專利名稱：一種鴨傳染性漿膜炎三價滅活疫苗及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種鴨傳染性漿膜炎三價滅活疫苗，屬于獸用生物制品領域。
背景技術：
鴨傳染性漿膜炎，又稱鴨疫里默氏桿菌病、鴨疫巴氏桿菌病、鴨敗血癥、鴨疫綜合征，是由鴨疫里默氏桿菌(Riemerella anatipestifer, RA)引起的一種鴨的急性、敗血性的傳染病。Hendrickson和Hilbert 1932年首次報道紐約長島的北京鴨發生本病。本病呈急性或慢性敗血癥，以纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊炎和腦膜炎為特征，慢性經過的鴨主要表現為腦膜炎癥狀(俞永裕，施建明.淺談鴨傳染性漿膜炎的診治.上海畜牧獸醫通訊， 2000，(2) :22 23)。I 8周齡雛鴨易感，惡劣環境可誘發本病，本病死亡率最高可達75% (胡建華，孫鳳萍等.鴨疫里氏桿菌分離及免疫研究.上海農業學報，2003，19 (4) :109 111)。由于本病的高死亡率,致鴨體重減輕和高度淘汰,使其成為養鴨業經濟損失最主要的疾病之一。使用疫苗進行免疫接種是控制該病的方法之一。到目前為止，鴨傳染性漿膜炎共報道有21個血清型(I 21型)，由于鴨傳染性漿膜炎血清型較多，且各血清型之間沒有交叉保護(Sandhu T S，Leister M L. Serotype of Pasteurella anatipestifer isolates from poultry in different contries. Avian Pathology, 1991，20:232-239),所以，使用疫苗的抗原血清型必須與發生該病的血清型最大程度的吻合，才能達到最佳免疫效果。
目前，對鴨傳染性漿膜炎的防治主要以疫苗預防為主。由于鴨傳染性漿膜炎不同血清型菌株的免疫原性不同，菌苗誘導的免疫力具有血清型的特異性，而且本病可出現多種血清型混合感染以及血清型的變異，因此，使用疫苗時，在確定不同地區流行菌株的血清型及其分布基礎上，選用同型菌株的疫苗才能確保免疫效果。
鴨傳染性漿膜炎給養鴨業帶來嚴重的經濟損失，引起越來越多的關注。目前，鴨傳染性漿膜炎較為理想的疫苗應該是亞單位苗或基因工程苗，而作為獸用疫苗，亞單位苗由于成本過高而不太實用，基因工程苗則是較為理想的發展方向。在研制基因工程苗時，在親本株的選擇上，要么是分離本地毒力較強的優勢血清型，產生最大限度的保護；要么使用的疫苗含有多種血清型，盡可能地包括多種保護性抗原，可以提供更全面的保護。但現在科研人員對RA的研究都集中在細菌的結構與功能上，細菌的致病機制等分子水平的研究雖然取得了很大的進展，但研究成果還未能促使RA疫苗取得突破。目前國內只有四川農業大學研制的疫苗獲得了新獸藥注冊證書，但是他們研究的產品僅含血清I型鴨疫里默氏桿菌， 不能預防其它血清型引起的鴨傳染性漿膜炎，市場急需多價苗的推廣與應用。
鑒于上述原因，根據近幾年的流行病學調查和病原分離工作，特別是目前企業的實際生產能力和水平，我們認為利用多個血清型的流行菌株研制鴨傳染性漿膜炎疫苗符合需要，并能夠解決以往產品無法預防多個血清型引發鴨傳染性漿膜炎的問題。發明內容
本發明要解決的技術問題是提供本發明人自行分離的的三株不同血清型鴨疫里默氏桿菌血清I型ZJOl株、血清2型HNOl株、血清7型YC03株，利用三株菌株制備一種鴨 傳染性漿膜炎三價滅活疫苗，用于有效預防鴨傳染性漿膜炎。為解決上述技術問題，本發明的技術方案在于將保藏號為CGMCC No. 6400的血清I型鴨疫里默氏桿菌ZJOl株、保藏號為CGMCC No. 6398的血清2型鴨疫里默氏桿菌HNOl株和保藏號為CGMCC No. 6399的血清7型鴨疫里 默氏桿菌YC03株作為生產疫苗用菌種，分別接種馬丁肉湯培養基，于37°C培養16 20小 時，經過滅活、濃縮制成三種滅活濃縮菌液；將檢驗合格的三種滅活濃縮菌液混合，加入油 佐劑再經乳化制備出鴨傳染性漿膜炎三價滅活疫苗。
具體實施例方式I.疫苗生產用菌株(I)菌株來源本發明人于2006年從河南、山東和浙江等地鴨場采集鴨疫里默氏桿菌病病料，用 血清營養瓊脂平板從病死鴨的腦組織、心臟、肝臟等部位分離出多株鴨疫里默氏桿菌菌株， 對分離的鴨疫里默氏桿菌進行了形態觀察、培養特性、生化特性、血清學試驗、毒力和免疫 原性試驗，最終篩選到國內流行的血清I型、2型菌株和7型菌株各一株，分別命名為鴨疫 里默氏桿菌血清I型ZJOl株、血清2型HNOl株和血清7型YC03株。以上鴨疫里默氏桿菌 (Riemerella anatipestifer) I 型 ZJOl 株，2 型 HNOl 株和 7 型 YC03 株已于 2012 年 08 月 14日送交北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所中國微生物菌種保 藏管理委員會普通微生物中心保藏，編號為分別CGMCC No. 6400，CGMCC No. 6398和CGMCC No. 6399。(2)菌種特性I)形態及生化特性本菌為革蘭氏陰性小桿菌。感染動物的組織或血液涂片，瑞氏 染色為兩極著色小桿菌。生化特性符合細菌分類學中本菌的特性。2)培養特征在麥康凱瓊脂平板上不生長；在含5%新生牛血清的營養瓊脂平板、含 10%綿羊鮮血的營養瓊脂平板和馬丁肉湯培養基中生長良好；在含5%新生牛血清的營養瓊 脂平板上培養24小時,形成圓形、凸起、透明、呈露珠樣、直徑為O. 5mm I. 5mm的菌落,用 斜射光觀察有藍色熒光；在含10%綿羊鮮血的營養瓊脂平板上呈露珠樣小菌落，不溶血；在 馬丁肉湯培養基中均勻渾濁，無菌膜。3)分型鑒定①材料鴨疫里默氏桿菌定型血清瓊擴效價均> 1:16，由揚州大學獸醫學院保存、提供。待檢菌株鴨疫里默氏桿菌ZJOl株、HNOl株、YC03株，由齊魯動物保健品有限公司 分離、提供。②方法在室溫條件下，將鴨疫里默氏桿菌ZJOl株、HNOl株、YC03株抗原分別充分振蕩搖 勻后，吸取25 μ I滴于潔凈載玻片上，分別取定型血清25 μ I與之混勻。抗原和血清混合后 觀察5min，若出現明顯的顆粒凝集或塊狀凝集則為陽性，若不出現凝集則為陰性。③結果
凝集反應結果表明，鴨疫里默氏桿菌ZJOl株與I型定型血清產生凝集反應，判定為血清I型；HN01株與2型定型血清產生凝集反應，判定為血清2型；YC03株與7型定型血清產生凝集反應，判定為血清7型菌株。具體結果見表I。
表I鴨疫里默氏桿菌血清型鑒定試驗結果
權利要求
1.一種鴨傳染性漿膜炎三價滅活疫苗，其特征是該疫苗含有保藏號為CGMCC No. 6400的血清I型鴨疫里默氏桿菌ZJOl株、保藏號為CGMCC No. 6398的血清2型鴨疫里默氏桿菌HNOl株和保藏號為CGMCC No. 6399的血清7型鴨疫里默氏桿菌YC03株，三株病毒已于2012年8月14日送交北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏。
2.—種權利要求1所述的鴨傳染性漿膜炎三價滅活疫苗的制備方法，其特征在于將保藏號為CGMCC No. 6400的血清I型鴨疫里默氏桿菌ZJOl株、保藏號為CGMCC No. 6398的血清2型鴨疫里默氏桿菌HNOl株和保藏號為CGMCC No. 6399的血清7型鴨疫里默氏桿菌YC03株作為生產疫苗用菌種，分別接種馬丁肉湯培養基，于37°C培養16 20小時，經過滅活、濃縮制成三種滅活濃縮菌液；將檢驗合格的三種滅活濃縮菌液混合，加入油佐劑再經乳化制備出鴨傳染性漿膜炎三價滅活疫苗。
全文摘要
本發明涉及一種鴨傳染性漿膜炎三價滅活疫苗及其制備方法。本發明利用自行分離的三株不同血清型鴨疫里默氏桿菌菌株，分別接種適宜培養基培養，收獲培養物，經甲醛溶液滅活后濃縮，然后按照一定比例混合均勻，加入礦物油佐劑乳化，制備出一種鴨傳染性漿膜炎三價滅活疫苗，能夠有效預防鴨傳染性漿膜炎。
文檔編號A61P31/04GK103007265SQ20121033417
公開日2013年4月3日 申請日期2012年9月11日 優先權日2012年9月11日
發明者鮑海忠, 王蕾, 鞠洪濤, 徐龍濤, 李金波, 宋曉飛, 張小軍, 吳昊, 魏聯果 申請人:齊魯動物保健品有限公司