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一種婦科調經片的制備方法及應用的制作方法

文檔序(xu)號:817130閱讀:225來源:國知局
專利名稱:一種婦科調經片的制備方法及應用的制作方法
技術領域
本發明涉及中藥制劑技術領域,具體涉及一種婦科調經片的制備方法及應用。
背景技術
婦科調經片記載于衛生部標準WS3-B-0937-91,由當歸144g、川芎16g、醋炙香附 400g、麩炒白術23g、白芍12g、赤芍12g、醋炙延胡索32g、熟地黃48g、大棗80g、甘草Ilg作為原料藥制成,能養血,調經,止痛。用于月經不調,經期腹痛。
現有技術中,尚未有婦科調經片在提取制備方面采用超臨界和微波技術的報道, 而采用打粉和水煎煮的方法,工藝粗糙、落后,雜質多,導致患者用量過大,不方便服用,嚴重影響了本品在臨床上應用。發明內容
發明目的為了解決上述問題,本發明的目的在于提供一種婦科調經片的制備方法。
本發明的另一個目的在于提供一種婦科調經片在制備抑制人鼻咽癌CNE-2Z細胞增殖藥物中的應用。
技術方案本發明的目的是通過如下的方案實現的
—種婦科調經片的制備方法,由當歸144g、川芎16g、醋炙香附400g、麩炒白術 23g、白芍12g、赤芍12g、 醋炙延胡索32g、熟地黃48g、大棗80g、甘草Ilg作為原料藥制成, 所述的方法由下列步驟組成取當歸、川芎、醋炙香附,加入到C02超臨界萃取器中,乙醇作為夾帶劑,夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%,萃取壓力15-30MPa,溫度30_50°C, C02流量l-3ml/g生藥·π η,萃取時間150_180min,得超臨界萃取物,備用;取其余中藥,粉碎,加入2L的70%乙醇,投入微波萃取裝置中進行微波萃取,萃取功率400-600W,萃取2次, 每次4-8分鐘,合并萃取液,濃縮,加到DlOl大孔吸附樹脂柱上,50%乙醇洗脫,收集5倍量柱體積洗脫液,減壓回收乙醇,濃縮并干燥,得微波提取物,備用;將上述超臨界萃取物和微波提取物混合,加入淀粉,70%乙醇制顆粒,干燥,壓片,制成1000片,每片重O. 5g。
上述一種婦科調經片的制備方法,所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
上述一種婦科調經片的制備方法,所述微波萃取功率500W,每次萃取6分鐘。
上述一種婦科調經片的制備方法,所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa,溫度 40°C, CO2 流量 2ml/g 生藥· min,萃取時間 160min。
上述婦科調經片在制備抑制人鼻咽癌CNE-2Z細胞增殖藥物中的應用。
現有技術中,婦科調經片每片O. 5g,每次4片,一日3次,采用本發明制備成的婦科調經片每片O. 5g,每次僅需2片,一日服用3次,在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。此結論可以通過下述試驗證明。
試驗一、不同方法制備的婦科調經片中阿魏酸含量的比較
1、儀器及試藥本發明婦科調經片按實施例3方法制備,使用1669g原料藥,經提取制成1000片,每片重O. 5g。原婦科調經片,按部頒標準方法制備,使用1669g原料藥,經提取制成1000片,每片重O. 5g。Agilent 1200高效液相色譜儀;METTLER AE240電子分析天平;阿魏酸對照品(中國藥品生物制品檢定所)。
2、方法
色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-水-磷酸(40 60 :0. 2)為流動相;檢測波長為280nm。理論板數按阿魏酸峰計算,應不低于3000。
對照品溶液的制備精密稱取在60°C減壓干燥4小時的阿魏酸對照品適量,加甲醇制成每Iml含18 μ g的溶液,即得。
供試品溶液的制備取本發明婦科調經片和原婦科調經片,研細,混勻,取lg,精密稱定,精密加入70%乙醇20ml,密塞,超聲處理10分鐘,離心,取上清液,即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1,注入液相色譜儀,測定, 即得。
3、結果
結果表明,本發明婦科調經片中阿魏酸的含量為1.56mg/片;而原婦科調經片中阿魏酸的含量為O. 28mg/片,在服用量減少的情況下,阿魏酸含量有很大提高。
上述研究表明,采用本發明制備的婦科調經片,有效成分含量高于部頒標準法制備的婦科調經片。
具體實施方式
以下通過實施例形式,對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明,但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例,凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。
實施例1
取當歸144g、川芎16g、醋炙香附400g、麩炒白術23g、白芍12g、赤芍12g、醋炙延胡索32g、熟地黃48g、大棗80g、甘草llg,將當歸、川芎、醋炙香附,加入到C02超臨界萃取器中,乙醇作為夾帶劑,夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4%,萃取壓力15MPa,溫度 30°C,C02流量lml/g生藥· min,萃取時間150min,得超臨界萃取物,備用;取其余中藥,粉碎,加入2L的70%乙醇,投入微波萃取裝置中進行微波萃取,萃取功率400W,萃取2次,每次 4分鐘,合并萃取液,濃縮,加到DlOl大孔吸附樹脂柱上,50%乙醇洗脫,收集5倍量柱體積洗脫液,減壓回收乙醇,濃縮并干燥,得微波提取物,備用;將上述超臨界萃取物和微波提取物混合,加入淀粉,70%乙醇制顆粒,干燥,壓片,制成1000片,每片重O. 5g。
經檢測,成品中阿魏酸的含量為1. 59mg/片。
實施例2
取當歸144g、川芎16g、醋炙香附400g、麩炒白術23g、白芍12g、赤芍12g、醋炙延胡索32g、熟地黃48g、大棗80g、甘草llg,將當歸、川芎、醋炙香附,加入到CO2超臨界萃取器中,乙醇作為夾帶劑,夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為6%,萃取壓力30MPa,溫度50°C, CO2流量3ml/g生藥·π η,萃取時間180min,得超臨界萃取物,備用;取其余中藥,粉碎,加入2L的70%乙醇,投入微波萃取裝置中進行微波萃取,萃取功率600W,萃取2次,每次8分鐘,合并萃取液,濃縮,加到DlOl大孔吸附樹脂柱上,50%乙醇洗脫,收集5倍量柱體積洗脫液,減壓回收乙醇,濃縮并干燥,得微波提取物,備用;將上述超臨界萃取物和微波提取物混合,加入淀粉,70%乙醇制顆粒,干燥,壓片,制成1000片,每片重O. 5g。
經檢測,成品中阿魏酸的含量為1. 67mg/片。
實施例3
取當歸144g、川芎16g、醋炙香附400g、麩炒白術23g、白芍12g、赤芍12g、醋炙延胡索32g、熟地黃48g、大棗80g、甘草llg,將當歸、川芎、醋炙香附,加入到CO2超臨界萃取器中,乙醇作為夾帶劑,夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%,萃取壓力20MPa,溫度40°C, CCV流量2ml/g生藥·π η,萃取時間160min,得超臨界萃取物,備用;取其余中藥,粉碎,加入2L的70%乙醇,投入微波萃取裝置中進行微波萃取,萃取功率500W,萃取2次,每次6分鐘,合并萃取液,濃縮,加到DlOl大孔吸附樹脂柱上,50%乙醇洗脫,收集5倍量柱體積洗脫液,減壓回收乙醇,濃縮并干燥,得微波提取物,備用;將上述超臨界萃取物和微波提取物混合,加入淀粉,70%乙醇制顆粒,干燥,壓片,制成1000片,每片重O. 5g。
經檢測,成品中阿魏酸的含量為1. 56mg/片。
實施例4 :婦科調經片抑制CNE-2Z細胞增殖的實驗研究資料
I實驗材料
1.1實驗用細胞株
人鼻咽癌CNE-2Z細胞,南京正寬醫藥科技有限公司實驗室細胞庫,DMEM+10%FBS常規培養。
1. 2實驗藥物
研究藥物本發明婦科調經片按實施例3方法制備。
藥液儲液稱取IOOmg婦科調經片,溶于5ml無水乙醇中,O. 2 μ m濾器過濾, 500 μ Idoff管分裝,-20°C存儲,同時O. 2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。
1. 3實驗試劑
DMEM(GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061 Lot. No. 758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419);NaHC03 (上海久億化學試劑有限公司Cat. No. 11810_033Lot. No. 1088387);Trypsin (AMRESC0 公司批號2010/04);EDTA (AMRESC0 公司批號:2009/10); Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批號2010242);Streptomycin SulfateCAMRESCO 公司批號2010382);無水乙醇(南京化學試劑有限公司批號080310182);MTT(Biosharp批號:0793) ;PBS (實驗室自配);
1. 4實驗器材
萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD 公司型號SPECTRAMAX 190) ;C02培養箱(FORMA型號3111);超凈臺(蘇凈集團安泰公司制造型號SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號S/N 020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號BT323S);全自動高壓滅菌鍋(日本SANK)公司型號MLS-3020);臺式電熱鼓風干燥箱(上海精密實驗設備公司型號 DHG9123A);冰箱(西門子公司型號KG18V21TI);液氮罐(CBS型號:2001);低速離心機(上海安亭科學儀器廠型號ΚΑ-1000) ;0. 2μπι濾器(MILLIP0RE型號SLGP033RB) ;10cm培養皿(NEST公司)、96孔培養板(NEST公司);細胞計數板;離心管、移液管、Tips若干。
2實驗方法
I) CNE-2Z 細胞用 DMEM+10%FBS 于 37 °C、5%C02 進行常規培養(IOcm 培養皿), 當細胞生長至對數期時,收集細胞,棄去培養液,PBS輕洗3遍,加入3ml O. 25%胰蛋白酶-O. 049ffiDTA,37°C消化2min后,向其中加入5ml完全培養基中和反應,吹打細胞后將其轉入離心管中,IOOOrpm離心5min,調整細胞懸液濃度3X 104個/ml。
2)將細胞種入96孔培養板中,每孔加入細胞懸液180 μ I,培養板放入細胞培養箱中(37 °C,5%C02 )常規培養。
3)根據細胞生長情況,一般長至50%_70%,加入婦科調經片溶液,繼續培養24h。
4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml,即 O. 5%MTT),繼續培養 4h。
5) 4h后扣板法倒去上清,用吸水紙輕輕拍干,每孔加入200 μ I 二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩lOmin,使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。
6)同時設置本底(不加細胞,只加培養液),對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT、二甲基亞砜),每組設定6個復孔。
7)結果以藥物對細胞的抑制率表示
細胞增值抑制率(%)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實驗重復3次。
3統計處理
采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關分析和Student t檢驗,數據以 mean + S. D.表不。
4實驗結果
MTT法實驗后統計結果顯示,與對照組比較,當劑量達到5mg/ml時,對CNE-2Z細胞增殖抑制有差異(p〈0. 05),劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(P〈0. 01),當劑量達到 15-20mg/ml時有極顯著性差異(Ρ〈0· 001)。
表I婦科調經片對CNE-2Z細胞增殖抑制影響^究(X土SD)
權利要求
1.一種婦科調經片的制備方法,由當歸144g、川芎16g、醋炙香附400g、麩炒白術23g、 白芍12g、赤芍12g、醋炙延胡索32g、熟地黃48g、大棗80g、甘草Ilg作為原料藥制成,其特征在于所述的方法由下列步驟組成取當歸、川芎、醋炙香附,加入到CO2超臨界萃取器中,乙醇作為夾帶劑,夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%,萃取壓力15-30MPa,溫度 30-50°C, CO2流量l-3ml/g生藥· min,萃取時間150_180min,得超臨界萃取物,備用;取其余中藥,粉碎,加入2L的70%乙醇,投入微波萃取裝置中進行微波萃取,萃取功率400-600W, 萃取2次,每次4-8分鐘,合并萃取液,濃縮,加到DlOl大孔吸附樹脂柱上,50%乙醇洗脫,收集5倍量柱體積洗脫液,減壓回收乙醇,濃縮并干燥,得微波提取物,備用;將上述超臨界萃取物和微波提取物混合,加入淀粉,70%乙醇制顆粒,干燥,壓片,制成1000片,每片重O. 5g。
2.根據權利要求1所述一種婦科調經片的制備方法,其特征在于所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
3.根據權利要求1所述一種婦科調經片的制備方法,其特征在于所述微波萃取功率 500W,每次萃取6分鐘。
4.根據權利要求1所述一種婦科調經片的制備方法,其特征在于所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa,溫度40°C, CO2流量2ml/g生藥· min,萃取時間160min。
5.根據權利要求1所述一種婦科調經片在制備抑制人鼻咽癌CNE-2Z細胞增殖藥物中的應用。
全文摘要
本發明提供一種婦科調經片的制備方法,由當歸144g、川芎16g、醋炙香附400g、麩炒白術23g、白芍12g、赤芍12g、醋炙延胡索32g、熟地黃48g、大棗80g、甘草11g作為原料藥制成,采用超臨界萃取和微波萃取制備而成,使得阿魏酸含量有很大提高,本發明還提供了婦科調經片在制備抑制人鼻咽癌CNE-2Z細胞增殖藥物中的應用。
文檔編號A61K36/8905GK102988665SQ201210378259
公開日2013年3月27日 申請日期2012年10月8日 優先權日2012年10月8日
發明者不公告發明人 申請人:卞毓平
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