專利名稱：肝病治療藥的制作方法
技術領域：
本發明涉及用于治療肝病或用于改善肝功能的組合物，其特征在于含有纈氨酸作為有效成分，而且實質上不含有纈氨酸以外的氨基酸作為有效成分。詳細的說，涉及含有對急性肝炎、肝衰竭、慢性肝炎、肝硬化等肝病具有治療或改善效果的纈氨酸作為有效成分，而且實質上不含有纈氨酸以外的氨基酸作為有效成分的藥物或食品組合物。
背景技術：
以前，對肝衰竭、肝硬化等肝病，使用了各種氨基酸制劑。例如，Aminoleban(注冊商標)、Morihepamin(注冊商標)、Aminoleban(注冊商標)EN、Hepan(注冊商標)ED和Livact(注冊商標)顆粒等氨基酸制劑可以用于改善伴隨肝硬化、肝衰竭等肝病的肝性腦病及血白蛋白減少癥。但是，這些氨基酸制劑不是直接治療、改善這些肝病，而是用于改善肝病引起的營養不良，即希望通過校正血漿氨基酸的不平衡改善氨代謝或降低血中氨值。另外，這些制劑是氨基酸的混合物，幾乎沒有發現單一的氨基酸能夠改善這些肝病。另一方面，在特公昭57-29446號公報中主要記載了L-纈氨酸注射液單獨使用時對治療肝性腦病有效，但是，肝性腦病是伴隨肝病惡化引起的一種并發癥，是血液中增多的氨等有毒物質引起中樞神經系統障礙，導致的各種神經癥狀，與本發明中所說的肝病是不同的。另外，該公報并未提示可以直接治療或改善肝病本身。事實上，目前是使用乳果糖等降低血液中氨的制劑治療肝性腦病，而且尚無使用肝病治療藥治療肝性腦病的病例，這一點也說明本發明并不能輕易從該公報推出。
另一方面，本發明者首先發現纈氨酸具有在肝病、肝硬化等的肝臟切除后使肝細胞再生的作用，并申請了專利(參照特開平8-67628號公報)。該公報中記載了纈氨酸對肝細胞再生的效果，但沒有公開纈氨酸對肝炎、肝硬化等肝病自身的效果，也沒有提示。
另外，已知的一些慢性肝炎、肝硬化等治療藥在有效性和安全性方面并不令人滿意。例如，對于這些肝病可以使用Minophagen C等甘草酸制劑，但由于在腸內失活，主要作為注射劑使用，口服給藥不能得到期望的效果。另外，關于其副作用，有報告指出基于其醛固酮樣作用，有血壓上升、低血鉀癥、由于鈉潴留造成水分潴留的傾向，特別是在有腹水的重度肝病時或長期給藥時會出現問題。
另外，特公昭57-29446號公報中，指出L-纈氨酸作為單獨的氨基酸對肝性腦病的治療有效，但這是通過將纈氨酸分解成檸檬酸循環中的琥珀酰輔酶A降低氨濃度，只適用于組織中氨濃度非常高的肝性腦病。如上所述，肝性腦病不是肝臟本身的疾病，是伴隨肝病惡化而引起的并發癥，因此，該公報中并未提示能夠直接治療或改善肝病本身。
發明描述本發明人鑒于這種狀況，對有效性高、在安全性方面沒有問題、不僅注射有效口服給藥也有效的肝病治療藥進行了悉心研究，這次發現氨基酸之一的纈氨酸，以完全不含有纈氨酸以外的氨基酸或實質上不含有纈氨酸以外的氨基酸作為有效成分的形式，經口服或非口服給藥，對肝衰竭、急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化等肝病具有優良的改善作用，而且在安全性方面沒有問題，從而完成了本發明。
纈氨酸對肝病的效果，可以如后述實施例所示的那樣從肝病動物模型及肝病患者中得到確認。關于急性肝炎與肝衰竭，可以使用半乳糖胺或四氯化碳等藥物性急性肝病模型與90％肝切除的肝衰竭模型評價；關于慢性肝炎·肝硬化，可以使用四氯化碳等藥物誘發性慢性肝病模型評價，對于這些模型，纈氨酸均有效。另外，對慢性肝炎患者采用口服給藥時，纈氨酸能夠改善肝功能(GOT、GPT、血小板等)。由此說明纈氨酸作為肝病用藥對于包括人在內的動物是有效的。發明的最佳實施方式本發明中使用的纈氨酸可以使用市售品、合成品，與其制備方法無關。另外，可以使用D型、L型、DL型中的任何一種，特別優選使用L型。
本發明中的纈氨酸具有治療或改善急性肝炎、慢性肝炎、肝衰竭、肝硬化等各種肝病的效果，特別是對急性肝炎、肝衰竭具有優良的治療效果。作為可望有治療效果的肝炎，例如有由A型、B型、C型、D型、E型等肝炎病毒引起的急性和慢性肝炎。另外，肝衰竭例如急性肝衰竭和慢性肝衰竭。而且，本發明的纈氨酸對這些肝炎及肝衰竭等疾病表現出的各種癥狀、異常或不受氨濃度影響的并發癥，例如發熱、倦怠、食欲不振、嘔吐、腹痛、腹水及胸水等，具有改善、緩和、恢復的效果。這里所舉的并發癥不包括受氨濃度影響的肝性腦病。
將本發明用于治療或改善肝臟疾病的組合物投給生物體時，可以口服給藥或通過直腸、皮下、髓腔、肌肉、靜脈、動脈、透皮等非口服形式給藥，優選口服或靜脈給藥。
將本發明的纈氨酸投給生物體時，纈氨酸優選制成適當的劑型后使用，例如片劑、散劑、顆粒劑、細粒劑、丸劑、膠囊、糖錠劑、咀嚼劑、液體制劑、乳劑、懸濁劑、栓劑、糖漿劑、洗劑、軟膏劑、巴布劑等制劑。在制備這些劑型時，可以使用可藥用的適當載體、賦形劑、添加劑等。
本發明用于治療或改善肝臟疾病的組合物在靜脈給藥時，優選的劑型是液體制劑，配制液體制劑時，可以使用精制水、生理鹽水、乙醇·丙二醇·甘油·聚乙二醇等醇類、甘油三乙酸酯等溶劑。在這些制劑中也可以進一步加入防腐劑、潤濕劑、乳化劑、分散劑、穩定劑等輔劑。另外，也可以作為懸濁劑給藥。
另外，在制備片劑、丸劑、散劑、顆粒劑、細粒劑、糖錠劑、咀嚼劑等固體制劑時，可以加入碳酸氫鈉、碳酸鈣、淀粉、蔗糖、甘露醇、羧甲基纖維素等載體，硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、甘油等添加劑，按照常規方法進行。另外，也可以噴上鄰苯二甲酸乙酸纖維素、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、鄰苯二甲酸聚乙烯醇、苯乙烯-馬來酸酐共聚物、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物等腸溶性物質在有機溶劑或水中的溶液，包腸溶性衣，制成腸溶性制劑。可藥用載體中包括必要時使用的其它常規輔助劑、芳香劑、穩定劑或防腐劑。而且，本發明用于治療或改善肝臟疾病的組合物也可以與高營養(熱量)輸液劑等輸液制劑并用，或將纈氨酸添加到其它輸液制劑中使用。
本發明用于治療或改善肝臟疾病的組合物也適于用作肝功能改善用食品。這時，可以將纈氨酸直接添加到現有的食品或飲料等中，或將纈氨酸直接添加到口膠、糖果、果凍、樹膠、家常小甜餅、餅干、巧克力等甜點，果汁等清涼飲料，干酪、黃油、酸乳酪等乳制品，冰淇淋、火腿等農產加工品，筒狀魚卷(竹輪)、魚肉山芋方形蒸餅(半平)等水產加工品，蕎麥面條、面條等面類，面包、蛋糕等小麥粉加工品，罐頭或鹽、醬油、糖、人工甜味劑等調味食品中，或在這些食品的加工階段混合纈氨酸，進行加工后使用。也可以作為用于改善肝功能的特定保健用藥品使用。將纈氨酸添加或混合到食品中時，可以使用粉末、細粒、顆粒等固體形狀的纈氨酸，也可以使用液態的物質。另外，加工含有纈氨酸的食品時，可以按照常規的食品加工方法進行。
本發明用于治療或改善肝臟疾病的組合物含有纈氨酸作為有效成分，而且與以前已知的其它氨基酸混合制劑不同，完全不含有纈氨酸以外的氨基酸，或不含有纈氨酸以外的氨基酸作為肝病治療藥的有效成分，即實質上不含有纈氨酸以外的氨基酸作為有效成分，是消除了以前所擔心的有效性和安全性方面的問題的優良組合物。
本發明用于治療或改善肝病的組合物作為藥物使用時，可以用于急性肝炎、肝衰竭、慢性肝炎、肝硬化等肝病患者，其給藥量根據患者的性別、體型、體質、年齡、癥狀或給藥劑型等有所不同，一般以纈氨酸作為有效成分可以在每日0.1～300g(優選1～100g)的范圍內適當選擇。給藥次數根據患者的癥狀或給藥劑型等有所不同，1日給藥1次乃至數次比較合適。
實施例以下結合實施例更詳細的說明本發明，但是本發明并不受其任何限定。實施例1對急性肝損傷的作用1)試驗方法使用8～9周齡250g左右的CrjDonryu雄性大鼠。在試驗過程中，讓其自由攝取大鼠用飼料MF(Oriental酵母公司生產)和水。將D-Galactosamine·HCl(D-半乳糖胺鹽酸鹽，Sigma公司生產)用生理鹽水溶解，用1N NaOH調節為pH7.0之后，制成D～Galactosamine(以下稱為“半乳糖胺”)100mg/ml溶液后使用。將四氯化碳(和光純藥工業公司生產)用橄欖油(和光純藥工業公司生產)配制成50％(v/v)溶液后使用。禁食12小時后，以10ml/kg的體積通過腹腔給藥將半乳糖胺投給大鼠，或以4ml/kg的容量通過皮下給藥將四氯化碳溶液投給大鼠，引起肝病。之后立即在乙醚麻醉下將導管插入到右頸靜脈中，留于中心靜脈中。中心靜脈導管通過皮下由肩胛骨之間抽出，安裝Harness后，通過protective coil，連接在Swivel(Bio-Cannula，Biomedica公司生產)上。將大鼠移至代謝籠中，在無麻醉·無拘束的條件下進行試驗。將給藥速度設定為100ml/kg/日，通過泵持續投給試驗液。試驗液的給藥時間為1～4天，試驗液組分為乳酸林格氏液(Lactec(注冊商標)，大冢制藥公司生產)組(對照組)以及纈氨酸組(在乳酸林格氏液中加入L-纈氨酸，將L-纈氨酸的濃度調節為16.88g/l。 L-Val組)。另外，也設定了未處理組(Non-treat，NT組)。試驗液給藥結束后，在乙醚麻醉下由腹主動脈取血后進行尸體解剖，取出肝臟。2)結果a)半乳糖胺誘發急性肝病大鼠模型結果如表1所示。
通過投給半乳糖胺，使大鼠產生肝病，通過投給L-纈氨酸可以使之得到改善。另外，Fischer比(BCAA(Val、Leu、Ile)/AAA(Phe、Tyr、Trp))也得到了改善。
表1對半乳糖胺誘發急性肝病大鼠模型的效果(試驗液給藥1日)<

>mean±SD ，*、**分別表示相對于NT組有p＜0.05、p＜0.01的顯著差異。#、##分別表示相對于對照組有p＜0.05、p＜0.01的顯著差異(Student t-檢驗)。
b)四氯化碳誘發急性肝病大鼠模型結果如表2所示。
通過投給四氯化碳，使大鼠產生肝病，通過投給L-纈氨酸可以使之得到改善。另外，Fischer比(BCAA(Val、Leu、Ile)/AAA(Phe、Tyr、Trp))也得到了改善。
表2對四氯化碳誘發急性肝病大鼠模型的效果(試驗液給藥2日)

mean±SD，*、**分別表示相對于NT組有p＜0.05、p＜0.01的顯著差異。#、##分別表示相對于對照組有p＜0.05、p＜0.01的顯著差異(Student t-檢驗)。實施例2對肝衰竭的作用1)試驗方法使用8～9周齡250g左右的CrjDonryu雄性大鼠。在試驗過程中，讓其自由攝取大鼠用飼料MF(Oriental酵母公司生產)和水。斷食12小時后，在乙醚麻醉下將導管插入到右頸靜脈中，留于中心靜脈中。然后，按照Gaub等的方法(J.Gaub等，《肝病學》Hepatology，4，902-904，1984年)，切除肝的90％。中心靜脈導管通過皮下由肩胛骨之間抽出，安裝Harness后，通過protective coil，連接在Swivel(Bio-Cannula，Biomedica公司生產)上。將大鼠移至代謝籠中，在無麻醉·無拘束的條件下進行試驗。將給藥速度設定為100ml/kg/日，通過泵持續投給試驗液。另外，肝切除之后立即通過皮下給藥投給20％葡萄糖溶液3ml，肝切除后讓其飲用10％葡萄糖溶液3天，之后讓其飲用自來水。試驗液的給藥時間為4天或6天。試驗液組分為乳酸林格氏液(Lactec(注冊商標)，大冢制藥公司生產)組(對照組)以及纈氨酸組(在乳酸林格氏液中加入L-纈氨酸，將L-纈氨酸的濃度調節為16.88g/l。L-Val組)。另外，也設定了未處理組(Non-treat，NT組)。試驗液給藥結束后，在乙醚麻醉下由腹主動脈取血后進行尸體解剖，取出肝臟。2)結果a)對切除肝90％引起肝衰竭大鼠模型的存活率的效果結果如表3所示。
通過切除肝的90％，使大鼠出現肝衰竭狀態，觀察6天，發現約有半數死亡。然而，通過6天投給L-纈氨酸，可以使存活率得到顯著改善。表3對切除肝90％引起肝衰竭大鼠模型的存活率的效果(試驗液給藥6天)<

b)對切除肝90％引起肝衰竭大鼠模型的效果結果如表4所示。
通過切除肝的90％，使大鼠出現肝衰竭狀態，通過投給L-纈氨酸可以使之得到改善。另外，Fischer比(BCAA(Val、Leu、Ile)/AAA(Phe、Tyr、Trp))也得到了改善。
表4對切除肝90％引起肝衰竭大鼠模型的效果(試驗液給藥4日)

mean±SD，*、**分別表示相對于NT組有p＜0.05、p＜0.01的顯著差異。#、##分別表示相對于對照組有p＜0.05、p＜0.01的顯著差異(Student t-檢驗)。實施例3對慢性肝病的作用1)試驗方法使用8～9周齡的CrjDonryu雄性大鼠。在試驗過程中，讓其自由攝取大鼠用飼料MF(Oriental Yeast公司生產)和水。將四氯化碳(和光純藥工業公司生產)用橄欖油(和光純藥工業公司生產)配制成50％(v/v)溶液后使用，通過皮下給藥投給大鼠，1次給藥2ml/kg，每周2次，給藥14周(28次)，制成慢性肝病模型。在14周的試驗過程中給予試驗飼料，對照組使用大鼠用飼料MF，L-Val組使用在大鼠用飼料MF中添加有3％重量的L-纈氨酸的飼料。另外，也設定了未處理組(Non-treat，NT組)。14周的試驗結束后，在乙醚麻醉下由腹主動脈取血后進行尸體解剖，取出肝臟。2)結果結果如表5所示。
通過投給四氯化碳14周，使大鼠產生慢性肝病，也發現了死亡例。另一方面，通過投給混有L-纈氨酸的飼料14周，可以改善肝病狀態。表5對四氯化碳誘發慢性肝病大鼠模型的效果

$、$$分別表示有p＜0.05以及p＜0.01的顯著差異(Fischer的直接概率計算法)。
a)mean±SD；**表示相對于NT組有p＜0.01的顯著差異。##表示相對于對照組有p＜0.01的顯著差異(Student t-檢驗)。實施例4口服L-纈氨酸對C型慢性肝炎患者的效果給C型慢性肝炎患者(女性)口服L-纈氨酸，1次1克，1日3次。該患者在服用L-纈氨酸前4個月的GOT和GPT平均值(mean±SD，每月1次，檢查4次的平均值)分別為89.0±21.9IU/l和91.5±23.1IU/l，但是從開始服用第2個月后4個月的GOT和GPT平均值(mean±SD，每月1次，檢查4次的平均值)分別為68.3±20.4IU/l和73.0±24.3IU/l，均顯著(p＜0.05，t檢驗)降低。另外，血小板數也可見改善效果，服用L-纈氨酸前6個月的血小板平均值(mean±SD，1或2個月1次，檢查4次的平均值)為15.7±1.7(×104)，但是從開始服用第2個月后4個月的血小板平均值(mean±SD，每月1次，檢查4次的平均值)為20.4±0.9(×104)，顯著(p＜0.01，t檢驗)增加。因此說明L-纈氨酸對慢性肝炎患者也有效。
工業實用性本發明組合物是優良的用于治療肝病或改善肝功能的組合物，比以前的藥物療法副作用少，可以治療急性肝炎、肝衰竭、慢性肝炎、肝硬化等肝臟疾病，并可以使這些肝臟疾病引起的發熱、倦怠、食欲不振、嘔吐、腹痛、腹水等癥狀、異常或并發癥(除肝性腦病外)得到改善、緩和、恢復。
權利要求
1.用于治療肝病或改善肝功能的組合物，其特征在于含有纈氨酸作為有效成分，而且完全不含有纈氨酸以外的氨基酸，或實質上不含有纈氨酸以外的氨基酸作為有效成分。
2.用于改善肝功能的食品組合物，其特征在于含有纈氨酸作為有效成分，而且完全不含有纈氨酸以外的氨基酸，或實質上不含有纈氨酸以外的氨基酸作為有效成分。
3.如權利要求2所述的組合物，是功能性食品。
4.如權利要求1或2所述的用于治療或改善的組合物，肝病為肝炎。
5.如權利要求1或2所述的用于治療或改善的組合物，肝病為肝衰竭。
6.如權利要求1或2所述的用于治療或改善的組合物，肝病為肝硬化。
7.如權利要求1～6中任意一項所述的用于治療或改善的組合物，纈氨酸為L-纈氨酸。
8.如權利要求1或4～7中任意一項所述的用于治療或改善的組合物，為注射劑。
9.如權利要求1或4～7中任意一項所述的用于治療或改善的組合物，為輸液制劑。
10.如權利要求1～7中任意一項所述的用于治療或改善的組合物，為口服制劑。
全文摘要
用于治療或改善肝病的藥物或食品,其特征在于含有纈氨酸作為有效成分,而且完全不含有纈氨酸以外的氨基酸,或實質上不含有纈氨酸以外的氨基酸作為有效成分。使用這種藥物或食品,比以前的藥物療法副作用小,可以治療肝炎、肝衰竭等肝臟疾病,并可以使這些肝臟疾病引起的發熱、倦怠、食欲不振、嘔吐、腹痛、腹水等癥狀、異常或并發癥(除肝性腦病外)得到改善、緩和、恢復。
文檔編號A61K31/198GK1278168SQ98810728
公開日2000年12月27日 申請日期1998年9月30日 優先權日1997年9月30日
發明者里見進, 土井秀之, 陳正浩, 小松博道, 古賀弘 申請人:中外制藥株式會社