一種同種骨超臨界二氧化碳脫脂處理的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于醫用材料處理技術領域，具體涉及一種同種骨超臨界二氧化碳脫脂處理的方法。
【背景技術】
[0002]在醫療用骨質材料，對骨質要求很高，需要保持骨質無污染，無異體脂肪，同種骨材料處理過程中需要去除其中的脂質以降低脂肪、脂蛋白產生的免疫原性并利于長期儲存。通常采用化學溶劑方法如乙醚、甲醇、氯仿等進行同種骨材料的脫脂。采用化學溶劑的方法處理骨質，有微量的有機溶劑殘留，影響骨質的存儲時間和使用的骨再生效果。
[0003]二氧化碳超臨界提取技術是一項成熟的提取物質的技術，根據不同物質的臨界點溫度不同，可以將目標物質高效，高產率的提取出來，醫用骨質材料需要脫脂，脂肪是要去除的物質，目前，采用超臨界二氧化碳萃取技術可以將骨質中的脂肪提取出來并收集利用，例如，專利201210557259.7公開了一種超臨界二氧化碳萃取海馬或海龍骨粉脂質的方法，可以將海馬骨粉中的脂肪萃取出來，骨質作為雜質除去，這種方法正好與發明人所要的結果相反，發明人需要將萃取的脂肪和其他雜質去除，而保留骨質。專利200610019071.1公開了一種鋳魚的軟骨處理方法，該方法也采用超臨界二氧化碳的技術，采用萃取的方法，將純凈的軟骨組織萃取出來，萃取出來的軟骨呈現液態，可以制成口服液。但是該技術是針對動物的軟骨，且萃取后軟骨組織被破壞，不成形。目前，尚未有采用超臨界二氧化碳萃取技術對醫用骨質進行脫脂處理的報道。
[0004]采用超臨界方法提取的物質比較純，進行骨脫脂也能將脂肪除盡，但是，還需要將一些相關的雜質除盡，依賴于骨的前處理和后處理的相關步驟，需要重點研宄。

【發明內容】

[0005]本發明的目的在于提供一種同種骨超臨界二氧化碳脫脂處理的方法。該方法處理的醫療用同種骨脫脂干凈，處理過程中沒有有害有機溶劑污染，脫脂徹底，儲存時間長，效果好。
[0006]一種同種骨超臨界二氧化碳脫脂處理的方法，按照如下步驟進行:
[0007](I)用人同種異體骨作為原材料，切割成骨段或骨塊，或者磨成骨粉，用去離子水去除骨段或骨塊中的骨髓，直到骨組織色澤為白色偏黃，無骨髓組織為止；
[0008](2)將骨段，骨塊或者骨粉超聲清洗1-8小時，除去浮油，自然冷卻后用質量濃度為70-80%的醫用酒精浸泡1-2小時；
[0009](3)將浸泡好的骨段，骨塊或者骨粉凍干，裝入密閉萃取釜內進行超臨界二氧化碳脫脂，脫脂溫度為40-60°C，壓強為41-50MPa ;所述骨段或骨塊采用靜態萃取脫脂，二氧化碳流量為15-30L/h，靜態萃取脫脂0.5-2小時；所述骨粉采用動態萃取脫脂，二氧化碳流量為10_20L/h，動態萃取脫脂0.5-1小時；
[0010](4)步驟(3)處理好的骨段，骨塊或者骨粉進入分離釜，調節溫度至50_70°C，在分離釜內二氧化碳由超臨界狀態轉化為氣態，將脫出的脂質帶走，留下脫脂完全的骨段，骨塊或者骨粉；
[0011](5)將步驟(4)處理好的骨段，骨塊或者骨粉進一步用去離子水清洗1-4次、-40°c條件下冷凍干燥72h處理后進行25Kgy劑量的輻照滅菌，儲存待用。
[0012]所述超臨界二氧化碳流體的純度為95-99%。
[0013]所述骨段的長度為1-lOcm，所述骨塊的體積為0.l_3cm3，所述骨粉的粒度為100 μm-lmm0
[0014]所述骨段或骨塊采用靜態萃取脫脂，二氧化碳流量為22L/h，靜態萃取脫脂I小時。
[0015]所述骨粉采用動態萃取脫脂，二氧化碳流量為15L/h，動態萃取脫脂0.8小時。
[0016]步驟(5)所述儲存條件為25 °C，儲存時間為3年以內。
[0017]步驟(5)所述儲存條件為液氮封存，儲存時間為30年以內。
[0018]本發明的有益效果:本發明的同種骨超臨界二氧化碳脫脂處理的方法，可以將醫療用骨徹底的脫脂，延長骨的儲存時間，醫療用骨在使用過程中，沒有免疫原性，可以完美的與患者原骨組織嵌合，同時，制備過程中沒有引入對人體有害的有機化學材料，安全無毒副作用。
【具體實施方式】
[0019]下面結合具體實施例對本發明做進一步說明。
[0020]實施例1
[0021]一種同種骨超臨界二氧化碳脫脂處理的方法，按照如下步驟進行:
[0022](I)用人同種異體骨作為原材料，切割成骨段或骨塊，或者磨成骨粉，用去離子水去除骨段或骨塊中的骨髓，直到骨組織色澤為白色偏黃，無骨髓組織為止；
[0023]所述骨段的長度為1cm，所述骨塊的體積為0.1cm3,所述骨粉的粒度為100 μ m ;
[0024](2)將骨段，骨塊或者骨粉超聲清洗1-8小時，除去浮油，自然冷卻后用質量濃度為70%的醫用酒精浸泡I小時；
[0025](3)將浸泡好的骨段，骨塊或者骨粉凍干，裝入密閉萃取釜內進行超臨界二氧化碳脫脂，脫脂溫度為40°C，壓強為41MPa ;所述骨段或骨塊采用靜態萃取脫脂，二氧化碳流量為15L/h，靜態萃取脫脂0.5小時；所述骨粉采用動態萃取脫脂，二氧化碳流量為10L/h，動態萃取脫脂0.5小時；
[0026](4)步驟(3)處理好的骨段，骨塊或者骨粉進入分離釜，調節溫度至50°C，在分離釜內二氧化碳由超臨界狀態轉化為氣態，將脫出的脂質帶走，留下脫脂完全的骨段，骨塊或者骨粉；
[0027](5)將步驟(4)處理好的骨段，骨塊或者骨粉進入蒸籠，采用去離子水作為蒸汽原料，蒸0.5小時，轉入70°C的烘干機內烘干，轉入消毒的醫用藥瓶封裝，在_20°C條件下儲存待用。
[0028]在_20°C條件下儲存可在5年內使用，未見明顯的免疫原性和毒副作用，若在25°C條件下儲存，可儲存2年，使用時未見明顯的免疫原性和毒副作用。
[0029]實施例2
[0030]一種同種骨超臨界二氧化碳脫脂處理的方法，按照如下步驟進行:
[0031](I)用人同種異體骨作為原材料，切割成骨段或骨塊，或者磨成骨粉，用去離子水去除骨段或骨塊中的骨髓，直到骨組織色澤為白色偏黃，無骨髓組織為止；
[0032]所述骨段的長度為10cm，所述骨塊的體積為3cm3，所述骨粉的粒度為1mm。
[0033](2)將骨段，骨塊或者骨粉超聲清洗1-8小時，除去浮油，自然冷卻后用質量濃度為80%的醫用酒精浸泡2小時；
[0034](3)將浸泡好的骨段，骨塊或者骨粉凍干，裝入密閉萃取釜內進行超臨界二氧化碳脫脂，脫脂溫度為50°C，壓強為50MPa ;所述骨段或骨塊采用靜態萃取脫脂，二氧化碳流量為30L/h，靜態萃取脫脂2小時；所述骨粉采用動態萃取脫脂，二氧化碳流量為20L/h，動態萃取脫脂I小時；
[0035](4)步驟(3)處理好的骨段，骨塊或者骨粉進入分離釜，調節溫度至60°C，在分離釜內二氧化碳由超臨界狀態轉化為氣態，將脫出的脂質帶走，留下脫脂完全的骨段，骨塊或者骨粉；
[0036](5)將步驟(4)處理好的骨段，骨塊或者骨粉進入蒸籠，采用去離子水作為蒸汽原料，蒸I小時，轉入75°C的烘干機內烘干，轉入消毒的醫用藥瓶封裝，在_20°C條件下儲存待用。
[0037]在_20°C條件下儲存可在5年內使用，未見明顯的免疫原性和毒副作用，若在25°C條件下儲存，可儲存2年，使用時未見明顯的免疫原性和毒副作用。
[0038]實施例3
[0039]一種同種骨超臨界二氧化碳脫脂處理的方法，按照如下步驟進行:
[0040](I)用人同種異體骨作為原材料，切割成骨段或骨塊，或者磨成骨粉，用去離子水去除骨段或骨塊中的骨髓，直到骨組織色澤為白色偏黃，無骨髓組織為止；
[0041]所述骨段的長度為5cm，所述骨塊的體積為1cm3，所述骨粉的粒度為500 μ m ;
[0042](2)將骨段，骨塊或者骨粉超聲清洗1-8小時，除去浮油，自然冷卻后用質量濃度為75%的醫用酒精浸泡1.5小時；
[0043](3)將浸泡好的骨段，骨塊或者骨粉凍干，裝入密閉萃取釜內進行超臨界二氧化碳脫脂，脫脂溫度為60°C，壓強為45MPa ;所述骨段或骨塊采用靜態萃取脫脂，二氧化碳流量為22L/h，靜態萃取脫脂I小時；所述骨粉采用動態萃取脫脂，二氧化碳流量為15L/h，動態萃取脫脂0.8小時；
[0044](4)步驟(3)處理好的骨段，骨塊或者骨粉進入分離釜，調節溫度至70°C，在分離釜內二氧化碳由超臨界狀態轉化為氣態，將脫出的脂質帶走，留下脫脂完全的骨段，骨塊或者骨粉；
[0045](5)將步驟(4)處理好的骨段，骨塊或者骨粉進入蒸籠，采用去離子水作為蒸汽原料，蒸0.8小時，轉入75°C的烘干機內烘干，轉入消毒的醫用藥瓶封裝，在_20°C條件下儲存待用。
[0046]在_20°C條件下儲存可在5年內使用，未見明顯的免疫原性和毒副作用，若在25°C條件下儲存，可儲存2年，使用時未見明顯的免疫原性和毒副作用。
[0047]實施例4
[0048]一種同種骨超臨界二氧化碳脫脂處理的方法，按照如下步驟進行:
[0049](I)用人同種異體骨作為原材料，切割成骨段或骨塊，或者磨成骨粉，用去離子水去除骨段或骨塊中的骨髓，直到骨組織色澤為白色偏黃，無骨髓組織為止；
[0050]所述骨段的長度為5cm，所述骨塊的體積為1cm3，所述骨粉的粒度為500 μ m ;
[0051](2)將骨段，骨塊或者骨粉超聲清洗1-8小時，超聲過程中加入小薊提取物，加入量為骨段，骨塊或者骨粉重量的萬分之一，除去浮油，自然冷卻后用質量濃度為75%的醫用酒精浸泡1.5小時；
[0052]所述小薊提取物采用如下方法提取:將小薊葉片曬干，磨成粉末，采用5-8倍重量的70%乙醇回流提取3次，合并濾液，脫色，蒸干制成；(3)將浸泡好的骨段，骨塊或者骨粉凍干，裝入密閉萃取釜內進行超臨界二氧化碳脫脂，脫脂溫度為50°C，壓強為45MPa;所述骨段或骨塊采用靜態萃取脫脂，二氧化碳流量為22L/h