抗cgrp組合物及其用途
【專利摘要】本發明是針對于對CGRP具有結合特異性的抗體和其片段。本發明的另一個實施方案涉及本文所述的抗體和其結合片段，其包含本文所述的VH、VL和CDR多肽的序列，以及編碼其的多核苷酸。本發明還涵蓋抗CGRP抗體和其結合片段綴合于一種或多種功能性或可檢測部分的綴合物。本發明還涵蓋制造所述抗CGRP抗體和其結合片段的方法。本發明的實施方案還涉及抗CGRP抗體和其結合片段用于診斷、評估以及治療與CGRP相關的疾病和病癥的用途。
【專利說明】抗CGRP組合物及其用途
[0001]本申請要求了 2011年5月20日提交的名稱為“抗CGRP組合物及其用途(ANT1-CGRP COMPOSITIONS AND USE THEREOF) ” 的美國臨時申請 N0.61/488，660 (代理人備案N0.67858.730300 )的權益，該臨時申請特此以全文引用的方式并入。
[0002]本申請包含通過EFS-Web以ASCII格式提交的序列表并且特此以全文引用的方式并入。所述ASCII副本創建于2012年5月18日，命名為67858o730301.txt并且大小為203，815 字節。
[0003]發明背景
發明領域
[0004]本發明涉及對人類降鈣素基因相關肽(Calcitonin Gene Related Peptide,下文為“CGRP”)具有結合特異性的抗體和其片段(包括Fab片段)。本發明還涉及篩選與CGRP相關的疾病和病癥的方法，以及通過施用所述抗體或其片段來預防或治療與CGRP相關的疾病和病癥的方法。
[0005]相關背景描述
[0006]降鈣素基因相關肽(CGRP)是以長度為37個氨基酸的多功能神經肽形式產生。兩種形式的CGRP，即CGRP-α和CGRP-β形式，存在于人類中并且具有類似的活性。CGRP-a與CGRP-β在人類中相差三個氨基酸，并且是源自不同的基因。CGRP肽家族包括胰淀素(amyl in)、腎上腺髓質素(adrenomedullin)以及降鈣素，但各自具有不同的受體和生物活性。Doods, H., Curr.0p.1nvest.Drugs, 2 (9): 1261-68 (2001)。
[0007] CGRP是從眾多組織如三叉神經中釋放，當被活化時在腦膜中釋放神經肽，從而介導神經源性炎癥，其特征為血管舒張、血管滲漏以及肥大細胞退化。Durham, P.L.，New Eng.J.Med.，350(11):1073-75(2004)。CGRP 的生物作用是通過 CGRP 受體(CGRP-R)介導，該CGRP受體由七次跨膜成分結合受體相關膜蛋白(RAMP)組成。CGRP-R進一步需要受體成分蛋白(RCP)的活性，該受體成分蛋白(RCP)對于通過G蛋白與腺苷酸環化酶有效偶聯以及cAMP 的產生是必要的。Doods, Η.，Curr.0p.1nvest.Drugs, 2 (9): 1261-68(2001)。
[0008]偏頭痛是影響美國約10%成年群體的神經血管病癥，并且典型地伴隨著劇烈的頭痛。約20-30%的偏頭痛患者經歷先兆，包括先于事件和/或伴隨事件的局灶性神經現象。認為CGRP在偏頭痛發展中起到顯著作用。例如，在偏頭痛的頭痛期間在頸靜脈血中鑒定出血漿CGRP濃度升高，排除其他神經肽。此外，根據Arulmozhi等人，在偏頭痛患者中鑒定出下列:(1)血漿CGRP濃度與偏頭痛之間存在強相關性；(2)輸注CGRP產生類偏頭痛的頭痛；(3)基線CGRP水平升高；以及(4)在偏頭痛發作期間血漿CGRP水平的變化與頭痛強度顯著相關。Arulmozhi, D.Κ.等人，Vas.Pharma.，43:176-187 (2005)。
[0009]一種有效的偏頭痛治療是施用曲坦類(triptans)，它們是基于色胺的藥物家族，包括舒馬曲坦(sumatriptan)和利扎曲坦(rizatriptan)。這個家族的成員對包括5-HT1B、5-HT1D以及5-HT1f在內的多種5-羥色胺受體具有親和力。這個家族成員的藥物選擇性地收縮腦血管，但也對冠狀血管造成血管收縮作用。Durham，P.L.，New Eng.J.Med.，350(11): 1073-75(2004)。在確定患有心臟病的患者中在施用后存在冠狀動脈痙攣的理論風險，并且在服用曲坦類后心臟事件可能很少發生。應注意，冠狀動脈血管疾病患者
[0010]類似地，通常可能通過施用某些麻醉劑或非留體抗炎藥物(NSAID)來解決疼痛問題。然而，這些治療的施用可能以某些負面后果為代價。NSAID有可能造成腎衰竭、腸道出血以及肝功能障礙。麻醉劑有可能造成惡心、嘔吐、精神功能受損以及成癮。因此，期望鑒定出替代的疼痛療法以避免這些負面后果中的某些。
[0011]認為CGRP在包括但不限于偏頭痛、頭痛以及疼痛的許多疾病和病癥中起作用。
[0012]例如，據報道CGRP可能與膀胱過度活動癥相關或甚至在膀胱過度活動癥中起到病因作用。CGRP可能與膀胱過度活動癥病狀相關的證據包括以下事實:CGRP存在于泌尿道、DRG以及脊髓中(Wharton等人，1986Neurosci (3):727);以及C纖維傳入對于傳送排尿中所涉及的脈沖至脊髓是關鍵的(Yoshida等人，2011J Pharmacol Sci (112): 128)。此外，已經報道Botox的膀胱內施用在醋酸誘發的膀胱疼痛模型中抑制了 CGRP并且顯著降低了排尿間隔(Chuang 等人，2004JUrol (172):1529 ;Chuang 等人，2009J Urol (182):786)。
[0013]CGRP可能在這種病狀中起到病因作用的證據為:近來公開的專利申請包含據稱表明其中公開的抗CGRP抗體在松節油誘發的膀胱過度活動癥模型中降低了膀胱收縮次數的資料(Pfizer W02011/024113)。
[0014]由于察覺到這些和其他病癥中涉及CGRP，因此本領域中需要可用于預防或治療與CGRP相關的疾病和病癥并且同時避免不良副作用的組合物和方法。本領域中需要降低或抑制與CGRP相關的疾病或病癥如偏頭痛、頭痛、膀胱過度活動癥以及疼痛的組合物或方法。
發明概要
`[0015]本發明是針對于對CGRP具有結合特異性的特異性抗體和其片段，特別是具有所需表位特異性、高親和力或親合力和/或功能特性的抗體。本發明的另一個實施方案涉及本文所述的抗體，其包含本文所述的Vh、'以及CDR多肽的序列，以及編碼其的多核苷酸。本發明的優選實施方案是針對能夠結合至CGRP和/或抑制由CGRP與CGRP受體(“CGRP-R”)結合而介導的生物活性的嵌合或人源化抗體和其片段(包括Fab片段)。
[0016]在本發明的另一個優選實施方案中，涵蓋抑制由CGRP-α ,CGRP-β以及大鼠CGRP驅動的cAMP產生的全長抗體和其Fab片段。在本發明的另一個優選實施方案中，涵蓋在施用后降低接受者中的血管舒張的全長和其Fab片段。
[0017]在本發明的另一個實施方案中，能夠結合于CGRP的嵌合或人源化抗體和其片段(包括Fab片段)可用于針對降低、治療或預防以下疾病的方法中:偏頭痛(有或無先兆)、癌癥或腫瘤、與癌癥或腫瘤生長相關的血管生成、與癌癥或腫瘤存活相關的血管生成、體重減輕、疼痛、偏癱性偏頭痛、叢集性頭痛、偏頭痛性神經痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、潮熱、慢性陣發性半側顱痛、由于頭或頸中的潛在結構問題而致的繼發性頭痛、腦神經痛、竇性頭痛(例如與竇炎相關)以及過敏癥誘發的頭痛或偏頭痛。本發明的抗體和抗體片段特別可用于治療、預防、改善、控制或降低一種或多種下列病狀或疾病的風險:膀胱過度活動癥和包括膀胱感染、疼痛在內的其他泌尿病狀；慢性疼痛；神經源性炎癥和炎性疼痛；神經性疼痛；眼痛；牙痛；手術后疼痛、創傷有關的疼痛、灼傷有關的疼痛、糖尿病；非胰島素依賴型糖尿病和其他炎癥性自身免疫病癥、血管病癥；炎癥；關節炎；支氣管高反應性、哮喘；休克；敗血癥；阿片劑戒斷綜合征；嗎啡耐受；男性和女性中的潮熱；過敏性皮炎；牛皮癬；腦炎；腦創傷；癲癇癥；神經退行性疾病；包括瘙癢癥、神經源性皮膚發紅、玫瑰色皮膚以及紅斑在內的皮膚疾病；炎癥性腸病、腸易激綜合征、膀胱炎；痛經，以及潛在地可通過CGRP受體的拮抗作用治療或預防或者改善癥狀的其他病狀。特別重要的是頭痛(包括偏頭痛和叢集性頭痛)和其他疼痛相關病狀以及膀胱過度活動癥的急性或預防性治療。
[0018]在本發明的另一個實施方案中，能夠結合于CGRP的嵌合或人源化抗體和其片段(包括Fab片段)優選可用于針對降低、治療或預防以下疾病的方法中:胃-食管反流和與胃-食管反流、消化不良、腸易激綜合征、炎癥性腸病、克羅恩病(Crohn’s disease)、回腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、月經期、分娩、更年期、前列腺炎或胰腺炎相關的內臟疼痛。[0019]在本發明的另一個實施方案中，這些抗體和人源化形式可能源自兔免疫細胞(B淋巴細胞)并且可根據其與人類生殖系序列的同源性(序列同一性)進行選擇。這些抗體可能需要最小序列修飾或無序列修飾，從而促進人源化后功能特性的保留。本發明的另一個實施方案是針對來自涵蓋例如源自兔免疫細胞的VH、'和CDR多肽的抗CGRP抗體的片段和編碼其的多核苷酸，以及這些抗體片段和編碼其的多核苷酸在產生能夠結合于CGRP和/或CGRP/CGRP-R復合物的新穎抗體和多肽組合物中的用途。
[0020]本發明還涵蓋抗CGRP抗體和其結合片段綴合于一種或多種功能性或可檢測部分的綴合物。本發明還涵蓋制造所述嵌合或人源化抗CGRP或抗CGRP/CGRP-R復合物抗體和其結合片段的方法。在一個實施方案中，結合片段包括但不限于Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv片段、SMIP (小分子免疫藥物)、駱駝抗體、納米抗體以及IgNAR。
[0021]本發明的實施方案涉及抗CGRP抗體和其結合片段用于診斷、評估和治療與CGRP或其異常表達相關的疾病和病癥的用途。本發明還涵蓋抗CGRP抗體的片段用于診斷、評估和治療與CGRP或其異常表達相關的疾病和病癥的用途。本發明的其他實施方案涉及抗CGRP抗體或其片段在重組宿主細胞、例如哺乳動物細胞如CH0、NS0或HEK293細胞、或酵母細胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母(diploid Pichia))以及其他酵母菌株中的產生。
[0022]附圖簡要說明
[0023]圖1提供對應于全長抗體Abl的多核苷酸和多肽序列。
[0024]圖2提供對應于全長抗體Ab2的多核苷酸和多肽序列。
[0025]圖3提供對應于全長抗體Ab3的多核苷酸和多肽序列。
[0026]圖4提供對應于全長抗體Ab4的多核苷酸和多肽序列。
[0027]圖5提供對應于全長抗體Ab5的多核苷酸和多肽序列。
[0028]圖6提供對應于全長抗體Ab6的多核苷酸和多肽序列。
[0029]圖7提供對應于全長抗體Ab7的多核苷酸和多肽序列。
[0030]圖8提供對應于全長抗體Ab8的多核苷酸和多肽序列。
[0031]圖9提供對應于全長抗體Ab9的多核苷酸和多肽序列。
[0032]圖10提供對應于全長抗體AblO的多核苷酸和多肽序列。
[0033]圖11提供對應于全長抗體Abll的多核苷酸和多肽序列。
[0034]圖12提供對應于全長抗體Abl2的多核苷酸和多肽序列。[0035]圖13提供對應于全長抗體Ab 13的多核苷酸和多肽序列。
[0036]圖14提供對應于全長抗體Abl4的多核苷酸和多肽序列。
[0037]圖15提供遵循下文實施例1中的方案而獲得的關于抗體Abl、Ab2、Ab3以及Ab4的CGRP-α ELISA結合數據。
[0038]圖16提供遵循下文實施例1中的方案而獲得的關于抗體Ab5、Ab6、Ab7以及Ab8的CGRP-α ELISA結合數據。
[0039]圖17提供遵循下文實施例1中的方案而獲得的關于抗體Ab9、AblO以及Abl4的CGRP-α ELISA結合數據。
[0040]圖18提供遵循下文實施例1中的方案而獲得的關于抗體Abll、Abl2以及Abl3的CGRP-α ELISA結合數據。
[0041]圖19顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Abl、Ab2以及Ab4對于CGRP- α驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0042]圖20顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab3對于CGRP-α驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0043]圖21顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab5和Ab6對于CGRP- α驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0044]圖22顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab7、Ab8、Ab9以及AblO對于CGRP- α驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0045]圖23顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Abll、Abl2以及Abl3對于CGRP- α驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0046]圖24顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Abl4對于CGRP-α驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0047]圖25顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Abl、Ab2以及Ab3對于CGRP- β驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0048]圖26顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab4、Ab5以及Ab6對于CGRP- β驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0049]圖27顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab7和Ab8對于CGRP- β驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0050]圖28顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab9、AblO以及Abl4對于CGRP- β驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0051]圖29顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Abll、Abl2以及Abl3對于CGRP- β驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0052]圖30顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Abl、Ab2、Ab4以及Ab5對于大鼠CGRP驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0053]圖31顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab3和Ab6對于大鼠CGRP驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0054]圖32顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab7和Ab8對于大鼠CGRP驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0055]圖33顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab9對于大鼠CGRP驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0056]圖34顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體AblO對于大鼠CGRP驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0057]圖35顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Abll和Abl2對于大鼠CGRP驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0058]圖36顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Abl3對于大鼠CGRP驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0059]圖37顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Abl4對于大鼠CGRP驅動的cAMP產生的抑制作用。
[0060]圖38顯示遵循下文實施例6中的方案而獲得的抗體Abl_Abl3對于經放射性標記的CGRP與CGRP-R結合的抑制作用。
[0061]圖39顯示遵循下文實施例7中的方案而獲得的通過在大鼠模型中施用辣椒素(capsaicin)之后再施用抗體Ab3和Ab6而獲得的相對于對照抗體的血管舒張減少。
[0062]圖40顯示遵循下文實施例7中的方案而獲得的通過在大鼠模型中施用辣椒素之后再施用不同濃度的抗體Ab6而獲得的相對于對照抗體的血管舒張減少。
[0063]圖41A-C顯示在生理鹽水輸注期間Ab3對膀胱容量的有益作用。對動物施用Ab3或陰性對照抗體，然后在向膀胱中輸注生理鹽水期間進行監測。ICI (圖A)得以增加并且MF (圖B)得以降低，指示膀胱容量增加。AM中的差異(圖C)在標準偏差內并且不具統計顯著性。星號指示統計學顯著改善(P〈0.05,未配對斯圖登t檢驗(Student’s t_test),與陰性對照抗體相比)。圖例:實心條:被Ab3處理(10mg/kg);空心條:陰性對照抗體(10mg/kg)。誤差條指不標準偏差。縮與:`IC1:排尿間隔；MF:排尿頻率；AM:排尿幅度。
[0064]圖42顯示Ab2在神經性疼痛模型中的作用。機械性痛覺超敏(mechanicalallodynia)是由Chung手術(L5/L6脊神經結扎)誘發的，并且在被Ab2處理的動物(散列條)與對照動物(實心條)之間比較敏感性程度。較高值指示敏感性較小。在第13天(在Ab2施用之前)的平均敏感性類似，但在第14天和第17天得到改善。誤差條指示平均值的標準誤差。
[0065]圖43顯不Ab2和嗎啡的止痛作用。對于施用嗎啡(空心正方形)、Ab2 (10mg/kg,實心三角形)或媒介物(陰性對照，空心圓形)的動物，通過縮尾時間(y軸，秒)來評估疼痛敏感性。動物發展成嗎啡耐受并且到第4天展現與對照動物類似的縮尾時間。相比之下，被Ab2處理的動物在實驗過程(到第7天)中展現縮尾時間的持續改善。被Ab2處理的動物的改善具統計顯著性(P〈0.05,單因素AN0VA,接著鄧奈特檢驗(Dunnett’s test),與媒介物相比，由星號指示)。誤差條指示平均值的標準誤差。
[0066]圖44顯示Ab2的劑量依賴性止痛作用。在第0天(第一次縮尾時間測試之后)，向大鼠施用劑量為lmg/kg (實心正方形)、3mg/kg (實心倒三角形)或10mg/kg (實心正三角形)的抗體Ab2、或媒介物(空心圓形)或陰性對照抗體(空心正方形)。每天評估大鼠應答于疼痛熱刺激的縮尾時間(較高時間指示對疼痛相對不敏感)。通過施用Ab2，縮尾時間以劑量依賴性方式增加。星號指示縮尾時間的統計學顯著增加(P〈0.05，單因素AN0VA，接著鄧奈特檢驗(Dunnett’s test),與媒介物相比)。誤差條指示平均值的標準誤差。
[0067]圖45顯示Ab2與嗎啡組合以及當嗎啡耐受開始后戒斷嗎啡時的止痛作用。在第O天(第一次縮尾時間測試之后)，向大鼠施用劑量為10mg/kg的抗體Ab2 (實心正方形和實心三角形)或媒介物(空心圓形)。然后在第I至10天(實心正方形)或僅在第I至4天(實心三角形)每天向大鼠施用嗎啡。在被嗎啡處理的小鼠中，縮尾時間起初極大地增加，但在隨后的幾天后降低，這指示嗎啡耐受。然而，在第4天后戒斷嗎啡的小鼠中，縮尾時間增加并且在第5天到第8天之間保持升高。誤差條指示平均值的標準誤差。
[0068]圖46顯示Ab2在大鼠內臟疼痛模型中的作用。通過對未處理動物(空心條)或用TNBS處理以引起慢性結腸超敏的接受陰性對照抗體(實心條)或Ab2 (散列條)的動物測量結腸擴張閾值(較高值指示敏感性較小)來定量內臟疼痛。被Ab2處理的動物中超敏性減輕27%，并且通過施用Ab2使擴張閾值顯著改善(p〈0.05，斯圖登t檢驗，與TNBS+陰性對照組相比)。誤差條指示平均值的標準誤差。
[0069]優選實施方案的詳細說明
[0070]定義
[0071]應理解，本發明并不限于所述的具體方法、方案、細胞系、動物物種或屬以及試劑，因為這些可能會有變化。還應理解，本文所用的術語僅為描述具體的實施方案，而不意欲限制本發明的范圍，本發明的范圍僅由所附權利要求書限制。除非上下文另外明確指出，否則如本文所用的單數形式“一”和“該”包括復數個指示物。因此，例如，提及“一個細胞”包括多個此類細胞以及提及“該蛋白質”包括提及一種或多種蛋白質以及為本領域技術人員已知的其等效物，諸如此類。除非另外明確指出，否則本文使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域的技術人員 所通常理解相同的含義。
[0072]降鈣素基因相關肽(CGRP):如本文所用，CGRP不僅涵蓋可獲自AmericanPeptides (Sunnyvale CA)和 Bachem (Torrance, CA)的下列智人 CGRP-α 和智人 CGRP-β 氨
基酸序列:
[0073]CGRP- α_:ACDTATCVTHRLAGLLS
RSGGVVKNNFVPTNVGSKAF-NH2 (SEQ ID NO: 281)，其中 N 端苯丙氨酸被酰胺化；
[0074]CGRP- β_:ACNTATCVTHRLAGLLSRSGG
MVKSNFVPTNVGSKAF-NH2 (SEQ ID NO:282)，其中N端苯丙氨酸被酰胺化；而且涵蓋這些CGRP氨基酸序列的任何膜結合形式，以及這種序列的突變體(突變蛋白)、剪接變體、同種型、直系同源物、同源物以及變體。
[0075]交配感受態酵母物種:在本發明中，意欲廣泛地涵蓋可以在培養物中生長的任何二倍體或四倍體酵母。此類酵母物種可以單倍體、二倍體或其他多倍體形式存在。給定倍性的細胞可在適當條件下以所述形式增殖無限代數。二倍體細胞也可以孢子化以形成單倍體細胞。連續交配可通過二倍體菌株的進一步交配或融合而產生四倍體菌株。本發明涵蓋單倍體酵母以及例如通過交配或原生質球融合而產生的二倍體或其他多倍體酵母細胞的用途。
[0076]在本發明的一個實施方案中，交配感受態酵母為酵母科(Saccharomycetaceae)成員，其包括阿斯霉屬(Arxiozyma) ;Ascobotryozyma ;固囊酵母屬(Citeromyces);德巴利酵母屬(Debaryomyces);德克酵母屬(Dekkera);假囊酵母屬(Eremothecium);伊薩酵母屬(Issatchenkia);哈薩克酵母屬(Kazachstania);克魯維酵母屬(Kluyveromyces)；柯達酵母屬(Kodamaea);婁德酵母屬(Lodderomyces);管囊酵母屬(Pachysolen);畢赤酵母屬(Pichia);酵母屬(Saccharomyces) ；Saturnispora ；Tetrapisispora ;有抱圓酵母屬(Torulaspora);擬威爾酵母屬(Williopsis);以及接合酵母屬(Zygosaccharomyces)。潛在地可用于本發明中的其他類型的酵母包括子囊菌酵母屬(Yairowia);紅冬孢酵母屬(Rhodosporidium);假絲酵母屬(Candida);漢遜酵母屬(Hansenula);線黑粉酵母屬(Filobasium);鎖擲酵母屬(Sporidiobolus);布勒擲孢酵母屬(Bullera);白冬孢酵母屬(Leucosporidium)以及線黑粉菌屬(Filobasidella)。
[0077]在本發明的一個優選實施方案中，交配感受態酵母是畢赤酵母屬成員。在本發明的另一個優選實施方案中，畢赤酵母屬的交配感受態酵母是以下物種之一:巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)、甲醇畢赤酵母(Pichia methanolica)以及多形漢遜酵母(Hansenula polymorpha)(安格斯畢赤酵母(Pichia angusta))。在本發明的一個特別優選實施方案中，畢赤酵母屬的交配感受態酵母為物種巴斯德畢赤酵母。
[0078]單倍體酵母細胞:具有其正常基因組(染色體組)補體的各基因的單拷貝的細胞。
[0079]多倍體酵母細胞:具有其正常基因組(染色體組)補體的多于一個拷貝的細胞。
[0080]二倍體酵母細胞:具有其正常基因組補體的基本上每個基因的兩個拷貝(等位基因)的細胞，其典型地通過兩個單倍體細胞融合(交配)的方法而形成。
[0081]四倍體酵母細胞:具有其正常基因組補體的基本上每個基因的四個拷貝(等位基因)的細胞，其典型地通過兩個單倍體細胞融合(交配)的方法而形成。四倍體可攜帶兩個、三個、四個或更多個不同的表達盒。此類四倍體可在釀酒酵母(s.cerevisiae)中通過選擇性交配純合基因的異宗配合a/a和α/α 二倍體而獲得以及在畢赤酵母中通過單倍體的連續交配以獲得營養缺陷型 二倍體而獲得。例如，[met his]單倍體可以與[ade his]單倍體交配來獲得二倍體[his];并且[met arg]單倍體可以與[ade arg]單倍體交配來獲得二倍體[arg];然后二倍體[his]X 二倍體[arg]來獲得四倍體原養型微生物。本領域技術人員應理解，提及二倍體細胞的益處和用途還可適用于四倍體細胞。
[0082]酵母交配:通過兩個單倍體酵母細胞天然地融合以形成一個二倍體酵母細胞的方法。
[0083]減數分裂:通過二倍體酵母細胞經受減少性的分裂以形成四個單倍體孢子產物的方法。每一孢子然后可發芽并形成單倍體植物性生長細胞系。
[0084]可選擇標記物:可選擇標記物為對例如通過轉化事件接收該基因的細胞賦予生長表型(物理生長特征)的基因或基因片段。可選擇標記物允許該細胞在選擇性生長培養基中在不接收該可選擇標記基因的細胞不能生長的條件下存活和生長。可選擇標記基因通常屬于幾種類型，包括陽性可選擇標記基因，例如賦予細胞對于抗生素或其他藥物的抗性、當雜交兩個溫度敏感性(“ts”)突變體或轉化ts突變體時賦予溫度抗性的基因；陰性可選擇標記基因，例如賦予細胞以在不含特定營養物的培養基中生長的能力的生物合成基因，而不具有該生物合成基因的所有細胞都需要這種營養物；或賦予細胞以不能利用不具有野生型基因的細胞而生長的誘變型生物合成基因；等。合適的標記物包括但不限于:ZE0 ；G418 ；LYS3 ；MET1 ；MET3a ；ADE1 ；ADE3 ；URA3 ;等。
[0085]表達載體:這些DNA載體包含便于外來蛋白質在目標宿主細胞內的表達操作的元件。方便起見，序列的操作和用于轉化的DNA的產生首先在細胞宿主、例如大腸桿菌(E.coli)中進行，并且通常載體將包括便于此類操作的序列，包括細菌復制起點和適當的細菌選擇標記物。選擇標記物對在選擇性培養基中生長的轉化宿主細胞的存活或生長而言必需的蛋白質進行編碼。未用包含選擇基因的載體轉化的宿主細胞將不在該培養基中存活。典型的選擇基因編碼具有以下功能的蛋白質:(a)賦予對于抗生素或其他毒素的抗性，(b)補充營養缺陷型缺陷，或(C)供應不能從復合培養基中獲得的關鍵營養物。用于轉化酵母的不例性載體和方法描述于例如Burke, D., Dawson, D.和Stearns, T.(2000).Methodsin yeast genetics: a Cold Spring Harbor Laboratory course manual.Plainview, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press 中。
[0086]用于本發明的方法中的表達載體將進一步包括酵母特異性序列，其包括可選擇營養缺陷型或藥物標記物以用于鑒定轉化的酵母菌株。藥物標記物此外可用于在酵母宿主細胞中擴增載體的拷貝數。
[0087]所關注的編碼多肽的序列可操作地連接至轉錄和翻譯調控序列，所述調控序列提供多肽在酵母細胞中的表達。這些載體成分可包括但不限于下列一種或多種:增強子元件、啟動子以及轉錄終止序列。還可以包括用于分泌多肽的序列，例如信號序列等。酵母復制起點為任選的，因為表達載體通常整合到酵母基因組中。在本發明的一個實施方案中，所關注的多肽可操作地連接或融合至提供多肽從酵母二倍體細胞中優化分泌的序列。
[0088]當核酸與另一核酸序列發生功能關系時為“可操作地連接”。例如，如果信號序列的DNA以參與多肽分泌的前蛋白形式表達，則其與多肽的DNA可操作地連接；如果啟動子或增強子影響序列的轉錄，則其與編碼序列可操作地連接。通常，“可操作地連接”意味著所連接的DNA序列為相鄰的，并且，在分泌前導序列的情況下，為相鄰的并且在閱讀框中。然而，增強子不必需是相鄰的。連接可以通過在適宜的限制性位點接合或可選地通過本領域技術人員熟悉的PCR/重組方法來實現(GatewayK Technology; Invitrogen, CarlsbadCalifornia)。如果此類位點不存在，則根據常規實踐使用合成的寡核苷酸適配子或連接子。
[0089]啟動子為位于結構基因(通常在約100至1000bp內)的起始密碼子的上游(5’)的非翻譯序列，其控制與其可操作地連接的特定核酸序列的轉錄和翻譯。此類啟動子屬于幾類:誘導型、組成型以及阻抑型啟`動子(其應答于阻遏子的缺失而增加轉錄水平)。誘導型啟動子可應答于培養條件的某些變化，例如營養物的存在或不存在或者溫度變化，而引發來自它們控制下的DNA的轉錄水平的增加。
[0090]酵母啟動子片段還可用作用于同源重組和將表達載體整合到酵母基因組中的相同位點的位點；可選地，可選擇標記物用作用于同源重組的位點。畢赤酵母屬轉化描述于Cregg 等人(1985)Mol.Cell.Biol.5:3376-3385 中。
[0091]來自畢赤酵母屬的合適啟動子的例子包括AOXl和啟動子(Cregg等人(1989)1^Cell.Biol.9:1316~1323):ICL1 啟動子(Menendez 等人(2003) Yeast20 (13):1097-108):甘油醛-3-磷酸脫氫酶啟動子(GAP) (Waterham 等人(1997)Genel86 (I):37-44);以及 FLDl啟動子(Shen等人(1998)Gene216(l):93_102)。GAP啟動子為強組成型啟動子并且AOX和FLDl啟動子為誘導型。
[0092]其他酵母啟動子包括ADHl、醇脫氫酶I1、GAL4、PH03、PH05、Pyk以及從其衍生的嵌
合啟動子。另外，非酵母啟動子可用于本發明中，例如哺乳動物、昆蟲、植物、爬行動物、兩棲動物、病毒以及鳥類啟動子。最典型地該啟動子將包括哺乳動物啟動子(可能對所表達的基因來說是內源性的)或將包括在酵母系統中提供有效轉錄的酵母或病毒啟動子。
[0093]所關注的多肽不僅可以直接重組地產生，而且可以作為與異源多肽、例如信號序列或在成熟蛋白或多肽的N端具有特定裂解位點的其他多肽的融合多肽形式產生。一般來說，信號序列可為載體的成分，或其可為插入載體中的多肽編碼序列的一部分。優選的異源信號序列為通過宿主細胞內可獲得的標準途徑之一識別并加工的異源信號序列。釀酒酵母α因子前原信號已經證明在各種來自巴斯德畢赤酵母的重組蛋白的分泌中有效。其他酵母信號序列包括α交配因子信號序列、轉化酶信號序列以及衍生自其他分泌的酵母多肽的信號序列。另外，這些信號肽序列可以被工程改造以提供在二倍體酵母表達系統中的增強的分泌。所關注的其他分泌信號還包括哺乳動物信號序列，其可能與所分泌的蛋白質是異源的，或可能為所分泌的蛋白質的天然序列。信號序列包括前肽序列，并且在一些情況下可包括原肽序列。許多此類信號序列在本領域是已知的，包括在免疫球蛋白鏈中發現的信號序列，例如Κ28前原毒素序列、PHA-E、FACE、人類MCP-1、人類血清白蛋白信號序列、人類Ig重鏈、人類Ig輕鏈等。例如參見Hashimoto等人Protein Engll (2) 75 (1998);以及Kobayashi 等人 Therapeutic Apheresis2 (4) 257 (1998)。
[0094]轉錄可以通過將轉錄激活子序列插入載體來增強。這些激活子是DNA的順式作用元件，通常約10至300bp，其作用在啟動子上以增強其轉錄。轉錄增強子相對獨立地定位和定向，已經發現于轉錄單元的5’和3’、在內含子內以及在編碼序列本身內。增強子可以在編碼序列的5’或3’位置剪接至表達載體中，但是優選位于從啟動子起的5’位點。
[0095]用于真核宿主細胞中的表達載體還可以包含對于轉錄終止和對于使mRNA穩定所需的序列。此類序列通常可從真核或病毒DNA或cDNA的非翻譯區中翻譯終止密碼子的3’獲得。這些區域包含轉錄為在mRNA的非翻譯部分中的多腺苷酸化片段的核苷酸區段。
[0096]包含一種或多種以上所列成分的合適載體的構建使用標準接合技術或PCR/重組方法。分離的質粒或DNA片段以需要產生所需質粒的形式或通過重組方法被裂解、修改和再接合。為了分析以確認所構建質粒中的正確序列，使用接合混合物來轉化宿主細胞，并且在適當時通過抗生素抗性(例如氨芐青霉素或博萊霉素(Zeocin))來選擇成功的轉化株。制備來自轉化株的質粒，通過限制性核酸內切酶消化進行分析和/或測序。
[0097]作為片段的限制和接合的替代方案，可使用基于att位點和重組酶的重組方法來將DNA序列插入載體中。此類方法由例如Landy (1989) Ann.Rev.Biochem.58:913-949描述；并且為本領域技術人員已知。此類方法利用分子間DNA重組，其由λ和大腸桿菌編碼的重組蛋白的混合物介導。重組出現在相互作用DNA分子上的特異性附著(att)位點之間。對于 att 位點的描述，參見Weisberg和 Landy (1983) Site-Specific Recombination inPhage Lambda, in Lambda II，Weisberg編(Cold Spring Harbor, NY:Cold Spring HarborPress),第211-250頁。使側接重組位點的DNA區段交換，以使得重組后，att位點為由各親本載體貢獻的序列所構成的雜交序列。重組可以在任何拓撲學的DNA之間發生。
[0098]可以通過以下步驟將att位點引入所關注的序列中:將所關注的序列接合入適當的載體；通過使用特定的引物產生包含att B位點的PCR產物；產生克隆入包含att位點的適當載體中的cDNA文庫；等等。
[0099]如本文所用的折疊是指多肽和蛋白質的三維結構，其中氨基酸殘基之間的相互作用用于穩定該結構。盡管非共價相互作用在確定結構上是重要的，但所關注的蛋白質通常將具有由兩個半胱氨酸殘基形成的分子內和/或分子間共價二硫鍵。對于天然存在的蛋白質和多肽或其衍生物和變體，適當的折疊典型地為導致最佳生物活性的排列，并且可以方便地通過活性測定法、例如配體結合、酶促活性等來監測。
[0100]在一些情況下，例如其中所需產品是合成來源時，基于生物活性的測定法將較無意義。此類分子的正確折疊可基于物理性質、能量考慮、建模研究等確定。
[0101]表達宿主可通過引入編碼一種或多種酶的序列來進一步修飾，所述一種或多種酶將增強折疊和二硫鍵形成，即折疊酶、伴侶蛋白等。此類序列可使用本領域已知的載體、標記物等在酵母宿主細胞中組成性或誘導性地表達。優選地包括足以用于所需表達模式的轉錄調控元件的序列，通過靶向方法穩定地整合入酵母基因組。
[0102]例如，真核PDI不僅是蛋白質半胱氨酸氧化和二硫鍵異構化的有效催化劑，而且展現伴侶蛋白活性。PDI的共同表達可以促進具有多個二硫鍵的活性蛋白的產生。此外所關注的是BIP (免疫球蛋白重鏈結合蛋白)、親環素(cyclophilin)等的表達。在本發明的一個實施方案中，每一單倍體親本菌株表達不同的折疊酶，例如一個菌株可以表達BIP，而另一菌株可以表達PDI或其組合。
[0103]術語“所需蛋白”或“所需抗體”可互換使用并且通常指對標靶具特異性的親本抗體，即如本文所述的CGRP或者衍生自其的嵌合或人源化抗體或者其結合部分。術語“抗體”意欲包括具有適合并識別表位的特定形狀的任何包含多肽鏈的分子結構，其中一種或多種非共價結合相互作用使分子結構和表位之間的復合物穩定化。原型抗體分子為免疫球蛋白，并且認為來自所有來源、例如人類、哨齒動物、兔、牛、綿羊、豬、狗、其他哺乳動物、雞、其他鳥類等的所有類型的免疫球蛋白IgG、IgM、IgA、IgE、IgD等為“抗體”。用于產生用作根據本發明的起始物質的抗體的優選來源為兔。已經描述了許多抗體編碼序列；以及其他可通過本領域眾所周知的方法產生。其例子包括嵌合抗體、人類抗體以及其他非人類哺乳動物抗體、人源化抗體、單鏈抗體(例如scFv)、駱騎抗體、納米抗體、IgNAR (源自S魚的單鏈抗體)、 小模塊免疫藥物(SMIP)，以及抗體片段如Fab、Fab’、F(ab’)2等。參見StreltsovVA等人，Structure of a shark IgNAR antibody variable domain and modeling of anearly-developmental isotype, Protein Sc1.2005 年 11 月；14 (11): 2901-9.電子版 2005年 9 月 30 日；Greenberg AS 等人，A new antigen receptor gene family that undergoesrearrangement and extensive somatic diversification in sharks, Nature.1995年 3 月 9 日；374 (6518): 168-73 ;Nuttall SD 等人，Isolation of the new antigenreceptor from wobbegong sharks, and use as a scaffold for the display ofproteinloop libraries, Mol Immunol.2001 年 8 月；38 (4): 313-26 ;Hamers_Casterman C 等人，Naturally occurring antibodies devoid of light chains，Nature.1993 年 6 月 3日;363(6428):446-8 ；Gill DS 等人，Biopharmaceutical drug discovery using novelprotein scaffolds, Curr Opin Biotechnol.2006 年 12 月；17 (6): 653-8.電子版 2006 年10月19曰。
[0104]例如，抗體或抗原結合片段可以通過基因工程產生。在這種技術中，如其他方法一樣，抗體產生細胞對所需抗原或免疫原敏感。從抗體產生細胞分離的信使RNA用作模板以使用PCR擴增制備cDNA。各自包含保持初始抗原特異性的一個重鏈基因和一個輕鏈基因的載體的文庫通過將擴增的免疫球蛋白cDNA的適當部分插入表達載體中而產生。通過將重鏈基因文庫與輕鏈基因文庫組合來構建組合文庫。這產生了共同表達重鏈和輕鏈(類似于抗體分子的Fab片段或抗原結合片段)的克隆的文庫。將攜帶這些基因的載體共同轉染入宿主細胞。當在轉染的宿主中誘導抗體基因合成時，重鏈和輕鏈蛋白自組裝以產生活性抗體，所述活性抗體可以通過用抗原或免疫原篩選來檢測。
[0105]所關注的抗體編碼序列包括被以下編碼的那些:天然序列，以及借助于基因編碼的簡并性而在序列上與所公開核酸不相同的核酸，和其變體。變體多肽可以包括氨基酸(aa)取代、添加或缺失。氨基酸取代可以為保守性氨基酸取代或為消除非必需氨基酸的取代，例如以改變糖基化位點，或通過取代或缺失一個或多個對于功能不必需的半胱氨酸殘基而使錯誤折疊最小化。變體可以設計成保持或具有蛋白質特定區域(例如，功能域、催化性氨基酸殘基等)的增強的生物活性。變體還包括本文公開的多肽的片段，特別是生物學活性片段和/或對應于功能域的片段。用于克隆基因的體外誘變技術是已知的。本發明中還包括這樣的多肽，其已經使用普通分子生物技術修飾以改進其對蛋白水解降解的抗性或以優化溶解度性質或以使其更適合作為治療劑。
[0106]嵌合抗體可以利用重組手段通過將獲自一個物種的抗體產生細胞的可變輕鏈區和可變重鏈區('和VH)與來自另一物種的恒定輕鏈區和恒定重鏈區組合而制得。典型地嵌合抗體利用嚙齒動物或兔可變區和人類恒定區，以產生具有主要人類結構域的抗體。此類嵌合抗體的產生在本領域是眾所周知的，并且可利用標準手段實現(如例如美國專利N0.5，624，659中所述，該專利以全文引用的方式并入本文中)。此外涵蓋本發明的嵌合抗體的人類恒定區可選自IgGl、IgG2、IgG3以及IgG4恒定區。
[0107]人源化抗體被工程改造以包含甚至更多類人免疫球蛋白結構域，并且只并入動物源抗體的互補決定區。這通過仔細 地檢查單克隆抗體的可變區的高變環的序列并且使它們適合人類抗體鏈的結構來實現。盡管表面上復雜，但實際上該過程是簡單的。參見例如美國專利N0.6，187，287，其以引用的方式完全并入本文中。
[0108]除了完整免疫球蛋白(或其重組對應物)之外，還可合成包括表位結合位點的免疫球蛋白片段(例如，Fab’、F(ab’)2或其他片段)。可利用重組免疫球蛋白技術來設計“片段”或最小免疫球蛋白。例如，用于本發明的“Fv”免疫球蛋白可以通過合成融合的可變輕鏈區和可變重鏈區而產生。抗體的組合也令人關注，例如雙功能抗體，其包括兩種不同的Fv特異性。在本發明的另一個實施方案中，免疫球蛋白片段涵蓋SMIP (小分子免疫藥物)、駱駝抗體、納米抗體以及IgNAR。
[0109]免疫球蛋白和其片段可以被翻譯后修飾，例如添加效應子部分如化學連接子、可檢測部分如熒光染料、酶、毒素、底物、生物發光材料、放射性材料、化學發光部分等，或特異性結合部分如鏈霉親和素(streptavidin)、親和素(avidin)或生物素等可用于本發明的方法和組合物中。另外的效應子分子的例子在下文提供。
[0110]如果按照遺傳密碼翻譯多核苷酸序列產生多肽序列，則該多核苷酸序列與該多肽序列相“對應”(即，該多核苷酸序列“編碼”該多肽序列);如果兩個序列編碼相同的多肽序列，則一個多核苷酸序列與另一個多核苷酸序列相“對應”。
[0111]DNA構建體的“異源”區或結構域為較大DNA分子內可鑒定的DNA區段，其在自然界中未發現與該較大分子相連。因此，當異源區編碼哺乳動物基因時，該基因將通常通過在來源有機體的基因組中不側接哺乳動物基因組DNA的DNA所側接。異源區的另一個例子為其中編碼序列本身未在自然界中發現的構建體(例如，其中基因組編碼序列包含內含子的cDNA，或具有不同于天然基因的密碼子的合成序列)。等位變異或天然存在的突變事件不產生如本文定義的DNA的異源區。
[0112]“編碼序列”為密碼子的同框序列，其(考慮到遺傳密碼)對應于或編碼蛋白質或肽序列。如果序列或其互補序列編碼相同的氨基酸序列，則兩個編碼序列彼此相一致。與適當的調控序列相連的編碼序列可被轉錄和翻譯成多肽。多腺苷酸化信號和轉錄終止序列將通常位于編碼序列的3’。“啟動子序列”為能夠結合細胞中的RNA聚合酶并且啟動下游(3’方向)編碼序列的轉錄的DNA調控區域。啟動子序列典型地包含用于結合影響編碼序列的轉錄的調控分子(例如，轉錄因子)的另外的位點。當RNA聚合酶結合細胞中的啟動子序列并且將編碼序列轉錄成mRNA，該mRNA然后又翻譯成由編碼序列編碼的蛋白質時，編碼序列在啟動子序列的“控制下”或“可操作地連接”至啟動子。[0113]使用載體將外來物質如DNA、RNA或蛋白質引入有機體或宿主細胞中。典型的載體包括重組病毒(用于多核苷酸)和脂質體(用于多肽)。“DNA載體”為復制子如質粒、噬菌體或粘粒，另一個多核苷酸區段可連接至其以引起所連接區段的復制。“表達載體”為DNA載體，其包含將通過適當的宿主細胞引導多肽合成的調控序列。這通常意味著結合RNA聚合酶并啟動mRNA的轉錄的啟動子，以及核糖體結合位點和引導mRNA翻譯成多肽的起始信號。在適當的位點處和在正確的閱讀框中將多核苷酸序列并入表達載體中，然后通過載體轉化適當的宿主細胞，能夠產生由所述多核苷酸序列編碼的多肽。
[0114]多核苷酸序列的“擴增”為體外產生特定核酸序列的多個拷貝。擴增序列通常為DNA形式。用于進行此類擴增的各種技術描述于Van Brunt的綜述文章(1990，Bio/Technol.，8 (4):291-294)中。聚合酶鏈反應或PCR為核酸擴增的原型，并且本文的PCR的使用應該被認為是其他合適擴增技術的示例。
[0115]現在已充分理解脊椎動物中抗體的一般結構(Edelman, G.M.，Ann.Ν.Y.Acad.Sc1.，190:5(1971))。抗體由分子量約23，000道爾頓的兩條相同的輕多肽鏈(“輕鏈”)和分子量53，000-70, 000的兩條相同的重鏈(“重鏈”)組成。四條鏈通過二硫鍵以“Y”形構型結合，其中輕鏈在“Y”形構型的口處括住重鏈。“Y”形構型的“分枝”部分稱為Fab區域；“Y”形構型的莖部分稱為Fc區域。氨基酸序列定向是從“Y”形構型頂部的N末端至各鏈底部的C末端。N末端擁有對引發其的抗原具有特異性的可變區，并且長度約100個氨基酸，在輕鏈和重鏈之間以及在不同抗體之間存在輕微的變化。
[0116]在各鏈中可變區連接至恒定區，該恒定區延伸鏈的剩余長度并且在特定種類的抗體內不隨抗體的特異性(即，引發其的抗原)而變化。存在五種已知的主要種類的恒定區，其確定免疫球蛋白分子的種類(對應于Υ、μ、α、δ以及ε重鏈恒定區的IgG、IgM、IgA、IgD以及IgE)。恒定區或種類決定抗體的后續效應子功能，包括補體的激活(Kabat, E.A.，Structural Concepts in Immunology and Immunochemistry,第2 版，第 413-436 頁，Holt, Rinehart, Winston (1976)),和其他細胞應答(Andrews, D.W.等人，Clinical Immunobiology,第 1-18 頁，W.B.Sanders (1980) ；Kohl,S.等人，Immunology，48:187(1983));而可變區決定將與其反應的抗原。輕鏈被分類為κ (kappa)或λ (lambda)。各重鏈種類可以用κ或λ輕鏈制備。當通過雜交瘤或通過Β細胞產生免疫球蛋白時，輕鏈和重鏈彼此共價地鍵合，并且兩個重鏈的“尾”部分通過共價二硫鍵彼此鍵合。
[0117]表述“可變區”或“VR”是指在抗體中各輕鏈和重鏈對內的結構域，其直接參與抗體與抗原的結合。各重鏈在一端具有可變域(Vh)，接著為多個恒定域。各輕鏈在一端具有可變域并且在另一端具有恒定域；輕鏈的恒定域與重鏈的第一個恒定域對齊，并且輕鏈可變域與重鏈的可變域對齊。
[0118]表述“互補決定區”、“高變區”或“CDR”是指在抗體的輕鏈或重鏈的可變區中存在的一個或多個高變區或互補決定區(⑶R)(參見Kabat, E.A.等人，Sequences of Proteinsof Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md.，(1987)X這些表述包括如由 Kabat 等人(“Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest, ” Kabat E.等人，US Dept, of Health and Human Services, 1983)定義的高變區或在抗體的三維結構中的高變環(Chothia和Lesk，J Mol.Biol.196901-917(1987))。在各鏈中的CDR由框架區保持緊密接近，并且與其他鏈的CDR —起形成抗原結合位點。在CDR內存在選定的氨基酸，其已經描述為代表在抗體-抗原相互作用中CDR所用的關鍵接觸殘基的選擇性決定區(SDR) (Kashmiri, S., Methods, 36:25-34 (2005))。
[0119]表述“框架區”或“FR”是指抗體的輕鏈和重鏈的可變區內的一個或多個框架區(參見 Kabat, E.A.等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest, NationalInstitutes of Health, Bethesda, Md., (1987) )?這些表述包括置于抗體的輕鏈和重鏈的可變區內的CDR之間的那些氨基酸序列區域。
[0120]對CGRP具有結合活性的抗CGRP抗體和其結合片段
[0121] 杭體Abl
[0122]在一個實施方案中，本發明包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSS⑶CFVFGGGTEVVVKR(SEQ IDNO:1)。
[0123]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSS⑶CFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO: 2)。
[0124]本發明進一步包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的嵌合抗體:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIffGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:3)。
[0125]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的嵌合抗體:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:4)。
[0126]本發明進一步涵蓋抗體，其包含對應于SEQ ID NO: 1的可變輕鏈序列或SEQ IDNO: 2的輕鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6以及SEQ IDNO:7的多肽序列中的一種或多種，和/或對應于SEQ ID NO:3的可變重鏈序列或SEQ IDN0:4的重鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9以及SEQ IDNO: 10的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們全部)的組合。
[0127]本發明還涵蓋對CGRP具有結合特異性的抗體的片段。在本發明的一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:1或SEQ ID N0:2的多肽序列。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO:3 或 SEQ ID NO:4 的多肽序列。 [0128]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO: 1的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:2的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO:5,SEQ ID N0:6以及SEQ ID N0:7的多肽序列中的一種或多種。
[0129]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO:3的可變重鏈序列或SEQ ID NO:4的重鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9以及SEQ ID N0:10的多肽序列中的一種或多種。
[0130]本發明還涵蓋包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發明的一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO: 1的可變輕鏈區；SEQ ID NO:3的可變重鏈區；SEQ ID NO: 1的可變輕鏈區的互補決定區(SEQ ID NO:5 ；SEQ ID N0:6;以及SEQ ID N0:7);以及SEQ ID NO:3的可變重鏈區的互補決定區(SEQ ID NO:8 ；SEQ ID NO:9 ；以及 SEQ ID NO: 10)。
[0131]在本發明的一個特別優選實施方案中，嵌合抗CGRP抗體為Abl，其包含SEQ IDNO: 2和SEQ ID NO:4或可選地由SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO:4組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0132]在本發明的另一個特別優選實施方案中，抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結合特異性的Fab (片段抗原結合)片段。關于抗體Abl，Fab片段包括SEQID N0:1的可變輕鏈序列和SEQ ID NO:3的可變重鏈序列。本發明的這個實施方案進一步涵蓋在保持對CGRP的結合特異性的同時所述Fab中SEQ ID NO: 1和/或SEQ ID NO:3的添加、缺失以及變體。
[0133]在本文(下文)所述的本發明的一個實施方案中，Fab片段可通過Abl的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產生。在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Ab 1或其Fab片段可通過在哺乳動物細胞如CH0、NS0或HEK293細胞，真菌、昆蟲或微生物系統如酵母細胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達而產生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。[0134]杭體Ab2
[0135]在一個實施方案中，本發明包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ IDNO:11)。
[0136]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSS⑶CFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:12)。
[0137]本發明進一步包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASffAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIffGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:13)。
[0138]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:14)。
[0139]本發明進一步涵蓋抗體，其包含對應于SEQ ID NO: 11的可變輕鏈序列或SEQ IDNO: 12的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16以及SEQID NO: 17的多肽序列中的一種或多種，和/或對應于SEQ ID NO: 13的可變重鏈序列或SEQID NO: 14的重鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19以及SEQ ID N0:20的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們全部)的組合。
[0140]本發明還涵蓋對CGRP具有結合特異性的抗體的片段。在本發明的一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO: 11或SEQ ID NO: 12的多肽序列。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO: 13 或 SEQ ID NO: 14 的多肽序列。
[0141]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO: 11的可變輕鏈序列或SEQ ID NO: 12的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16以及SEQ ID NO: 17的多肽序列中的一種或多種。
[0142]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO: 13的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 14的重鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19以及SEQ ID N0:20的多肽序列中的一種或多種。
[0143]本發明還涵蓋包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發明的一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO: 11的可變輕鏈區；SEQ ID NO: 13的可變重鏈區；SEQ ID NO: 11的可變輕鏈區的互補決定區(SEQ ID NO: 15 ；SEQ ID NO: 16 ；以及SEQ ID N0:17);以及SEQ ID NO: 13的可變重鏈區的互補決定區(SEQ ID NO: 18 ；SEQID NO: 19;以及 SEQ ID NO: 20)。
[0144]在本發明的一個特別優選實施方案中，人源化抗CGRP抗體為Ab2，其包含SEQ IDNO: 12和SEQ ID NO: 14或可選地由SEQ ID NO: 12和SEQ ID NO: 14組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0145]在本發明的另一個特別優選實施方案中，抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結合特異性的Fab (片段抗原結合)片段。關于抗體Ab2，Fab片段包括SEQID NO: 11的可變輕鏈序列和SEQ ID NO: 13的可變重鏈序列。本發明的這個實施方案進一步涵蓋在保持對CGRP的結合特異性的同時所述Fab中SEQ ID NO: 11和/或SEQ ID NO: 13的添加、缺失以及變體。
[0146]在本文(下文)所述的本發明的一個實施方案中，Fab片段可通過Ab2的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產生。在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Ab2或其Fab片段可通過在哺乳動物細胞如CH0、NS0或HEK293細胞，真菌、昆蟲或微生物系統如酵母細胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達而產生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0147]杭體 Ab3`
[0148]在一個實施方案中，本發明包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ IDN0:21)。
[0149]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSS⑶CFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:22)。
[0150]本發明進一步包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:23)。
[0151]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:24)。
[0152]本發明進一步涵蓋抗體，其包含對應于SEQ ID NO:21的可變輕鏈序列或SEQ IDNO: 22的輕鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26以及SEQID N0:27的多肽序列中的一種或多種，和/或對應于SEQ ID NO:23的可變重鏈序列或SEQID NO: 24的重鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29以及SEQ ID N0:30的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們全部)的組合。
[0153]本發明還涵蓋對CGRP具有結合特異性的抗體的片段。在本發明的一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:21或SEQ ID N0:22的多肽序列。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO:23 或 SEQ ID NO:24 的多肽序列。
[0154]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO:21的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:22的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26以及SEQ ID N0:27的多肽序列中的一種或多種。
[0155]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO:23的可變重鏈序列或SEQ ID N0:24的重鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29以及SEQ ID NO: 30的多肽序列中的一種或多種。
[0156] 本發明還涵蓋包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發明的一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO:21的可變輕鏈區；SEQ ID NO:23的可變重鏈區；SEQ ID NO: 21的可變輕鏈區的互補決定區(SEQ ID NO: 25 ；SEQ ID NO:26 ；以及SEQ ID N0:27);以及SEQ ID NO:23的可變重鏈區的互補決定區(SEQ ID NO:28 ；SEQID N0:29;以及 SEQ ID N0:30)。
[0157]在本發明的一個特別優選實施方案中，嵌合抗CGRP抗體為Ab3，其包含SEQ IDNO:22和SEQ ID NO:24或可選地由SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:24組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0158]在本發明的另一個特別優選實施方案中，抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結合特異性的Fab (片段抗原結合)片段。關于抗體Ab3，Fab片段包括SEQID N0:21的可變輕鏈序列和SEQ ID NO:23的可變重鏈序列。本發明的這個實施方案進一步涵蓋在保持對CGRP的結合特異性的同時所述Fab中SEQ ID N0:21和/或SEQ ID NO:23的添加、缺失以及變體。
[0159]在本文(下文)所述的本發明的一個實施方案中，Fab片段可通過Ab3的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產生。在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Ab3或其Fab片段可通過在哺乳動物細胞如CH0、NS0或HEK293細胞，真菌、昆蟲或微生物系統如酵母細胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達而產生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0160]杭體 Ab4
[0161 ] 在一個實施方案中，本發明包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQ IDN0:31)。
[0162]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:32)。
[0163]本發明進一步包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的嵌合抗體:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:33)。
[0164]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的嵌合抗體:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:34)。
[0165]本發明進一步涵蓋抗體，其包含對應于SEQ ID NO:31的可變輕鏈序列或SEQ IDNO:32的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO:35,SEQ ID N0:36以及SEQ IDNO:37的多肽序列中的一種或多種，和/或對應于SEQ ID NO:33的可變重鏈序列或SEQIDN0:34的重鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39以及SEQID N0:40的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們全部)的組合。
[0166]本發明還涵蓋對CGRP具有結合特異性的抗體的片段。在本發明的一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:32的多肽序列。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO:33 或 SEQ ID NO:34 的多肽序列。
[0167]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO:31的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:32的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36以及SEQ ID N0:37的多肽序列中的一種或多種。
[0168]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于S EQ ID NO:33的可變重鏈序列或SEQ ID N0:34的重鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 39以及SEQ ID NO: 40的多肽序列中的一種或多種。
[0169]本發明還涵蓋包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發明的一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO:31的可變輕鏈區；SEQ ID NO:33的可變重鏈區；SEQ ID NO: 31的可變輕鏈區的互補決定區(SEQ ID NO: 35 ；SEQ ID NO:36 ；以及SEQ ID N0:37);以及SEQ ID NO:33的可變重鏈區的互補決定區(SEQ ID NO:38 ；SEQID N0:39;以及 SEQ ID N0:40)。
[0170]在本發明的一個特別優選實施方案中，人源化抗CGRP抗體為Ab4，其包含SEQ IDNO:32和SEQ ID NO:34或可選地由SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:34組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。 [0171]在本發明的另一個特別優選實施方案中，抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結合特異性的Fab (片段抗原結合)片段。關于抗體Ab4，Fab片段包括SEQID N0:31的可變輕鏈序列和SEQ ID NO:33的可變重鏈序列。本發明的這個實施方案進一步涵蓋在保持對CGRP的結合特異性的同時所述Fab中SEQ ID N0:31和/或SEQ ID NO:33的添加、缺失以及變體。
[0172]在本文(下文)所述的本發明的一個實施方案中，Fab片段可通過Ab4的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產生。在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Ab4或其Fab片段可通過在哺乳動物細胞如CH0、NS0或HEK293細胞，真菌、昆蟲或微生物系統如酵母細胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達而產生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0173]杭體Ab5
[0174]在一個實施方案中，本發明包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ IDN0:41)。
[0175]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:42)。
[0176]本發明進一步包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASffAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIffGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:43)。
[0177]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:44)。
[0178]本發明進一步涵蓋抗體，其包含對應于SEQ ID NO:41的可變輕鏈序列或SEQ IDN0:42的輕鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:46以及SEQID N0:47的多肽序列中的一種或多種，和/或對應于SEQ ID NO:43的可變重鏈序列或SEQID NO:44的重鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID N0:48、SEQ ID NO:49以及SEQ ID N0:50的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們全部)的組合。
[0179]本發明還涵蓋對CGRP具有結合特異性的抗體的片段。在本發明的一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:41或SEQ ID N0:42的多肽序列。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO:43 或 SEQ ID NO:44 的多肽序列。
[0180]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO:41的可變輕鏈序列或SEQ ID NO:42的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO:46以及SEQ ID NO:47的多肽序列中的一種或多種。
[0181]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO:43的可變重鏈序列或SEQ ID NO:44的重鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO:49以及SEQ ID NO:50的多肽序列中的一種或多種。
[0182]本發明還涵蓋包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發明的一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID N0:41的可變輕鏈區；SEQ ID NO:43的可變重鏈區；SEQ ID NO:41的可變輕鏈區的互補決定區(SEQ ID NO:45 ；SEQ ID NO:46 ；以及SEQ ID N0:47);以及SEQ ID N0:43的可變重鏈區的互補決定區(SEQ ID NO:48 ;SEQID N0:49;以及 SEQ ID N0:50)。
[0183]在本發明的一個特別優選實施方案中，嵌合抗CGRP抗體為Ab5，其包含SEQ IDNO:42和SEQ ID NO:44或可選地由SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0184]在本發明的另一個特別優選實施方案中，抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結合特異性的Fab (片段抗原結合)片段。關于抗體Ab5，Fab片段包括SEQID NO:41的可變輕鏈序列和SEQ ID NO:43的可變重鏈序列。本發明的這個實施方案進一步涵蓋在保持對CGRP的結合特異性的同時所述Fab中SEQ ID N0:41和/或SEQ ID NO:43的添加、缺失以及變體。
[0185]在本文(下文)所述的本發明的一個實施方案中，Fab片段可通過Ab5的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產生。在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Ab5或其Fab片段可通過在哺乳動物細胞如CH0、NS0或HEK293細胞，真菌、昆蟲或微生物系統如酵母細胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達而產生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0186]杭體Ab6
[0187]在一個實施方案中，本發明包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ IDN0:51)。
[0188]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:52)。
[0189]本發明進一步包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASffAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIffGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:53)。
[0190]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:54)。
[0191]本發明進一步涵蓋抗體，其包含對應于SEQ ID NO:51的可變輕鏈序列或SEQ IDNO: 52的輕鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56以及SEQID N0:57的多肽序列中的一種或多種，和/或對應于SEQ ID NO:53的可變重鏈序列或SEQID NO: 54的重鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 59以及SEQ ID N0:60的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們全部)的組合。
[0192]本發明還涵蓋對CGRP具有結合特異性的抗體的片段。在本發明的一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:51或SEQ ID N0:52的多肽序列。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO:53 或 SEQ ID NO:54 的多肽序列。
[0193]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO:51的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:52的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:56以及SEQ ID N0:57的多肽序列中的一種或多種。
[0194]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO:53的可變重鏈序列或SEQ ID N0:54的重鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO:59以及SEQ ID NO:60的多肽序列中的一種或多種。
[0195]本發明還涵蓋包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發明的一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO:51的可變輕鏈區；SEQ ID NO:53的可變重鏈區；SEQ ID NO: 51的可變輕鏈區的互補決定區(SEQ ID NO:55 ；SEQ ID NO:56 ；以及SEQ ID N0:57);以及SEQ ID NO:53的可變重鏈區的互補決定區(SEQ ID NO:58 ；SEQID N0:59;以及 SEQ ID N0:60)。
[0196]在本發明的一個特別優選實施方案中，人源化抗CGRP抗體為Ab6，其包含SEQ IDNO:52和SEQ ID NO:54或可選地由SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:54組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。 [0197]在本發明的另一個特別優選實施方案中，抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結合特異性的Fab (片段抗原結合)片段。關于抗體Ab6，Fab片段包括SEQID N0:51的可變輕鏈序列和SEQ ID NO:53的可變重鏈序列。本發明的這個實施方案進一步涵蓋在保持對CGRP的結合特異性的同時所述Fab中SEQ ID N0:51和/或SEQ ID NO:53的添加、缺失以及變體。
[0198]在本文(下文)所述的本發明的一個實施方案中，Fab片段可通過Ab6的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產生。在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Ab6或其Fab片段可通過在哺乳動物細胞如CH0、NS0或HEK293細胞，真菌、昆蟲或微生物系統如酵母細胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達而產生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0199]杭體Ab7
[0200]在一個實施方案中，本發明包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSIODCFVFGGGTEVVVKR(SEQ IDN0:61)。
[0201]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:62)。
[0202]本發明進一步包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的嵌合抗體:QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:63)。
[0203]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的嵌合抗體:QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:64)。
[0204]本發明進一步涵蓋抗體，其包含對應于SEQ ID NO:61的可變輕鏈序列或SEQ IDN0:62的輕鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66以及SEQID N0:67的多肽序列中的一種或多種，和/或對應于SEQ ID NO:63的可變重鏈序列或SEQID NO:64的重鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID N0:68、SEQ ID NO:69以及SEQ ID N0:70的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們全部)的組合。
[0205]本發明還涵蓋對CGRP具有結合特異性的抗體的片段。在本發明的一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:61或SEQ ID N0:62的多肽序列。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO:63 或 SEQ ID NO:64 的多肽序列。
[0206]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO:61的可變輕鏈序列或SEQ ID NO:62的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66以及SEQ ID NO: 67的多肽序列中的一種或多種。
[0207]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO:63的可變重鏈序列或SEQ ID NO:64的重鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69以及SEQ ID N0:70的多肽序列中的一種或多種。
[0208]本發明還涵蓋包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發明的一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO:61的可變輕鏈區；SEQ ID NO:63的可變重鏈區；SEQ ID N0:61的可變輕鏈區的互補決定區(SEQ ID NO:65 ；SEQ ID NO:66 ；以及SEQ ID N0:67);以及SEQ ID N0:63的可變重鏈區的互補決定區(SEQ ID NO:68 ;SEQID N0:69;以及 SEQ ID N0:70)。
[0209]在本發明的一個特別優選實施方案中，嵌合抗CGRP抗體為Ab7，其包含SEQ IDNO:62和SEQ ID NO:64或可選地由SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:64組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0210]在本發明的另一個特別優選實施方案中，抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結合特異性的Fab (片段抗原結合)片段。關于抗體Ab7，Fab片段包括SEQID N0:61的可變輕鏈序列和SEQ ID NO:63的可變重鏈序列。本發明的這個實施方案進一步涵蓋在保持對CGRP的結合特異性的同時所述Fab中SEQ ID N0:61和/或SEQ ID NO:63的添加、缺失以及變體。
[0211]在本文(下文)所述的本發明的一個實施方案中，Fab片段可通過Ab7的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產生。在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Ab7或其Fab片段可通過在哺乳動物細胞如CHO、NSO或HEK293細胞，真菌、昆蟲或微生物系統如酵母細胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達而產生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0212]抗體Ab8
[0213]在一個實施方案中，本發明包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ IDN0:71)。
[0214]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSIODCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:72)。
[0215]本發明進一步包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:73)。
[0216]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGWGINGRTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDΙΑVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:74)。
[0217]本發明進一步涵蓋抗體，其包含對應于SEQ ID NO:71的可變輕鏈序列或SEQ IDNO: 72的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO:76以及SEQID N0:77的多肽序列中的一種或多種，和/或對應于SEQ ID NO:73的可變重鏈序列或SEQID NO:74的重鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO:79以及SEQ ID N0:80的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們全部)的組合。
[0218]本發明還涵蓋對CGRP具有結合特異性的抗體的片段。在本發明的一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:71或SEQ ID N0:72的多肽序列。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO:73 或 SEQ ID NO:74 的多肽序列。
[0219]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO:71的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:72的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:76以及SEQ ID N0:77的多肽序列中的一種或多種。[0220]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO:73的可變重鏈序列或SEQ ID N0:74的重鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO:78, SEQ ID NO: 79以及SEQ ID N0:80的多肽序列中的一種或多種。
[0221]本發明還涵蓋包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發明的一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO:71的可變輕鏈區；SEQ ID NO:73的可變重鏈區；SEQ ID NO: 71的可變輕鏈區的互補決定區(SEQ ID NO: 75 ；SEQ ID NO:76 ；以及SEQ ID N0:77);以及SEQ ID NO:73的可變重鏈區的互補決定區(SEQ ID NO:78 ；SEQID N0:79;以及 SEQ ID N0:80)。
[0222]在本發明的一個特別優選實施方案中，人源化抗CGRP抗體為Ab8，其包含SEQ IDNO:72和SEQ ID NO:74或可選地由SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:74組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0223]在本發明的另一個特別優選實施方案中，抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結合特異性的Fab (片段抗原結合)片段。關于抗體Ab8，Fab片段包括SEQID N0:71的可變輕鏈序列和SEQ ID NO:73的可變重鏈序列。本發明的這個實施方案進一步涵蓋在保持對CGRP的結合特異性的同時所述Fab中SEQ ID N0:71和/或SEQ ID NO:73的添加、缺失以及變體。
[0224]在本文(下文)所述的本發明的一個實施方案中，Fab片段可通過AbS的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產生。在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Ab8或其Fab片段可通過在哺乳動物細胞如CH0、NS0或HEK293細胞，真菌、昆蟲或微生物系統如酵母細胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達而產生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0225]杭體 Ab9`[0226]在一個實施方案中，本發明包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQ IDN0:81)。
[0227]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:82)。
[0228]本發明進一步包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的嵌合抗體:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEWIGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIffGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:83)。
[0229]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的嵌合抗體:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEWIGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:84)。
[0230]本發明進一步涵蓋抗體，其包含對應于SEQ ID NO:81的可變輕鏈序列或SEQ IDN0:82的輕鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:86以及SEQID N0:87的多肽序列中的一種或多種，和/或對應于SEQ ID NO:83的可變重鏈序列或SEQID N0:84的重鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89以及SEQ ID N0:90的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們全部)的組合。
[0231]本發明還涵蓋對CGRP具有結合特異性的抗體的片段。在本發明的一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:81或SEQ ID N0:82的多肽序列。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO:83 或 SEQ ID NO:84 的多肽序列。
[0232]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO:81的可變輕鏈序列或SEQ ID NO:82的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:86以及SEQ ID N0:87的多肽序列中的一種或多種。
[0233]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO:83的可變重鏈序列或SEQ ID NO:84的重鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO:89以及SEQ ID NO:90的多肽序列中的一種或多種。
[0234]本發明還涵蓋包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發明的一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO:81的可變輕鏈區；SEQ ID NO:83的可變重鏈區；SEQ ID N0:81的可變輕鏈區的互補決定區(SEQ ID NO:85 ；SEQ ID NO:86 ；以及SEQ ID N0:87);以及SEQ ID N0:83的可變重鏈區的互補決定區(SEQ ID NO:88 ;SEQID N0:89;以及 SEQ ID N0:90)。
[0235]在本發明的一個特別優選實施方案中，嵌合抗CGRP抗體為Ab9，其包含SEQ IDNO:82和SEQ ID NO:84或可選地由SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:84組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0236]在本發明的另一個特別優選實施方案中，抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結合特異性的Fab (片段抗原結合)片段。關于抗體Ab9，Fab片段包括SEQID NO:81的可變輕鏈序列和SEQ ID NO:83的可變重鏈序列。本發明的這個實施方案進一步涵蓋在保持對CGRP的結合特異性的同時所述Fab中SEQ ID N0:81和/或SEQ ID NO:83的添加、缺失以及變體。
[0237]在本文(下文)所述的本發明的一個實施方案中，Fab片段可通過Ab9的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產生。在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Ab9或其Fab片段可通過在哺乳動物細胞如CHO、NSO或HEK293細胞，真菌、昆蟲或微生物系統如酵母細胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達而產生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0238]杭體 AblO
[0239]在一個實施方案中，本發明包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ IDN0:91)。
[0240]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:92)。
[0241]本發明進一步包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATffAKGRFTlSRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIffGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:93)。
[0242]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLV QPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:94)。
[0243]本發明進一步涵蓋抗體，其包含對應于SEQ ID NO:91的可變輕鏈序列或SEQ IDN0:92的輕鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:96以及SEQID N0:97的多肽序列中的一種或多種，和/或對應于SEQ ID NO:93的可變重鏈序列或SEQID NO:94的重鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID N0:98、SEQ ID NO:99以及SEQ ID NO: 100的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們全部)的組合。
[0244]本發明還涵蓋對CGRP具有結合特異性的抗體的片段。在本發明的一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:91或SEQ ID N0:92的多肽序列。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO:93 或 SEQ ID NO:94 的多肽序列。
[0245]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO:91的可變輕鏈序列或SEQ ID NO:92的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:96以及SEQ ID N0:97的多肽序列中的一種或多種。
[0246]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO:93的可變重鏈序列或SEQ ID NO:94的重鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 98,SEQ ID NO:99以及SEQ ID N0:100的多肽序列中的一種或多種。
[0247]本發明還涵蓋包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發明的一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO:91的可變輕鏈區；SEQ ID NO:93的可變重鏈區；SEQ ID N0:91的可變輕鏈區的互補決定區(SEQ ID NO:95 ；SEQ ID NO:96 ；以及SEQ ID N0:97);以及SEQ ID N0:93的可變重鏈區的互補決定區(SEQ ID NO:98 ;SEQID N0:99;以及 SEQ ID NO: 100)。
[0248]在本發明的一個特別優選實施方案中，人源化抗CGRP抗體為AblO，其包含SEQ IDNO:92和SEQ ID NO:94或可選地由SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:94組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0249]在本發明的另一個特別優選實施方案中，抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結合特異性的Fab (片段抗原結合)片段。關于抗體AblO，Fab片段包括SEQ ID N0:91的可變輕鏈序列和SEQ ID NO:93的可變重鏈序列。本發明的這個實施方案進一步涵蓋在保持對CGRP的結合特異性的同時所述Fab中SEQ ID N0:91和/或SEQ IDNO:93的添加、缺失以及變體。
[0250]在本文(下文)所述的本發明的一個實施方案中，Fab片段可通過AblO的酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而產生。在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如AblO或其Fab片段可通過在哺乳動物細胞如CH0、NS0或HEK293細胞，真菌、昆蟲或微生物系統如酵母細胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達而產生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
`[0251]杭體 Abl 1
[0252]在一個實施方案中，本發明包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQ IDNO:101)。
[0253]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:102)。
[0254]本發明進一步包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的嵌合抗體:QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:103)。
[0255]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的嵌合抗體:QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:104)。
[0256]本發明進一步涵蓋抗體，其包含對應于SEQ ID NO: 101的可變輕鏈序列或SEQ IDNO: 102的輕鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106以及SEQ ID NO: 107的多肽序列中的一種或多種，和/或對應于SEQ ID NO: 103的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 104的重鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO: 108、SEQ IDNO: 109以及SEQ ID NO: 110的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們全部)的組合。
[0257]本發明還涵蓋對CGRP具有結合特異性的抗體的片段。在本發明的一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:101或SEQ ID N0:102的多肽序列。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO: 103 或 SEQ ID NO: 104 的多肽序列。
[0258]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO: 101的可變輕鏈序列或SEQ ID NO: 102的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 105,SEQ ID NO: 106以及SEQ ID NO: 107 ^多肽序列中的一種或多種。
[0259]在本發明的另 一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO: 103的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 104的重鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 108,SEQ ID NO: 109以及SEQ ID N0:110的多肽序列中的一種或多種。
[0260]本發明還涵蓋包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發明的一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO: 101的可變輕鏈區；SEQ IDNO: 103的可變重鏈區；SEQ ID NO: 101的可變輕鏈區的互補決定區(SEQ ID NO: 105 ；SEQ IDNO:106;以及SEQ ID NO: 107);以及SEQ ID NO: 103的可變重鏈區的互補決定區(SEQ IDNO: 108 ；SEQ ID NO: 109;以及 SEQ ID NO: 110)。
[0261]在本發明的一個特別優選實施方案中，嵌合抗CGRP抗體為Abll，其包含SEQ IDNO: 102和SEQ ID NO: 104或可選地由SEQ ID NO: 102和SEQ ID NO: 104組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0262]在本發明的另一個特別優選實施方案中，抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結合特異性的Fab (片段抗原結合)片段。關于抗體Abll，Fab片段包括SEQ ID NO: 101的可變輕鏈序列和SEQ ID NO: 103的可變重鏈序列。本發明的這個實施方案進一步涵蓋在保持對CGRP的結合特異性的同時所述Fab中SEQ ID NO: 101和/或SEQID NO: 103的添加、缺失以及變體。[0263]在本文(下文)所述的本發明的一個實施方案中，Fab片段可通過Abll的酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而產生。在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Abll或其Fab片段可通過在哺乳動物細胞如CHO、NS0或HEK293細胞，真菌、昆蟲或微生物系統如酵母細胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達而產生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0264]杭體 Abl2
[0265]在一個實施方案中，本發明包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ IDN0:111)。 [0266]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:112)。
[0267]本發明進一步包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:113)。
[0268]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:114)。
[0269]本發明進一步涵蓋抗體，其包含對應于SEQ ID NO: 111的可變輕鏈序列或SEQ IDNO: 112的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 116以及SEQ ID NO: 117的多肽序列中的一種或多種，和/或對應于SEQ ID NO: 113的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 114的重鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO: 118、SEQ IDNO: 119以及SEQ ID NO: 120的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們全部)的組合。
[0270]本發明還涵蓋對CGRP具有結合特異性的抗體的片段。在本發明的一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO: 111或SEQ ID NO: 112的多肽序列。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO: 113 或 SEQ ID NO: 114 的多肽序列。
[0271]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO: 111的可變輕鏈序列或SEQ ID NO: 112的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 115,SEQ ID NO: 116以及SEQ ID NO: 117的多肽序列中的一種或多種。
[0272]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO: 113的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 114的重鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 118,SEQ ID NO: 119以及SEQ ID NO: 120 ^多肽序列中的一種或多種。 [0273]本發明還涵蓋包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發明的一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO: 111的可變輕鏈區；SEQ IDNO: 113的可變重鏈區；SEQ ID NO: 111的可變輕鏈區的互補決定區(SEQ ID NO: 115 ；SEQ IDNO:116;以及SEQ ID NO: 117);以及SEQ ID NO: 113的可變重鏈區的互補決定區(SEQ IDNO: 118 ；SEQ ID NO: 119;以及 SEQ ID NO: 120)。
[0274]在本發明的一個特別優選實施方案中，人源化抗CGRP抗體為Abl2，其包含SEQ IDNO: 112和SEQ ID NO: 114或可選地由SEQ ID NO: 112和SEQ ID NO: 114組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0275]在本發明的另一個特別優選實施方案中，抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結合特異性的Fab (片段抗原結合)片段。關于抗體Abl2，Fab片段包括SEQ ID NO: 111的可變輕鏈序列和SEQ ID NO: 113的可變重鏈序列。本發明的這個實施方案進一步涵蓋在保持對CGRP的結合特異性的同時所述Fab中SEQ ID NO: 111和/或SEQID NO: 113的添加、缺失以及變體。
[0276]在本文(下文)所述的本發明的一個實施方案中，Fab片段可通過Abl2的酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而產生。在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Ab12或其Fab片段可通過在哺乳動物細胞如CHO、NSO或HEK293細胞，真菌、昆蟲或微生物系統如酵母細胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達而產生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0277]杭體 Abl3
[0278]在一個實施方案中，本發明包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的嵌合抗體:AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEWVKR(SEQ IDNO:121)。
[0279]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的嵌合抗體:AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:122)。
[0280]本發明進一步包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的嵌合抗體:QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGI IYNGDGSTYYASffVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:123)。
[0281]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的嵌合抗體:QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGCIYNGDGSTYYASWVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:124)。
[0282]本發明進一步涵蓋抗體，其包含對應于SEQ ID NO: 121的可變輕鏈序列或SEQ IDNO: 122的輕鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 126以及SEQ ID NO: 127的多肽序列中的一種或多種，和/或對應于SEQ ID NO: 123的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 124的重鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO: 128、SEQ IDNO: 129以及SEQ ID NO: 130的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們全部)的組合。
[0283]本發明還涵蓋對CGRP具有結合特異性的抗體的片段。在本發明的一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO: 121或SEQ ID NO: 122的多肽序列。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO: 123 或 SEQ ID NO: 124 的多肽序列。
[0284]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO: 121的可變輕鏈序列或SEQ ID NO: 122的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 125,SEQ ID NO: 126以及SEQ ID N0:127的多肽序列中的一種或多種。
[0285]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO: 123的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 124的重鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 128,SEQ ID NO: 129以及SEQ ID N0:130的多肽序列中的一種或多種。`
`[0286]本發明還涵蓋包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發明的一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO: 121的可變輕鏈區；SEQ IDNO: 123的可變重鏈區；SEQ ID NO: 121的可變輕鏈區的互補決定區(SEQ ID NO: 125 ；SEQ IDNO: 126;以及SEQ ID NO: 127);以及SEQ ID NO: 123的可變重鏈區的互補決定區(SEQ IDNO: 128 ；SEQ ID NO: 129;以及 SEQ ID NO: 130)。
[0287]在本發明的一個特別優選實施方案中，嵌合抗CGRP抗體為Abl3，其包含SEQ IDNO: 122和SEQ ID NO: 124或可選地由SEQ ID NO: 122和SEQ ID NO: 124組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0288]在本發明的另一個特別優選實施方案中，抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結合特異性的Fab (片段抗原結合)片段。關于抗體Abl3，Fab片段包括SEQ ID NO: 121的可變輕鏈序列和SEQ ID NO: 123的可變重鏈序列。本發明的這個實施方案進一步涵蓋在保持對CGRP的結合特異性的同時所述Fab中SEQ ID NO: 121和/或SEQID NO: 123的添加、缺失以及變體。
[0289]在本文(下文)所述的本發明的一個實施方案中，Fab片段可通過Abl3的酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而產生。在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Ab13或其Fab片段可通過在哺乳動物細胞如CHO、NSO或HEK293細胞，真菌、昆蟲或微生物系統如酵母細胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達而產生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0290]杭體 Ab 14
[0291]在一個實施方案中，本發明包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ IDNO:131)。
[0292]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:132)。
[0293]本發明進一步包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATffAKGRFTlSRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIffGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:133)。
[0294]本發明還包括對CGRP具有結合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDffLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:134)。
[0295]本發明進一步涵蓋抗體，其包含對應于SEQ ID NO: 131的可變輕鏈序列或SEQ IDNO: 132的輕鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136以及SEQ ID NO: 137的多肽序列中的一種或多種，和/或對應于SEQ ID NO: 133的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 134的重鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的SEQ ID NO: 138、SEQ IDNO: 139以及SEQ ID NO: 140的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們全部)的組合。
[0296]本發明還涵蓋 對CGRP具有結合特異性的抗體的片段。在本發明的一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO: 131或SEQ ID NO: 132的多肽序列。在本發明的另一個實施方案中，本發明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO: 133 或 SEQ ID NO: 134 的多肽序列。
[0297]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO: 131的可變輕鏈序列或SEQ ID NO: 132的輕鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 135,SEQ ID NO: 136以及SEQ ID N0:137的多肽序列中的一種或多種。
[0298]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應于SEQ ID NO: 133的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 134的重鏈序列的互補決定區(CDR或高變區)的SEQ ID NO: 138,SEQ ID NO: 139以及SEQ ID N0:140的多肽序列中的一種或多種。
[0299]本發明還涵蓋包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發明的一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO: 131的可變輕鏈區；SEQ IDNO: 133的可變重鏈區；SEQ ID NO: 131的可變輕鏈區的互補決定區(SEQ ID NO: 135 ；SEQ IDNO: 136;以及SEQ ID NO: 137);以及SEQ ID NO: 133的可變重鏈區的互補決定區(SEQ IDNO: 138 ；SEQ ID NO: 139;以及 SEQ ID NO: 140)。
[0300]在本發明的一個特別優選實施方案中，人源化抗CGRP抗體為Abl4，其包含SEQ IDNO: 132和SEQ ID NO: 134或可選地由SEQ ID NO: 132和SEQ ID NO: 134組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0301]在本發明的另一個特別優選實施方案中，抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結合特異性的Fab (片段抗原結合)片段。關于抗體Abl4，Fab片段包括SEQ ID NO: 131的可變輕鏈序列和SEQ ID NO: 133的可變重鏈序列。本發明的這個實施方案進一步涵蓋在保持對CGRP的 結合特異性的同時所述Fab中SEQ ID NO: 131和/或SEQID NO: 133的添加、缺失以及變體。
[0302]在本文(下文)所述的本發明的一個實施方案中，Fab片段可通過Abl4的酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而產生。在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Abl4或其Fab片段可通過在哺乳動物細胞如CHO、NS0或HEK293細胞，真菌、昆蟲或微生物系統如酵母細胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達而產生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0303]在另一個實施方案中，抗體片段可以一種或多種下列非限制性形式存在:Fab、Fab’、F(ab’) 2、Fv以及單鏈Fv抗體形式。在一個優選實施方案中，本文所述的抗CGRP抗體進一步包括包含下文所示序列的κ恒定輕鏈序列:
[0304]VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:283)。
[0305]在另一個優選實施方案中，本文所述的抗CGRP抗體進一步包括包含下文所示序列的y-ι恒定重鏈多肽序列:
[0306]ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:284)。
[0307]在另一個實施方案中，本發明涵蓋分離的抗CGRP抗體，其包含選自以下的VH多肽序列:SEQ ID N0:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123 或 133，或其變體；并且進一步包含選自以下的八多肽序列:SEQ ID N0:l、ll、21、31、41、51、61、71、81、91、101、lll、121或131，或其變體，其中所述Vh或'多肽中的一個或多個框架殘基(FR殘基)已經被另一個氨基酸殘基取代，產生特異性結合CGRP的抗CGRP抗體。本發明涵蓋這些抗體的人源化和嵌合形式。此類嵌合抗體可包括衍生自IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgGlO、IgGlU IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18 或 IgG19 恒定區的Fe。
[0308]在本發明的一個實施方案中，抗體或Vh或\多肽源自或選自在本文所述人源化過程開始之前的一種或多種兔B細胞群體。
[0309]在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體和其片段不具有對CGRP-R的結合特異性。在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體和其片段抑制CGRP與CGRP-R的締合。在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體和其片段抑制CGRP與CGRP-R和/或另外的蛋白質和/或其多聚體的締合，和/或拮抗其生物效應。
[0310]如本文的段落中所述，抗體和其片段可被翻譯后修飾以添加效應子部分如化學連接子、可檢測部分如例如熒光染料、酶、底物、生物發光材料、放射性材料以及化學發光部分，或功能性部分如例如鏈霉親和素、親和素、生物素、細胞毒素、細胞毒性劑以及放射性材料。
[0311]抗體或其片段也可以被化學修飾以提供另外的優點，例如多肽的溶解性、穩定性以及循環時間(體內半衰期)增加，或免疫原性降低(參見美國專利N0.4，179，337)。用于衍生化的化學部分可選自水溶性聚合物，例如聚乙二醇、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇等。抗體和其片段可在分子內的任意位置或在分子內的預定位置被修飾并且可包括一個、兩個、三個或更多個連接的化學部分。
[0312] 聚合物可具有任何分子量，并且可為分枝或未分枝的。對于聚乙二醇來說，為便于處理和制造，優選的分子量介于約IkDa與約IOOkDa之間(術語“約”指示在制備聚乙二醇時，一些分子的重量將比所述分子量更大或略小)。取決于所需治療概況(例如，所需持續釋放的持續時間、對生物活性的影響(如果存在的話)、處理簡易性、聚乙二醇與治療蛋白或類似物的抗原性和其他已知作用的程度或缺乏)，可使用其他大小。例如，聚乙二醇可具有約 200、500、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10，000、10，500、11，000、11，500、12，000、12，500、13，000、13，500、14，000、14，500、15，000、15，500、16，000、16，500、17，000、17，500、18，000、18，500、19，000、19，500、20，000、25，000、30，000、35，000,40,000,50,000,55, 000,60, 000,65, 000,70, 000,75, 000,80, 000,85, 000、90，000,95, 000或100，OOOkDa的平均分子量。分枝聚乙二醇描述于例如美國專利N0.5, 643, 575 ；Morpurgo 等人,Appl.Biochem.Biotechnol.56:59-72(1996) ；Vorobjev等人,Nucleosides NucIeotides 18:2745-2750 (1999)；以及 Caliceti 等人,Bioconjug.Chem.10:638-646(1999)中，其各自的公開內容以引用的方式并入本文中。
[0313]存在多種為本領域技術人員可用的連接方法。參見例如EP0401384，其以引用的方式并入本文中(將PEG偶聯至G-CSF)。也參見Malik等人，Exp.Hematol.20:1028-1035 (1992)(報道使用三氟代乙烷磺酰氯進行GM-CSF的聚乙二醇化)。例如，聚乙二醇可經由反應性基團(例如游離氨基或羧基)通過氨基酸殘基共價結合。反應性基團為可結合至活化的聚乙二醇分子的那些基團。具有游離氨基的氨基酸殘基可包括賴氨酸殘基和N端氨基酸殘基；具有游離羧基的氨基酸殘基可包括天冬氨酸殘基、谷氨酸殘基以及C端氨基酸殘基。巰基也可以用作反應性基團以連接聚乙二醇分子。對于治療目的優選的是在氨基處連接，例如在N端或賴氨酸基團處連接。
[0314]如上文所示，聚乙二醇可經由鍵聯至多種氨基酸殘基中的任一個而連接至蛋白質。例如，聚乙二醇可經由與賴氨酸、組氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸殘基的共價鍵而鍵聯至多肽。可使用一種或多種反應化學來連接聚乙二醇與特定氨基酸殘基(例如，賴氨酸、組氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸)或多于一種類型的氨基酸殘基(例如，賴氨酸、組氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、半胱氨酸以及其組合)。
[0315]可選地，抗體或其片段可經由與白蛋白(包括但不限于重組人類血清白蛋白或其片段或變體(參見例如1999年3月2日頒予的美國專利N0.5，876，969 ;歐洲專利0 413622 ；以及1998年6月16日頒予的美國專利N0.5，766，883，以全文引用的方式并入本文中))或其他循環血蛋白如轉鐵蛋白或鐵蛋白融合而具有增加的體內半衰期。在一個優選的實施方案中，本發明的多肽和/或抗體(包括其片段或變體)與人類血清白蛋白的成熟形式(即，如歐洲專利0 322 094的圖1和圖2中所示的人類血清白蛋白的氨基酸1_585，該文獻以全文引用的方式并入本文中)融合。本發明還涵蓋了編碼本發明的融合蛋白的多核苷酸。
[0316]關于可檢測部分，另外的示例性酶包括但不限于辣根過氧化物酶、乙酰膽堿酯酶、堿性磷酸酶、β_半乳糖苷酶以及熒光素酶。另外的示例性熒光材料包括但不限于羅丹明(rhodamine)、突光素、異硫氰酸突光素、傘形酮(umbel 1 iferone)、二氯三嗪胺、藻紅蛋白(phycoerythrin)以及丹磺酰氯(dansyl chloride)。另外的示例性化學發光部分包括但不限于魯米諾(luminol)。另外的示例性生物發光材料包括但不限于熒光素和水母發光蛋白(aequorin)。另外的示例性放射性材料包括但不限于碘125 (1251)、碳14(14C)、硫35(3?)、氚(?)以及磷32 (32P)。
[0317]關于功能性部分，示例性細胞毒性劑包括但不限于甲氨蝶呤(methotrexate)、氨基蝶呤(aminopterin)、6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧唳、達卡巴嚷(decarbazine);燒化劑如氣芥(mechlorethamine)、賽替派(thioepa)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、美法侖(melphalan)、卡莫司汀(carmustine) (BSNU)、絲裂霉素C (mitomycin C)、洛莫司汀(lomustine) (CCNU)、1_甲基亞硝基脲、環磷酰胺(cyclothosphamide)、氮芥、白消安(busulfan)、二溴甘露醇、鏈脲佐菌素(streptozotocin)、絲裂霉素C、順式二氯二氨合鉬(II) (DDP)順鉬以及卡鉬(鉬爾定(paraplatin));蒽環類包括柔紅霉素(以前的道諾霉素)、阿霉素(亞德里亞霉素)、地托比星(detorubicin)、洋紅霉素(carminomycin)、伊達比星(idarubicin)、表柔比星(epirubicin)、米托蒽酉昆(mitoxantrone)以及比生群(bisantrene);抗生素包括更生霉素(放線菌素D)、博萊霉素、卡奇霉素、光神霉素以及安曲霉素(AMC);以及抗有絲分裂劑如長春花生物堿、長春新堿(vincristine)以及長春堿(vinblastine)。其他細胞毒性劑包括紫杉醇(泰素)、蓖麻毒素、假單胞菌外毒素(pseudomonas exotoxin)、吉西他濱(gemcitabine)、細胞松弛素 B (cytochalasin B)、短桿菌肽 D (gramicidin D)、溴化乙錠(ethidium bromide)、依米丁 (emetine)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、秋水仙素(colchicin)、二羥基炭疽菌素二酮、1-去氫睪酮、糖皮質激素、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛爾(propranolol)、嘌呤霉素、丙卡巴肼(procarbazine)、羥基脲、天冬酰胺酶、皮質類固醇、米托坦(0，P’-(DDD))、干擾素以及這些細胞毒性劑的混合物。
[0318]另外的細胞毒性劑包括但不限于化學治療劑如卡鉬、順鉬、太平洋紫杉醇、吉西他濱、卡奇霉素、阿霉素、5-氟尿嘧啶、絲裂霉素C、放線菌素D、環磷酰胺、長春新堿以及博萊霉素。來自植物和細菌的毒性酶如蓖麻毒素、白喉毒素以及假單胞菌毒素可以綴合至人源化或嵌合抗體或其結合片段，以產生細胞類型特異性殺傷試劑(Youle等人，Proc.Nat，I Acad.Sc1.USA77:5483 (1980) ;Gilliland 等人，Proc.Nat，I Acad.Sc1.USA77:4539 (1980) ；Krolick 等人，Proc.Nat，I Acad.Sc1.USA77:5419 (1980))。
[0319]其他細胞毒性劑包括由Goldenberg在美國專利N0.6，653，104中所述的細胞毒性核糖核酸酶。本發明的實施方案還涉及放射免疫綴合物，其中使用或不使用復合物形成劑，使發射α或β粒子的放射性核素穩定地偶聯至抗體或其結合片段。此類放射性核素包括 β 發射體，例如磷-32 (32P)、鈧-47 (47Sc)、銅-67 (67Cu)、鎵-67 (67Ga)、釔-88 (88Y)、釔-90 (90Y)、碘-125 (125I)、碘-131 (131I)、釤-153 (153Sm)、镥-177 (177Lu)、錸-186 (186Re)或錸-188 (188Re);以及 α 發射體，例如砹-211 (211At)、鉛-212 (212Pb)、鉍-212 (212Bi)或鉍-213 (213Bi)或錒-2 2 5 (225Ac)。
[0320]用于將抗體或其結合片段結合至可檢測部分等的方法在本領域是已知的，例如由 Hunter 等人,Naturel44:945 (1962) ；David 等人,Biochemistryl3:1014 (1974)；Pain 等人，J.1mmunol.Meth.40:219 (1981)；以及 Nygren, J.，Histochem.andCytochem.30:407(1982)描 述的那些方法。
[0321]本文所述的實施方案進一步包括與本文所示的抗體、抗體片段、雙功能抗體、SMIP、駱駝抗體、納米抗體、IgNAR、多肽、可變區以及⑶R基本上同源的變體和等效物。這些物質可包含例如保守性取代突變(即一個或多個氨基酸被類似的氨基酸取代)。例如，保守性取代是指氨基酸被同一通用類別內的另一氨基酸取代，例如一個酸性氨基酸被另一酸性氨基酸取代，一個堿性氨基酸被另一堿性氨基酸取代，或一個中性氨基酸被另一中性氨基酸取代。保守性氨基酸取代所預期的內容在本領域眾所周知。
[0322]在另一個實施方案中，本發明涵蓋與任何一種或多種本文所示的抗體片段、可變區以及CDR的多肽序列具有至少90%或更大的序列同源性的多肽序列。更優選地，本發明涵蓋與任何一種或多種本文所示的抗體片段、可變區以及CDR的多肽序列具有至少95%或更大的序列同源性、甚至更優選至少98%或更大的序列同源性以及再更優選至少99%或更大的序列同源性的多肽序列。用于測定核酸與氨基酸序列之間的同源性的方法為本領域技術人員眾所周知。
[0323]在另一個實施方案中，本發明進一步涵蓋進一步具有抗CGRP活性的本文所示抗體片段、可變區以及CDR的上述多肽同源物。本文例如在下文的段落-中闡述抗CGRP活性的非限制性例子。
[0324]在另一個實施方案中，本發明進一步涵蓋結合任何上述序列的抗獨特型抗體的產生和使用。在一個示例性實施方案中，此類抗獨特型抗體可以施用于已接受抗CGRP抗體的受試者以調節、降低或中和抗CGRP抗體的作用。此類抗獨特型抗體還可以用于治療特征在于存在抗CGRP抗體的自身免疫疾病。此類抗獨特型抗體的另一個示例性用途為檢測本發明的抗CGRP抗體，例如監測在受試者的血液或其他體液中存在的抗CGRP抗體的水平。
[0325]本發明還涵蓋抗CGRP抗體，其包含用于取代本文所述的任何其他多核苷酸序列的本文所述的任何多肽或多核苷酸序列。例如，但不限于此，本發明涵蓋包含本文所述的任何可變輕鏈和可變重鏈序列的組合的抗體，并且進一步涵蓋由本文所述的任何CDR序列取代本文所述的任何其他CDR序列而產生的抗體。
[0326]本發明的另外的示例性實施方案
[0327]在另一個實施方案中，本發明涵蓋一種或多種抗人類CGRP抗體或其抗體片段，其特異性結合于在完整人類CGRP多肽或其片段上與選自以下的抗人類CGRP抗體相同的重疊線性或構象表位和/或競爭結合于在完整人類CGRP多肽或其片段上與選自以下的抗人類CGRP 抗體相同的重疊線性或構象表位:Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abll、Abl2、Abl3或Abl4。在一個優選實施方案中，抗人類CGRP抗體或其片段特異性結合于在完整人類CGRP多肽或其片段上與Ab3、Ab6、Abl3或Abl4相同的重疊線性或構象表位和/或競爭結合于在完整人類CGRP多肽或其片段上與Ab3、Ab6、Abl3或Abl4相同的重疊線性或構象表位。 [0328]本發明的一個優選實施方案是針對于對CGRP具有結合特異性并抑制由CGRP與CGRP受體結合而介導的生物活性的嵌合或人源化抗體和其片段(包括Fab片段)。在本發明的一個特別優選實施方案中，嵌合或人源化抗CGRP抗體是選自Ab3、Ab6、Abl3或Abl4。
[0329]在本發明的另一個實施方案中涵蓋降低、治療或預防與CGRP相關的疾病或病癥的方法，該方法通過影響經由CGRP介導的那些生物活性，從而避免經由CGRP與CGRP-R的結合而介導的生物活性。在一個實施方案中，該與CGRP相關的疾病或病癥為偏頭痛或另一種病癥，其中CGRP引起疼痛、頭痛、疼痛、癌癥、膀胱過度活動癥或體重減輕。本文提供與CGRP相關的疾病和病癥的另一個非限制性列表。
[0330]本發明的另一個優選實施方案涵蓋Fab多肽序列用于治療患者的偏頭痛和頭痛的用途。本公開中他處提供可使用Fab多肽序列治療的偏頭痛和頭痛的非限制性類型。
[0331]在本發明的另一個實施方案中，抗人類CGRP抗體為特異性結合于在完整CGRP多肽或其片段上由Ab3、Ab6、Abl3或Abl4特異性結合的相同的重疊線性或構象表位的抗體，如使用橫跨天然人類CGRP多肽的全長的重疊線性肽片段通過表位定位所確定。
[0332]本發明還針對與和本文公開的抗體或抗體片段相同的CGRP表位結合和/或與抗CGRP抗體競爭結合于CGRP的抗CGRP抗體，包括但不限于選自Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abll、Abl2、Abl3 或 Abl4 的抗 CGRP 抗體。
[0333]在另一個實施方案中，本發明還針對分離的抗CGRP抗體或抗體片段，其包含一個或多個在選自以下的VH多肽序列中所含的CDR:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133，或其變體，和/或一個或多個在選自以下的\多肽序列中所含的⑶R:1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121 或 131，或其變體。
[0334]在本發明的一個實施方案中，在前面兩個段落中所討論的抗人類CGRP抗體在可變輕鏈和可變重鏈區中各包含至少2個互補決定區(CDR)，其與選自以下的抗人類CGRP抗體中所含的 CDR 相同:Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abll、Abl2、Abl3或Abl4。
[0335]在一個優選的實施方案中，上文討論的抗人類CGRP抗體在可變輕鏈和可變重鏈區中各包含至少2個互補決定區(⑶R)，其與Ab3或Ab6中所含的⑶R相同。在另一個實施方案中，上文討論的抗人類CGRP抗體的所有CDR都與選自以下的抗人類CGRP抗體中所含的 CDR 相同:Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abll、Abl2、Abl3 或 Abl4。在本發明的一個優選實施方案中，上文討論的抗人類CGRP抗體的所有CDR都與選自Ab3或Ab6的抗人類CGRP抗體中所含的⑶R相同。
[0336]本發明進一步涵蓋上文討論的一種或多種抗人類CGRP抗體是未糖基化的；其包含已被修飾以改變效應功能、半衰期、蛋白水解和/或糖基化的Fe區；其為人類抗體、人源化抗體、單鏈抗體或嵌合抗體；以及其為源自兔(親本)抗人類CGRP抗體的人源化抗體。
[0337]本發明進一步涵蓋一種或多種抗人類CGRP抗體，其中所述抗體的可變輕鏈區和可變重鏈區中的框架區(FR)分別為未被修飾或已通過用親本兔抗體的相應FR殘基取代可變輕鏈或重鏈區中的一個或多個人類FR殘基而被修飾的人類FR，并且其中所述人類FR已經來源于人類可變重鏈和輕鏈抗體序列，所述人類可變重鏈和輕鏈抗體序列已基于其相對于文庫中所含的其他人類生殖系抗體序列與相應的兔可變重鏈或輕鏈區的高同源性水平而從人類生殖系抗體序列文庫中選出。
[0338]在本發明的一個實施方案中，抗人類CGRP抗體或片段特異性結合于表達CGRP的人類細胞和/或結合于體內循環的可溶性CGRP分子，包括在與表達CGRP的細胞相關的疾病患者中于人類細胞上表達或通過人類細胞表達的CGRP。
[0339]在另一個實施方案中，該疾病選自偏頭痛(有或無先兆)、體重減輕、癌癥或腫瘤、與癌癥或腫瘤生長相關的血管生成、與癌癥或腫瘤存活相關的血管生成、偏癱性偏頭痛、叢集性頭痛、偏頭痛性神經痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、潮熱、慢性陣發性半側顱痛、由于頭或頸中 的潛在結構問題而致的繼發性頭痛、腦神經痛、竇性頭痛(例如與竇炎相關)、過敏癥誘發的頭痛或偏頭痛、疼痛、炎性疼痛、手術后切口疼痛、復雜區域性疼痛綜合征、癌癥疼痛、原發性或轉移性骨癌疼痛、骨折疼痛、慢性疼痛、骨質疏松性骨折疼痛、由灼傷產生的疼痛、骨質疏松癥、痛風性關節疼痛、腹痛、與鐮狀細胞危象相關的疼痛和其他傷害性疼痛，以及肝細胞癌、乳腺癌、肝硬化、神經源性疼痛、神經性疼痛、傷害性疼痛、三叉神經痛、帶狀皰疹后神經痛、幻肢痛、纖維肌痛、經痛、卵巢痛、反射性交感神經營養不良、神經源性疼痛、骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、下背痛、糖尿病性神經病變、坐骨神經痛，或與以下相關的疼痛或內臟疼痛:胃-食管反流、消化不良、腸易激綜合征、激惹性結腸、痙攣性結腸、粘液性結腸炎、炎癥性腸病、克羅恩病、回腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、月經期、分娩、更年期、前列腺炎、胰腺炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎(包括間質性膀胱炎(1C))、與腸梗阻相關的手術、憩室炎、腹膜炎、心包炎、肝炎、闌尾炎、結腸炎、膽囊炎、子宮內膜異位、慢性和/或急性胰腺炎、心肌梗塞、腎臟疼痛、胸膜疼痛、前列腺炎、骨盆痛、器官創傷、慢性傷害性疼痛、慢性神經性疼痛、慢性炎性疼痛、纖維肌痛、爆發性疼痛以及持續性疼痛。
[0340]在本發明的另一個實施方案中，疾病為起因于惡性疾病或癌癥的癌癥疼痛，該惡性疾病或癌癥優選地選自以下一種或多種:腺組織中的腺癌、器官胚胎組織中的胚細胞瘤、上皮組織中的癌瘤、形成血細胞的組織中的白血病、淋巴組織中的淋巴瘤、骨髓組織中的骨髓瘤、結締組織或支持組織中的肉瘤、腎上腺癌、AIDS相關淋巴瘤、貧血、膀胱癌、骨癌、腦癌、乳腺癌、類癌瘤、子宮頸癌、化學療法、結腸癌、血細胞減少癥、子宮內膜癌、食道癌、胃癌、頭癌、頸癌、肝膽管癌、腎癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、何杰金病(Hodgkin’sdisease)、淋巴瘤、非何杰金病、神經系統腫瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、甲狀腺癌、尿道癌、骨癌、結締組織肉瘤癌、骨組織癌、造血細胞癌、骨髓癌、多發性骨髓瘤、白血病、原發性或繼發性骨癌、轉移至骨骼的腫瘤、浸潤神經和空腔臟器的腫瘤、接近神經結構的腫瘤。癌癥疼痛更優選包括內臟疼痛，優選為起因于胰腺癌和/或腹部轉移瘤的內臟疼痛。癌癥疼痛更優選包括軀體疼痛，優選為由于骨癌、骨骼中的轉移瘤、手術后疼痛、結締組織肉瘤癌、骨組織癌、骨髓的造血細胞癌、多發性骨髓瘤、白血病、原發性或繼發性骨癌中的一種或多種而造成的軀體疼痛。
[0341]本發明進一步涵蓋直接或間接連接至可檢測標記或治療劑的抗人類CGRP抗體或片段。
[0342]本發明還涵蓋產生如上文所示的抗人類CGRP抗體或抗體片段的表達的一種或多種核酸序列，包括包含酵母或人類偏愛密碼子或可選地由酵母或人類偏愛密碼子組成的核酸序列。本發明還涵蓋包含所述核酸序列的載體(包括質粒或重組病毒載體)。本發明還涵蓋表達至少一種上文所示抗體的宿主細胞或重組宿主細胞，包括哺乳動物、酵母、細菌以及昆蟲細胞。在一個優選實施方案中，宿主細胞為酵母細胞。在另一個優選實施方案中，酵母細胞為二倍體酵母細胞。在一個更優選實施方案中，酵母細胞為畢赤酵母。
[0343]本發明還涵蓋一種治療方法，其包括向患有與表達CGRP的細胞相關的疾病或病狀的患者施用治療有效量的至少一種本文所述的抗人類CGRP抗體或片段。本發明還涵蓋該治療方法可包括施用兩種或更多種抗CGRP抗體或其片段并公開于本文中。如果向患者施用多于一種的抗體，則多種抗體可同時或并行施用，或其施用可交錯進行。可治療的疾病呈現于上文和本文他處所示的非限制性列表中。在一個優選實施方案中，疾病選自偏頭痛、頭痛、體重減輕、疼痛、癌癥 疼痛或神經性疼痛。在另一個實施方案中，治療進一步包括施用選自化學療法、放射線療法、細胞因子施用或基因療法的另一種治療劑或方式。
[0344]在本發明的非限制性實施方案中，另一種治療劑或方式包括泰素(紫杉醇)或其衍生物、鉬化合物如卡鉬或順鉬、蒽環類如阿霉素、烷化劑如環磷酰胺、抗代謝物如5-氟尿嘧啶、或依托泊苷。
[0345]本發明進一步涵蓋體內成像方法，其檢測表達CGRP的細胞的存在，該方法包括施用診斷有效量的至少一種抗人類CGRP抗體。在一個實施方案中，所述施用進一步包括在表達CGRP的疾病位點施用促進抗體檢測的放射性核素或熒光團。在另一個實施方案中，使用所述體內成像方法的結果來促進適當的治療方式的設計，包括包含放射線療法、化學療法或其組合的治療方式。
[0346]對CGRP具有結合特異性的本發明的抗CGRP抗體和其片段的抗CGRP活性還可以通過其對于CGRP的結合強度或其親和力來描述。在本發明的一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的本發明的抗CGRP抗體和其片段以小于或等于5 X ΙΟΙ、ΙΟΙ、5 X 10_8M、10_8M、5 X 10-9Μ、10-9Μ、5 X I (T10M、I (T10M、5 X I (T11M、I (T11M、5 X I (T12M、I (T12M、5 X KT13M 或 KT13M 的解離常數(Kd)結合于CGRP。優選地，抗CGRP抗體和其片段以小于或等于10_ηΜ、5 X KT12M或10_12Μ的解離常數結合CGRP。在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的本發明的抗CGRP抗體和其片段結合于線性或構象CGRP表位。
[0347]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的本發明的抗CGRP抗體和其片段的抗CGRP活性以小于或等于IQ-4S-1AX IO-5S-1UQ-5S-1AX IQ-6S-1UQ-6S'5X KTS—1或lO—V1的解離速率結合于CGRP。
[0348]在本發明的另一個實施方案中，對CGRP具有結合特異性的本發明的抗CGRP抗體和其片段的抗CGRP活性通過預防、改善或減少與CGRP相關的疾病和病癥的癥狀或可選地治療與CGRP相關的疾病和病癥而展現抗CGRP活性。本文示出與CGRP相關的疾病和病癥的非限制性例子。
[0349]編碼抗CGRP抗體多肽的多核苷酸
[0350]杭體 Abl
[0351]本發明進一步針對編碼對CGRP具有結合特異性的抗體多肽的多核苷酸。在本發明的一個實施方案中，本發明的多核苷酸包含編碼SEQ ID NO: 1的可變輕鏈多肽序列的下列多核苷酸序列或可選地由編碼SEQ ID NO: 1的可變輕鏈多肽序列的下列多核苷酸序列組成:
[0352]CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:141)。
[0353]在本發明的一個實施方案中，本發明的多核苷酸包含編碼SEQ ID N0:2的輕鏈多肽序列的下列多核苷酸序列 或可選地由編碼SEQ ID N0:2的輕鏈多肽序列的下列多核苷酸序列組成:
[0354]CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:142)。
[0355]在本發明的另一個實施方案中，本發明的多核苷酸包含編碼SEQ ID N0:3的可變重鏈多肽序列的下列多核苷酸序列或可選地由編碼SEQ ID NO:3的可變重鏈多肽序列的下列多核苷酸序列組成:
[0356]CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:143)。
[0357]在本發明的一個實施方案中，本發明的多核苷酸包含編碼SEQ ID NO:4的重鏈多肽序列的下列多核苷酸序列或可選地由編碼SEQ ID N0:4的重鏈多肽序列的下列多核苷酸序列組成:CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:144)。
[0358]在本發明的另一個實施方案中，編碼對CGRP具有結合特異性的抗體片段的多核苷酸包含以下或可選地由以下組成:對應于編碼SEQ ID NO:1的輕鏈可變序列或SEQID NO: 2的輕鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的多核苷酸的SEQ ID NO: 145, SEQ IDNO: 146以及SEQ ID NO: 147的多核苷酸序列中的一種或多種。
[0359]在本發明的另一個實施方案中，編碼對CGRP具有結合特異性的抗體片段的多核苷酸包含以下或可選地由以下組成:對應于編碼SEQ ID NO:3的重鏈可變序列或SEQID N0:4的重鏈序列的互補決定區(⑶R或高變區)的多核苷酸的SEQ ID NO: 148, SEQ IDNO: 149以及SEQ ID NO: 150的多核苷酸序列中的一種或多種。
[0360]本發明還涵蓋包括一種或多種編碼本文所述的抗體片段的多核苷酸序列的多核苷酸序列。在本發明的一個實施方案中，編碼對CGRP具有結合特異性的抗體片段的多核苷酸包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列編碼抗體片段的多核苷酸:編碼SEQ ID NO:1的輕鏈可變序列的多核苷酸SEQ ID NO: 141;編碼SEQ IDNO:2的輕鏈序列的多核苷酸SEQ ID NO: 142;編碼SEQ ID NO:3的重鏈可變序列的多核苷酸SEQ ID NO: 143 ;編碼SEQ ID N0:4的重鏈序列的多核苷酸SEQ ID NO: 144;編碼SEQ IDNO:1的輕鏈可變序列或SEQ ID NO: 2的輕鏈序列的互補決定區(SEQ ID NO: 145 ；SEQ IDN0:146;以及SEQ ID NO: 147)的多核苷酸；以及編碼SEQ ID NO:3的重鏈可變序列或SEQID N0:4 的重鏈序列的互補決定區(SEQ ID NO: 148 ；SEQ ID N0:149;以及 SEQ ID NO: 150)的多核苷酸。
[0361]在本發明的一個優選實施方案中，本發明的多核苷酸包含以下或可選地由以下組成:編碼對CGRP具有結合特異性的Fab (片段抗原結合)片段的多核苷酸。關于抗體Abl，編碼全長Abl抗體的多核苷酸包含以下或可選地由以下組成:編碼SEQ ID N0:2的輕鏈序列的多核苷酸SEQ ID NO: 142和編碼SEQ ID N0:4的重鏈序列的多核苷酸SEQ ID NO: 144。[0362]本發明的另一個實施方案涵蓋這些多核苷酸并入表達載體中以在哺乳動物細胞如CH0、NS0、HEK-293中或在真菌、昆蟲或微生物系統如酵母細胞(例如畢赤酵母屬)中表達。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。在本文(下文)所述的本發明的一個實施方案中，Fab片段可通過在合適的宿主中表達全長多核苷酸之后Abl的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產生。在本發明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Abl或其Fab片段可通過Abl多核苷酸在哺乳動物細胞如CHO、NS0或HEK293細胞，真菌、昆蟲或微生物系統如酵母細胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達而產生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0363]杭體 Ab2
[0364]本發明進一步針對編碼對CGRP具有結合特異性的抗體多肽的多核苷酸。在本發明的一個實施方案中，本發明的多核苷酸包含編碼SEQ ID NO: 11的可變輕鏈多肽序列的下列多核苷酸序列或可選地由編碼SEQ ID NO: 11的可變輕鏈多肽序列的下列多核苷酸序列組成:
[0365]CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(SEQ ID NO:151)。
[0366]在本發明的一個實施方案中，本發明的多核苷酸包含編碼SEQ ID NO: 12的輕鏈多肽序列的下列多核苷酸序列或可選地由編碼SEQ ID NO: 12的輕鏈多肽序列的下列多核苷酸序列組成:
[0367]CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:152)。
[0368]在本發明的另一個實施方案中，本發明的多核苷酸包含編碼SEQ ID NO: 13的可變重鏈多肽序列的下列多核苷酸序列或可選地由編碼SEQ ID NO: 13的可變重鏈多肽序列的下列多核苷酸序列組成:
[0369]GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:153)。
[0370]在本發明的一個實施方案中，本發明的多核苷酸包含編碼SEQ ID NO: 14的重鏈多肽序列的下列多核苷酸序列或可選地由編碼SEQ ID NO: 14的重鏈多肽序列的下列多核苷
【權利要求】
1.一種抗人類CGRP抗體或抗體片段，其特異性結合于完整CGRP多肽或其片段上與選自以下的抗人類CGRP抗體相同或重疊的線性或構象表位和/或競爭結合于完整CGRP多肽或其片段上與選自以下的抗人類CGRP抗體相同或重疊的線性或構象表位:Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Abl0、Abll、Abl2、Abl3 或 Abl4。
2.根據權利要求1所述的抗人類CGRP抗體或片段，其特異性結合于完整CGRP多肽或其片段上與Ab3、Ab6、Abl3或Abl4相同或重疊的線性或構象表位和/或競爭結合于完整CGRP多肽或其片段上與Ab3、Ab6、Abl3或Abl4相同或重疊的線性或構象表位。
3.根據權利要求1所述的抗體片段，其中所述片段選自Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段或單價抗體如“metMab”。
4.根據權利要求3所述的抗體片段，其中所述片段為Fab片段。
5.根據權利要求1所述的抗人類CGRP抗體或抗體片段，其包含與選自以下的抗人類CGRP 抗體相同的 CDR:Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abll、Abl2、Abl3或 Abl4。
6.根據權利要求4所述的Fab片段，其包含包括SEQID NO:25的⑶Rl序列、SEQ IDNO: 26的CDR2序列以及SEQ ID NO: 27的CDR3序列的可變輕鏈，和/或包括SEQ ID NO: 28的⑶Rl序列、SEQ ID NO:29的⑶R2序列以及SEQ ID NO:30的⑶R3序列的可變重鏈。
7.根據權利要求4所述的Fab片段，其包含包括SEQID NO:55的⑶Rl序列、SEQ IDNO: 56的CDR2序列以及SEQ ID NO: 57的CDR3序列的可變輕鏈，和/或包括SEQ ID NO: 58的CDRl序列、SEQ ID NO:59的CDR2序列以及SEQ ID NO:60的CDR3序列的可變重鏈。
8.根據權利要求1所述的抗人類CGRP抗體或抗體片段，其在所述可變輕鏈區和所述可變重鏈區中各包含至少2個互補決定區(CDR)，所述CDR與選自以下的抗人類CGRP抗體中所含的 CDR 相同:Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Abl0、Abll、Abl2、Abl3 或Ab 14。
9.根據權利要求8所述的抗人類CGRP抗體或抗體片段，其在所述可變輕鏈區和所述可變重鏈區中各包含至少2個互補決定區(CDR)，所述CDR與Ab3、Ab6、Ab7、Ab8、Abl3或Ab 14中所含的⑶R相同。
10.根據權利要求1所述的抗人類CGRP抗體或抗體片段，其為未糖基化的或如果被糖基化則僅包含甘露糖殘基。
11.根據權利要求1所述的抗人類CGRP抗體或抗體片段，其未被N-糖基化。
12.根據權利要求1所述的抗人類CGRP抗體或抗體片段，其包含已被修飾以改變效應功能、半衰期、蛋白水解和/或糖基化的Fe區。
13.根據權利要求1所述的抗人類CGRP抗體或抗體片段，其為人源化抗體、單鏈抗體或嵌合抗體。
14.根據權利要求1所述的抗人類CGRP抗體或抗體片段，其特異性結合于表達CGRP的人類細胞和/或結合于體內循環的可溶性CGRP分子。
15.根據權利要求14所述的抗人類CGRP抗體或抗體片段，其特異性結合于在與結合CGRP的細胞相關的疾病患者中于人類細胞上表達或通過人類細胞表達的CGRP。
16.根據權利要求15所述的抗人類CGRP抗體或抗體片段，其中所述疾病為偏頭痛(有或無先兆)、具有CGRP相關疼痛的病狀、體重減輕、癌癥或腫瘤、膀胱過度活動癥、尿失禁、瘙癢癥、牛皮癬、潰瘍、心臟病狀、與癌癥或腫瘤生長相關的血管生成、與癌癥或腫瘤存活相關的血管生成、偏頭痛、慢性偏頭痛、高頻發作性偏頭痛、月經性偏頭痛、偏癱性偏頭痛、叢集性頭痛、偏頭痛性神經痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、潮熱、慢性陣發性半側顱痛、由于頭或頸中的潛在結構問題而致的繼發性頭痛、腦神經痛、竇性頭痛(例如與竇炎相關)、過敏癥誘發的頭痛或偏頭痛、疼痛、TMJ、顳下頜紊亂、炎性疼痛、內臟疼痛、手術后切口疼痛、復雜區域性疼痛綜合征、癌癥疼痛、原發性或轉移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨質疏松性骨折疼痛、由灼傷產生的疼痛、骨質疏松癥、痛風性關節疼痛、與鐮狀細胞危象相關的疼痛和其他傷害性疼痛，以及肝細胞癌、乳腺癌、肝硬化、神經源性疼痛、神經性疼痛、傷害性疼痛、三叉神經痛、帶狀皰疹后神經痛、幻肢痛、纖維肌痛、經痛、卵巢痛、反射性交感神經營養不良、神經源性疼痛、骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、下背痛、糖尿病性神經病變、坐骨神經痛，或與胃-食管反流、消化不良、腸易激綜合征、炎癥性腸病、克羅恩病、回腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、月經期、分娩、更年期、前列腺炎或胰腺炎相關的內臟疼痛。
17.根據權利要求15所述的抗人類CGRP抗體或抗體片段，其中所述疾病選自疼痛、內臟疼痛、TMJ、顳下頜紊亂、頭痛、膀胱過度活動癥、尿失禁或偏頭痛。
18.根據權利要求17所述的抗人類CGRP抗體或片段，其中所述疾病為偏頭痛。
19.根據權利要求17所述的抗人類CGRP抗體或片段，其中所述疾病為有或無先兆的偏頭痛。
20.根據權利要求17所述的抗人類CGRP抗體或片段，其中所述疾病為下列類型偏頭痛中的一種:慢性偏頭痛、高頻發作性偏頭痛或月經性偏頭痛。
21.根據權利要求17所述的抗人類CGRP抗體或片段，其中所述疾病為叢集性頭痛。
22.根據權利要求1所述的抗人類CGRP抗體或片段，其直接或間接連接至可檢測標記或治療劑。
23.一種核酸序列或多種 核酸序列，其引起根據權利要求1或權利要求5所述的抗人類CGRP抗體或抗體片段的表達。
24.根據權利要求23所述的一種或多種核酸序列，其由酵母或人類偏愛密碼子構成。
25.—種載體,其包含根據權利要求24所述的一種或多種核酸序列。
26.根據權利要求25所述的載體，其為質粒或重組病毒載體。
27.一種培養的或重組的細胞，其表達根據權利要求1至22中任一項所述的抗體或抗體片段。
28.根據權利要求27所述的細胞，其選自哺乳動物、酵母、細菌、真菌或昆蟲細胞。
29.根據權利要求28所述的細胞，其為酵母細胞。
30.根據權利要求29所述的細胞，其為二倍體酵母細胞。
31.根據權利要求30所述的酵母細胞，其為畢赤酵母。
32.—種治療方法，其包括向患有可通過施用CGRP拮抗劑治療的疾病或病狀的患者施用治療有效量的至少一種根據權利要求1或5所述的抗人類CGRP抗體或片段。
33.根據權利要求32所述的方法，其中所述疾病或病狀為與表達CGRP的細胞相關的疾病或病狀，治療有效量的至少一種根據權利要求1或5所述的抗人類CGRP抗體或片段。
34.根據權利要求32或33所述的方法，其中所述疾病選自偏頭痛(有或無先兆)、體重減輕、癌癥或腫瘤、與癌癥或腫瘤生長相關的血管生成、與癌癥或腫瘤存活相關的血管生成、偏頭痛、慢性偏頭痛、高頻發作性偏頭痛、或月經性偏頭痛、偏癱性偏頭痛、叢集性頭痛、偏頭痛性神經痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、潮熱、慢性陣發性半側顱痛、由于頭或頸中的潛在結構問題而致的繼發性頭痛、腦神經痛、竇性頭痛(例如與竇炎相關)、過敏癥誘發的頭痛或偏頭痛、疼痛、炎性疼痛、手術后切口疼痛、復雜區域性疼痛綜合征、癌癥疼痛、原發性或轉移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨質疏松性骨折疼痛、由灼傷產生的疼痛、骨質疏松癥、痛風性關節疼痛、與鐮狀細胞危象相關的疼痛和其他傷害性疼痛，以及肝細胞癌、乳腺癌、肝硬化、神經源性疼痛、神經性疼痛、傷害性疼痛、三叉神經痛、帶狀皰疹后神經痛、幻肢痛、纖維肌痛、經痛、卵巢痛、反射性交感神經營養不良、神經源性疼痛、骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、下背痛、糖尿病性神經病變、坐骨神經痛，或與胃-食管反流、消化不良、腸易激綜合征、炎癥性腸病、克羅恩病、回腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、月經期、分娩、更年期、前列腺炎或胰腺炎相關的內臟疼痛。
35.根據權利要求32或33所述的方法，其中所述病狀包括膀胱過度活動癥；尿失禁；疼痛；慢性疼痛；神經源性炎癥和炎性疼痛；神經性疼痛；眼痛；牙痛；手術后疼痛、創傷有關的疼痛、糖尿病；非胰島素依賴型糖尿病和其他炎癥性自身免疫病癥、血管病癥；炎癥；關節炎；支氣管高反應性、哮喘；休克；敗血癥；阿片劑戒斷綜合征；嗎啡耐受；男性和女性中的潮熱；過敏性皮炎；牛皮癬；腦炎；腦創傷；癲癇癥；神經退行性疾病；皮膚疾病，包括瘙癢癥、神經源性皮膚發紅、玫瑰色皮膚以及紅斑；炎癥性腸病、腸易激綜合征、膀胱炎；以及痛經。
36.根據權利要求32或33所述的方法，其中所述疾病或病狀為疼痛、膀胱過度活動癥、尿失禁、頭痛或偏頭痛。
37.根據權利要求32或33所述的方法，其中所述治療進一步包括施用選自抗組胺、抗炎劑、止痛劑或抗生素的另一種治療劑或方式。
38.根據權利要求37所述的方法，其中所述止痛劑為NSAID、阿片類止痛劑、抗體或抗體片段或另一種止痛生物制品。
39.根據權利要求38所述的方法，其中所述止痛劑為阿片類并且所述方法被用于降低或預防對所述阿片類的耐受。
40.根據權利要求38所述的方法，其中所述阿片類為嗎啡或嗎啡衍生物。
41.根據權利要求37所述的方法，其中所述另一種止痛劑為NGF抗體或抗體片段。
42.一種體內成像方法，其檢測表達CGRP的細胞的存在，所述方法包括施用診斷有效量的至少一種根據權利要求1所述的抗人類CGRP抗體或抗體片段。
43.根據權利要求42所述的方法，其中所述施用進一步包括在表達CGRP的疾病位點施用促進所述抗體的檢測的放射性核素或熒光團。
44.根據權利要求42所述的方法，其中使用結果來促進適當的治療方式的設計。
45.一種分離的抗CGRP抗體或抗體片段，其包含選自以下的VhS肽序列:SEQ ID勵:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133，或展現與其具有至少90%序列同一性的其變體；和/或選自以下的八多肽序列:SEQ ID ΝΟ:1、11、21、31、41、51、61、。71、81、91、101、111、121或131，或展現與其具有至少90%序列同一性的其變體，其中所述Vh或Vl多肽中的一個或多個框架(FR)或CDR殘基已經被另一個氨基酸殘基取代，產生特異性結合CGRP的抗CGRP抗體。
46.一種分離的抗CGRP抗體或抗體片段，其包含選自以下的VHS肽序列:SEQ ID勵:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133，或展現與其具有至少95%序列同一性的其變體；和/或選自以下的八多肽序列:SEQ ID N0:l、ll、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131，或展現與其具有至少90%序列同一性的其變體，其中所述Vh*Vl多肽中的一個或多個框架(FR)或CDR殘基已經被另一個氨基酸殘基取代，產生特異性結合CGRP的抗CGRP抗體。
47.根據權利要求45或46所述的分離的抗體或抗體片段，其中一個或多個所述FR殘基被親本兔抗CGRP抗體中相應位點處存在的氨基酸取代，所述VH或\多肽中所含的互補決定區(CDR)已經源自所述親本兔抗CGRP抗體；或被保守性氨基酸取代。
48.根據權利要求45或46所述的分離的抗體抗體或抗體片段，其中所述\多肽序列的⑶R中的至多1或2個殘基被修飾。
49.根據權利要求45或46所述的分離的抗體抗體或抗體片段，其中所述VH多肽序列的⑶R中的至多1或2個殘基被修飾。
50.根據權利要求45或46所述的抗體或抗體片段，其中所述抗體為人源化抗體。
51.根據權利要求45或46所述的抗體或抗體片段，其中所述抗體為嵌合抗體。
52.根據權利要求45或46所述的抗體或抗體片段，其包含單鏈抗體。
53.根據權利要求50或51所述的抗體，其中所述人源化或嵌合抗體包含人類F。。
54.根據權利要求53所述的抗體或抗體片段，其中所述人類F。是源自IgGl、IgG2、IgG3或 IgG4。
55.根據權利要求45至54中任一項所述的抗體或抗體片段，其中所述抗體抑制CGRP與CGRP-R和/或其多聚體、一種或多種另外的蛋白質以CGRP-CGRP-R復合物形式的締合，和/或拮抗其生物效應。
56.一種分離的抗CGRP抗體或抗體片段，其包含與根據權利要求45或46所述的多肽序列中的任一者具有至少90%或更大的同源性的多肽序列。
57.一種分離的抗CGRP抗體或抗體片段，其包含與根據權利要求45或46所述的多肽序列中的任一者具有至少95%或更大的同源性的多肽序列。
58.根據權利要求56所述的抗體或抗體片段，其中所述抗體以小于或等于10_4S'5X 10^\10^\5Χ 10^\10^\5X 10^V ^ 1(T7S-1 的解離速率(Koff)結合于 CGRP。
59.根據權利要求45至58中任一項所述的抗體或抗體片段，其中所述抗體抑制CGRP與CGRP-R和/或其多聚體的復合物的產生，以及CGRP與CGRP-R和一種或多種另外的蛋白質以復合物形式的產生。
60.根據權利要求45至59中任一項所述的抗體片段，其中所述片段選自Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。
61.根據權利要求45至60中任一項所述的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段進一步包含效應子部分。
62.根據權利要求61所述的抗體或抗體片段，其中所述效應子部分為可檢測部分或功能性部分。
63.根據權利要求62所述的抗體，其中所述可檢測部分為熒光染料、酶、底物、生物發光材料、放射性材料或化學發光材料。
64.根據權利要求62所述的抗體，其中所述功能性部分為鏈霉親和素、親和素、生物素、細胞毒素、細胞毒性劑或放射性材料。
65.一種改善或減少可通過施用CGRP拮抗劑治療的疾病或病癥的癥狀的方法，其包括向有需要的個體施用治療有效量的根據權利要求45至64中任一項所述的CGRP抗體或抗體片段。
66.根據權利要求65所述的方法，其中所述疾病與增加的CGRP相關。
67.根據權利要求65或66所述的方法,其中所述疾病或病癥選自偏頭痛(有或無先兆)、體重減輕、癌癥或腫瘤、與癌癥或腫瘤生長相關的血管生成、與癌癥或腫瘤存活相關的血管生成、偏癱性偏頭痛、叢集性頭痛、偏頭痛性神經痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、潮熱、慢性陣發性半側顱痛、由于頭或頸中的潛在結構問題而致的繼發性頭痛、腦神經痛、竇性頭痛(例如與竇炎相關)、過敏癥誘發的頭痛或偏頭痛、疼痛、炎性疼痛、手術后切口疼痛、復雜區域性疼痛綜合征、癌癥疼痛、原發性或轉移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨質疏松性骨折疼痛、由灼傷產生的疼痛、骨質疏松癥、痛風性關節疼痛、與鐮狀細胞危象相關的疼痛和其他傷害性疼痛，以及肝細胞癌、乳腺癌、肝硬化、神經源性疼痛、神經性疼痛、傷害性疼痛、三叉神經痛、帶狀皰疹后神經痛、幻肢痛、纖維肌痛、經痛、卵巢痛、反射性交感神經營養不良、神經源性疼痛、骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、下背痛、糖尿病性神經病變、坐骨神經痛，或與胃-食管反流、消化不良、腸易激綜合征、炎癥性腸病、克羅恩病、回腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、月經期、分娩、更年期、前列腺炎或胰腺炎相關的內臟疼痛。
68.根據權利要求65或66所述的方法，其中所述病狀包括膀胱過度活動癥、疼痛；TMJ、顳下頜紊亂、慢性疼痛；神經源性炎癥和炎性疼痛；神經性疼痛；眼痛；牙痛；手術后疼痛、創傷有關的疼痛、糖尿病；非胰島素依賴型糖尿病和其他炎癥性自身免疫病癥、血管病癥；炎癥；關節炎；肉狀瘤病、支氣管高反應性、哮喘；休克；敗血癥；阿片劑戒斷綜合征；嗎啡耐受；男性和女性中的潮熱；過敏性皮炎；牛皮癬；腦炎；腦創傷；癲癇癥；神經退行性疾病；皮膚疾病，包括瘙癢癥、神經源性皮膚發紅、玫瑰色皮膚以及紅斑；炎癥性腸病、腸易激綜合征、膀胱炎；以及痛經。
69.根據權利要求65或66所述的方法，其中所述疾病或病狀為疼痛、膀胱過度活動癥、頭痛或偏頭痛。
70.根據權利要求65至69中任一項所述的方法，其中所述CGRP抗體或抗體片段包含與Ab3或Ab6相同的CDR。
71.根據權利要求65至69中任一項所述的方法，其中所述CGRP抗體或抗體片段是以用于治療與疼痛相關的具體疾病或病狀的治療方式施用，所述治療方式包括施用另一種治療劑。
72.根據權利要求71所述的方法，其中所述另一種治療劑選自化學治療劑、止痛劑、抗炎劑、免疫抑制劑、細胞因子、抗增殖劑、止吐劑以及細胞毒素。
73.根據權利要求71所述的方法，其中所述另一種治療劑為止痛劑。
74.根據權利 要求73所述的方法，其中另一種止痛劑為NSAID、阿片類止痛劑、抗體或非抗體生物制劑。
75.根據權利要求74所述的方法，其中所述抗體為NGF抗體或抗體片段。
76.根據權利要求73所述的方法，其中所述另一種止痛劑為NSAID，其為環氧合酶I和/或環氧合酶2抑制劑。
77.根據權利要求76所述的方法，其中所述NSAID選自(1)丙酸衍生物，包括布洛芬、甲氧萘丙酸、萘普生、雙氯芬酸以及酮洛芬；(2)乙酸衍生物，包括托美汀和司林達；(3)芬那酸衍生物，包括甲芬那酸和甲氯芬那酸；(4)聯苯羧酸衍生物，包括二氟尼柳和氟苯柳；以及(5)昔康類，包括吡羅昔康、舒多昔康以及伊索昔康。
78.根據權利要求73所述的方法，其中所述另一種止痛劑為菲；苯基庚基胺；苯基哌啶；嗎啡烷；或苯并嗎啡烷化合物。
79.根據權利要求73所述的方法，其中所述另一種止痛劑為選自以下的阿片類止痛劑:可待因、二氫可待因、二乙酰嗎啡、氫可酮、氫嗎啡酮、左啡烷、羥嗎啡酮、阿芬太尼、丁丙諾啡、布托啡諾、芬太尼、舒芬太尼、哌替啶、美沙酮、納布啡、丙氧芬以及噴他佐辛或其藥學上可接受的鹽。
80.根據權利要求78或79所述的方法，其中所述阿片類止痛劑與所述CGRP抗體或抗體片段的組合施用增加了由此引起的止痛作用和/或減輕了對所述止痛劑的耐受。
81.根據權利要求79所述的方法，其中所述阿片類止痛劑為嗎啡或嗎啡衍生物或其藥學上可接受的鹽。
82.—種在穩定表達根據權利要求45所述的抗體并以至少10-25毫克/升分泌到培養基中的多倍體酵母培養物中制造所述抗體或抗體片段的方法，其包括:(i)將至少一種包含可操作地連接至啟動子和信號序列的編碼所述抗體的一種或多種異源多核苷酸的表達載體引入單倍體酵母細胞中；(?)通過交配或原生質球融合從所述第一和/或第二單倍體酵母細胞產生多倍體酵 母;(iii)選擇穩定表達所述抗體的多倍體酵母細胞；以及(iv)在所述培養基中從穩定表達所述抗體的所述多倍體酵母細胞產生穩定的多倍體酵母培養物。
83.根據權利要求82所述的方法，其中所述酵母屬為畢赤酵母屬。
84.根據權利要求83所述的方法，其中所述畢赤酵母屬物種選自巴斯德畢赤酵母、甲醇畢赤酵母或多形漢遜酵母(安格斯畢赤酵母)。
85.根據權利要求83所述的方法，其中所述畢赤酵母屬物種為巴斯德畢赤酵母。
86.一種分離的多核苷酸，其包含編碼選自SEQ ID NO:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133的抗CGRPVH抗體氨基酸序列或編碼展現與其具有至少90%序列同一性的其變體的多核苷酸。
87.根據權利要求86所述的分離的多核苷酸，其中所述多核苷酸序列編碼抗CGRPVH抗體氨基酸序列，其中至少一個框架殘基(FR殘基)已經被在兔抗CGRP抗體VH多肽中的相應位置處存在的氨基酸取代或被保守性氨基酸取代。
88.—種載體或宿主細胞,其包含根據權利要求86或87所述的多核苷酸序列。
89.根據權利要求88所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞為屬于畢赤酵母屬的酵母細胞。
90.根據權利要求82所述的 方法，其中所述異源多核苷酸進一步包含編碼選自SEQIDN0:l、ll、21、31、41、51、61、71、81、91、101、lll、121 或 131 的抗 CGRP 八氨基酸序列的多核苷酸序列，或編碼展現與其具有至少90%序列同一性的其變體的多核苷酸。
91.根據權利要求90所述的方法，其中編碼抗CGRPVl抗體氨基酸序列的所述多核苷酸序列包含至少一個框架殘基(FR殘基)，其已經被在兔抗CGRP抗體\多肽中的相應位置處存在的氨基酸取代或被保守性氨基酸取代。
92.一種分離的多核苷酸，其包含編碼選自SEQ ID ΝΟ:1、11、21、31、41、51、61、71、81、.91、101、111、121或131的抗CGRP Vl抗體氨基酸序列或編碼展現與其具有至少90%序列同一'I"生的變體的多核苷酸序列。
93.根據權利要求92所述的分離的多核苷酸，其中編碼抗CGRP'抗體氨基酸序列的所述多核苷酸序列包含至少一個框架殘基(FR殘基)，其已經被在兔抗CGRP抗體\多肽中的相應位置處存在的氨基酸取代或被保守性氨基酸取代。
94.一種載體,其包含根據權利要求92或93所述的多核苷酸序列。
95.一種宿主細胞，其包含根據權利要求94所述的載體。
96.根據權利要求95所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞為屬于畢赤酵母屬的酵母細胞。
97.根據權利要求90所述的方法，其中所述異源多核苷酸包含編碼以下中所含的多肽的序列:SEQ ID NO:1 和 SEQ ID NO: 3 ；SEQ ID NO: 11 和 SEQ ID NO: 13 ；SEQ ID NO: 21 和SEQ ID NO:23 ；SEQ ID NO:31 和 SEQ ID NO:33 ；SEQ ID N0:41 和 SEQ ID NO:43 ;SEQ IDNO:51 和 SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:61 和 SEQ ID NO:63 ;SEQ ID NO:71和 SEQ ID NO:73 ；SEQ ID NO:81 和 SEQ ID NO:83 ;SEQ ID NO:91 和 SEQ ID NO:93 ;SEQ ID NO: 101 和 SEQ IDNO: 103 ；SEQ ID NO:1 I I 和 SEQ ID NO: 113 ；SEQ ID NO: 121 和 SEQ ID NO: 123;或 SEQ IDNO:131和 SEQ ID NO:133。
98.一種抗CGRP抗體或抗體片段，其與和包含由權利要求92或97中所述的多核苷酸序列之一編碼的序列的抗體或抗體片段相同或重疊的CGRP表位結合和/或與抗CGRP抗體競爭結合于CGRP。
99.根據權利要求98所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其結合于與選自Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab 10、Ab 11、Ab 12、Ab 13 或 Ab 14 的抗 CGRP 抗體相同或重疊的CGRP表位。
100.—種分離的抗CGRP抗體或抗體片段，其包含一個或多個在選自以下的Vh多肽序列中所含的 CDR:SEQ ID N0:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123 或 133，和 / 或一個或多個在選自以下的八多肽序列中所含的CDR:SEQ ID NO: 1、11、21、31、41、51、61、71、.81、91、101、111、121 或 131。
101.根據權利要求100所述的分離的抗CGRP抗體或抗體片段，其包含至少2個在選自以下的 Vh 多肽序列中所含的 CDR:SEQ IDN0:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、.123或133，和/或至少2個在選自以下的Vl多肽序列中所含的CDR:SEQ ID ΝΟ:1、11、21、.31、41、51、61、71、81、91、101、111、121 或 131。
102.根據權利要求101所述的分離的抗CGRP抗體或抗體片段，其包含全部3個在選自以下的Vh多肽序列中所含的CDR:SEQ ID NO:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、.123或133，和/或全部3個在選自以下的Vl多肽序列中所含的CDR:SEQ ID ΝΟ:1、11、21、.31、41、51、61、71、81、91、101、111、121 或 131。
103.根據權利要求99、100、101或102所述的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段為人源化抗體。
104.根據權利要求99、100、101或102所述的抗體，其中所述抗體為嵌合抗體。
105.根據權利要求104所述的抗體，其中所述嵌合抗體包含人類F。。
106.根據權利要求99、100、101或102所述的抗體，其包含單鏈抗體。
107.根據權利要求99或100所述的抗體，其包含單價抗體分子。
108.根據權利要求105所述的抗體，其中所述人類F。是源自人類IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。
109.—種分離的抗CGRP抗體或抗體片段，其包含與權利要求100或101中所述的多肽序列中的任一者具有至少90%或更大的同源性的\或VH多肽序列。
110.根據權利要求109所述的抗體或抗體片段，其中所述抗體以小于或等于10_4S'5X 10^\10^\5Χ 10^\10^\5X 10^V ^ 1(T7S-1 的解離速率(Koff)結合于 CGRP。
111.根據權利要求99至110中任一項所述的抗體或抗體片段，其中所述抗體抑制CGRP與CGRP-R和/或其多聚體的締合，或CGRP與其受體(CGRP-R)和一種或多種另外的蛋白質以復合物形式的締合。
112.根據權利要求99至1 10中任一項所述的抗體片段，其中所述片段選自Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。
113.根據權利要求99至110中任一項所述的抗體或抗體片段，其中所述抗體進一步包含效應子部分。
114.根據權利要求113所述的抗體，其中所述效應子部分為可檢測部分或功能性部分。
115.根據權利要求114所述的抗體，其中所述可檢測部分為熒光染料、酶、底物、生物發光材料、放射性材料或化學發光材料。
116.根據權利要求114所述的抗體，其中所述功能性部分為鏈霉親和素、親和素、生物素、細胞毒素、細胞毒性劑或放射性材料。
117.—種改善或減少可通過施用CGRP拮抗劑治療的疾病或病癥的癥狀的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的根據權利要求99至116中任一項所述的抗體或抗體片段。
118.根據權利要求117所述的方法，其中所述疾病或病癥與增加的CGRP相關。
119.根據權利要求118所述的方法，其中所述疾病或病癥選自偏頭痛(有或無先兆)、體重減輕、癌癥或腫瘤、與癌癥或腫瘤生長相關的血管生成、與癌癥或腫瘤存活相關的血管生成、偏癱性偏頭痛、叢集性頭痛、偏頭痛性神經痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、潮熱、慢性陣發性半側顱痛、由于頭或頸中的潛在結構問題而致的繼發性頭痛、腦神經痛、竇性頭痛(例如與竇炎相關)、過敏癥誘發的頭痛或偏頭痛、疼痛、炎性疼痛、手術后切口疼痛、復雜區域性疼痛綜合征、癌癥疼痛、原發性或轉移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨質疏松性骨折疼痛、由灼傷產生的疼痛、骨質疏松癥、痛風性關節疼痛、與鐮狀細胞危象相關的疼痛和其他傷害性疼痛，以及肝細胞癌、乳腺癌、肝硬化、神經源性疼痛、神經性疼痛、傷害性疼痛、三叉神經痛、帶狀皰疹后神經痛、幻肢痛、纖維肌痛、經痛、卵巢痛、反射性交感神經營養不良、神經源性疼痛、骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、下背痛、糖尿病性神經病變、坐骨神經痛，或與胃-食管反流、消化不良、腸易激綜合征、炎癥性腸病、克羅恩病、回腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、月經期、分娩、更年期、前列腺炎或胰腺炎相關的內臟疼痛。
120.根據權利要求118所述的方法，其中所述病狀包括膀胱過度活動癥、疼痛；慢性疼痛；神經源性炎癥和炎性疼痛；神經性疼痛；眼痛；牙痛；手術后疼痛、創傷有關的疼痛、糖尿病；非胰島素依賴型糖尿病和其他炎癥性自身免疫病癥、血管病癥；炎癥；關節炎；支氣管高反應性、哮喘；休克；敗血癥；阿片劑戒斷綜合征；嗎啡耐受；男性和女性中的潮熱；過敏性皮炎；牛皮癬；腦炎；腦創傷；癲癇癥；神經退行性疾病；皮膚疾病，包括瘙癢癥、神經源性皮膚發紅、玫瑰色皮膚以及紅斑；炎癥性腸病、腸易激綜合征、膀胱炎；以及痛經。
121.根據權利要求118所述的方法，其中所述病狀或病癥為偏頭痛、膀胱過度活動癥、疼痛相關的疾病或病狀、或阿片類止痛劑耐受。
122.根據權利要求118所述的方法，其中所述CGRP抗體或抗體片段是以用于治療與疼痛相關的具體疾病或病狀的治療方式施用，所述治療方式包括施用另一種治療劑。
123.根據權利要求122所述的方法，其中所述另一種治療劑選自化學治療劑、止痛劑、抗炎劑、免疫抑制劑、細胞因子、抗增殖劑、止吐劑以及細胞毒素。
124.根據權利要求122所述的方法，其中所述另一種治療劑為止痛劑。
125.根據權利要求122所述的方法，其中另一種止痛劑為NSAID、阿片類止痛劑、抗體或非抗體生物制劑。
126.根據權利要求125所述的方法，其中所述抗體為NGF抗體或抗體片段。
127.根據權利要求125所述的方法，其中所述另一種止痛劑為NSAID，其包含環氧合酶I和/或環氧合酶2抑制劑。
128.根據權利要求127所述的方法，其中所述NSAID選自(I)丙酸衍生物，包括布洛芬、甲氧萘丙酸、萘普生、雙氯芬酸以及酮洛芬；(2)乙酸衍生物，包括托美汀和司林達；(3)芬那酸衍生物，包括甲芬那酸和甲氯芬那酸；(4)聯苯羧酸衍生物，包括二氟尼柳和氟苯柳；以及(5)昔康類，包括吡羅昔康、舒多昔康以及伊索昔康。
129.根據權利要求124所述的方法，其中所述另一種止痛劑為菲；苯基庚基胺；苯基哌啶；嗎啡烷；或苯并嗎啡烷化合物。
130.根據權利要求124所述的方法，其中所述另一種止痛劑為選自以下的阿片類止痛劑:可待因、二氫可待因、二乙酰嗎啡、氫可酮、氫嗎啡酮、左啡烷、羥嗎啡酮、阿芬太尼、丁丙諾啡、布托啡諾、芬太尼、舒芬太尼、哌替唆、美沙酮、納布啡、丙氧芬以及噴他佐辛或其藥學上可接受的鹽。
131.根據權利要求129或130所述的方法，其中所述止痛劑與所述CGRP抗體或抗體片段的組合施用增加了由此引起的止痛作用和/或減輕了對所述止痛劑的耐受。
132.根據權利要求131所述的方法，其中所述止痛劑為嗎啡或嗎啡衍生物或其藥學上可接受的鹽。
133.—種在穩定表達根據權利要求98至116中任一項所述的抗體并以至少10-25毫克/升分泌到培養基中的多倍體酵母培養物中制造所述抗體的方法，其包括: (i)將至少一種包含可操作地連接至啟動子和信號序列的編碼所述抗體的一種或多種異源多核苷酸的表達載體引入單倍體酵母細胞中； (?)通過交配或原生質球融合從所述第一和/或第二單倍體酵母細胞產生多倍體酵母；(iii)選擇穩定表達所述抗體的多倍體酵母細胞；以及(iv)在所述培養基中從穩定表達至少10-25毫克/升的所述抗體的所述多倍體酵母細胞產生穩定的多倍體酵母培養物。
134.根據權利要求133所述的方法，其中所述酵母屬為畢赤酵母屬。
135.根據權利要求134所述的方法，其中所述畢赤酵母屬物種選自巴斯德畢赤酵母、甲醇畢赤酵母或多形漢遜酵母(安格斯畢赤酵母)。
136.根據權利要求135所述的方法，其中所述畢赤酵母屬物種為巴斯德畢赤酵母。
137.—種分離的多核苷酸，其表達包含至少一個源自抗CGRP抗體的⑶R多肽的多肽，其中所述表達多肽單獨特異性結合CGRP，或當與另一個多核苷酸序列一起表達時特異性結合CGRP，所述另一個多核苷酸序列表達包含至少一個源自抗CGRP抗體的⑶R多肽的多肽，其中所述至少一個 CDR 選自在 SEQ ID ΝΟ:1、3、11、13、21、23、31、33、41、43、51、53、61、63、71、73、81、83、91、93、101、103、111、113、121、123、131 或 133 的'或 VH 多肽中所含的 CDR。
138.根據權利要求137所述的分離的多核苷酸，其表達包含2個或3個源自抗CGRP抗體的CDR多肽的多肽，其中所述表達多肽單獨特異性結合CGRP，或當與另一個多核苷酸序列一起表達時特異性結合CGRP，所述另一個多核苷酸序列表達包含2個或3個源自抗CGRP抗體的CDR多肽的多肽，其中所述CDR多肽選自在SEQ ID NO: 1、3、11、13、21、23、31、33、41、43、51、53、61、63、71、73、81、83、91、93、101、103、111、113、121、123、131 或 133 的 VL或 VH 多肽中所含的CDR多肽。
139.—種載體,其包含根據權利要求137或138所述的多核苷酸序列中的至少一者。
140.一種宿主細胞，其包含根據權利要求139所述的載體。
141.根據權利要求140所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞為屬于畢赤酵母屬的酵母細胞。
142.根據權利要求133所述的方法，其中所述異源多核苷酸包含編碼選自以下的\或VH多肽中所含的至少一個CDR的多核苷酸序列:SEQ ID NO: 1、3、11、13、21、23、31、33、41、43、51、53、61、63、71、73、81、83、91、93、101、103、111、113、121、123、131 或 133。
143.一種藥物或診斷組合物，其包含根據權利要求1至22或99至116中的一項所述的至少一種CGRP抗體或片段和藥學上可接受的載體。
144.根據權利要求143所述的藥物或診斷組合物，其進一步包含至少一種穩定劑。
145.根據權利要求143或144所述的藥物或診斷組合物，其為凍干的。
146.根據權利要求143或144所述的藥物或診斷組合物，其包含選自Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abll、Abl2、Abl3 或 Abl4 的一種或多種抗 CGRP 抗體、或嵌合或人源化抗體、或源自其的片段。
147.根據權利要求143或144所述的藥物或診斷組合物，其包含選自Ab2的抗CGRP抗體或片段、或嵌合或人源化抗體、或源自其的片段。
148.根據權利要求143或144所述的藥物或診斷組合物，其包含選自Ab3的抗CGRP抗體或片段、或嵌合或人源化抗體、或源自其的片段。
149.根據權利要求143或144所述的藥物或診斷組合物，其包含選自Ab6的抗CGRP抗體或片段、或嵌合或人源化抗體、或源自其的片段。
150.一種治療可通過施用CGRP拮抗劑治療或預防的疾病或病狀的方法，其包括施用治療有效量的根據權利要求143至149中的一項所述的藥物組合物。
151.根據權利要求150所述的方法，其中所述疾病選自偏頭痛(有或無先兆)、體重減輕、癌癥或腫瘤、與癌癥或腫瘤生長相關的血管生成、與癌癥或腫瘤存活相關的血管生成、偏癱性偏頭痛、叢集性頭痛、偏頭痛性神經痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、潮熱、慢性陣發性半側顱痛、由于頭或頸中的潛在結構問題而致的繼發性頭痛、腦神經痛、竇性頭痛(例如與竇炎相關)、過敏癥誘發的頭痛或偏頭痛、疼痛、炎性疼痛、手術后切口疼痛、復雜區域性疼痛綜合征、癌癥疼痛、原發性或轉移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨質疏松性骨折疼痛、由灼傷產生的疼痛、骨質疏松癥、痛風性關節疼痛、與鐮狀細胞危象相關的疼痛和其他傷害性疼痛，以及肝細胞癌、乳腺癌、肝硬化、神經源性疼痛、神經性疼痛、傷害性疼痛、三叉神經痛、帶狀皰疹后神經痛、幻肢痛、纖維肌痛、經痛、卵巢痛、反射性交感神經營養不良、神經源性疼痛、骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、下背痛、糖尿病性神經病變、坐骨神經痛，或與胃-食管反流、消化不良、腸易激綜合征、炎癥性腸病、克羅恩病、回腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、月經期、分娩、更年期、前列腺炎或胰腺炎相關的內臟疼痛。
152.根據權利要求150所述的方法，其中所述疾病為疼痛、疼痛相關的病癥、膀胱過度活動癥、頭痛或偏頭痛。
153.根據權利要求150所述的方法，其中所述病狀包括膀胱過度活動癥、疼痛；慢性疼痛；神經源性炎癥和炎性疼痛；神經性疼痛；眼痛；牙痛；手術后疼痛、創傷有關的疼痛、糖尿病；非胰島素依賴型糖尿病和其他炎癥性自身免疫病癥、血管病癥；炎癥；關節炎；支氣管高反應性、哮喘；休克；敗血癥；阿片劑戒斷綜合征；嗎啡耐受；男性和女性中的潮熱；過敏性皮炎；牛皮癬；腦炎；腦創傷；癲癇癥；神經退行性疾病；皮膚疾病，包括瘙癢癥、神經源性皮膚發紅、玫瑰色皮膚以及紅斑；炎癥性腸病、腸易激綜合征、膀胱炎；以及痛經。
154.根據權利要求150所述的方法，其中所述病狀或病癥為偏頭痛、膀胱過度活動癥、疼痛相關的疾病或病狀、或阿片類止痛劑耐受。
155.根據權利要求150所述的方法，其中所述CGRP抗體或抗體片段是以用于治療與疼痛相關的具體疾病或病狀的治療方式施用，所述治療方式包括施用另一種治療劑。
156.根據權利要求155所述的方法，其中所述另一種治療劑選自化學治療劑、止痛劑、抗炎劑、免疫抑制劑、細胞因子、抗增殖劑、止吐劑以及細胞毒素。
157.根據權利要求155所述的方法，其中所述另一種治療劑為止痛劑。
158.根據權利要求157所述的方法，其中另一種止痛劑為NSAID、阿片類止痛劑、抗體或非抗體生物制劑。
159.根據權利要求158所述的方法，其中所述抗體為NGF抗體或抗體片段。
160.根據權利要求157所述的方法，其中所述另一種止痛劑為NSAID，其包含環氧合酶I和/或環氧合酶2抑制劑。
161.根據權利要求160所述的方法，其中所述NSAID選自(I)丙酸衍生物，包括布洛芬、甲氧萘丙酸、萘普生、雙氯芬酸以及酮洛芬；(2)乙酸衍生物，包括托美汀和司林達；(3)芬那酸衍生物，包括甲芬那酸和甲氯芬那酸；(4)聯苯羧酸衍生物，包括二氟尼柳和氟苯柳；以及(5)昔康類，包括吡羅昔康、舒多昔康以及伊索昔康。
162.根據權利要求157所述的方法，其中所述另一種止痛劑為菲；苯基庚基胺；苯基哌啶；嗎啡烷；或苯并嗎啡烷化合物。
163.根據權利要求157所述的方法，其中所述另一種止痛劑為選自以下的阿片類止痛劑:可待因、二氫可待因、二乙酰嗎啡、氫可酮、氫嗎啡酮、左啡烷、羥嗎啡酮、阿芬太尼、丁丙諾啡、布托啡諾、芬太尼、舒芬太尼、哌替唆、美沙酮、納布啡、丙氧芬以及噴他佐辛或其藥學上可接受的鹽。
164.根據權利要求162或163所述的方法，其中所述阿片類止痛劑與所述CGRP抗體或抗體片段的組合施用增加了由此引起的止痛作用和/或減輕了對所述阿片類止痛劑的耐受。
165.根據權利要求164所述的方法，其中所述阿片類止痛劑為嗎啡或嗎啡衍生物或其藥學上可接受的鹽。
166.—種體內成像方法，其檢測表達CGRP的細胞的存在，所述方法包括施用診斷有效量的根據權利要求143至149中任一項所述的診斷組合物。
167.根據權利要求166所述的方法，其被用作用于設計以下疾病的有效治療方案的計劃方式的一部分:偏頭痛(有或無先兆)、體重減輕、癌癥或腫瘤、與癌癥或腫瘤生長相關的血管生成、與癌癥或腫瘤存活相關的血管生成、偏癱性偏頭痛、叢集性頭痛、偏頭痛性神經痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、潮熱、慢性陣發性半側顱痛、由于頭或頸中的潛在結構問題而致的繼發性頭痛、腦神經痛、竇性頭痛(例如與竇炎相關)、過敏癥誘發的頭痛或偏頭痛、疼痛、炎性疼痛、手術后切口疼痛、復雜區域性疼痛綜合征、癌癥疼痛、原發性或轉移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨質疏松性骨折疼痛、由灼傷產生的疼痛、骨質疏松癥、痛風性關節疼痛、與鐮狀細胞危象相關的疼痛和其他傷害性疼痛，以及肝細胞癌、乳腺癌、肝硬化、神經源性疼痛、神經性疼痛、傷害性疼痛、三叉神經痛、帶狀皰疹后神經痛、幻肢痛、纖維肌痛、經痛、卵巢痛、反射性交感神經營養不良、神經源性疼痛、骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、下背痛、糖尿病性神經病變、坐骨神經痛，或與胃-食管反流、消化不良、腸易激綜合征、炎癥性腸病、克羅恩病、回腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、月經期、分娩、更年期、前列腺炎或胰腺炎相關的內臟疼痛。
168.根據權利要求167所述的方法，其中所述治療方案包括抗組胺、抗炎劑或抗生素中的一種或多種。
169.根據權利要求168所述的方法，其中所述抗體包含根據權利要求1至22或98至116中的一項所述的抗CGRP抗體或片段。
170.根據權利要求169所述的抗體，其中所述抗體片段為選自scFv、駱駝抗體、納米抗體、IgNAR、SMIP或其組合、截短形式或修飾形式的單鏈抗體。
171.—種分離的抗CGRP抗體，其結合于CGRP并抑制CGRP與CGRP-R的締合，并且拮抗其生物效應。
172.根據權利要求171所述的分離的抗CGRP抗體，其中所述抗體選自Ab2、Ab3、Ab5、Ab6、Abl3 或Abl4。
173.—種分離的抗CGRP抗體片段，其抑制CGRP與CGRP-R的締合，并且拮抗其生物效應。
174.根據權利要求173所述的分離的抗CGRP片段，其中所述抗體片段結合與Ab2、Ab3、Ab5、Ab6、Abl3 或 Abl4 相同的表位。
175.根據權利要求174所述的分離的抗CGRP抗體或片段，其中所述抗體為Ab3、Ab6、Abl3或Abl4或其片段。
176.根據權利要求174所述的分離的抗CGRP抗體或片段，其包含與Ab3、Ab6、Abl3或Ab 14相同的CDR。
177.一種治療疼痛的方法，其包括施用有效量的抗CGRP抗體或其片段，所述抗CGRP抗體或其片段抑制CGRP與CGRP-R的締合。
178.根據權利要求177所述的方法，其中所述抗體為Ab3、Ab6、Abl3或Abl4或其片段。
179.根據權利要求177所述的方法，其中所述抗體包含與Ab3、Ab6、Abl3或Abl4相同的 CDR。
180.根據權利要求177所述的方法，其中所述疼痛與肌肉骨骼系統創傷、灼傷、或手術前或手術后外科手術相關，或為與胃-食管反流、消化不良、腸易激綜合征、炎癥性腸病、克羅恩病、回腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、月經期、分娩、更年期、前列腺炎、牛皮癬、IBD或胰腺炎相關的內臟疼痛。
181.根據權利要求180所述的方法，其中所述抗體為Ab3、Ab6、Abl3或Abl4，或抗體片段是源自 Ab3.Ab6.Abl3 或 Abl4。
182.根據權利要求180所述的方法，其中所述抗體或抗體片段包含與Ab3、Ab6、Abl3或Ab 14相同的⑶R。
183.—種治療偏頭痛的方法，其包括施用有效量的抗CGRP抗體或其片段，所述抗CGRP抗體或其片段抑制CGRP與CGRP-R的締合。
184.根據權利要求183所述的方法，其中所述抗體為Ab2、Ab3、Ab5、Ab6、Abl3或Abl4，或所述抗體片段是 源自Ab2、Ab3、Ab5、Ab6、Abl3或Abl4。
185.—種治療非偏頭痛型頭痛的方法，其包括施用有效量的抗CGRP抗體或其片段，所述抗CGRP抗體或其片段抑制CGRP與CGRP-R的締合。
186.根據權利要求185所述的方法，其中所述抗體為Ab2、Ab3、Ab5、Ab6、Abl3或Abl4，或所述抗體片段是源自Ab2、Ab3、Ab5、Ab6、Abl3或Ab 14。
187.根據權利要求185所述的方法，其中所述抗體或抗體片段包含與Ab2、Ab3、Ab5、Ab6、Abl3 或 Abl4 相同的 CDR。
188.—種抗CGRP抗體或抗體片段，其對CGRP具有結合特異性并且包含選自下列的可變輕鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3多肽序列以及可變重鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3多肽序列:
189.根據權利要求188所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其中所述抗體片段為scFv、駱駝抗體、納米抗體、IgNAR (源自鯊魚的單鏈抗體)、Fab、Fab’或F(ab’)2片段。
190.根據權利要求188所述的抗CGRP抗體片段，其中所述抗體片段為Fab片段。
191.根據權利要求188所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其包含選自下列的可變輕鏈多肽序列和可變重鏈多肽序列:
192.根據權利要求188所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其包含選自下列的輕鏈多肽序列和重鏈多肽序列:
193.根據權利要求188至192中任一項所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其中所述可變輕鏈和可變重鏈多肽序列各自分別與SEQ ID N0:l、ll、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131的所述可變輕鏈多肽序列之一以及SEQ ID NO:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133的所述可變重鏈多肽序列之一具有至少90%同一性。
194.根據權利要求188至193中任一項所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其為嵌合或人源化抗體。
195.根據權利要求188至194中任一項所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其為未糖基化的或僅包含甘露糖殘基。
196.根據權利要求188至193中任一項所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其包含人類恒定域。
197.根據權利要求196所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其為IgGl、IgG2、IgG3或IgG4抗體。
198.根據權利要求188至196中任一項所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其包含已被修飾以改變效應功能、半衰期、蛋白水解和/或糖基化中的至少一種的Fc區。
199.根據權利要求198所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其中所述Fc區包含改變或消除糖基化的突變。
200.根據權利要求188至199中任一項所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其直接或間接連接至可檢測標記或治療劑。
201.根據權利要求188至199中任一項所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其進一步包含效應子部分。
202.根據權利要求201所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其中所述效應子部分為可檢測部分或功能性部分。
203.根據權利要求202所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其中所述可檢測部分為熒光染料、酶、底物、生物發光材料、放射性材料或化學發光材料。
204.根據權利要求202所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其中所述功能性部分為鏈霉親和素、親和素、生物素、細胞毒素、細胞毒性劑或放射性材料。
205.根據權利要求188至204中任一項所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其中所述可變輕鏈和可變重鏈多肽序列各自分別與SEQ ID N0:l、ll、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131的所述可變輕鏈多肽序列之一以及SEQ ID NO:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133的所述可變重鏈多肽序列之一具有至少95%同一性。
206.根據權利要求188至205中任一項所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其中所述可變輕鏈和可變重鏈多肽序列各自分別與SEQ ID N0:l、ll、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131的所述可變輕鏈多肽序列之一以及SEQ ID NO:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133的所述可變重鏈多肽序列之一具有至少98%同一性。
207.根據權利要求188至206中任一項所述的抗CGRP抗體或抗體片段，其中所述可變輕鏈和可變重鏈多 肽序列各自分別與SEQ ID N0:l、ll、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131的所述可變輕鏈多肽序列之一以及SEQ ID NO:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133的所述可變重鏈多肽序列之一具有至少99%同一性。
208.—種組合物，其包含根據I至17或權利要求188至207中任一項所述的抗CGRP抗體或抗體片段。
209.根據權利要求208所述的組合物，其適合于治療或診斷用途。
210.根據權利要求208所述的組合物，其進一步包含至少一種穩定劑。
211.根據權利要求208所述的組合物，其為凍干的。
【文檔編號】A61K39/395GK103748111SQ201280035733
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2012年5月21日 優先權日:2011年5月20日
【發明者】B·R·科瓦切維奇, L·F·加西亞-馬丁內斯, K·奧爾森, B·H·杜察爾, J·J·比爾格倫, J·A·萊瑟姆, D·M·米切爾, P·D·麥克尼爾, N·M·詹森, M-C·盧米斯 申請人:奧爾德生物控股有限責任公司