專利名稱：一種負載小干擾rna的納米級脂質微泡超聲造影劑及制備方法
技術領域：
本發明涉及超聲分子影像學和生物醫學工程領域，具體地，涉及一種負載小干擾RNA (siRNA)的納米級脂質微泡超聲造影劑及其制備方法。
背景技術：
超聲造影作為超聲成像技術中的第三次革命，為多種疾病特別是腫瘤性疾病的診斷及鑒別診斷提供了有效的依據。隨著超聲成像技術的快速發展，發現微泡一方面在超聲造影中能夠作為顯影劑，另一方面能夠作為超聲空化效應的空化核，降低空化效應的閾值，促進基因片段的靶向遞送。大量研究證明，以微氣泡作為空化核心，在低頻率高能量超聲輻照下，能夠產生空化效應，在此過程中釋放出巨大的能量、高溫、高壓和噴射流。在空化效應的作用下，微泡周圍的細胞膜被瞬間打開，產生半衰期為20至50毫秒的裂孔，然后迅速閉合，這種效應被稱為“聲孔效應”。通過被打開聲孔的細胞膜，細胞周圍的基因片段在空化效應的作用下被動地遞送到胞漿中，實現基因的細胞遞送。這種通過空化效應和聲孔效應實現的靶向基因遞送體系稱為超聲靶向微泡破壞(UTMD)技術。目前，應用于UTMD技術進行基因遞送的微泡主要是商品化的微泡造影劑，如聲諾維等。但是，商品化的微泡具有作為基因遞送載體(特別是腫瘤靶向基因遞送載體)存在著明顯的不足:①直徑過大，因目前市面上的超聲造影劑都是微米級別的，只能局限于血管系統內，無法通過腫瘤血管內皮間隙到達腫瘤細胞周圍不能負載基因片段，由于市面上的微泡均為表面帶負電的微泡，而基因片段(質粒DNA，siRNA等)表面均帶有負電，二者無法有效結合。因此，目前商品化的微泡超聲造影劑不能稱為嚴格意義上的基因載體。為了高效遞送基因片段及實現腫瘤靶向基因傳輸，有必要制備一種新型的超聲造影劑作為基因載體，并同時解決一下技術難題。①粒徑小，處于納米級，能夠通過腫瘤增寬的血管內皮間隙(380 780 nm)實現造影劑的腫瘤被動祀向聚集；②能夠高效負載基因片段，使其負載在微泡造影劑內，實現造影劑與基因片段的同步遞送；③具有良好的增強超聲顯影能力，在診斷超聲條件下實現超聲造影的應用；④具有超聲敏感性，在低頻高能量超聲輻照的條件下激發微泡的空化效應，實現基因片段的靶向釋放。

發明內容
本發明的目的在于針對目前現有的超聲造影劑作為siRNA載體存在的不足，提供一種能夠負載siRNA的納米級脂質微泡超聲造影劑(下文簡稱siRNA納米微泡)。本發明的另一目的在于提供上述微泡造影劑的制備方法。本發明通過以下技術方案來實現上述目的:
一種負載siRNA的納米級脂質微泡超聲造影劑，所述造影劑能夠高效負載siRNA,siRNA被負載在整個微泡結構的表面， 與納米級脂質微泡超聲造影劑形成整體；所述負載siRNA的納米級脂質微泡的直徑為200 500 nm。
如上所述造影劑是通過正負電荷吸引力，將表面帶正電的siRNA納米膠束負載在表面帶負電的納米級脂質微泡超聲造影劑表面，形成一個整體結構。一種如上所述負載siRNA的納米級脂質微泡超聲造影劑的制備方法，具體包括如下步驟:
51.以磷脂成分二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和二棕櫚酰磷脂酸為膜材，通過薄膜-水化法制備得到帶負電的納米級脂質微泡超聲造影劑；
52.將聚乙二醇(Polyethyeneglycol,可簡寫為PEG)與聚賴氨酸(Polylysine,可簡寫為PLL)組成兩嵌段陽離子共聚物與siRNA以氮磷比(共聚物的含氮基團與siRNA的含磷基團的摩爾比)的比值為21:1時進行自主裝，得到帶正電的siRNA納米膠束；
53.在SI得到的帶負電的納米級脂質微泡中加入過量S2中帶正電的siRNA納米膠束，孵育制備得到負載siRNA的納米級脂質微泡超聲造影劑。具體地，步驟SI中所述薄膜-水化法制備得到帶負電的納米級脂質微泡超聲造影劑的步驟如下:
511.將磷脂成分二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)，二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)溶解于氯仿中并置于培養皿中，
512.在通風櫥中待氯仿自然揮發形成磷脂薄膜，加入雙蒸水37飛(TC水化0.5^2小時后，將脂質溶液轉移到離心管中，利用超聲破碎儀進行聲振廣10分鐘，同時通入八氟丙烷氣體制備脂質微泡；
513.將微泡液靜置10 30分鐘，然后以1000 2000rpm離心1 10分鐘，吸取下層乳白色液體即為所制備的表面帶負電的納米微泡。優選地，步驟SI中所述二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和二棕櫚酰磷脂酸的重量份數比為18:1:1飛。更為優選地，步驟SI中所述二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和二棕櫚酰磷脂酸的重量份數比為18:1:1。優選地，為除去沒有結合到微泡表面的siRNA膠束，步驟S3中所述孵裕后可利用高速離心法純化產物，即用2000 rpm離心30分鐘，棄去下層清液，加入4毫升雙蒸水重懸，反復洗滌三遍，最后用I毫升磷酸鹽緩沖液(PH= 7.4)重懸得終產物。進一步地，SI中所述帶負電的納米級脂質微泡內含八氟丙烷氣體。優選地,步驟S2中所述聚乙二醇(Polyethyeneglycol,可簡寫為PEG)與聚賴氨酸(Polylysine，可簡寫為PLL)組成兩嵌段陽離子共聚物(可簡寫成PEG-PLL)，其中聚乙二醇的分子量為50(Γ3500 ;步驟S2中所述聚賴氨酸的平均分子量為600(Γ10000，具體合成方法如下:S21.大分子引發劑α-甲基-ω-氨基的聚(乙二醇)(HiPEG-NH2)是參考文獻方法由甲氧基聚乙二醇(mPEG-OH)制備[Neal JC, Stolnik S，Schacht E, Kenawy ER, GarnettMC, Davis SS, IIIum L.Pharm Sci 1998; 87: 1242-1248] ;S22.芐氧羰基保護賴氨酸酸Hf (Benzyloxycarbonyl-L-Lysine N-carboxylic anhydride, CBLLys- NCA)是按照文獻方法(Daly HW, Poche D.Tetrahedron Lett 1988, 29: 5859-5862; Zhang XQ, Li JG,Li ff, Zhang AF.Biomacromolecules 2007, 8: 3557-3567)由賴氛酸鹽酸鹽(L-Lysine
HC1，中國國藥化學試劑有限公司)合成；S23.聚(乙二醇)-b-聚(芐氧羰基-賴氨酸)(mPEG-b-PCBLLys)嵌段共聚物是以α -甲基-ω -氨基的聚(乙二醇)mPEG_NH2作為大分子引發劑，通過引發芐氧羰基保護的賴氨酸酸酐的開環聚合反應合成；具體步驟為，在氬氣保護下，向加有磁力攪拌子的干燥的反應瓶中，加入α -甲基-ω-氨基的聚(乙二醇)0.5^2克和芐氧羰基保護賴氨酸酸酐6 10克，用無水二甲基甲酰胺溶解后，放在33 37 °C油浴反應2 4天；反應結束后，將反應體系用乙醚沉淀，過濾，洗滌，室溫下在真空干燥，得到的白色粉末；
S24.雙嵌段共聚物聚(乙二醇)-b-聚(L-賴氨酸)(mPEG-b-PLLys)的制備:將S23中共聚物聚(乙二醇)-b-聚(芐氧羰基-賴氨酸)溶解在三氟乙酸中，冰浴條件下，加入溴化氫的冰醋酸溶液；室溫下攪拌后，用過量乙醚洗滌反應體系洗滌；在蒸干溶劑后，室溫下在真空干燥，得到灰色的終產物粉末。本發明的有益效果是:
通過本方法制備得到的負載siRNA的納米級脂質微泡超聲造影劑的粒徑小，處于納米級，能夠通過腫瘤增寬的血管內皮間隙(380 780 nm)實現造影劑的腫瘤被動靶向聚集。通過本方法制備得到的負載siRNA納米級脂質微泡超聲造影劑能夠高效負載siRNA，使其負載在微泡造影劑內，實現造影劑與siRNA的同步遞送。在體內輸送siRNA的同時，通過超聲造影的方法能夠實現siRNA的分布監測。所述負載siRNA納米級脂質微泡超聲造影劑具有良好的增強超聲顯影能力，在診斷超聲條件下實現超聲造影的應用；具有超聲敏感性，在低頻高能量超聲輻照的條件下激發微泡的空化效應，實現siRNA的靶向釋放。能夠實現腫瘤體內顯像和治療的一體化。


圖1.對siRNA納米微泡做透射電子顯微鏡檢測的結果。圖2.對siRNA納米微泡進行超聲顯影能力檢測和超聲輻照敏感性的檢測；A和C分別表示siRNA納米微泡與納米微泡在超聲造影模式下的顯影效能；B和D分別表示siRNA納米微泡與納米微泡經低頻超聲輻照后在超聲造影模式下的顯影效果。圖3.siRNA納米微泡在低頻超聲輻照下細胞的siRNA轉染效能檢測；超聲(+ )為熒光物質Cy3標記siRNA的siRNA納米微泡；超聲(一)為Cy3標記的siRNA但未經超聲輻照；對照為只加入Cy3標記的siRNA但未經超聲輻照處理。圖4.激光共聚焦顯微鏡檢測siRNA的細胞內分布結果；超聲(+ )為熒光物質Cy3標記siRNA的siRNA納米微泡；超聲(一)為Cy3標記的siRNA但未經超聲輻照；對照為只加入siRNA但未經超聲輻照處理。
具體實施例方式以下結合實施例來進一步解釋本發明，但實施例并不對本發明做任何形式的限定。為了敘述方便，負載siRNA納米級脂質微泡超聲造影劑簡稱為siRNA納米微泡；帶負電的納米級脂質微泡超聲造影劑簡稱為納米微泡；帶正電的siRNA納米膠束簡稱siRNA膠束。實施例1
S1.表面帶負電的納米級脂質微泡超聲造影劑(下文簡稱納米微泡)制備:利用薄膜-水化法以磷脂為原料制備納米微泡。將磷脂成分二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)，二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)按重量份數18:1:1溶解于氯仿中并置于直徑9厘米的培養皿，在通風櫥中待氯仿自然揮發形成磷脂薄膜。加入4毫升雙蒸水37 °C水化I小時后，將脂質溶液轉移到50毫升離心管中，利用超聲破碎儀進行聲振5分鐘，同時通入八氟丙烷氣體制備脂質微泡。將微泡液靜置10分鐘，然后以1000 rpm離心5分鐘，吸取下層乳白色液體即為所制備的表面帶負電的納米微泡。S2.表面帶正電的siRNA納米膠束的制備:
利用聚乙二醇(Polyethyeneglycol,可簡寫為PEG)與聚賴氨酸(Polylysine,可簡寫為PLL)組成兩嵌段陽離子共聚物(可簡寫成PEG-PLL)，其中PEG和PLL的平均分子量為2000及8000。將PEG-PLL與siRNA以氮磷比(共聚物的含氮基團與siRNA的含磷基團的摩爾比)比值為5:1進行配比，二者在室外下孵育20分鐘，即可制備成帶正電和的siRNA納米膠束。聚乙二醇(Polyethyeneglycol,可簡寫為PEG)與聚賴氨酸(Polylysine,可簡寫為PLL)組成兩嵌段陽離子共聚物的制備方法如下:
S21.大分子引發劑α-甲基-ω-氨基的聚(乙二醇)(HiPEG-NH2)是參考文獻方法由甲氧基聚乙二醇(mPEG-OH)制備。[Neal JC, Stolnik S，Schacht E, Kenawy ER, GarnettMC, Davis SS, IIIum L.Pharm Sci 1998; 87: 1242-1248] ;S22.芐氧羰基保護賴氨酸酸Hf (Benzyloxycarbonyl-L-Lysine N-carboxylic anhydride, CBLLys- NCA)是按照文獻方法(Daly HW, Poche D.Tetrahedron Lett 1988, 29: 5859-5862; Zhang XQ, Li JG,Li ff, Zhang AF.Biomacromolecules 2007, 8: 3557-3567)由賴氛酸鹽酸鹽(L-Lysine
HC1，中國國藥化學試劑有限公司)合成；S23.聚(乙二醇)-b-聚(芐氧羰基-賴氨酸)(mPEG-b-PCBLLys)嵌段共聚物是以α -甲基-ω -氨基的聚(乙二醇)mPEG_NH2作為大分子引發劑，通過引發芐氧羰基保護的賴氨酸酸酐的開環聚合反應合成；具體步驟為，在氬氣保護下，向加有磁力攪拌子的 干燥的反應瓶中，加入計算量的mPEG-NH2 (1.0 g, 0.5 mmol)和CBLLys-NCA (8.4 g, 27.5 mmol),用20 ml無水二甲基甲酰胺(DMF)溶解后，放在35 V油浴反應3天。反應結束后，將反應體系用乙醚沉淀，過濾，洗滌，室溫下在真空干燥，得到的白色粉末7.6克(92%);S24.雙嵌段共聚物聚(乙二醇)-b-聚(L-賴氨酸)(mPEG-b-PLLys)是將共聚物mPEG-b-PCBLLys (2.0 g)溶解在5 ml三氟乙酸中，0° C條件下，加入2 ml溴化氫的冰醋酸溶液(33%)。室溫下攪拌2小時后，用過量乙醚洗滌反應體系4次洗。在蒸干溶劑后，室溫下在真空干燥，得到灰色的粉末I克(90%)。S3.siRNA納米微泡的制備:
通過自主裝制備siRNA納米微泡。在上述步驟SI的負電荷納米微泡中加入過量步驟S2的正電荷siRNA納米膠束，室溫孵育20分鐘，可制備出siRNA納米微泡。為除去沒有結合到微泡表面的siRNA膠束，利用高速離心法純化產物，即用2000 rpm離心30分鐘，棄去下層清液，加入4毫升雙蒸水重懸，反復洗滌三遍，最后用I毫升磷酸鹽緩沖液(pH= 7.4)重懸得終產物。本發明基于利用納米微泡來負載siRNA，所得中間產物和最終產物用動態光散射法測定微泡的直徑和表面電位；通過透射電子顯微鏡觀察siRNA納米微泡的形態和結構；利用離體超聲造影技術檢測造影劑的超聲顯影能力和低頻超聲輻照產生空化效應的敏感性；最后通過流式細胞計數和激光共聚焦顯微鏡檢測造影劑在低頻超聲輻照下對細胞的siRNA轉染效能和分布。實施例2中間產物和最終產物的直徑和表面電位:
將實施例1所得中間產物(納米微泡、siRNA膠束)和終產物(siRNA納米微泡)利用動態光散射法來檢測其各自的直徑和表面電位。結果(結果數據以均數土標準誤表示)顯示納米微泡、siRNA膠束、siRNA納米微泡的直徑分別為436.8±5.7 nm、66.8±2.8 nm、476.0±6.1nm ;而三者的表面電位為-18.4±0.2 mV;23.4±1.1 mV、15.3±2.7 mV。直徑大小和表面電位驗證了制備siRNA納米微泡的聚合過程。實施例3 siRNA納米微泡的形態結構檢測:
為進一步證實實施例1制備所得siRNA納米微泡的形態和結構，采用透射電子顯微鏡來檢測，測試結果見圖1。通過測試可見siRNA納米微泡呈圓形或類圓形，直徑分布大約在200 500 nm，直徑分布均勻，未見明顯聚集，表面可見在制備透射電子顯微鏡過程抽真空引起的微泡表面凹痕。在高放大倍數下可見(圖1左上角)，造影劑呈類圓形，表面不光滑，表面可見大量直徑約50 70 nm的小siRNA膠束負載在微泡表面，形成一個整體結構。實施例4 siRNA納米微泡離體超聲顯影效能及低頻超聲輻照敏感性的檢測: 為證明實施例1制備所得siRNA納米微泡與納米微泡具有相似的超聲顯影能力和低
頻超聲敏感性，本實施例特意制備帶圓形孔洞的瓊脂糖模型(瓊脂糖在超聲下基本呈無回聲)來檢測造影劑的基本聲學性質，結果如圖2所示。圖2A和C分別顯示在瓊脂糖模型中，siRNA納米微泡和納米微泡在超聲造影模式中的顯影情況，二者均表現出明顯的強回聲圖像，說明負載siRNA后，納米微泡同樣有良好的超聲顯影能力。由于要實現siRNA納米微泡在細胞上的轉染效果，必須利用低頻超聲組照siRNA納米微泡使其產生空化效應，因此設計了低頻超聲輻照敏感性試驗來驗證siRNA納米微泡的空化效應情況。圖2B和D則分別顯示，siRNA納米微泡及納米微泡在低頻超聲輻照后，均由原來的強回聲轉變為無回聲。說明siRNA納米微泡與納米微泡相似，在低頻超聲輻照后發生了空化效應，微泡破壞，驗證了siRNA納米微泡的超聲敏感性。實施例5實施例1制備所得siRNA納米微泡在低頻超聲輻照下細胞的siRNA轉染效能檢測:
在6孔板中鋪種腫瘤細胞，加入用熒光物質Cy3 (能夠發出紅色熒光)標記siRNA的siRNA納米微泡，然后用低頻超聲輻照，實現Cy3標記的siRNA在腫瘤細胞內轉染。利用只加入siRNA納米微泡但未經超聲輻照的細胞作為實驗對照，只加入Cy3標記的siRNA作為陰性對照。將各組細胞用胰酶消化收集并用磷酸鹽緩沖液洗滌三次，加入磷酸鹽緩沖液重懸細胞后進行流式細胞計數檢測。檢測結果如圖3所示，經過超聲輻照后，siRNA的轉染率為50.3±2.5 %，而未經超聲輻照的實驗對照組轉染率為5.0±0.2 %。結果說明siRNA納米微泡本身的siRNA轉染能力并不高,但是在低頻超聲福照下有較高的siRNA轉染效能,符合作為siRNA載體的要求。實施例6激光共聚焦顯微鏡檢 測siRNA的細胞內分布:
要實現siRNA的功能，必須先確保siRNA被成功輸送到細胞漿中，因此，本實施例利用激光共聚焦顯微鏡來檢測實施例1制備所得siRNA納米微泡在低頻超聲輻照下的基因輸送效果。將細胞鋪種與激光共聚焦皿上，加入用Cy3標記siRNA的siRNA納米微泡，然后進行超聲輻照。同時，只加入siRNA納米微泡而不進行超聲輻照的細胞作為實驗對照組，而只加入Cy3標記的裸siRNA作為陰性對照組。結果如圖4所示，siRNA納米微泡經超聲輻照后，細胞漿內可見大量的紅色熒光(Cy3)，明顯較實驗對照組多，而細胞核中未見任何紅色熒光顯示。該結果說明siRNA納 米微泡經超聲輻照后，能夠有效地將siRNA遞送到細胞漿。
權利要求
1.一種負載SiRNA的納米級脂質微泡超聲造影劑，其特征在于，SiRNA被負載在微泡結構的表面，所述負載siRNA的納米級脂質微泡的直徑為200 500 nm。
2.一種負載siRNA的納米級脂質微泡超聲造影劑的制備方法，其特征在于，所述造影劑是通過正負電荷吸引力，將表面帶正電的siRNA納米膠束負載在表面帶負電的納米級脂質微泡超聲造影劑表面，形成一個整體結構。
3.一種負載siRNA的納米級脂質微泡超聲造影劑的制備方法，其特征在于包括如下步驟:磷脂成分二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和二棕櫚酰磷脂酸為膜材，通過薄膜-水化法制備得到帶負電的納米微泡超聲造影劑；聚乙二醇與聚賴氨酸組成兩嵌段陽離子共聚物與siRNA以氮磷比的比值為2^8:1時進行自主裝，得到帶正電的siRNA納米膠束；所述氮磷比是指共聚物的含氮基團與siRNA的含磷基團的摩爾比；SI得到的帶負電的納米級脂質微泡中加入過量S2中帶正電的siRNA納米膠束，孵育制備得到負載siRNA的納米級脂質微泡超聲造影劑。
4.根據權利要求3所述制備方法，其特征在于，SI中所述二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和二棕櫚酰磷脂酸的重量份數比為18:1:1飛。
5.根據權利要求4所述制備方法，其特征在于，SI中所述二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和二棕櫚酰磷脂酸的重量份數比為18:1:1。
6.根據權利要求3所述制備方法，其特征在于，SI中所述薄膜-水化法具體步驟如下:磷脂成分二棕櫚酰磷脂酰膽堿，`二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和二棕櫚酰磷脂酸溶于氯仿中；氯仿自然揮發形成磷脂薄膜后加入雙蒸水37飛(TC水化0.5^2小時后，超聲聲振廣10分鐘，同時通入八氟丙烷氣體制備脂質微泡；微泡液靜置1(Γ30分鐘，離心，吸取下層乳白色液體即為所制備的表面帶負電的納米級脂質微泡超聲造影劑。
7.根據權利要求3所述制備方法，其特征在于，SI中所述帶負電的納米級脂質微泡內含八氟丙烷氣體。
8.根據權利要求3所述制備方法，其特征在于，S2中所述聚乙二醇的分子量為500^3500 ;所述聚賴氨酸的平均分子量為6000 10000。
9.根據權利要求3所述制備方法，其特征在于，S2中所述聚乙二醇與聚賴氨酸組成兩嵌段陽離子共聚物的具體步驟為:甲氧基聚乙二醇制備得到大分子引發劑α-甲基-ω-氨基的聚(乙二醇)；賴氨酸鹽酸鹽合成芐氧羰基保護賴氨酸酸酐；(乙二醇)-b-聚(芐氧羰基-賴氨酸)嵌段共聚物的制備:以0-甲基- -氨基的聚(乙二醇)作為大分子引發劑，通過引發芐氧羰基保護的賴氨酸酸酐的開環聚合反應合成的；具體步驟為在氬氣保護下，向反應瓶中，加入α-甲基-ω-氨基的聚(乙二醇)0.5^2克和芐氧羰基保護賴氨酸酸酐6 10克，用無水二甲基甲酰胺溶解后，放在33 37 °C油浴反應2 4天；反應結束后，將反應體系用乙醚沉淀，過濾，洗滌，室溫下在真空干燥，得到的白色粉末；S24.雙嵌段共聚物聚(乙二醇)-b-聚(L-賴氨酸)的制備:將S23中共聚物聚(乙二醇)-b_聚(芐氧羰基-賴氨酸)溶解在三氟乙酸中，冰浴條件下，加入溴化氫的冰醋酸溶液；室溫下攪拌后，用過量乙醚洗滌反應體系洗滌；在蒸干溶劑后，室溫下在真空干燥，得到灰色的終產物粉末。
10.根據權利要求3所述制備方法，其特征在于，S3中所述孵育后利用高速離心法純化產物，即用500 3000 rpm離心2(Γ40分鐘,棄去下層清液,加入雙蒸水重懸,反復洗漆三遍，最后用磷酸鹽緩 沖液重懸得終產物。
全文摘要
本發明公開了一種負載小干擾RNA(siRNA)的納米級脂質微泡超聲造影劑及制備方法。所述負載siRNA的脂質微泡由磷脂成分二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)和二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)按重量份數18:1:1制備成微泡(內涵八氟丙烷氣體)，再與由聚乙二醇—聚賴氨酸(PEG-PLL)包裹的siRNA納米膠束組裝形成。本發明中負載siRNA的脂質微泡為納米級，有顯著的超聲顯像效果，在低頻超聲輻照下能產生明顯的siRNA細胞轉染效能。可望在進一步超聲診斷及基因治療領域要重大的研究價值和應用前景。
文檔編號A61K48/00GK103100093SQ20131002451
公開日2013年5月15日 申請日期2013年1月23日 優先權日2013年1月23日
發明者鄭榮琴, 尹庭輝, 帥心濤 申請人:中山大學附屬第三醫院