本發明涉及探針(zhen)技術領(ling)域(yu)，特別是涉及一種(zhong)細胞標記探針(zhen)及其制備方法。

背景技術：

細胞(bao)(bao)(bao)治(zhi)療(liao)是通過將自體或異體功(gong)能細胞(bao)(bao)(bao)在(zai)體外進行培養，而后回輸(shu)到病(bing)(bing)人體內，借助細胞(bao)(bao)(bao)自身治(zhi)療(liao)和(he)免疫功(gong)能達到疾病(bing)(bing)治(zhi)療(liao)目的(de)，作為一種有效(xiao)的(de)臨床(chuang)疾病(bing)(bing)治(zhi)療(liao)方案(an)備受關注。然(ran)而，回輸(shu)到體內的(de)細胞(bao)(bao)(bao)，其聚集部位難(nan)以判別，對注射部位的(de)準確性(xing)難(nan)以做出診(zhen)斷，從(cong)而影(ying)響其治(zhi)療(liao)功(gong)能發(fa)揮。因(yin)此在(zai)臨床(chuang)實施中，急需非侵入(ru)性(xing)成像技術對回輸(shu)細胞(bao)(bao)(bao)監(jian)測(ce)。

磁(ci)共振成(cheng)(cheng)(cheng)像(xiang)技術，光學成(cheng)(cheng)(cheng)像(xiang)技術，以(yi)及(ji)光聲成(cheng)(cheng)(cheng)像(xiang)技術，在活體(ti)標記(ji)與示蹤(zong)治療細胞方面具有較(jiao)大應(ying)用(yong)潛能(neng)，當結合高靈(ling)敏(min)(min)度(du)造影劑探(tan)針能(neng)夠極大地(di)增強成(cheng)(cheng)(cheng)像(xiang)靈(ling)敏(min)(min)度(du)，獲得(de)(de)細胞準確(que)的生物學信息。利用(yong)納米探(tan)針對細胞進行(xing)標記(ji)，則可以(yi)很好地(di)獲得(de)(de)細胞成(cheng)(cheng)(cheng)像(xiang)并進行(xing)示蹤(zong)分(fen)析。

現有細(xi)(xi)胞標(biao)(biao)記(ji)用(yong)探(tan)針材料(liao)制備(bei)技術一般是通過陽(yang)(yang)離(li)(li)(li)子(zi)(zi)(zi)脂質體或陽(yang)(yang)離(li)(li)(li)子(zi)(zi)(zi)聚(ju)合(he)物(wu)包裹或修飾納(na)米(mi)粒(li)子(zi)(zi)(zi)形成(cheng)復合(he)粒(li)子(zi)(zi)(zi)，通過陽(yang)(yang)離(li)(li)(li)子(zi)(zi)(zi)與(yu)細(xi)(xi)胞膜表(biao)面的磷脂雙分子(zi)(zi)(zi)層相(xiang)互作用(yong)，促使細(xi)(xi)胞內吞，完成(cheng)標(biao)(biao)記(ji)。但是這種強靜(jing)電相(xiang)互作用(yong)往(wang)往(wang)致使細(xi)(xi)胞膜破(po)損，造成(cheng)細(xi)(xi)胞損傷(shang)。因此以陽(yang)(yang)離(li)(li)(li)子(zi)(zi)(zi)脂質體以及陽(yang)(yang)離(li)(li)(li)子(zi)(zi)(zi)聚(ju)合(he)物(wu)，構建(jian)納(na)米(mi)探(tan)針表(biao)現出較(jiao)大的生(sheng)物(wu)毒性。陰離(li)(li)(li)子(zi)(zi)(zi)型納(na)米(mi)探(tan)針則(ze)具備(bei)較(jiao)高生(sheng)物(wu)安全性，但構建(jian)復雜(za)，往(wang)往(wang)難(nan)以形成(cheng)較(jiao)好的細(xi)(xi)胞標(biao)(biao)記(ji)效果(guo)。

技術實現要素：

本發明(ming)主要解決的(de)技(ji)術問(wen)題是提供一種(zhong)細胞標(biao)記探針及(ji)其(qi)制備方(fang)法，能夠具備較好的(de)成像性能以(yi)及(ji)良好的(de)生物相容(rong)性，且其(qi)構建(jian)也比(bi)較簡單(dan)方(fang)便(bian)。

為解(jie)決(jue)上述技(ji)術(shu)問題，本發明采(cai)用的一個(ge)技(ji)術(shu)方(fang)案是：提供一種細胞標記(ji)探(tan)針(zhen)，所述探(tan)針(zhen)包(bao)括納米粒子或量子點以及包(bao)裹或修飾所述納米粒子或量子點的抗壞血酸(suan)棕櫚酸(suan)酯(zhi)。

其(qi)中，所述探針還包(bao)括熒光染料。

其中，所述納米粒子為氧(yang)化(hua)鐵納米粒子。

其(qi)中，所(suo)(suo)述納(na)米粒子為四氧化(hua)三鐵納(na)米粒子，所(suo)(suo)述熒(ying)光(guang)染(ran)料為IR780染(ran)料。

為解決(jue)上述(shu)技術(shu)(shu)問題，本(ben)發(fa)明采用的(de)另一個技術(shu)(shu)方(fang)案是(shi)：提(ti)供一種(zhong)細胞標記探針的(de)制備方(fang)法，所(suo)(suo)述(shu)方(fang)法包括：提(ti)供納(na)米粒子(zi)(zi)或(huo)量(liang)子(zi)(zi)點(dian)、抗壞血酸(suan)棕(zong)櫚(lv)酸(suan)酯，并使之(zhi)混(hun)合均勻(yun)；向(xiang)混(hun)合均勻(yun)后的(de)混(hun)合物中加(jia)入揮(hui)發(fa)性有機溶劑和水(shui)，并使之(zhi)震蕩均勻(yun)；將震蕩均勻(yun)后的(de)混(hun)合物中的(de)所(suo)(suo)述(shu)揮(hui)發(fa)性有機溶劑揮(hui)發(fa)完全(quan)，進而(er)獲(huo)得所(suo)(suo)述(shu)抗壞血酸(suan)棕(zong)櫚(lv)酸(suan)酯包裹或(huo)修(xiu)飾所(suo)(suo)述(shu)納(na)米粒子(zi)(zi)或(huo)量(liang)子(zi)(zi)點(dian)的(de)所(suo)(suo)述(shu)細胞標記探針。

其中，所述(shu)提供(gong)納(na)米(mi)(mi)粒子或量(liang)(liang)子點、抗壞血酸(suan)棕(zong)櫚(lv)酸(suan)酯(zhi)，并使之(zhi)混(hun)合(he)均勻的步(bu)驟，包括：提供(gong)納(na)米(mi)(mi)粒子或量(liang)(liang)子點、抗壞血酸(suan)棕(zong)櫚(lv)酸(suan)酯(zhi)以及熒光染(ran)料(liao)，并使之(zhi)混(hun)合(he)均勻。

其中，所(suo)(suo)述納(na)米粒(li)子(zi)為四氧化三(san)鐵(tie)納(na)米粒(li)子(zi)，所(suo)(suo)述揮發(fa)性(xing)有機溶(rong)劑(ji)為四氫呋喃。

其(qi)中(zhong)，所(suo)(suo)述四氧(yang)化三鐵納米粒子為(wei)0.001-0.5重(zhong)量(liang)份(fen)，所(suo)(suo)述抗壞(huai)血(xue)酸棕櫚酸酯為(wei)0.001-10重(zhong)量(liang)份(fen)，所(suo)(suo)述四氫呋喃為(wei)1-10重(zhong)量(liang)份(fen)，所(suo)(suo)述水(shui)為(wei)5-100重(zhong)量(liang)份(fen)。

其中，所述提供納(na)米粒子或量子點、抗(kang)壞血(xue)酸棕櫚酸酯(zhi)，并使(shi)之(zhi)混(hun)合均(jun)勻的步驟，包括：提供四氧化三鐵(tie)納(na)米粒子、抗(kang)壞血(xue)酸棕櫚酸酯(zhi)以及IR780染料，并使(shi)之(zhi)混(hun)合均(jun)勻，其中，所述IR780染料為0.001-1重量份(fen)。

其中，所(suo)述(shu)提(ti)供(gong)四(si)氧(yang)(yang)化(hua)三(san)(san)鐵(tie)納米(mi)粒(li)子的(de)步驟，包括(kuo)：提(ti)供(gong)濃度為2-10毫克每毫升、分散在(zai)三(san)(san)氯(lv)(lv)甲烷(wan)、正(zheng)己(ji)(ji)烷(wan)或二(er)氯(lv)(lv)甲烷(wan)中的(de)四(si)氧(yang)(yang)化(hua)三(san)(san)鐵(tie)納米(mi)膠體溶(rong)液；將所(suo)述(shu)四(si)氧(yang)(yang)化(hua)三(san)(san)鐵(tie)納米(mi)膠體溶(rong)液中的(de)三(san)(san)氯(lv)(lv)甲烷(wan)、正(zheng)己(ji)(ji)烷(wan)或二(er)氯(lv)(lv)甲烷(wan)揮發完全，進而獲得所(suo)述(shu)四(si)氧(yang)(yang)化(hua)三(san)(san)鐵(tie)納米(mi)粒(li)子。

其中(zhong)，所述(shu)向混(hun)合(he)均(jun)(jun)勻后的混(hun)合(he)物中(zhong)加(jia)(jia)入(ru)(ru)揮(hui)發性有(you)機溶劑和水，并使(shi)之(zhi)震蕩(dang)均(jun)(jun)勻的步驟，包括(kuo)：向混(hun)合(he)均(jun)(jun)勻后的混(hun)合(he)物中(zhong)加(jia)(jia)入(ru)(ru)1-10重量份的四(si)氫呋喃，在25-30攝氏度(du)下，進行超(chao)聲處理，并將(jiang)超(chao)聲處理后的混(hun)合(he)物加(jia)(jia)入(ru)(ru)到5-100重量份水中(zhong)，震蕩(dang)均(jun)(jun)勻；所述(shu)四(si)氫呋喃是(shi)通過減壓旋轉(zhuan)蒸發方(fang)法揮(hui)發完全(quan)的。

本(ben)發(fa)(fa)明的(de)(de)(de)有(you)益效果是(shi)：區別(bie)于(yu)現有(you)技術的(de)(de)(de)情(qing)況，本(ben)發(fa)(fa)明細(xi)胞標(biao)記探(tan)(tan)針(zhen)包(bao)括(kuo)納米(mi)粒子(zi)或(huo)量(liang)子(zi)點(dian)以(yi)及(ji)包(bao)裹或(huo)修飾所述納米(mi)粒子(zi)或(huo)量(liang)子(zi)點(dian)的(de)(de)(de)抗壞血酸(suan)棕櫚酸(suan)酯，由于(yu)該(gai)(gai)細(xi)胞標(biao)記探(tan)(tan)針(zhen)是(shi)一類陰(yin)離子(zi)型(xing)探(tan)(tan)針(zhen)，因此具有(you)良好的(de)(de)(de)生物相(xiang)容(rong)性，且具備(bei)(bei)較(jiao)好的(de)(de)(de)成像性能。該(gai)(gai)探(tan)(tan)針(zhen)的(de)(de)(de)制(zhi)備(bei)(bei)方法(fa)包(bao)括(kuo)提供納米(mi)粒子(zi)或(huo)量(liang)子(zi)點(dian)、抗壞血酸(suan)棕櫚酸(suan)酯，并使(shi)之混(hun)(hun)合(he)均(jun)勻；向混(hun)(hun)合(he)均(jun)勻后的(de)(de)(de)混(hun)(hun)合(he)物中(zhong)加入揮(hui)發(fa)(fa)性有(you)機溶劑和水(shui)，并使(shi)之震蕩(dang)均(jun)勻；將震蕩(dang)均(jun)勻后的(de)(de)(de)混(hun)(hun)合(he)物中(zhong)的(de)(de)(de)所述揮(hui)發(fa)(fa)性有(you)機溶劑揮(hui)發(fa)(fa)完全(quan)，進而獲得(de)該(gai)(gai)探(tan)(tan)針(zhen)，相(xiang)比較(jiao)現有(you)的(de)(de)(de)陰(yin)離子(zi)型(xing)納米(mi)探(tan)(tan)針(zhen)的(de)(de)(de)制(zhi)備(bei)(bei)工藝(yi)，該(gai)(gai)探(tan)(tan)針(zhen)的(de)(de)(de)制(zhi)備(bei)(bei)工藝(yi)簡單方便，操作步驟(zou)少，材料價格(ge)也(ye)不昂(ang)貴。

附圖說明

圖(tu)1是樣品(pin)1、樣品(pin)2以及水的磁共振成像(xiang)檢測(ce)結果示意(yi)圖(tu)；

圖2是樣品2和水(shui)的光聲成像(xiang)檢測結果(guo)示意圖；

圖(tu)(tu)3是樣品1的細胞磁共振成像檢測結果示意圖(tu)(tu)；

圖4是樣品1的細胞毒性(xing)檢測結果示意圖；

圖(tu)5是本發明細胞標記探針的制備方法(fa)一實施方式的流程圖(tu)；

圖6是(shi)樣品(pin)1的動態光(guang)散射檢測圖片示意圖；

圖(tu)(tu)7是樣品3的動態光散射檢測圖(tu)(tu)片示意圖(tu)(tu)。

具體實施方式

下面結合附圖(tu)和實施方(fang)式對本發明進(jin)行詳細說明。

本(ben)發明提供一種細胞標(biao)記探(tan)針，該(gai)探(tan)針包括納米粒(li)子(zi)或(huo)(huo)量子(zi)點以及包裹或(huo)(huo)修飾(shi)所述(shu)納米粒(li)子(zi)或(huo)(huo)量子(zi)點的抗壞血酸(suan)棕櫚酸(suan)酯。

納米(mi)粒(li)子是指粒(li)度(du)在(zai)1-100nm之(zhi)(zhi)間(jian)(jian)的(de)(de)粒(li)子(納米(mi)粒(li)子又(you)稱超細微(wei)(wei)粒(li))，屬于膠體(ti)(ti)粒(li)子大小的(de)(de)范疇。它們(men)處(chu)于原子簇和(he)(he)宏觀(guan)(guan)(guan)(guan)物體(ti)(ti)之(zhi)(zhi)間(jian)(jian)的(de)(de)過度(du)區，處(chu)于微(wei)(wei)觀(guan)(guan)(guan)(guan)體(ti)(ti)系和(he)(he)宏觀(guan)(guan)(guan)(guan)體(ti)(ti)系之(zhi)(zhi)間(jian)(jian)，是由數目(mu)不多的(de)(de)原子或分(fen)子組(zu)成的(de)(de)集團，因此(ci)它們(men)既非典型的(de)(de)微(wei)(wei)觀(guan)(guan)(guan)(guan)系統亦非典型的(de)(de)宏觀(guan)(guan)(guan)(guan)系統。

納米材料在醫學和生物工程也有許多應用。已成功開發以納米磁性材料為藥物載體的靶向藥物，稱為“生物導彈”。即在磁性Fe₃O₄納米(mi)微(wei)粒包敷的(de)蛋白質表面(mian)攜(xie)帶藥(yao)(yao)物(wu)，注射進入人體(ti)血(xue)(xue)(xue)管，通(tong)過磁場(chang)導航輸送到(dao)病(bing)(bing)變(bian)部位釋放藥(yao)(yao)物(wu)，可(ke)減(jian)少肝、脾、腎等所受由于藥(yao)(yao)物(wu)產生的(de)副作用。利用納米(mi)傳(chuan)感器(qi)可(ke)獲取各種(zhong)生化(hua)(hua)反(fan)應的(de)信(xin)息和電化(hua)(hua)學信(xin)息。還可(ke)以利用納米(mi)粒子研制成納米(mi)機器(qi)人，注入人身的(de)血(xue)(xue)(xue)液，對人體(ti)進行全身健康檢查，疏通(tong)腦血(xue)(xue)(xue)管中血(xue)(xue)(xue)栓，清除(chu)心臟(zang)動脈脂肪沉積物(wu)，甚(shen)至還能吞噬病(bing)(bing)毒，殺死癌細(xi)胞(bao)等，可(ke)以預言，隨著制備納米(mi)材料(liao)技術的(de)發(fa)展和功能開(kai)發(fa)，會(hui)有越(yue)來越(yue)多的(de)新型納米(mi)材料(liao)在眾多的(de)高(gao)科技領域中得(de)到(dao)廣泛的(de)應用。

量子點(quantum dot)是準(zhun)零維的(de)納米材(cai)料(liao)，由(you)(you)少(shao)量的(de)原子所構成。粗略地說，量子點三個維度的(de)尺寸都在100nm以(yi)下，外觀恰似一極小的(de)點狀物(wu)。量子點一般為球形(xing)或(huo)類球形(xing)，是由(you)(you)半導體材(cai)料(liao)(通常(chang)由(you)(you)IIB～ⅥA或(huo)IIIA～VA元素組成)制成的(de)、穩定直徑在2-20nm的(de)納米粒(li)子，在光學生(sheng)物(wu)標記等領(ling)域(yu)具有廣泛的(de)應用情(qing)景。

抗壞血酸棕櫚酸酯為棕櫚酸與L-抗壞血酸等天然成分酯化而成，其分子式為C₂₂H₃₈O₇，是(shi)(shi)一種高(gao)效(xiao)的(de)氧清除劑(ji)(ji)(ji)和增效(xiao)劑(ji)(ji)(ji)，被(bei)世界(jie)衛(wei)生組織(WHO)食(shi)品(pin)(pin)添加(jia)劑(ji)(ji)(ji)委員會評(ping)定為具有營養性、無(wu)毒、高(gao)效(xiao)、使用(yong)安(an)全的(de)食(shi)品(pin)(pin)添加(jia)劑(ji)(ji)(ji)，是(shi)(shi)我國唯一可用(yong)于(yu)嬰幼(you)兒食(shi)品(pin)(pin)的(de)抗(kang)氧化(hua)劑(ji)(ji)(ji)，本品(pin)(pin)用(yong)于(yu)食(shi)品(pin)(pin)可起到(dao)抗(kang)氧化(hua)、食(shi)品(pin)(pin)(油脂)護色、營養強(qiang)化(hua)等功效(xiao)。

因(yin)此，采用(yong)抗(kang)壞血酸棕櫚酸酯(zhi)包裹(guo)或(huo)修飾納米粒子或(huo)量子點，構建而成的探針(zhen)具(ju)有良(liang)好的生物相容性(xing)，該探針(zhen)標記細(xi)胞(bao)之后可以(yi)用(yong)于(yu)細(xi)胞(bao)治療，不(bu)會(hui)對細(xi)胞(bao)造成損傷。

其(qi)中，該探針還包括(kuo)熒(ying)(ying)(ying)光染料(liao)。熒(ying)(ying)(ying)光染料(liao)泛指吸(xi)收(shou)某一(yi)(yi)波(bo)長(chang)的(de)光波(bo)后能發射(she)出另一(yi)(yi)波(bo)長(chang)大于吸(xi)收(shou)光的(de)光波(bo)的(de)物質。標(biao)記上(shang)熒(ying)(ying)(ying)光染料(liao)，還可以進一(yi)(yi)步(bu)進行熒(ying)(ying)(ying)光檢(jian)測。

其中(zhong)，該納(na)米(mi)粒(li)(li)子(zi)(zi)為氧化鐵(tie)納(na)米(mi)粒(li)(li)子(zi)(zi)。氧化鐵(tie)納(na)米(mi)粒(li)(li)子(zi)(zi)是一種(zhong)多功能材料。當氧化鐵(tie)顆粒(li)(li)尺寸小(xiao)到納(na)米(mi)級(ji)(1～100nm)時，其表面(mian)原子(zi)(zi)數(shu)、比表面(mian)積(ji)和表面(mian)能等均(jun)隨著粒(li)(li)徑的(de)減小(xiao)而急(ji)劇(ju)增加，從而表現出小(xiao)尺寸效(xiao)應、量(liang)子(zi)(zi)尺寸效(xiao)應、表面(mian)效(xiao)應和宏觀(guan)量(liang)子(zi)(zi)隧道效(xiao)應等特(te)點(dian)，具有良好的(de)光學性質(zhi)、磁性、催化性能等。

進(jin)一(yi)步(bu)，該(gai)(gai)納(na)(na)米粒(li)子(zi)為四氧化(hua)三鐵納(na)(na)米粒(li)子(zi)，該(gai)(gai)熒(ying)(ying)光(guang)染料(liao)(liao)為IR780染料(liao)(liao)。當然，該(gai)(gai)納(na)(na)米粒(li)子(zi)還可以是(shi)(shi)四氧化(hua)三鐵納(na)(na)米粒(li)子(zi)之(zhi)外的其他納(na)(na)米粒(li)子(zi)，例(li)如納(na)(na)米金等；該(gai)(gai)熒(ying)(ying)光(guang)染料(liao)(liao)可以是(shi)(shi)IR780染料(liao)(liao)之(zhi)外的其他熒(ying)(ying)光(guang)染料(liao)(liao)，例(li)如吲哚(duo)菁綠等。

下面以樣品(pin)(pin)(pin)1的探(tan)針(zhen)和樣品(pin)(pin)(pin)2的探(tan)針(zhen)為(wei)例來說明本發明的探(tan)針(zhen)的成像性能以及(ji)生物相容性。其中(zhong)，樣品(pin)(pin)(pin)1和樣品(pin)(pin)(pin)2中(zhong)，納(na)米粒子均是(shi)四氧(yang)化三鐵納(na)米粒子，樣品(pin)(pin)(pin)1沒有標記(ji)熒光染(ran)料，樣品(pin)(pin)(pin)2標記(ji)有IR780染(ran)料。

參見圖1，圖1是樣(yang)(yang)品(pin)1、樣(yang)(yang)品(pin)2以(yi)及水的(de)磁共振(zhen)成像檢測結果示意圖。從圖1可(ke)(ke)以(yi)看出(chu)，樣(yang)(yang)品(pin)1與樣(yang)(yang)品(pin)2納(na)米探(tan)針，其橫向弛豫成像性能與對照組(zu)的(de)水相比，呈現(xian)出(chu)明顯的(de)信號(hao)差異(yi)(yi)。當該探(tan)針標記細胞(bao)的(de)時(shi)候，根據這種(zhong)信號(hao)差異(yi)(yi)，可(ke)(ke)以(yi)判斷出(chu)標記細胞(bao)所在的(de)位置(zhi)，或(huo)者哪里有標記細胞(bao)，哪里沒有標記細胞(bao)。

參見圖(tu)2，圖(tu)2是(shi)樣品2和水的(de)光(guang)(guang)聲成像(xiang)檢測結果示意圖(tu)(原始(shi)圖(tu)片是(shi)彩色(se)的(de)圖(tu)片)。光(guang)(guang)聲成像(xiang)(Photoacoustic Imaging，PAI)是(shi)近年來發展起來的(de)一(yi)種非入侵(qin)式(shi)和非電離(li)式(shi)的(de)新(xin)型生(sheng)(sheng)物(wu)醫學成像(xiang)方法。當脈(mo)沖激光(guang)(guang)照(zhao)射到生(sheng)(sheng)物(wu)組(zu)織中時，組(zu)織的(de)光(guang)(guang)吸(xi)收域將產生(sheng)(sheng)超聲信(xin)號，稱這種由光(guang)(guang)激發產生(sheng)(sheng)的(de)超聲信(xin)號為(wei)光(guang)(guang)聲信(xin)號。

從圖2可以看出(chu)，樣品2納米探針其光聲成像性能與對(dui)照(zhao)組(zu)的(de)(de)水相比，呈現(xian)出(chu)明顯的(de)(de)信號(hao)差異(yi)。當(dang)該探針標記(ji)細胞(bao)的(de)(de)時候，根據這種信號(hao)差異(yi)，可以判斷出(chu)標記(ji)細胞(bao)所(suo)在的(de)(de)位(wei)置，或者(zhe)哪里(li)有(you)標記(ji)細胞(bao)，哪里(li)沒(mei)有(you)標記(ji)細胞(bao)。

參見圖(tu)3，圖(tu)3是(shi)樣品(pin)1的細(xi)胞磁共振成像檢(jian)測結果示意圖(tu)。從圖(tu)3可以看出，樣品(pin)1納米(mi)探(tan)針標記細(xi)胞后，細(xi)胞呈現明顯的信號差異。

參見(jian)圖(tu)4，圖(tu)4是(shi)(shi)樣(yang)品1的(de)(de)細(xi)胞毒(du)性檢測結(jie)果(guo)示(shi)意(yi)圖(tu)。圖(tu)4中(zhong)，橫(heng)坐標(biao)是(shi)(shi)鐵在(zai)細(xi)胞培養(yang)基中(zhong)的(de)(de)濃(nong)度，反(fan)應的(de)(de)是(shi)(shi)環境中(zhong)探針(zhen)的(de)(de)量對(dui)(dui)細(xi)胞的(de)(de)影響；第一個(ge)柱(zhu)形圖(tu)對(dui)(dui)應的(de)(de)是(shi)(shi)控制(zhi)組。縱(zong)坐標(biao)是(shi)(shi)細(xi)胞生(sheng)存能力。從圖(tu)4可(ke)以看出，鐵的(de)(de)濃(nong)度從1-25微(wei)克每毫升(sheng)培養(yang)基情況下(ug/ml)，細(xi)胞的(de)(de)生(sheng)存能力均大于100％，這說明樣(yang)品1納米探針(zhen)不會對(dui)(dui)細(xi)胞造成損傷(shang)，其具有較好(hao)的(de)(de)生(sheng)物(wu)相容性。

參見圖5，圖5是本發明細(xi)胞(bao)標記(ji)探針(zhen)的(de)制(zhi)備方法(fa)一實施方式的(de)流程圖，該方法(fa)包括(kuo)：

步(bu)驟S101：提供納米粒子或(huo)量子點、抗壞(huai)血酸棕櫚酸酯，并(bing)使之混合均勻(yun)。

步驟S102：向混合均(jun)勻后的混合物中加入揮發性有(you)機溶(rong)劑(ji)和水，并使之(zhi)震蕩均(jun)勻。

抗壞血(xue)(xue)酸(suan)棕(zong)櫚酸(suan)酯是(shi)非水(shui)溶(rong)性(xing)(xing)的(de)，只能溶(rong)解在有(you)(you)機(ji)(ji)(ji)溶(rong)劑(ji)(ji)中(zhong)，例如乙醇、油脂等。揮發性(xing)(xing)有(you)(you)機(ji)(ji)(ji)溶(rong)劑(ji)(ji)是(shi)為了溶(rong)解抗壞血(xue)(xue)酸(suan)棕(zong)櫚酸(suan)酯，以便于溶(rong)解狀態(tai)的(de)抗壞血(xue)(xue)酸(suan)棕(zong)櫚酸(suan)酯更好地(di)包裹或(huo)修飾納米粒(li)子(zi)或(huo)量子(zi)點(dian)。后續(xu)抗壞血(xue)(xue)酸(suan)棕(zong)櫚酸(suan)酯包裹或(huo)修飾納米粒(li)子(zi)或(huo)量子(zi)點(dian)的(de)探針需要用于細(xi)(xi)胞標記，必須去掉(diao)有(you)(you)機(ji)(ji)(ji)溶(rong)劑(ji)(ji)，以免對細(xi)(xi)胞產(chan)生(sheng)損(sun)傷，因(yin)此需要加(jia)入水(shui)，有(you)(you)機(ji)(ji)(ji)溶(rong)劑(ji)(ji)需要是(shi)揮發性(xing)(xing)的(de)有(you)(you)機(ji)(ji)(ji)溶(rong)劑(ji)(ji)，以便于去掉(diao)。

步驟S103：將震蕩(dang)均勻后(hou)的混合物(wu)中(zhong)的揮(hui)發(fa)性有機溶(rong)劑(ji)揮(hui)發(fa)完全(quan)，進(jin)而獲得(de)抗(kang)壞血酸(suan)棕(zong)櫚(lv)酸(suan)酯包裹或修飾(shi)納(na)米(mi)粒子或量子點(dian)的細(xi)胞標記探針(zhen)。

本發明(ming)實施方式提供納(na)米(mi)(mi)粒子(zi)或量子(zi)點、抗壞血酸(suan)棕(zong)櫚酸(suan)酯，并(bing)使之混(hun)(hun)合(he)均(jun)勻(yun)；向混(hun)(hun)合(he)均(jun)勻(yun)后(hou)(hou)的(de)混(hun)(hun)合(he)物中(zhong)加入(ru)揮發性有機溶劑(ji)(ji)和水(shui)，并(bing)使之震蕩均(jun)勻(yun)；將震蕩均(jun)勻(yun)后(hou)(hou)的(de)混(hun)(hun)合(he)物中(zhong)的(de)所(suo)述揮發性有機溶劑(ji)(ji)揮發完(wan)全，進而獲得該探(tan)針(zhen)(zhen)，相比較現有的(de)陰離子(zi)型納(na)米(mi)(mi)探(tan)針(zhen)(zhen)的(de)制備工藝，該探(tan)針(zhen)(zhen)的(de)制備工藝簡單方便，操(cao)作步驟少，材料價格也不昂貴(gui)。

其中，步(bu)驟(zou)S101還可以(yi)包(bao)括：提(ti)供(gong)納米粒子或(huo)量子點、抗(kang)壞血酸(suan)棕櫚(lv)酸(suan)酯以(yi)及熒(ying)(ying)光染料，并使之混合均勻。也(ye)就是說，在制備探針(zhen)的時候，也(ye)標記(ji)上熒(ying)(ying)光染料。以(yi)備后續需要利用熒(ying)(ying)光染料進行檢測(ce)的情(qing)況。

其中(zhong)，納(na)米粒(li)子(zi)為四氧(yang)化三鐵納(na)米粒(li)子(zi)，揮(hui)發性有機(ji)溶劑(ji)為四氫呋喃。

其中(zhong)，四氧化(hua)三鐵納米(mi)粒子為0.001-0.5重量(liang)(liang)(liang)份(fen)(fen)，例如(ru)(ru)：0.001、0.01、0.05、0.1、0.3、0.5重量(liang)(liang)(liang)份(fen)(fen)等(deng)等(deng)；抗壞血酸棕櫚酸酯(zhi)為0.001-10重量(liang)(liang)(liang)份(fen)(fen)，例如(ru)(ru)：0.001、0.01、0.1、1、5、10重量(liang)(liang)(liang)份(fen)(fen)等(deng)等(deng)；四氫(qing)呋喃(nan)為1-10重量(liang)(liang)(liang)份(fen)(fen)，例如(ru)(ru)：1、3、5、7、10重量(liang)(liang)(liang)份(fen)(fen)等(deng)等(deng)；水為5-100重量(liang)(liang)(liang)份(fen)(fen)，例如(ru)(ru)：5、25、50、75、100重量(liang)(liang)(liang)份(fen)(fen)等(deng)等(deng)。

在實際應用(yong)中，通過調(diao)節(jie)四氧化三鐵納(na)米粒(li)(li)子(zi)和(he)抗壞(huai)(huai)血酸(suan)棕(zong)櫚(lv)酸(suan)酯的(de)(de)(de)重量份(fen)的(de)(de)(de)比(bi)(bi)例(li)(li)，可以(yi)調(diao)節(jie)探(tan)針顆粒(li)(li)粒(li)(li)徑(jing)的(de)(de)(de)大小。抗壞(huai)(huai)血酸(suan)棕(zong)櫚(lv)酸(suan)酯的(de)(de)(de)比(bi)(bi)例(li)(li)越(yue)大，探(tan)針顆粒(li)(li)粒(li)(li)徑(jing)越(yue)小，抗壞(huai)(huai)血酸(suan)棕(zong)櫚(lv)酸(suan)酯的(de)(de)(de)比(bi)(bi)例(li)(li)越(yue)小，探(tan)針顆粒(li)(li)粒(li)(li)徑(jing)越(yue)大。在調(diao)節(jie)探(tan)針顆粒(li)(li)粒(li)(li)徑(jing)的(de)(de)(de)大小時，還(huan)可以(yi)微調(diao)節(jie)四氫呋(fu)喃(nan)和(he)水(shui)的(de)(de)(de)量份(fen)的(de)(de)(de)比(bi)(bi)例(li)(li)，一般來說，四氫呋(fu)喃(nan)和(he)水(shui)的(de)(de)(de)量份(fen)的(de)(de)(de)比(bi)(bi)例(li)(li)可以(yi)是1：5-1：20。

其(qi)(qi)中(zhong)，在一(yi)具體(ti)的(de)實施(shi)方式中(zhong)，步驟(zou)S101具體(ti)包括：提供(gong)四氧(yang)化三鐵納米粒子、抗壞(huai)血酸棕櫚酸酯以及IR780染料(liao)，并使之混合(he)均勻，其(qi)(qi)中(zhong)，IR780染料(liao)為0.001-1重(zhong)量份(fen)。

具體地，提供四氧化三鐵(tie)納米粒子的步驟，包(bao)括：

提供(gong)濃度為2-10毫(hao)克每毫(hao)升、分散在三氯(lv)(lv)甲(jia)烷、正己烷或二氯(lv)(lv)甲(jia)烷中的(de)四(si)氧化三鐵納(na)米膠(jiao)體溶液；將四(si)氧化三鐵納(na)米膠(jiao)體溶液中的(de)三氯(lv)(lv)甲(jia)烷、正己烷或二氯(lv)(lv)甲(jia)烷揮(hui)發完全，進而獲(huo)得四(si)氧化三鐵納(na)米粒子。

進一步(bu)，步(bu)驟S102可以包(bao)括：向混合(he)均(jun)勻后的(de)(de)(de)混合(he)物中加入1-10重量(liang)份的(de)(de)(de)四氫呋喃，在(zai)25-30攝氏度下，進行超聲處理(li)，并將超聲處理(li)后的(de)(de)(de)混合(he)物加入到5-100重量(liang)份水中，震蕩均(jun)勻；此時，四氫呋喃是通過(guo)減壓旋轉(zhuan)蒸發(fa)方法揮發(fa)完全的(de)(de)(de)。

下(xia)面以三個具(ju)體的(de)實施例來說(shuo)明上述的(de)方(fang)法。

實(shi)施例(li)1，構建(jian)抗壞血酸(suan)棕櫚酸(suan)酯包裹(guo)或修飾的四(si)氧(yang)化三鐵(tie)納米探針：

(1)將濃度為10mg/ml分散在三(san)氯甲烷、正(zheng)己(ji)烷或二(er)氯甲烷中(zhong)的四氧化三(san)鐵(tie)納米晶(jing)(jing)體，加入試劑瓶中(zhong)，通(tong)過真空干燥或使用惰性氣體吹干的方(fang)式(shi)去(qu)除有機溶劑，然后稱量(liang)納米晶(jing)(jing)體0.005重量(liang)份；

(2)將0.010重量(liang)份(fen)(fen)的抗壞血(xue)酸棕櫚酸酯與上述(shu)干燥的0.005重量(liang)份(fen)(fen)的四(si)氧化三(san)鐵納(na)米晶體于溫(wen)度25-30攝氏(shi)度振蕩混合。混合后加入四(si)氫呋喃溶液1重量(liang)份(fen)(fen)；

(3)將上述有(you)機(ji)混(hun)合(he)溶(rong)液在溫度(du)(du)25-30攝氏度(du)(du)下(xia)進行超聲(sheng)，超聲(sheng)功(gong)率130W，振幅(fu)65％，然后(hou)將超聲(sheng)后(hou)的混(hun)合(he)物加入到5重量份的水溶(rong)液中(zhong)，震蕩均勻。

(4)通過(guo)減壓旋轉蒸發方法去除上述(shu)水相溶液中殘留的(de)四(si)氫呋(fu)喃(nan)溶劑，制得抗壞血酸(suan)棕(zong)櫚(lv)酸(suan)酯(zhi)構建的(de)四(si)氧化三鐵納米探針，記錄為樣品1。

實(shi)施(shi)例2，構建抗壞血(xue)酸(suan)棕櫚酸(suan)酯包裹或修(xiu)飾的(de)四氧化(hua)三鐵/IR780納(na)米探針：

(1)將濃度為10mg/ml分散在三氯甲烷(wan)(wan)、正己(ji)烷(wan)(wan)或二氯甲烷(wan)(wan)中(zhong)的(de)四(si)氧化三鐵納米晶體(ti)，加入試劑(ji)瓶(ping)中(zhong)，通過真空干(gan)燥或使(shi)用惰性氣體(ti)吹干(gan)的(de)方式去除有機溶劑(ji)，然后稱量(liang)納米晶體(ti)0.005重量(liang)份(fen)；

(2)將0.001重(zhong)(zhong)量份(fen)IR780與0.025重(zhong)(zhong)量份(fen)抗壞血酸(suan)棕櫚酸(suan)酯與上述干燥的(de)0.005重(zhong)(zhong)量份(fen)的(de)四(si)氧化三鐵納米晶(jing)體于溫度(du)25-30攝氏度(du)振蕩混合。混合后加(jia)入四(si)氫(qing)呋喃溶(rong)液1重(zhong)(zhong)量份(fen)；

(3)將(jiang)上述有機混合溶液在溫度25-30攝氏度下進行超(chao)聲(sheng)(sheng)，超(chao)聲(sheng)(sheng)功率130W，振幅65％，然后(hou)將(jiang)超(chao)聲(sheng)(sheng)后(hou)的(de)混合物加入(ru)到5重量份的(de)水溶液中(zhong)，震蕩(dang)均(jun)勻。

(4)通過(guo)減壓(ya)旋轉蒸發方法(fa)去除(chu)上述水相(xiang)溶(rong)液中殘留(liu)的四氫呋喃溶(rong)劑(ji)，制得抗壞血酸(suan)棕櫚酸(suan)酯(zhi)構建(jian)的四氧化三鐵/IR780納米(mi)探針，記(ji)錄為樣品2。

應用(yong)實施例1的樣品1探針進行細胞標記：

將所選取的小鼠腹腔巨噬細胞(RAW264.7)或骨髓間充質干細胞在2cm²細(xi)胞(bao)(bao)(bao)培養皿上進(jin)行(xing)常規細(xi)胞(bao)(bao)(bao)鋪(pu)板(5*105個細(xi)胞(bao)(bao)(bao)/ml)，24小時(shi)后(hou)加(jia)入0.02mg-2mg按照實施例1制備的樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)1探(tan)針(zhen)，標(biao)記(ji)(ji)2-6小時(shi)后(hou)棄掉標(biao)記(ji)(ji)液，加(jia)入完全培養基(ji)后(hou)繼續常規培養24-48小時(shi)后(hou)制得(de)由(you)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)1探(tan)針(zhen)標(biao)記(ji)(ji)的小鼠腹腔巨噬細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(RAW264.7)或骨髓(sui)間充質(zhi)干細(xi)胞(bao)(bao)(bao)。樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)1的動態光散射監測數據(ju)如(ru)圖(tu)(tu)6所(suo)示(shi)(shi)，該樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)1的探(tan)針(zhen)粒徑(jing)分布區間在60nm范(fan)圍內。其成像(xiang)效果如(ru)圖(tu)(tu)1所(suo)示(shi)(shi)，與對照組相(xiang)比，樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)1及樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)1標(biao)記(ji)(ji)的細(xi)胞(bao)(bao)(bao)的磁共振成像(xiang)效果好，如(ru)圖(tu)(tu)3所(suo)示(shi)(shi)。CCK-8實驗驗證其細(xi)胞(bao)(bao)(bao)毒性，如(ru)圖(tu)(tu)4所(suo)示(shi)(shi)，樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)1未見顯著細(xi)胞(bao)(bao)(bao)毒性。

應用實施例(li)2的樣品2探針(zhen)進(jin)行細胞標記(ji)：

將所選取的小鼠骨髓基質干細胞在2cm²細(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)(yang)皿上進行常規(gui)細(xi)胞(bao)(bao)鋪板(ban)(5*105個細(xi)胞(bao)(bao)/ml)，24小時后(hou)(hou)加(jia)入(ru)0.02mg-2mg按(an)照(zhao)實施(shi)例2制(zhi)備的樣(yang)品(pin)2探針，標(biao)記(ji)2-6小時后(hou)(hou)棄掉(diao)標(biao)記(ji)液，加(jia)入(ru)完(wan)全培養(yang)(yang)基后(hou)(hou)繼續常規(gui)培養(yang)(yang)24-48小時后(hou)(hou)制(zhi)得由四氧化(hua)三(san)鐵/IR780納米探針標(biao)記(ji)的小鼠骨髓基質(zhi)干細(xi)胞(bao)(bao)。其成像效果如圖(tu)1-2所(suo)示，與對照(zhao)組相比，樣(yang)品(pin)2的磁共振成像及(ji)光聲成像效果好。

實施例3，構建抗壞血酸(suan)棕櫚酸(suan)酯包裹或修(xiu)飾的(de)四氧化三鐵(tie)納米探針：

(1)將濃度為10mg/ml分散在三(san)(san)氯甲烷(wan)(wan)、正己烷(wan)(wan)或二氯甲烷(wan)(wan)中的四(si)氧化三(san)(san)鐵納米(mi)晶體(ti)(ti)，加入(ru)試(shi)劑(ji)瓶中，通過真空干燥或使用惰(duo)性(xing)氣體(ti)(ti)吹干的方(fang)式去除有機溶劑(ji)，然后(hou)稱(cheng)量(liang)納米(mi)晶體(ti)(ti)0.005重(zhong)量(liang)份(fen)；

(2)將0.025重量份的抗壞血(xue)酸棕櫚酸酯與(yu)上述干燥的0.005重量份的四氧(yang)化(hua)三鐵納米晶體于溫度(du)25-30攝氏度(du)振(zhen)蕩混合。混合后加入四氫呋喃溶液1重量份；

(3)將上述有機(ji)混合溶液在溫度25-30攝氏度下進行超(chao)聲(sheng)，超(chao)聲(sheng)功率130W，振幅(fu)65％，然后(hou)(hou)將超(chao)聲(sheng)后(hou)(hou)的(de)混合物加入到5重量份的(de)水溶液中，震(zhen)蕩均勻(yun)。

(4)通過減壓旋轉蒸發(fa)方法去除上(shang)述水相溶(rong)液中(zhong)殘留的四氫(qing)呋(fu)喃溶(rong)劑，制(zhi)得抗壞(huai)血酸棕櫚(lv)酸酯(zhi)構建的四氧(yang)化三鐵納米探針，記錄為樣品3。

樣品(pin)3的(de)動態光散(san)射(she)監(jian)測數據如圖7所示(shi)，該(gai)樣品(pin)3的(de)探針粒徑分布(bu)區間在(zai)40nm范圍(wei)內(nei)。

通(tong)過實施(shi)例(li)(li)1和實施(shi)例(li)(li)3可(ke)知，調整四(si)氧(yang)化(hua)三(san)(san)鐵(tie)(tie)納(na)(na)米(mi)晶體(ti)與抗(kang)(kang)壞(huai)血(xue)(xue)酸(suan)(suan)棕(zong)櫚(lv)酸(suan)(suan)酯(zhi)之(zhi)間的(de)(de)(de)(de)重(zhong)量(liang)(liang)份比例(li)(li)，可(ke)以調整探(tan)針粒(li)(li)(li)徑(jing)(jing)的(de)(de)(de)(de)大(da)(da)(da)小。當(dang)加大(da)(da)(da)抗(kang)(kang)壞(huai)血(xue)(xue)酸(suan)(suan)棕(zong)櫚(lv)酸(suan)(suan)酯(zhi)的(de)(de)(de)(de)重(zhong)量(liang)(liang)份時，在包裹(guo)或(huo)修(xiu)飾的(de)(de)(de)(de)過程中，由(you)于(yu)有(you)更多的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)壞(huai)血(xue)(xue)酸(suan)(suan)棕(zong)櫚(lv)酸(suan)(suan)酯(zhi)圍(wei)(wei)繞(rao)在四(si)氧(yang)化(hua)三(san)(san)鐵(tie)(tie)納(na)(na)米(mi)晶體(ti)的(de)(de)(de)(de)周圍(wei)(wei)，因(yin)此(ci)可(ke)以得到更小粒(li)(li)(li)徑(jing)(jing)的(de)(de)(de)(de)探(tan)針。當(dang)減少抗(kang)(kang)壞(huai)血(xue)(xue)酸(suan)(suan)棕(zong)櫚(lv)酸(suan)(suan)酯(zhi)的(de)(de)(de)(de)重(zhong)量(liang)(liang)份時，在包裹(guo)或(huo)修(xiu)飾的(de)(de)(de)(de)過程中，由(you)于(yu)有(you)更少的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)壞(huai)血(xue)(xue)酸(suan)(suan)棕(zong)櫚(lv)酸(suan)(suan)酯(zhi)圍(wei)(wei)繞(rao)在四(si)氧(yang)化(hua)三(san)(san)鐵(tie)(tie)納(na)(na)米(mi)晶體(ti)的(de)(de)(de)(de)周圍(wei)(wei)，四(si)氧(yang)化(hua)三(san)(san)鐵(tie)(tie)納(na)(na)米(mi)晶體(ti)便已自動聚集，形成大(da)(da)(da)顆粒(li)(li)(li)的(de)(de)(de)(de)四(si)氧(yang)化(hua)三(san)(san)鐵(tie)(tie)納(na)(na)米(mi)晶體(ti)，抗(kang)(kang)壞(huai)血(xue)(xue)酸(suan)(suan)棕(zong)櫚(lv)酸(suan)(suan)酯(zhi)包裹(guo)或(huo)修(xiu)飾大(da)(da)(da)顆粒(li)(li)(li)的(de)(de)(de)(de)四(si)氧(yang)化(hua)三(san)(san)鐵(tie)(tie)納(na)(na)米(mi)晶體(ti)，因(yin)此(ci)可(ke)以得到更大(da)(da)(da)粒(li)(li)(li)徑(jing)(jing)的(de)(de)(de)(de)探(tan)針。

以上(shang)所述僅為本發明(ming)的實施方式，并非因(yin)此(ci)限制本發明(ming)的專(zhuan)利范圍(wei)，凡是利用(yong)本發明(ming)說明(ming)書及附圖內容所作的等(deng)效結構或等(deng)效流程變換，或直接或間接運用(yong)在其(qi)他相關的技術領(ling)域，均同理包括(kuo)在本發明(ming)的專(zhuan)利保(bao)護范圍(wei)內。