發潛力。
[0013]秦皮是木犀科植物白錯樹Fraxinus chinensis Roxb等五種植物的干燥枝皮或樹干皮，是我國一味常用中藥，始載于漢代的藥學專著《神農本草經》，歷代本草均有記載。秦皮具有清熱燥濕、收澀、明目之功效，常用于治療熱痢、泄瀉、赤白帶下、目赤腫痛、目生翳膜等癥。現代藥理研究表明，秦皮具有抗炎鎮痛、降低尿血酸、抗凝、止咳祛痰平喘以及抗腫瘤作用，主要用于治療腸炎、痢疾、白帶、慢性氣管炎、結膜炎，用于治療痛風效果甚佳。正品秦皮中主要成分為香豆素類(秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷、秦皮素、宿柱白蠟苷、6，7_ 二甲氧基香豆素等，此外還有酚類、皂苷和鞣質等，其中秦皮甲素、秦皮乙素是治療氣管炎和菌痢疾患的有效成份。然而，涉及本發明所述秦皮甲素在防治骨質疏松中應用，迄今為止，尚未見有國內外的相關報道。
[0014]本發明的目的是，提供秦皮甲素在制備防治骨質疏松藥物中的應用。

【發明內容】

:
[0015]為了提供秦皮甲素在防治骨質疏松中的應用，本發明采取以下技術方案:
[0016]采用研究破骨細胞體外生物學行為的常用細胞模型單核巨噬細胞RAW264.7細胞，該細胞在核因子受體活化因子配體(RANKL)刺激誘導下可以向破骨細胞分化。
[0017]I，檢測秦皮甲素抑制RANKL誘導NF- κ B的轉錄活化效應；
[0018]2，檢測秦皮甲素抑制多核成熟破骨細胞的形成作用；
[0019]3，檢測秦皮甲素抑制破骨細胞分化基因TRAP、ΜΜΡ9、Cath印sin K、v_ATPased2的基因表達。
[0020]發明效果:
[0021]本發明的有益效果在于，公開了秦皮甲素在制備防治骨質疏松的藥物中的應用，在有效劑量內對RAW264.7細胞沒有明顯的細胞毒作用，能夠抑制RANKL誘導的NF- κ B轉錄活化效應，抑制RANKL誘導的RAW264.7細胞向破骨細胞的形成。與此同時，可以降低TRAP、MMP9、Cathepsin K、v-ATPased2等破骨細胞分化特異基因的表達，抑制骨吸收，最終起到防治骨質疏松的作用。由于秦皮甲素為純天然物質，用藥安全，毒副作用小，可用于骨質疏松的防治。
【附圖說明】
:
[0022]圖1:秦皮甲素對RAW264.7細胞的細胞毒作用
[0023]圖2:秦皮甲素對RANKL誘導的NF- κ B轉錄活性效應的影響。
[0024]其中:橫坐標-不同濃度的秦皮甲素的給藥劑量；縱坐標-各組熒光值與空白對照組熒光值相比較百分數表述的NF- κ B轉錄活性
[0025]圖3:秦皮甲素對RANKL抑制破骨細胞形成
[0026]圖4:秦皮甲素抑制破骨細胞內分化TRAPXatkpsin K、MMP9、v_ATPased2的mRNA表達
[0027]實施方式:
[0028]以下實施例僅為幫助本領域技術人員更好地了解本發明，但不以任何方式限制本發明。實施例中未標明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件或按照制造廠商所建議的條件。
[0029]《實施例1》秦皮甲素對RAW264.7細胞的細胞毒作用
[0030]將RAW264.7細胞(購自中國醫學科學院基礎醫學研究所細胞培