本發明涉及一種補骨脂素納(na)米立(li)方液晶透皮制劑(ji)及其制備方法和應(ying)用，屬于醫藥技術領域(yu)。

背景技術：

補(bu)(bu)(bu)(bu)骨(gu)脂(zhi)(zhi)素(psoralen，ps)是從豆科植物補(bu)(bu)(bu)(bu)骨(gu)脂(zhi)(zhi)中(zhong)(zhong)提(ti)取出來的(de)(de)(de)一(yi)(yi)種(zhong)平(ping)面雜環復合物，為呋喃(nan)環和(he)吡(bi)喃(nan)酮環的(de)(de)(de)駢體，水溶性(xing)(xing)(xing)較差。補(bu)(bu)(bu)(bu)骨(gu)脂(zhi)(zhi)素具有較強的(de)(de)(de)光(guang)敏(min)化作(zuo)(zuo)用(yong)和(he)生(sheng)物學活性(xing)(xing)(xing)，如鎮靜、解痙、止(zhi)血、致(zhi)光(guang)敏(min)等作(zuo)(zuo)用(yong)；是治(zhi)(zhi)療白(bai)癜風的(de)(de)(de)有效藥(yao)(yao)(yao)物，同時(shi)對斑禿、牛皮(pi)癬以及瘤樣皮(pi)膚病也有治(zhi)(zhi)療作(zuo)(zuo)用(yong)。目(mu)前用(yong)于臨(lin)床治(zhi)(zhi)療的(de)(de)(de)主要(yao)是補(bu)(bu)(bu)(bu)骨(gu)脂(zhi)(zhi)片(pian)劑(ji)(ji)(ji)(ji)、注(zhu)射(she)(she)劑(ji)(ji)(ji)(ji)、酊(ding)(ding)劑(ji)(ji)(ji)(ji)。補(bu)(bu)(bu)(bu)骨(gu)脂(zhi)(zhi)片(pian)劑(ji)(ji)(ji)(ji)在(zai)(zai)使用(yong)過(guo)程中(zhong)(zhong)會(hui)產生(sheng)明顯的(de)(de)(de)毒副作(zuo)(zuo)用(yong)，可能引起惡心、頭痛、上腹(fu)部不適(shi)，一(yi)(yi)少部分人(ren)服用(yong)后(hou)會(hui)引發精神(shen)抑郁、失眠(mian)、日(ri)光(guang)性(xing)(xing)(xing)皮(pi)炎(yan)以及急性(xing)(xing)(xing)角膜炎(yan)等全身(shen)性(xing)(xing)(xing)副作(zuo)(zuo)用(yong)，且肝臟首過(guo)效應強，個(ge)體差異大(da)，因(yin)此補(bu)(bu)(bu)(bu)骨(gu)脂(zhi)(zhi)片(pian)劑(ji)(ji)(ji)(ji)的(de)(de)(de)用(yong)藥(yao)(yao)(yao)劑(ji)(ji)(ji)(ji)量需嚴(yan)格控(kong)制。補(bu)(bu)(bu)(bu)骨(gu)脂(zhi)(zhi)注(zhu)射(she)(she)劑(ji)(ji)(ji)(ji)使用(yong)后(hou)可引發局部紅腫、水皰(pao)、偶見頭暈、血壓(ya)升(sheng)高甚至過(guo)敏(min)性(xing)(xing)(xing)休克等嚴(yan)重不良發應。補(bu)(bu)(bu)(bu)骨(gu)脂(zhi)(zhi)酊(ding)(ding)劑(ji)(ji)(ji)(ji)與前兩種(zhong)劑(ji)(ji)(ji)(ji)型相比，因(yin)其是以透(tou)皮(pi)方式(shi)給藥(yao)(yao)(yao)在(zai)(zai)使用(yong)過(guo)程中(zhong)(zhong)明顯降低了全身(shen)性(xing)(xing)(xing)的(de)(de)(de)毒副作(zuo)(zuo)用(yong)，但由于該制劑(ji)(ji)(ji)(ji)為普通(tong)外用(yong)涂抹酊(ding)(ding)劑(ji)(ji)(ji)(ji)，藥(yao)(yao)(yao)物易(yi)流淌，導致(zhi)在(zai)(zai)皮(pi)膚滯留時(shi)間短而影(ying)響藥(yao)(yao)(yao)物的(de)(de)(de)吸收起效，同時(shi)藥(yao)(yao)(yao)物透(tou)過(guo)脂(zhi)(zhi)溶性(xing)(xing)(xing)的(de)(de)(de)皮(pi)膚角質(zhi)層屏(ping)障以及皮(pi)膚靶向作(zuo)(zuo)用(yong)差，因(yin)此補(bu)(bu)(bu)(bu)骨(gu)脂(zhi)(zhi)片(pian)劑(ji)(ji)(ji)(ji)、注(zhu)射(she)(she)劑(ji)(ji)(ji)(ji)和(he)酊(ding)(ding)劑(ji)(ji)(ji)(ji)在(zai)(zai)應用(yong)上均具有一(yi)(yi)定的(de)(de)(de)局限性(xing)(xing)(xing)。

經(jing)皮(pi)(pi)給藥(yao)制(zhi)劑(transdermaldrugdeliverysystems,簡稱(cheng)tdds)是指經(jing)皮(pi)(pi)膚貼(tie)敷方式用(yong)藥(yao)，藥(yao)物由(you)皮(pi)(pi)膚吸收進(jin)入全身血液循環并達到有(you)效血藥(yao)濃(nong)度，從而實(shi)現(xian)對疾(ji)病的治(zhi)療或預防的一類(lei)制(zhi)劑。由(you)于透(tou)皮(pi)(pi)給藥(yao)系統(tong)具有(you)避免肝臟的首過效應，維持恒(heng)定(ding)有(you)效血藥(yao)濃(nong)度，降低(di)毒副反應，減(jian)少給藥(yao)次數，提高治(zhi)療效能和使用(yong)方便等優(you)點，為(wei)大多數患者所接受。

納米立(li)方液(ye)晶(cubsomes)是由雙(shuang)(shuang)連續(xu)的(de)(de)(de)(de)(de)脂(zhi)相(xiang)(xiang)和水相(xiang)(xiang)組成(cheng)的(de)(de)(de)(de)(de)，表面(mian)活性(xing)(xing)劑(ji)插入脂(zhi)質雙(shuang)(shuang)分(fen)子層，晶胞在三維(wei)方向上(shang)以無(wu)限循環方式排列，形成(cheng)曲面(mian)度(du)(du)極(ji)(ji)小的(de)(de)(de)(de)(de)、緊密的(de)(de)(de)(de)(de)、類(lei)似蜂窩狀的(de)(de)(de)(de)(de)結構(gou)。該系(xi)(xi)統(tong)為各向同(tong)性(xing)(xing)、熱力(li)學穩定、外觀澄明的(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)散體系(xi)(xi)。立(li)方液(ye)晶在tdds中(zhong)具有諸多(duo)優(you)勢，如：能顯著增加(jia)(jia)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)溶(rong)解度(du)(du)，維(wei)持較高(gao)的(de)(de)(de)(de)(de)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)濃度(du)(du)，提(ti)(ti)高(gao)立(li)方液(ye)晶與皮(pi)膚(fu)間的(de)(de)(de)(de)(de)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)濃度(du)(du)梯(ti)度(du)(du)，增加(jia)(jia)透皮(pi)速(su)率，增加(jia)(jia)角(jiao)質層脂(zhi)質雙(shuang)(shuang)層的(de)(de)(de)(de)(de)流動性(xing)(xing)，且(qie)液(ye)晶具有與生(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)膜相(xiang)(xiang)似的(de)(de)(de)(de)(de)化學結構(gou)，能提(ti)(ti)高(gao)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)透過皮(pi)膚(fu)屏障能力(li)，且(qie)具有皮(pi)膚(fu)靶向作用(yong)，提(ti)(ti)高(gao)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)利用(yong)度(du)(du)。同(tong)時被(bei)廣(guang)泛(fan)用(yong)于模擬(ni)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)膜、蛋(dan)白(bai)質結晶的(de)(de)(de)(de)(de)基(ji)質、材料學和藥(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)傳輸載(zai)體等(deng)方面(mian)，且(qie)其還具有可采用(yong)傳統(tong)方法滅菌，制備工(gong)藝簡單，輔料價廉(lian)易得，適合(he)工(gong)業(ye)化生(sheng)產等(deng)優(you)點。因此該體系(xi)(xi)在醫藥(yao)領(ling)域作為一種(zhong)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)載(zai)體的(de)(de)(de)(de)(de)研究(jiu)引起了人們極(ji)(ji)大的(de)(de)(de)(de)(de)興趣。

目(mu)前尚無補骨脂(zhi)(zhi)素(su)納米(mi)(mi)立方晶透(tou)皮制劑(ji)的(de)(de)公(gong)開報道，本發(fa)明采用納米(mi)(mi)立方晶將補骨脂(zhi)(zhi)素(su)包載(zai)其中通(tong)過皮膚(fu)(fu)給(gei)藥(yao)(yao)，可直接靶向于皮膚(fu)(fu)病變部位用藥(yao)(yao)，降低(di)系統性毒(du)副作用，且可明顯提高(gao)載(zai)藥(yao)(yao)能力，顯著(zhu)增強補骨脂(zhi)(zhi)素(su)皮膚(fu)(fu)滯留的(de)(de)能力，有效延長作用時間，進(jin)而(er)提高(gao)療效，減少給(gei)藥(yao)(yao)次數，以(yi)期更(geng)加適合患(huan)者的(de)(de)需求，為補骨脂(zhi)(zhi)素(su)的(de)(de)合理(li)開發(fa)利用提供更(geng)廣闊的(de)(de)前景。為飽(bao)受(shou)白(bai)癜風、斑禿、牛皮癬以(yi)及瘤樣皮膚(fu)(fu)病折磨的(de)(de)患(huan)者帶來治療的(de)(de)希望(wang)，改善(shan)他們的(de)(de)生(sheng)活(huo)質量。

技術實現要素：

本(ben)發明要(yao)解決的(de)技術問題是提供一種具有溶解性好、藥物(wu)穩定性高、皮(pi)(pi)膚滯(zhi)留量高、作(zuo)用時(shi)間持久(jiu)、能夠(gou)顯著提高藥物(wu)療(liao)(liao)效、減(jian)少給藥次數、給藥方(fang)便等優(you)點的(de)補骨脂素納米立方(fang)液晶(jing)透皮(pi)(pi)制劑(ji)及其制備方(fang)法和(he)在制備治療(liao)(liao)白癜風、斑禿、牛皮(pi)(pi)癬以及瘤樣皮(pi)(pi)膚病藥物(wu)中(zhong)的(de)應用。

為達(da)上述目的，本發明提供了一(yi)種(zhong)補骨(gu)(gu)脂(zhi)素納米(mi)立方液(ye)晶，包含如(ru)下成分：補骨(gu)(gu)脂(zhi)素、脂(zhi)質材料、穩定劑(ji)(ji)、有機(ji)溶劑(ji)(ji)、去離(li)子水和透皮促(cu)滲劑(ji)(ji)，優選(xuan)的，補骨(gu)(gu)脂(zhi)素、脂(zhi)質材料、穩定劑(ji)(ji)、有機(ji)溶劑(ji)(ji)和去離(li)子水的重(zhong)量比為1：6.67：0.33～1.33：55.67～59.00：666.67～4000.00，更(geng)優選(xuan)為1：6.67：0.67：58.33：666.67。

優選的，所述脂質材(cai)料為甘(gan)油(you)單油(you)酸酯(gmo)。

優選的，所述穩(wen)定(ding)劑為泊洛沙(sha)姆407(f127)。

優(you)選的，所述(shu)有機溶劑為甲醇(chun)(chun)(chun)、無水乙醇(chun)(chun)(chun)、丙(bing)二醇(chun)(chun)(chun)和正丁醇(chun)(chun)(chun)中的至(zhi)少一種；更優(you)選為無水乙醇(chun)(chun)(chun)。

優選的，所述透皮促(cu)滲劑(ji)為氮(dan)酮、薄荷(he)腦、甘油和丙二醇(chun)中的至少一種；更優選為氮(dan)酮。

優選的(de)，所述透皮促滲(shen)劑的(de)含量為其它(ta)成分(fen)總重(zhong)量的(de)1％～5％；更優選為3％。

本發明還提(ti)供了上述補骨(gu)脂(zhi)素納米立方液(ye)晶透(tou)皮制劑的制備(bei)方法，包括以下(xia)步驟：

1)按照(zhao)本發明的重量比稱(cheng)取補骨(gu)脂素、脂質材料、穩(wen)定劑、有機(ji)溶劑和去離(li)子水；

2)將補骨脂素、脂質材(cai)料、穩(wen)定劑(ji)加入(ru)到有機溶劑(ji)中(zhong)，充分(fen)混合；

3)將步(bu)驟2)所(suo)得(de)溶(rong)液超聲加熱至(zhi)完全溶(rong)解，得(de)到均(jun)一的前體(ti)溶(rong)液；

4)將步驟3)所得溶液(ye)快速(su)注射(she)至(zhi)去離(li)子水中，迅速(su)震蕩(dang)；

5)在步驟4)所得溶液(ye)(ye)中加(jia)入一(yi)定量的透皮促滲(shen)劑(ji)，渦旋，得到均一(yi)的泛淡藍色乳光的立方(fang)液(ye)(ye)晶溶液(ye)(ye)，即所述補骨脂素納米立方(fang)液(ye)(ye)晶透皮制劑(ji)。

優(you)選的，步(bu)驟3)中所述超聲(sheng)加熱的溫(wen)度為20～60℃；更(geng)優(you)選為30℃。

優選的，步驟3)中所述(shu)超聲加熱(re)的時間為(wei)10～30min；更優選為(wei)15min。

優(you)選(xuan)的，步(bu)驟5)中所述透皮促(cu)滲劑的用量為其它成分總重量的1％～5％；更優(you)選(xuan)為3％。

優(you)選的，步驟5)中所述渦旋的時間為3～15min；更優(you)選為3min。

本發明提供上述補骨脂(zhi)素立方液晶透皮制劑(ji)的應(ying)用(yong)，可用(yong)于制備治療白癜風、斑禿、牛皮癬(xian)以及瘤樣皮膚(fu)病的藥物。

優選的，所述藥物為外用(yong)涂抹給藥。

本(ben)發明還(huan)提供一種治(zhi)療白(bai)癜風、斑禿、牛皮(pi)(pi)癬以及瘤樣(yang)皮(pi)(pi)膚病(bing)的藥物涂抹外用制(zhi)劑，含有上述(shu)補骨脂素立(li)方液晶透(tou)皮(pi)(pi)制(zhi)劑。

相(xiang)對于(yu)現有技術，本發(fa)明的有益效果(guo)在于(yu)：

本發(fa)明(ming)(ming)將(jiang)補骨(gu)(gu)(gu)脂(zhi)素(su)、透(tou)皮給藥(yao)(yao)系(xi)統、立方液晶(jing)聯合(he)應用(yong)，制(zhi)成毒副作(zuo)用(yong)小、穩定性(xing)好、療效(xiao)高(gao)的抗白癜風、斑(ban)禿、牛皮癬以及瘤(liu)樣皮膚病類藥(yao)(yao)物。目前尚無補骨(gu)(gu)(gu)脂(zhi)素(su)立方液晶(jing)透(tou)皮制(zhi)劑的公開報道，本發(fa)明(ming)(ming)采用(yong)立方液晶(jing)可明(ming)(ming)顯提高(gao)載藥(yao)(yao)能力(li)，顯著增(zeng)強補骨(gu)(gu)(gu)脂(zhi)素(su)透(tou)過皮膚屏(ping)障的能力(li)，增(zeng)加表皮真皮單位面積滯留量，有(you)效(xiao)延長作(zuo)用(yong)時(shi)間，進而(er)提高(gao)療效(xiao)，減少給藥(yao)(yao)次數，給藥(yao)(yao)方便。

透(tou)(tou)皮(pi)給藥(yao)(yao)系統中(zhong)角質層的(de)皮(pi)膚屏(ping)障作用限制了藥(yao)(yao)物透(tou)(tou)過皮(pi)膚，為了達到更好的(de)療(liao)效，發明人經(jing)過了長(chang)期(qi)的(de)研究，選用立方液(ye)晶作為載體，立方液(ye)晶穩定性(xing)好，粒徑(jing)小(xiao)，易于(yu)透(tou)(tou)過皮(pi)膚毛(mao)囊(nang)孔、微(wei)縫等(deng)結構(gou)，且由于(yu)自(zi)身結構(gou)因素可增加難滲透(tou)(tou)藥(yao)(yao)物與皮(pi)膚的(de)相容性(xing)，改變(bian)脂(zhi)質雙分子層結構(gou)，增加藥(yao)(yao)物的(de)經(jing)皮(pi)滲透(tou)(tou)，靶(ba)向皮(pi)膚表皮(pi)真皮(pi)層，并確定了各(ge)組分的(de)重量配比。

附圖說明

圖1為本發明的透皮制劑在含不同促滲劑時的累計滲透量曲線(n＝3，空白；丙二酮；薄荷腦；氮酮；甘油)；

圖2為本發明的透皮制劑在含不同量氮酮時的累積滲透量曲線(n＝3，5％氮酮；3％氮酮；2％氮酮；1％氮酮；空白)；

圖3為本(ben)發(fa)明各(ge)實施例(li)的包(bao)封率(lv)百(bai)分率(lv)柱形圖(n＝3)；

圖4為本發明的透皮制劑和市售酊劑的累積滲透量曲線(n＝3，立方液晶；市售酊劑)；

圖5為(wei)本發明的透皮制劑和市售酊劑的累積滯留量(n＝3，■市售酊劑；□立方液(ye)晶)。

具體實施方法

首(shou)先，本發明以包(bao)(bao)封率(lv)為指(zhi)標，考察了各有(you)機溶劑(ji)對立方液晶包(bao)(bao)封率(lv)的影響，測(ce)定結果如表1所示(shi)：

表(biao)1.立方液晶在(zai)不同的有機溶劑中的包封率

由表1可知，包封率最高即最優(you)選(xuan)的(de)有機溶劑(ji)為無水乙醇(chun)。

隨后，本(ben)發明通過體(ti)外(wai)經(jing)皮(pi)(pi)(pi)滲(shen)透(tou)實驗考察(cha)(cha)了多種(zhong)透(tou)皮(pi)(pi)(pi)促(cu)(cu)滲(shen)劑(氮(dan)酮(tong)(tong)、丙二醇、薄(bo)荷(he)腦、甘油)對(dui)ps體(ti)外(wai)經(jing)皮(pi)(pi)(pi)滲(shen)透(tou)的(de)影(ying)響(xiang)，以累(lei)積滲(shen)透(tou)量為指標，結(jie)(jie)果(guo)如圖1所示(shi)，可見優選(xuan)的(de)透(tou)皮(pi)(pi)(pi)促(cu)(cu)滲(shen)劑為氮(dan)酮(tong)(tong)。同(tong)時考察(cha)(cha)了不同(tong)含量氮(dan)酮(tong)(tong)對(dui)ps體(ti)外(wai)經(jing)皮(pi)(pi)(pi)滲(shen)透(tou)的(de)影(ying)響(xiang)，結(jie)(jie)果(guo)如圖2所示(shi)，可見優選(xuan)的(de)氮(dan)酮(tong)(tong)含量為3％(氮(dan)酮(tong)(tong)占其它成分總量的(de)百(bai)分比)。

下面結合具(ju)體實(shi)施例(li)來進(jin)(jin)一步描述本(ben)(ben)(ben)發(fa)明(ming)(ming)，本(ben)(ben)(ben)發(fa)明(ming)(ming)的(de)(de)(de)(de)優點(dian)(dian)和(he)(he)特點(dian)(dian)將會(hui)隨著(zhu)描述而(er)更(geng)為清楚。但(dan)這(zhe)些(xie)(xie)實(shi)施例(li)僅是范(fan)例(li)性的(de)(de)(de)(de)，并不對本(ben)(ben)(ben)發(fa)明(ming)(ming)的(de)(de)(de)(de)范(fan)圍構成任(ren)何限制。本(ben)(ben)(ben)領域(yu)技(ji)術人員應該理(li)解的(de)(de)(de)(de)是，在不偏離本(ben)(ben)(ben)發(fa)明(ming)(ming)的(de)(de)(de)(de)精神和(he)(he)范(fan)圍下可(ke)以對本(ben)(ben)(ben)發(fa)明(ming)(ming)技(ji)術方案的(de)(de)(de)(de)細(xi)節和(he)(he)形式進(jin)(jin)行修改或替換，但(dan)這(zhe)些(xie)(xie)修改和(he)(he)替換均(jun)落入本(ben)(ben)(ben)發(fa)明(ming)(ming)的(de)(de)(de)(de)保護范(fan)圍內。

實施例1

制備方法：

1)按(an)照處方量稱取補骨脂素、脂質材料、穩定(ding)劑、有機溶劑和去離子水；

2)將補骨脂素(su)、脂質材料和穩定劑(ji)加入到(dao)有機溶劑(ji)中，充(chong)分混(hun)合；

3)將步驟(zou)2)所得溶(rong)液超聲加(jia)熱至完全(quan)溶(rong)解(jie)，得到均一的前體溶(rong)液，超聲溫度(du)為(wei)30℃，超聲時間為(wei)15min；

4)將步(bu)驟(zou)3)所得溶液(ye)快速注(zhu)射至去離子(zi)水中，迅速震蕩(dang)；

5)在步驟4)所(suo)得溶液(ye)中加入透皮(pi)促滲(shen)劑(ji)，渦旋3min，得到均一的(de)泛(fan)淡藍色乳光的(de)立方液(ye)晶溶液(ye)，即本發明的(de)透皮(pi)制劑(ji)。

實施例2

制備(bei)方法：同實施(shi)例1。

實施例3

制備方法(fa)：同實施(shi)例1。

實施例4

制備方(fang)法：同實施例1。

實施例5

制備方(fang)法：同實施例(li)1。

實施例6

制備方法：同實(shi)施例1。

實驗例1實施例說明及包(bao)封率測試結果分(fen)析(xi)

本發明通(tong)過實(shi)施(shi)例(li)，考察了兩(liang)種不同(tong)(tong)的(de)前(qian)體溶液配方及三種不同(tong)(tong)的(de)gmo與去離子水的(de)比例(li)對立方液晶包(bao)封率的(de)影響。

如圖3所示的(de)(de)測試結(jie)果可以看出，實施例(li)(li)1的(de)(de)包封率(lv)最高，其次是實施例(li)(li)2。結(jie)果表(biao)明，以重(zhong)量(liang)計，前體溶(rong)液的(de)(de)優選配方為ps：gmo：f127：乙醇＝0.015：0.1：0.01：0.875；去(qu)(qu)離子水的(de)(de)優選用量(liang)為gmo：去(qu)(qu)離子水＝0.1：10。

再(zai)綜合前(qian)述所考察(cha)的(de)透皮促滲劑的(de)優選(xuan)方案可得，以重量計(ji)，本發明最(zui)優選(xuan)的(de)處方組成(cheng)為ps：gmo：f127：乙醇：去離子水：氮(dan)酮＝0.015：0.1：0.01：0.875：10：0.33。

實驗例(li)2體外經皮(pi)滲(shen)透實驗

制備補(bu)骨(gu)脂素納米立方液晶透皮制劑(ji)(以重量計，ps：gmo：f127：乙醇：去離子水：氮酮＝0.015：0.1：0.01：0.875：10：0.33)，與(yu)市(shi)售的補(bu)骨(gu)脂酊(中(zhong)國人(ren)民解放軍(jun)總醫(yi)院(yuan))進(jin)行體外累積滲透量比較實驗。

(1)實驗儀器

tp-3a智能透皮試驗(yan)儀，kq3200e醫用超(chao)聲(sheng)波清洗器，waters2695型高(gao)效液相(xiang)色譜(pu)儀。

(2)接收介質的選(xuan)擇(ze)

因補骨(gu)脂素為非水溶(rong)性藥物，本發(fa)明考察(cha)了多種接收介質在37℃時對(dui)ps的溶(rong)解能(neng)力，飽和溶(rong)解度的測定結果如表2所示：

表2.37℃時補骨(gu)脂素(su)在不同介質中的溶解度

結果顯(xian)示，ps在(zai)10％tween-80-生理(li)鹽(yan)水中(zhong)的飽和溶解度最高，為611.7μg/ml，足以(yi)(yi)達到(dao)漏槽條件，因此可以(yi)(yi)選用10％tween-80-生理(li)鹽(yan)水作接收介(jie)質。

(3)皮膚處理方法

將(jiang)sd大鼠(shu)(體(ti)重180～220g)用(yong)水合氯醛麻(ma)醉后處死，用(yong)眼用(yong)剪刀仔細(xi)清(qing)除背部皮(pi)(pi)(pi)膚(fu)上的毛發后將(jiang)背部皮(pi)(pi)(pi)膚(fu)剝(bo)離。將(jiang)皮(pi)(pi)(pi)膚(fu)內側的皮(pi)(pi)(pi)下脂肪和粘連物用(yong)刀片(pian)小(xiao)心(xin)剔除，用(yong)生理鹽水沖洗后，將(jiang)其置于(yu)(yu)生理鹽水溶液中磁力攪拌2h，仔細(xi)檢查皮(pi)(pi)(pi)膚(fu)的完整性后，將(jiang)皮(pi)(pi)(pi)膚(fu)置于(yu)(yu)密封(feng)袋中密封(feng)，置于(yu)(yu)-80℃冰箱中保存。實驗前，取出鼠(shu)皮(pi)(pi)(pi)置于(yu)(yu)生理鹽水溶液中攪拌沖洗，仔細(xi)檢查鼠(shu)皮(pi)(pi)(pi)不得(de)有任何(he)肉(rou)眼可見破(po)損。

(4)實驗方法

采用tp-3a智能透皮試驗儀進行實驗，將選定的大鼠背部皮膚固定于接收池和給藥池之間，角質層朝上。釋放面積為1.31cm²，接受池(chi)(chi)容積為20ml。將補骨脂素納米立(li)方液晶2ml和市(shi)售軟膏(gao)2ml分(fen)(fen)別(bie)均勻涂布于(yu)(yu)供(gong)給池(chi)(chi)一側(ce)皮膚(fu)上。接收介(jie)質(zhi)加入接收池(chi)(chi)中，于(yu)(yu)37±1℃恒溫水浴定(ding)速攪(jiao)拌，分(fen)(fen)別(bie)于(yu)(yu)1、2、3、4、6、8、10、12、16、24h取接收介(jie)質(zhi)1ml，同(tong)時向接受池(chi)(chi)中加入等量同(tong)溫的空白接收介(jie)質(zhi)。

(5)累積量測定

將每個(ge)時(shi)間點(dian)取出的樣(yang)品溶(rong)(rong)液(ye)用0.45μm濾(lv)膜(mo)濾(lv)過，棄(qi)去初濾(lv)液(ye)，取續濾(lv)液(ye)，用高效液(ye)相(xiang)色譜(pu)法測定(ding)接(jie)收(shou)介質(zhi)中藥(yao)物的含量(liang)。色譜(pu)條件：topsilc18(200mm×4.6mm，5μm)色譜(pu)柱，流動相(xiang)：甲醇-水(55：45)，波長：246nm，流速：1.0ml/min，進樣(yang)量(liang)：10μl，柱溫：37℃。以樣(yang)品溶(rong)(rong)液(ye)與對照(zhao)品溶(rong)(rong)液(ye)的峰面積(ji)(ji)比計算各個(ge)時(shi)間內(nei)濃(nong)度，并帶入公式計算累積(ji)(ji)滲透量(liang)(q)。

累積滲透量公式如下：經hplc測得的藥物濃度用公式(1-1)進行校正，代入公式(1-2)計算藥物的累積滲透量(q，μg/cm²)。

式中：

ci—t時間前藥物的測定濃(nong)度；

—t時(shi)間藥物的(de)累積濃度；

cn—t時間藥物的(de)測(ce)定(ding)濃度(du)；

v—取樣體積；

v0—接受池中(zhong)溶(rong)液的體積；

qn—t時間單位面積(ji)累積(ji)滲透量；

a—皮膚有效擴散面積(ji)。

以單位面積累計滲(shen)透(tou)量為縱坐(zuo)標，時(shi)間(jian)為橫坐(zuo)標作圖(tu)，繪制累積滲(shen)透(tou)曲線(xian)。繪制結果如圖(tu)4所示。

(6)滯留量測定

實驗終止后，取下皮(pi)(pi)膚，用(yong)生(sheng)理鹽(yan)水洗(xi)凈(jing)皮(pi)(pi)膚表面殘余藥(yao)物(wu)，并用(yong)棉簽擦干，測(ce)定(ding)藥(yao)物(wu)在角質(zhi)層(ceng)以(yi)及(ji)表皮(pi)(pi)層(ceng)和真皮(pi)(pi)層(ceng)中的滯(zhi)留量。

角(jiao)質層：使用(yong)3m膠(jiao)(jiao)帶(dai)(dai)貼(tie)在帶(dai)(dai)毛側皮膚，丟(diu)棄第一(yi)次使用(yong)的膠(jiao)(jiao)帶(dai)(dai)，重(zhong)復(fu)貼(tie)取(qu)十五次后(hou)，將(jiang)膠(jiao)(jiao)帶(dai)(dai)剪碎，置于(yu)10ml離(li)心管(guan)中，加入5ml甲(jia)醇，用(yong)細胞破碎儀超聲(sheng)提(ti)取(qu)10min，用(yong)甲(jia)醇定容，旋渦振蕩3min，15000r/min離(li)心10min，取(qu)上清液，用(yong)0.45μm濾膜過濾，測定藥物含量。

表皮層和(he)真皮層：將剩下的皮膚剪碎置于10ml離(li)心管中，加5ml甲(jia)醇(chun)，用(yong)組織(zhi)勻(yun)漿(jiang)(jiang)機勻(yun)漿(jiang)(jiang)10min，并(bing)用(yong)甲(jia)醇(chun)定容，旋渦振蕩3min，15000r/min離(li)心10min，取上清液，用(yong)0.45μm濾(lv)膜(mo)過濾(lv)，測定藥物(wu)含量。

以單位(wei)面積(ji)皮膚滯留量為(wei)縱坐標，繪制(zhi)皮膚累積(ji)滯留量柱(zhu)狀圖。繪制(zhi)結果如圖5所示(與thecontroltincture相比*p<0.05)。

(7)補骨(gu)脂素立(li)方液晶和市售酊劑載(zai)藥含量(liang)測定

載藥量測定結果(guo)見表3。

表3.補骨脂(zhi)素立方液晶和市售酊劑的含藥量(單位：％)

市(shi)售酊劑的補(bu)骨脂(zhi)素含(han)量為(wei)0.15％，本發明(ming)的補(bu)骨脂(zhi)素納米立方晶透皮制劑的補(bu)骨脂(zhi)素含(han)量為(wei)0.13％。

(8)結果分析

由圖4所示，本發明的補骨脂素納米立方晶透皮制劑和市售酊劑透皮制劑24h內持續釋放藥物的累計滲透量結果為：市售補骨脂酊的經皮滲透量(181.83±8.19μg/cm²)比本發明的補骨脂素納米立方晶透皮制劑(108.25±3.23μg/cm²)高。補(bu)骨脂酊(ding)24h的(de)(de)經皮(pi)滲(shen)透(tou)量(liang)是(shi)立方晶(jing)的(de)(de)1.68倍(bei)。由圖5所示，市(shi)售(shou)補(bu)骨脂酊(ding)劑(ji)組的(de)(de)表皮(pi)層(ceng)濃度是(shi)本(ben)(ben)發明的(de)(de)補(bu)骨脂素(su)納(na)米立方晶(jing)透(tou)皮(pi)制(zhi)(zhi)劑(ji)組表皮(pi)濃度的(de)(de)1.9倍(bei)，而本(ben)(ben)發明的(de)(de)補(bu)骨脂素(su)納(na)米立方晶(jing)透(tou)皮(pi)制(zhi)(zhi)劑(ji)組的(de)(de)真皮(pi)、角(jiao)質(zhi)層(ceng)藥物濃度是(shi)市(shi)售(shou)酊(ding)劑(ji)組的(de)(de)1.69倍(bei)。可(ke)見與市(shi)售(shou)補(bu)骨脂酊(ding)劑(ji)相比，本(ben)(ben)發明的(de)(de)補(bu)骨脂素(su)納(na)米立方晶(jing)透(tou)皮(pi)制(zhi)(zhi)劑(ji)在(zai)真皮(pi)、角(jiao)質(zhi)層(ceng)的(de)(de)滯留量(liang)更大(da)。

綜合可見，本(ben)(ben)發明(ming)的(de)補(bu)骨(gu)(gu)(gu)脂(zhi)(zhi)(zhi)素(su)納(na)(na)米(mi)立方晶(jing)(jing)透皮(pi)(pi)(pi)(pi)制(zhi)劑(ji)(ji)的(de)補(bu)骨(gu)(gu)(gu)脂(zhi)(zhi)(zhi)素(su)含量(liang)、累積滲透量(liang)和滲透速率均低于市(shi)售酊劑(ji)(ji)，但市(shi)售酊劑(ji)(ji)的(de)有效(xiao)成(cheng)分(fen)(fen)多數僅停留在表皮(pi)(pi)(pi)(pi)層(ceng)，本(ben)(ben)發明(ming)的(de)補(bu)骨(gu)(gu)(gu)脂(zhi)(zhi)(zhi)素(su)納(na)(na)米(mi)立方晶(jing)(jing)透皮(pi)(pi)(pi)(pi)制(zhi)劑(ji)(ji)的(de)有效(xiao)成(cheng)分(fen)(fen)卻深入真皮(pi)(pi)(pi)(pi)層(ceng)和角質層(ceng)，其(qi)有效(xiao)成(cheng)分(fen)(fen)的(de)含量(liang)是市(shi)售制(zhi)劑(ji)(ji)組的(de)1.69倍。可知本(ben)(ben)發明(ming)的(de)補(bu)骨(gu)(gu)(gu)脂(zhi)(zhi)(zhi)素(su)納(na)(na)米(mi)立方晶(jing)(jing)透皮(pi)(pi)(pi)(pi)制(zhi)劑(ji)(ji)的(de)透過角質層(ceng)能(neng)(neng)(neng)力(li)、靶向(xiang)皮(pi)(pi)(pi)(pi)膚(fu)能(neng)(neng)(neng)力(li)均高(gao)于市(shi)售酊劑(ji)(ji)，能(neng)(neng)(neng)明(ming)顯提高(gao)補(bu)骨(gu)(gu)(gu)脂(zhi)(zhi)(zhi)素(su)的(de)生物利(li)用(yong)(yong)(yong)度(du)，且(qie)本(ben)(ben)發明(ming)的(de)立方晶(jing)(jing)系統能(neng)(neng)(neng)夠(gou)為(wei)補(bu)骨(gu)(gu)(gu)脂(zhi)(zhi)(zhi)素(su)提供緩釋作(zuo)用(yong)(yong)(yong)，延長藥物作(zuo)用(yong)(yong)(yong)時間，使藥物滯留于皮(pi)(pi)(pi)(pi)膚(fu)，起到靶向(xiang)治療的(de)目的(de)，具(ju)有良(liang)好的(de)臨床應用(yong)(yong)(yong)前景。