專利名稱：治療再狹窄的DNAzyme和方法
技術領域：
本發明涉及采用DNAzyme抑制再狹窄的起病。所述DNAzyme通過切割編碼c-myc的mRNA達到這一目的，而在血管平滑肌細胞中c-mcy的表達是再狹窄的發生所需要的。
人們認為再狹窄是由(至少部分是由)在血管形成術過程中發生的血管損傷之后平滑肌細胞(“SMC’s”)過分增殖而引起的。認為幾種生物調節劑有助于這種SMC的增殖。這些調節劑包括血小板衍生生長因子(“PDGF”)、成纖維細胞生長因子(“FGF”)和胰島素樣生長因子(“IGF”)(Ross；Banscota；Libby；Gay)。這些調節劑對SMC增殖的誘導作用經由許多重要基因的胞內反式激活作用而發生(Kindy；Gadeau)。這些基因包括c-myc、c-myb、c-fos和PCNA(增殖細胞核抗原)，且一般是細胞周期特異性的。
具體地說，在血管損傷30分鐘至2小時內，c-myc在SMC’s中過量表達，且表達在此后12小時內降低至正常水平。也就是說，血管成形術引起血管SMC損傷，后者引起c-myc在損傷后30分鐘至2小時開始過量表達，而在損傷后12小時結束。
目前采用放射療法和藥理學療法治療再狹窄。放射療法包括放射性植入物或將放射性組合物傳遞到正在治療的位點上。盡管放射治療已經顯示出一些有希望的成果，卻產生了內冠狀放射的長期副作用。關于藥理學療法，到此為止使用的抗-thrombotin和抗增殖的方法一般都沒有效果(Bennet)。
DNAzvme在人類基因治療中，反義核酸技術已經是選擇用于使那些表達引起疾病并因此不希望有的基因失活的主要方法之一。所述反義的方法使用一種核酸分子，它互補于編碼不希望有的基因的mRNA分子，并因此與之雜交。這種雜交導致了基因表達的抑制。
反義技術有某些缺點。反義雜交的結果是DNA/目標mRNA異源雙鏈體的形成。該異源雙鏈體作為RNA酶H介導的降解目標mRNA成分的底物。在此，所述DNA反義分子以被動方式作用，因為它僅僅有助于內源RNA酶H的所需切割。這種對RNAse H的依賴在反義分子的化學性質和與其目標mRNA形成穩定異源雙鏈體的能力方面，限制了反義分子的設計。反義DNA分子也有與非特異性活性的相關問題，在較高濃度下甚至有與毒性相關問題。
作為反義分子的替代物，催化核酸分子已表明有希望作為用于抑制基因表達的治療劑，且在文獻中廣泛討論(Haseloff；Breaker(1994)；Koizumi；Otsuka；Kashani-Sabet；Raillard；和Carmi)。這樣，不同于常規的反義分子，催化核酸分子通過真正切割它的目標mRNA分子而不是僅僅與之結合而起作用。如果目標序列滿足某些最低需要，則催化核酸可以只切割目標核酸序列。所述目標序列必須互補于催化核酸的雜交區域，并且該目標必須在切割位點包含特異序列。
有許多資料記載了催化RNA分子(“核酶”)(Haseloff；Symonds；和Sun)，并且已經表明它們既能夠切割RNA分子(Haseloff)又能夠切割DNA分子(Raillard)。事實上，在體外選擇和進化技術的發展已經使采用已知核酶的隨機變體或隨機序列RNA作為起始點而獲得針對已知底物的新核酶成為可能(Pan；Tsang；和Breaker(1994))。
然而，核酶在它們進行作用的細胞中對酶水解作用是高度敏感的。這本身又限制了它們的藥學應用。
近來，創造了一類新的名為“DNAzyme”的催化分子(Breaker(1995)；Santoro)。DNAzyme是單鏈的，切割RNA(Breaker(1994)；Santoro)，也切割DNA(Carmi)。已經提出了DNAzyme的一般模型，稱為“10-23”模型。按照“10-23”模型的DNAzyme，也簡稱為“10-23DNAzyme”，它包含一個15個脫氧核糖核苷酸的催化域，側翼為兩個分別含7-9個脫氧核糖核苷酸的底物識別域。體外分析表明，這種類型的DNAzyme能在生理條件下在嘌呤嘧啶連接處有效地切割它的底物RNA(Santoro)。
DNAzyme表明有希望成為治療藥物。然而，DNAzyme成功對抗由于已知mRNA的存在而導致的疾病是不可預料的。這種不可預料性部分歸因于兩個因素。首先，某些mRNA二級結構可能阻礙DNAzyme結合并切割其目標mRNA的能力。其次，表達目標mRNA的細胞對DNAzyme的吸入可能不夠有效地提供有治療意義的結果。由于這些原因，僅僅知道疾病和它的成因目標mRNA序列不能單獨允許人們合理地預料針對目標mRNA的DNAzyme的治療成功，因為缺少一個發明性步驟。
本發明也提供了用于抑制再狹窄起病的藥用組合物，它包含所述DNAzyme和適用于局部給藥的藥用可接受的載體。
本發明還提供用于抑制再狹窄起病的血管成形術斯滕特固定模，它包括可操作地涂上預防有效劑量的所述藥用組合物的血管成形術斯滕特固定模。
本發明還提供了用于抑制經受血管成形術的受治療者中再狹窄起病的方法，它包括在血管成形術時前后一般給予所述受治療者預防有效劑量的所述藥用組合物。
最后，本發明提供用于抑制經受血管成形術的受治療者中再狹窄起病的方法，它包括在血管成形術時前后局部給予所述受治療者所述的血管成形術斯滕特固定模。
圖2顯示c-myc RNA-切割DNAzyme的設計。c-myc DNAzyme的切割位點選在人類c-myc mRNA(第二個外顯子)的AUG起始子密碼子。如圖所示，切割發生在A和U之間。
圖3顯示最佳化的DNAzyme臂長和化學修飾。基于“10-23”型設計了具有不同臂長的c-myc-切割DNAzyme。由陰影C或G(3’INV)表示在3’端的3’-3’末端堿基倒置。
圖4顯示多轉換(multiple turnover)動力學。圖A顯示16％聚丙烯酰胺凝膠的光密度測量圖象，它是采用磷光成像器(PhosphorImager)(Molecular Dynamics)而獲得的，顯示在多轉換條件下對合成的c-mycmRNA的切割。所有的反應均用200pM DNAzyme和2nM、4nM、8nM、16nM和32nM的底物mRNA(如所示)進行。每個反應的溫育時間在0-60分鐘之間，在每道的頂端注明。圖B顯示每個底物濃度的DNAzyme切割進程(nM)曲線。這些數據是從圖A所示的切割條帶的光密度測定中得到的。
圖5顯示體外c-myc mRNA的切割。在有32P-UTP的情況下從PGEM載體中轉錄1.5kb c-myc mRNA底物。切割反應于10mMMgCl2、50mM Tris.HCl pH7.5、37℃下進行60分鐘。
圖6顯示人類血清中3’-倒置DNAzyme的穩定性分析。DNAzyme與AB型人類血清(Sigma)一起溫育。在所示的不同時間點收集樣品，并用32P標記。該標記的DNAzyme在16％聚丙烯酰胺凝膠中分析。這里顯示了未修飾的DNAzyme的典型凝膠帶型(上右角)和3’-倒置的DNAzyme的典型凝膠帶型(下右角)。
圖7顯示在SV-LT-SMC’s中對c-myc mRNA切割DNAzyme的測試。生長停滯的SMC’s用10％FBS-DME(包含0.5％牛胎血清的Dulbecco改進的Eagle培養基)在有以下物質的情況下刺激10mM稱為Rs-6的抗-c-myc mRNA DNAzyme(下述)、10mM對照寡核苷酸(與Rs-6相同的臂序列，含倒置催化核心序列)或單獨的脂質體(DOTAP；即N-[1-(2,3-二油酰氧基)]-N,N,N-三甲銨-甲基硫酸鹽)。數據以均值±SD表示。
圖8顯示SMC’s中Rs-6 DNAzyme的劑量-反應實驗。該實驗詳述按照圖7。數據以對照的百分數表示。
圖9顯示在DNAzyme處理的SMC’s中c-myc的表達。如實施例7所述用35S-甲硫氨酸標記細胞，并進行免疫沉淀法以確定DNAzyme處理的SMC’s中c-myc蛋白的表達水平。


圖10顯示人類c-myc基因的基因組DNA序列(外顯子1和2)。
發明詳述本發明目的在于采用DNAzyme技術抑制再狹窄起病。所述疾病的起病，是在血管成形術過程中由動脈平滑肌的物理性損傷而觸發的，其特征是在此后不久c-myc過量表達幾個小時。這種c-myc過量表達導致SMC過度增殖，而抑制這種過量表達本身又抑制再狹窄起病。本發明通過在血管成形術時的前后應用c-myc mRNA特異性DNAmye于損傷區而利用這個c-myc過量表達的“時機窗口”，因此而切割mRNA并抑制再狹窄起病。
更具體的說，本申請提供了特異性切割c-myc mRNA的DNAzyme，其包含(a)一個催化域，它具有核苷酸序列GGCTAGCTACAACGA，并在朝著它的任何嘌呤嘧啶切割位點切割，(b)鄰接催化域5’末端的一個結合域，和(c)鄰接催化域3’末端的另一個結合域；其中所述結合域分別地互補于側翼緊接c-myc mRNA中需要DNAzyme催化切割的切割位點的嘌呤殘基的兩個區域，并因此與之雜交，且其中每個結合域長度至少為6個核苷酸，兩個結合域結合的總長至少為14個核苷酸。
這里所用的“DNAzyme”是指特異性識別并切割特殊的目標核酸序列的DNA分子，它可以是DNA或RNA。所述DNAzyme切割RNA分子，如圖1所示它是“10-23”型的，如此命名是由于歷史原因。在Santoro中描述了這種類型的DNAzyme。10-23 DNAzyme需要的RNA目標序列是由NNNNNNNR*YNNNNNN、NNNNNNNNR*YNNNNN或NNNNNNR*YNNNNNNN構成的任何RNA序列，其中R*Y是切割位點，R是A或G,Y是U或C,N是任意的G、U、C或A。
在本發明的參量中，結合域的長度(這里也稱為“臂長”)可以任意變更，可以相同或不同。預想了各種變更如7+7、8+8和9+9，且在后面的實施例中更全面地列舉。已經很好地證實了結合域的長度更長，那么它與互補的mRNA序列就結合得更緊。因此，在優選的實施方案中，每個結合域的長度為9個核苷酸。在一個實施方案中，所述DNAzyme具有TGAGGGGCAGGCTAGCTACAACGACGTCGTGAC序列(在此也稱為“Rs-6”)。
在應用基于DNAzyme的治療中，DNAzyme在胞內環境下抗降解而盡可能地穩定是重要的。達到這一目的的一個方法是通過在所示DNAzyme的一個或更多個末端加入一個3’-3’-倒置。更具體地說，3’-3’-倒置(在此也簡稱為“倒置”)是指末端核苷酸及與其相鄰的核苷酸的3’碳原子間的共價磷酸鍵合。這種類型的鍵合與相鄰核苷酸的3’和5’碳原子間的一般磷酸鍵合反向，從而有“倒置”一詞。因此，在優選的實施方案中，3’末端核苷酸殘基在鄰接催化域3’末端的結合域中倒置。除倒置外，所述DNAzyme還可以包含修飾的核苷酸。修飾的核苷酸包括如N3’-P5’磷酰胺(phosphoramidate)鍵和肽-核酸鍵。這些在本領域是眾所周知的(Wagner)。
在本發明中，在c-myc mRNA中的任何鄰接的嘌呤嘧啶核苷酸對都可以作為切割位點。在優選的實施方案中，嘌呤尿嘧啶是希望的嘌呤嘧啶切割位點。
包含所述切割位點的c-myc mRNA區域可以是任何區域。例如，c-myc mRNA中需要DNAzyme-催化切割的位置可以是翻譯起始位點、剪接識別位點、5’非翻譯區和3’非翻譯區。在一個實施方案中，切割位點位于翻譯起始位點。
人類c-myc mRNA序列和/或編碼所述序列的DNA是眾所周知的(Bernard)。如這里所用的“c-myc mRNA”是指由圖10所示的人類c-myc DNA序列或由其任何自然存在的多態形式編碼的任何mRNA序列。c-myc mRNA包括成熟mRNA和不成熟mRNA。在本發明的參量中，確定c-myc mRNA切割位點、每個結合域的所需序列和因此確定完整DNAzyme序列可以按照眾所周知的方法進行。
本發明也提供了用于抑制再狹窄起病的藥用組合物，它包含所述DNAzyme和適用于局部給藥的藥用可接受載體。
在本發明中，局部給予所述藥用組合物可以采用本領域技術人員已知的任何不同方法和傳遞系統實現或完成。例如，局部給予可以經由導管和局部注射和經由如下討論的涂層斯滕特固定模完成。
用于局部給予的藥用載體在本領域中廣為人知，將所述載體與待傳遞的活性劑混合的方法也是廣為人知。以下使用許多常規使用的載體的傳遞系統，只是許多預想用于給予所述組合物的實施方案的代表。
局部傳遞系統包括如凝膠和溶液，并可以包含賦形劑如增溶劑、滲透增強劑(如脂肪酸、脂肪酸酯、脂肪族醇和氨基酸)，和親水聚合物(如polycarbophil和聚乙烯吡咯烷酮)。在優選實施方案中，所述藥學上可接受的載體是脂質體或生物可降解的聚合物。可以用于本發明的脂質體的例子包括如下(1)CellFectm，陽離子類脂N,NⅠ,NⅡ,NⅢ-四甲基-N,NⅠ,NⅡ,NⅢ-四棕櫚基(palmityl)精胺和二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)(GIBCO BRL)的1∶1.5(M/M)脂質體制劑；(2)CytofectinGSV，一種陽離子類脂和DOPE的2∶1(M/M)脂質體制劑(GlenResearch)；(3)DOTAP(N-[1-(2,3-二油酰氧基)-N,N,N-三甲基銨-甲基硫酸鹽](Boehringer Manheim)；(4)Lipofectamine，聚陽離子類脂DOSPA和中性類脂DOPE的3∶1(M/M)脂質體制劑(GIBCO BRL)。
本發明還提供用于抑制再狹窄起病的血管成形術斯滕特固定模，它包括可操作涂上預防有效劑量的所述藥用組合物的血管成形術斯滕特固定模。
血管成形術斯滕特固定模，也叫其它名稱如“血管內斯滕特固定模”或簡單的“斯滕特固定模”，它們是本領域中眾所周知的。它們經常用于阻止由物理性異常引起的血管閉合，如外科損傷引起的不希望有的血管組織向內生長的。它們經常含有一個與它們的功能相稱的管狀的、膨脹的格柵型結構，并且可選擇地可被生物降解。
在本發明中，所述斯滕特固定模可以采用任何適合的本領域所知的方法可操作地涂上所述藥用組合物。在此，“可操作地涂上”斯滕特固定模是指以這樣的方式涂布一旦給予所述涂布的斯滕特固定模，則允許適時釋放所述藥用組合物于待治療的周圍組織。這種涂布方法，例如，可以采用聚合物聚吡咯(polypyrrole)。斯滕特固定模、用于涂上上述物質的方法和組合物在美國序列號60/091,217中詳細討論。
確定所述藥用組合物的預防有效劑量可以采用常規計算方法基于動物數據完成。在一個實施方案中，所述預防有效劑量包含在約0.1mg和約1g之間的所述DNAzyme。在另一個實施方案中，預防有效劑量包含在約1mg和100mg之間的所述DNAzyme。在再一實施方案中，所述預防有效劑量包含在約10mg和50mg之間的所述DNAzyme。在又一實施方案中，所述預防有效劑量包含約25mg的所述DNAzyme。
本發明還提供了抑制經受血管成形術的受治療者中再狹窄起病的方法，所述方法包括在血管成形術時的前后局部給予受治療者有效劑量的所述藥用組合物。如這里所用的，在血管成形術時的“前后”給予所述藥用組合物，可以在該手術期間或緊隨之前或之后進行。給予可以按照已知的方法進行，如導管傳遞。“抑制”再狹窄起病是指減弱發生于血管成形術之后的再狹窄的嚴重性，或完全阻止再狹窄起病。在優選的實施方案中，抑制再狹窄起病是指完全阻止再狹窄起病。
最后，本發明提供了抑制經受血管成形術的受治療者中再狹窄起病的方法，所述方法包括在血管成形術時局部給予受治療者所述血管成形術斯滕特固定模。
通過參考以下的實施例將更好地理解本發明，但是本領域技術人員將易于理解，它們只是說明如后面的權利要求書中更全面描述的本發明。另外，本申請中列舉了不同的文獻。這些文獻的內容通過引用結合到本申請中，以更全面地描述本發明所屬領域的技術狀況。實施例采用多轉換動力學檢測合成的短c-myc RNA序列的體外DNAzyme催化切割的效力(圖4)。含對稱的7、8和9個堿基對底物結合臂的三種修飾的DNAzyme和它們未修飾對照與過量的32P-標記的合成c-myc RNA一起溫育。根據kobs值確定動力學參量Km和kcat(表1)。
通過kat/Km的比率測定的每個DNAzyme的總催化效率在修飾的種類和未修飾的種類之間明顯不同。在短臂DNAzyme(7+7bp)中，包含一個倒置堿基的修飾產生kcat/Km的3倍減小。與這種切割活性的負相應相反，長臂種類(9+9bp)由于有倒置堿基修飾，相對效率增強了10倍。中間長度(8+8bp)的結合臂DNAzyme受修飾作用的影響最小，顯示kcat/Km值增加2倍。因此，3’-倒置末端堿基的影響根據底物結合臂的長度而不同。在短臂(7+7bp)DNAzyme中，發現修飾作用對催化效率有害。然而，在長臂(9+9bp)分子中，它的確改善催化活性。未修飾的DNAzyme的活性以8bp底物結合臂最佳。在短臂(7bp)DNAzyme中，其總效率主要由于較高的Km(3.4-23nM)而較低。在臂長超過8bp(如9bp)的DNAzyme中，由于Km的相對升高(3.4-7nM)和kcat的減小(0.11-0.06min-1)，總活性減小。
這樣，對于c-myc mRNA切割DNAzyme而言，發現未修飾型式的最佳切割效率是含8bp臂的型式。根據各自的kcat/Km值，未修飾的c-myc DNAzyme的7bp和9bp的型式總效率較低。
這三種不同大小的c-myc切割分子的動力學型式由于包含3’-末端核苷酸倒置而明顯地改變。這種DNA修飾作用對c-myc RNA切割動力學的影響在短的7bp臂DNAzyme中特別明顯。與未修飾型對比，這種分子按照它的kcat/Km值基本上沒有效率。然而這種催化效率的減弱通過在8bp修飾型中添加另外兩個核苷酸而恢復甚至增強。這表明短DNAzyme活性的減弱是由于DNA/RNA相互作用的一些干擾(由核苷酸倒置而引起的)引起的，它可以通過增加臂長度至8bp而得到恢復。通過進一步增加修飾型DNAzyme的長度至9bp，發現催化效率的另一個輕微改進。這與未修飾型DNAzyme的情況形成對照，未修飾型DNAzyme的情況證明當從8bp增加臂的長度至9bp時發現活性急劇下降。
這些結果證明8bp是未修飾型DNAzyme對c-myc RNA切割的最佳長度。在3’-倒置型DNAzyme中9bp的臂長度好象提供了最佳催化切割活性。含9bp臂的未修飾型DNAzyme中所見的催化效率的下降部分反映酶轉換率的減弱，表現為較低的kcat值。這種較低的轉換率可能是由于所述DNAzyme對反應物親和力增強的結果，親和力本身又減慢產物的解離。在通過末端堿基倒置修飾的DNA中避免了這種活性的減弱，這可能是對酶-產物相互作用的去穩定作用的結果。
表1c-myc-切割DNAzyme的動力學
分析三種不同長度、都針對起始子的DNAzyme(修飾的和未修飾的)的c-myc RNA切割的動力學。反應在有10mM MgCl2和50mMTris·HCl pH7.5的情況下，在含至少10倍過量的底物的多轉換條件下進行。
圖5顯示了所有的DNAzyme以20-50％的切割速率有效地切割c-myc mRNA。如所預料的，較長臂的DNAzyme更有效地切割底物。3’-倒置堿基的修飾作用減小了7+7臂DNAzyme的切割效率，但增強了9+9臂DNAzyme的切割效率。有趣的是，預熱和不預熱的DNAzyme之間的DNAzyme切割效率沒有不同。這種結果表明c-mycmRNA中的切割位點的可及性不受mRNA二級結構的影響。實施例3DNAzyme的化學修飾和穩定性以下方法分析在100％人類AB血清中DNAzyme的穩定性。簡要的說，將150μM未標記的DNAzyme在37℃培養于100μl 100％的人類血清中溫育，在時間點0、2、4、8、24、48和72小時取出重復樣品5μl。取樣時，立即將295μl TE(10mM Tris·HCl,pH7.5,1mlEDTA)加入到5μl的等分樣品中，且進行酚/氯仿提取。每個時間點的所有樣品用γ-32P-ATP末端標記，并且沒有進一步純化或沉淀就直接在16％PAGE凝膠中跑電泳，這樣顯示了所有完整的DNAzyme和降解產物。結果表明在3’-末端的3’-3’倒置大大地改善了DNAzyme在人類血清中的穩定性(t1/2=20小時)，而未修飾的DNAzyme顯示半衰期＜2小時(圖6)。
表2抗-c-myc DNAzyme對血清-刺激的平滑肌細胞增殖的影響
實施例6DNAzyme轉染的SMC’s中c-myc蛋白的表達為了在分子水平上說明抗-c-myc DNAzyme的效力，采用免疫沉淀法分析DNAzyme處理的SMC’s中c-myc蛋白的表達。簡單地說，SMC’s在沒有血清的培養基中停滯72小時，然后在無met-free培養基(包含5％的透析胎牛血清)中于37℃培養1小時。除去培養基后，為細胞更換含5％的透析胎牛血清、100mCi/ml35S-Met和5mMDNAzyme的met-free培養基，并另外培養2小時。采用如所描述的方法制備細胞溶胞產物，并采用瓊脂糖結合的抗-c-myc抗體檢測c-myc蛋白。如圖9所示，如通過代謝標記材料的免疫沉淀法確定，用抗-c-myc DNAzyme處理SMC’s明顯地抑制c-myc蛋白的合成。SMC與對照寡核苷酸(Rs-8)一起溫育對c-myc的表達沒有影響。
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權利要求
1．特異性切割c-myc mRNA的DNAzyme，其包含(a)一個催化域，它具有核苷酸序列GGCTAGCTACAACGA，并在朝著它的任何嘌呤嘧啶切割位點切割，(b)鄰接所述催化域5’末端的一個結合域，和(c)鄰接所述催化域3’末端的另一個結合域；其中所述結合域分別地互補于側翼緊接c-myc mRNA中需要DNAzyme催化切割的切割位點的嘌呤殘基的兩個區域，并因此與之雜交，且其中每個結合域長度至少為6個核苷酸，兩個結合域結合的總長至少為14個核苷酸。
2．權利要求1的所述DNAzyme，其中每個結合域的長度為9個核苷酸。
3．權利要求1的所述DNAzyme，其中鄰接所述催化域3’末端的所述結合域中的3’-末端核苷酸殘基是倒置的。
4．權利要求1的所述DNAzyme，其具有TGAGGGGCAGGCTAGCTACAACGACGTCGTGAC序列。
5．權利要求1的所述DNAzyme，其中在c-myc mRNA中的切割位點是嘌呤尿嘧啶。
6．權利要求1的所述DNAzyme，其中c-myc mRNA中的切割位點位于選擇以下的區域翻譯起始位點、剪接識別位點、5’非翻譯區和3’非翻譯區。
7．用于抑制再狹窄起病的藥用組合物，它包含權利要求1的所述DNAzyme和適用于局部給藥的藥學上可接受的載體。
8．權利要求7的所述的藥用組合物，其中所述藥學上可接受的載體選自脂質體和生物可降解的聚合物。
9．用于抑制再狹窄起病的血管成形術斯滕特固定模，它包括可操作地涂上有效預防量的權利要求7的藥用組合物的血管成形術斯滕特固定模。
10．用于抑制經受血管成形術的受治療者中再狹窄起病的方法，所述方法包括在所述血管成形術的前后局部給予所述受治療者有效預防量的權利要求7的藥用組合物。
11．用于抑制經受血管成形術的受治療者中再狹窄起病的方法，所述方法包括在所述血管成形術的前后局部給予所述受治療者權利要求9的血管成形術斯滕特固定模。
全文摘要
本申請提供了特異性切割c－mycmRNA的DNAzyme,它包含一個15個核苷酸的催化域和兩個結合域,其中一個結合域鄰接催化域的5’末端,另一個結合域鄰接催化域的3’末端。本發明也提供用于抑制再狹窄起病的藥用組合物,它包含所述的DNAzyme和適用于局部給藥的藥用可接受載體。本發明還提供了用于抑制再狹窄起病的血管成形術斯滕特固定模,它包括可操作涂上有效預防量的所述藥用組合物的血管成形術斯滕特固定模。最后。本發明提供了用于抑制經受血管成形術的受治療者再狹窄起病的方法,它包括局部給予受治療者所述的藥用組合物或血管成形術斯滕特固定模。
文檔編號A61P9/00GK1323344SQ99811966
公開日2001年11月21日 申請日期1999年8月12日 優先權日1998年8月13日
發明者L·-Q·孫, M·J·凱恩斯 申請人:莊臣及莊臣研究股份有限公司