白介素-18抗病毒口腔噴劑的制作方法
【專利摘要】本發明提供一種白介素-18抗病毒口腔噴劑,噴劑的成分包括重組人類白介素-18(rhIL-18)，所述rhIL-18是以第36位的ASP位點為界去除了N-端前導序列之后的rhIL-18成熟肽，其質量濃度為1-1000μg/ml，優選的，質量濃度為5-50μg/ml。本發明提供了一種具有廣譜抗病毒作用的口腔噴劑：白介素-18抗病毒口腔噴劑，可用于治療和預防病毒感染引起的上呼吸道感染疾病。
【專利說明】白介素_18抗病毒口腔噴劑

【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種口腔噴劑，具體涉及白介素-18抗病毒口腔噴劑。

【背景技術】
[0002] 病毒性傳染病如SARS、埃博拉病毒出血癥、艾滋病（AIDS)對人類極具威脅。病毒 可侵犯人體不同組織器官，感染細胞引起疾病。病毒是病原微生物中最小的一種，能在宿主 細胞內繁殖。病毒的核心是核糖核酸（RNA)或脫氧核糖核酸（DNA)，外殼是蛋白質，不具有 細胞結構。病毒感染并寄生于宿主細胞，依賴宿主細胞代謝系統進行自我復制繁殖。宿主 細胞在病毒基因提供的遺傳信息調控下合成病毒核酸和蛋白質，然后在胞漿內裝配成病毒 體，病毒體再釋出而感染其他細胞，如此反復，直至所有細胞都被病毒感染。病毒不能獨立 自營生活，必須依靠宿主的酶系統才能使其本身繁殖（復制），病毒核酸有時整合于細胞， 不易消除，因此抗病毒藥研宄發展緩慢。
[0003] 上呼吸道感染有70%?80%由病毒引起，包括流感病毒和副流感病毒、鼻病毒、 冠狀病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、埃可病毒、柯薩奇病毒等；另有20%?30%的上感由 細菌引起，細菌感染常繼發于病毒感染之后。
[0004] 人類白介素-18有很強的刺激Thl細胞產生IFN-Y的活性，故命名為 IGIF(IFN-y inducing factor), 1996年被重新命名為IL-18。具有調節人免疫系統、刺激 T細胞增殖、誘導T細胞和NK細胞產生具有殺滅病毒特性的干擾素伽瑪（IFN- Y )的功能。
[0005] 對病毒感染，目前還沒有特效藥，主要靠自身免疫來慢慢殺滅病毒。因此，免疫功 能低下的嬰幼兒、老年人、重病患者容易受病毒傳染。目前市場上還缺乏對上呼吸道感染的 特效抗病毒藥物，尤其是廣譜的抗病毒藥物。


【發明內容】

[0006] 為解決上述技術問題，本發明提供了一種具有廣譜抗病毒作用的口腔噴劑：白介 素-18抗病毒口腔噴劑，可用于治療和預防病毒感染引起的上呼吸道感染疾病。
[0007] 本發明采用的技術方案是：一種白介素-18抗病毒口腔噴劑，噴劑的成分包括重 組人類白介素-18 (rhIL-18)，所述rhIL-18是以第36位的ASP位點為界去除了 N-端前導 序列之后的rhIL-18成熟肽，其質量濃度為1-1000 y g/ml，優選的，質量濃度為5-50 y g/ ml 〇
[0008] 優選的，所述噴劑的成分還包括抗內毒素特異抗體，其抗體效價為100-10000滴 度，優選的，抗體效價為1000-3000滴度。
[0009] 優選的，所述噴劑的成分還包括抗流感病毒特異抗體。
[0010] 優選的，所述抗流感病毒特異抗體是用裂解滅活的一種或多種流感病毒的抗原 免疫動物所獲得的經純化后的特異抗體；所述的抗流感病毒抗體含量按抗體效價計為 100-50000滴度，優選的，抗體效價計為1000-5000滴度。
[0011] 優選的，所述流感病毒為HONl、HlNl、H2N2、H3N2。
[0012] 優選的，所述噴劑的成分還包括人類免疫球蛋白0. 01-10mg/ml或重組人類白蛋 白（rHSA)0.1-10mg/ml。
[0013] 優選的，所述噴劑的成分還包括葡萄糖酸氯已定或醋酸氯已定，其質量百分比濃 度為 0. 001% -0. 5%。
[0014] 優選的，所述噴劑的成分還包括pH為6-8. 5的緩沖液：濃度5-200mM，EDTA鈉鹽： 濃度l-20mM，甘油：質量百分比濃度1% -20%，或pH為6-8. 5的緩沖液：濃度5-200mM，甘 油：質量百分比濃度1% -20%，甘露醇：質量百分比濃度1% -10%。
[0015] -種制備上述白介素-18抗病毒口腔噴劑的方法，其特征在于：包括如下步驟：
[0016] 1)配制pH為6-8. 5的緩沖液；
[0017] 2)用步驟1)所制備的緩沖液配制含下述任一種或多種成分的溶液：EDTA鈉鹽、甘 油、甘露醇；
[0018] 3)用步驟2)所制備的溶液溶解或稀釋rhIL-18成熟肽及其它要添加的蛋白至終 體積的10-20%，所述蛋白為重組人類白蛋白或人類免疫球蛋白；
[0019] 4)當配方中含有一種或多種抗體時，用步驟1)所制備的緩沖液稀釋抗體溶液至 終體積的10-20% ;
[0020] 5)當配方中含有氯已定時，先用純凈水稀釋所要添加量的氯已定至產品終體積的 50%或以上；
[0021] 6)成品液制備：
[0022] 將步驟3)所制備的溶液，用步驟1)所制備的緩沖液定容至終體積，即得；
[0023] 或者混合步驟3)和步驟4)所制備的溶液，并用步驟1)所制備的緩沖液定容至終 體積，即得；
[0024] 或者混合步驟3)、步驟4)和步驟5)所制備的溶液，并用步驟1)所制備的緩沖液 定容至終體積，即得；
[0025] 7)無菌過濾后分裝于口腔噴霧瓶。
[0026] 優選的，所述步驟2)制備得到的溶液中含50% (v/v)甘油和6% (w/v)EDTA，或者 是30% (v/v)甘油和30% (w/v)甘露醇緩沖液。
[0027] 本發明具有的優點和積極效果是：本發明開發了一種具有廣譜抗病毒作用的口 腔噴劑：白介素-18抗病毒口腔噴劑；該口腔噴劑含有重組人類白介素-18,具有調節人 免疫系統、刺激T細胞增殖、誘導T細胞和NK細胞產生具有殺滅病毒特性的干擾素伽瑪 (IFN-Y)的功能，可用于治療和預防病毒（包括流感病毒）感染引起的上呼吸道感染疾病。 當與流感病毒抗體和氯已定配伍時，降低感染率達到71 %，優于單獨使用白介素-18,氯已 定和抗體的效果之和，具有協同作用。

【具體實施方式】
[0028] 下面結合具體實施例對本發明作進一步說明，但不限定本發明的保護范圍。
[0029] 實施例1
[0030] 一種白介素-18抗病毒口腔噴劑的制備方法，包括如下步驟：
[0031] 1)50%甘油-PE緩沖液制備：首先制備pH7. 4的PBS緩沖液：分別稱取磷酸二氫鉀 (KH2PO4)O. 27g，磷酸氫二鈉（Na2HPO4) I. 42g，氯化鈉（NaCl) 8g，氯化鉀（KCl)O. 2g，加去離子 水約SOOmL充分攪拌溶解，然后加入IM鹽酸調pH至7. 4,最后用去離子水定容到1L，既得； 分別取制得的PBS緩沖液50ml，甘油50ml，混勻后加入6g的EDTA-2Na，制得50 %甘油-PE 緩沖液；
[0032] 2)取rhIL-18成熟肽50mg、重組人類白蛋白（rHSA) lOOOmg，用IOOml步驟1)制得 的50 %甘油-PE緩沖液稀釋后備用；
[0033] 3)將步驟2)制得的溶液IOOml用純凈水定容至IOOOml后再加入Iml薄荷香精， 混勻，用0. 2 y的濾膜過濾除菌后分裝于噴霧瓶便制得白介素-18抗病毒口腔噴劑。
[0034] 實施例2
[0035] 一種白介素-18抗病毒復合口腔噴劑的制備方法，包括如下步驟：
[0036] 1)分別取甘油和實施例1中制得的pH7. 4的PBS緩沖液各50ml，混勻后加入6g 的已0了4-2似，制得體積比50%甘油^^緩沖液備用；
[0037] 2)取rhIL-18成熟肽50mg、重組人類白蛋白（rHSA) lOOOmg，用IOOml步驟1)制得 的50 %甘油-PE緩沖液稀釋后備用；
[0038] 3)取抗內毒素特異抗體，用PBS緩沖液稀釋并調效價至5000滴度，制備IOOrnl備 用；
[0039] 4)取抗流感病毒H1N1、H2N2、H3N2多克隆組合抗體，用PBS緩沖液稀釋并調效價 至5000滴度，制備100ml備用；
[0040] 5)將步驟2)制得的溶液100ml、步驟3)制得的溶液IOOrnl和步驟4)制得的溶液 IOOrnl混合后用PBS緩沖液定容至1000ml，再加入Iml薄荷香精混勻，用0. 2 y的濾膜過濾 除菌后分裝于噴霧瓶便制得白介素-18抗病毒復合口腔噴劑。
[0041] 實施例3
[0042] 一種抗病毒抗細菌雙效復合口腔噴劑制備方法，包括如下步驟：
[0043] 1)分別取甘露醇30g，甘油30ml，加實施例1中制得的pH7. 4的PBS緩沖液至 100ml，混勻制得體積比30%甘油-甘露醇緩沖液；
[0044] 2)取rhIL-18成熟肽50mg、人類免疫球蛋白100mg，用IOOrnl步驟1)制得的30% 甘油-甘露醇緩沖液稀釋后備用；
[0045] 3)取抗內毒素特異抗體，用PBS緩沖液稀釋并調效價至5000滴度，制備IOOrnl備 用，
[0046] 4)取抗流感病毒H1N1、H2N2、H3N2多克隆組合抗體，用PBS緩沖液稀釋并調效價 至5000滴度，制備100ml備用，
[0047] 5)取市購20%葡萄糖酸氯已定2. 5ml，加到700ml純凈水中混勻備用；
[0048] 6)將步驟2)制得的溶液100ml、步驟3)制得的溶液100ml、步驟4)制得的溶液 IOOrnl預先混合后，再與步驟5)制得的溶液700ml混合，最后加入Iml薄荷香精，混勻，用 〇. 2 y的濾膜過濾除菌后分裝于噴霧瓶便制得抗病毒抗細菌雙效復合口腔噴劑。
[0049] 對比例1
[0050] 一種抗流感病毒抗體口腔噴劑的制備方法，包括如下步驟：
[0051] 1)分別取甘露醇30g，甘油30ml，加實施例1中制得的pH7. 4的PBS緩沖液至 100ml，混勻制得體積比30%甘油-甘露醇緩沖液；
[0052] 2)取重組人類白蛋白（rHSA) lOOOrng，用IOOrnl步驟1)制得的30%甘油-甘露醇 緩沖液稀釋后備用；
[0053] 3)取抗流感病毒H1N1、H2N2、H3N2多克隆組合抗體，用PBS緩沖液稀釋并調效價 至5000滴度，制備IOOml備用；
[0054] 4)將步驟2)制得的溶液IOOml和步驟3)制得的溶液IOOml混合后，用PBS緩沖 液定容至IOOOml，再加入Iml薄荷香精混勻，用0. 2y的濾膜過濾除菌后分裝于噴霧瓶便制 得抗流感病毒口腔噴劑。
[0055] 對比例2
[0056] -種抗細菌口腔噴劑的制備方法，包括如下步驟：
[0057] 1)分別取甘露醇30g，甘油30ml，加實施例1中制得的pH7. 4的PBS緩沖液至 100ml，混勻制得體積比30%甘油-甘露醇緩沖液；
[0058] 2)取人類免疫球蛋白100mg，用IOOml步驟1)制得的30%甘油-甘露醇緩沖液稀 釋后備用；
[0059] 3)取市購20%葡萄糖酸氯已定2. 5ml，加到700ml純凈水中混勻備用；
[0060] 4)將步驟2)制得的溶液IOOml與步驟3)制得的溶液700ml混勻后，加入Iml薄 荷香精，混勻，用〇. 2 y的濾膜過濾除菌后分裝于噴霧瓶便制得抗病毒抗細菌雙效復合口 腔噴劑。
[0061] 實施例4
[0062] 比較不同配方口腔噴劑在預防感冒（包括病毒性和細菌性感冒）中的效果：
[0063] 在感冒高發期，從幼兒園挑選4-5歲志愿者（經家長同意）120名（不分性別），隨 機分成6組（如表1所示），每組20名兒童。給組1-5的孩子分別用實施例1-5所制備的 口腔噴劑，給組6 (對照組）的孩子用生理鹽水口腔噴劑，每天噴口腔4次，每次3-4噴；連 續進行20天，每天觀察每組兒童有否感冒癥狀：發燒、咽喉腫痛、咳嗽、流鼻涕等癥狀并記 錄。試驗結果如表1所示：對照組中有14人感染，感染率70%;組1中有11人感染上感冒， 感染率55% ;組2中有5人感染，感染率25% ;組3中有4人感染，感染率20% ;組4中有 9人感染，感染率45% ;組5中有13人感染，感染率65%。顯然，組1-4的口腔噴劑均有一 定的預防感冒的作用；尤其是，實施例3的復合口腔噴劑有顯著預防感冒效果。而且，與對 照組相比，實施例3的功效（降低感染率71 % )大于實施例1 (降低感染率21 % ) +對比例 1 (降低感染率36% ) +對比例2 (降低感染率7% )的總和，這說明有效成分rhIL-18、流感 抗體及氯已定的混合使用有協同作用，比單獨使用效果更好。
[0064] 表1.比較不同配方口腔噴劑的預防感冒功效：

【權利要求】
1. 一種白介素-18抗病毒口腔噴劑，其特征在于：所述噴劑的成分包括重組人類白介 素-18 (rhIL-18)，所述rhIL-18是以第36位的ASP位點為界去除了 N-端前導序列之后的 rhIL-18成熟肽，其質量濃度為1-1000 y g/ml，優選的，質量濃度為5-50 y g/ml。
2. 根據權利要求1所述的白介素-18抗病毒口腔噴劑，其特征在于：還包括抗內毒素 特異抗體，其抗體效價為100-10000滴度，優選的，抗體效價為1000-3000滴度。
3. 根據權利要求1或2所述的白介素-18抗病毒口腔噴劑，其特征在于：還包括抗流 感病毒特異抗體。
4. 根據權利要求3所述的白介素-18抗病毒口腔噴劑，其特征在于：所述抗流感病毒 特異抗體是用裂解滅活的一種或多種流感病毒的抗原免疫動物所獲得的經純化后的特異 抗體；所述的抗流感病毒抗體含量按抗體效價計為100-50000滴度，優選的，抗體效價計為 1000-5000 滴度。
5. 根據權利要求4所述的白介素-18抗病毒口腔噴劑，其特征在于：所述流感病毒為 H0N1、H1N1、H2N2、H3N2。
6. 根據權利要求1-5任一項所述的白介素-18抗病毒口腔噴劑，其特征在于：還包括 人類免疫球蛋白〇? 〇l_l〇mg/ml或重組人類白蛋白（rHSA)O. l-10mg/ml。
7. 根據權利要求6所述的白介素-18抗病毒口腔噴劑，其特征在于：還包括葡萄糖酸 氯已定或醋酸氯已定，其質量百分比濃度為0. 001 % -0. 5%。
8. -種權利要求1-7任一項所述的白介素-18抗病毒口腔噴劑的制備方法，其特征在 于：包括如下步驟： 1) 配制pH為6-8. 5的緩沖液； 2) 用步驟1)所制備的緩沖液配制含下述任一種或多種成分的溶液：EDTA鈉鹽、甘油、 甘露醇； 3) 用步驟2)所制備的溶液溶解或稀釋rhIL-18成熟肽及其它要添加的蛋白至終體積 的10-20%，所述蛋白為重組人類白蛋白或人類免疫球蛋白； 4) 當配方中含有一種或多種抗體時，用步驟1)所制備的緩沖液稀釋抗體溶液至終體 積的 10-20% ; 5) 當配方中含有氯已定時，先用純凈水稀釋所要添加量的氯已定至產品終體積的 50%或以上； 6) 成品液制備： 將步驟3)所制備的溶液，用步驟1)所制備的緩沖液定容至終體積，即得； 或者混合步驟3)和步驟4)所制備的溶液，并用步驟1)所制備的緩沖液定容至終體 積，即得； 或者混合步驟3)、步驟4)和步驟5)所制備的溶液，并用步驟1)所制備的緩沖液定容 至終體積，即得； 7) 無菌過濾后分裝于口腔噴霧瓶。
9. 根據權利要求8所述的白介素-18抗病毒口腔噴劑的制備方法，其特征在于：所述 步驟2)制備得到的溶液中含50% (v/v)甘油和6% (w/v)EDTA，或者是30% (v/v)甘油和 30% (w/v)甘露醇緩沖液。
【文檔編號】A61P11/00GK104474534SQ201410811340
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年12月22日 優先權日:2014年12月22日
【發明者】鄒潮 申請人:哈德遜（天津）生物技術有限責任公司