專利名稱：與慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證相關的基因序列的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及分子診斷領域，尤其涉及一組與慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證相關的基因序列的應用。
背景技術：
慢性乙型肝炎(chronic hepatitis type B, CHB)患者是指既往有乙型病毒性肝炎或HBV攜帶史，或乙型急性肝炎病程超過半年，而目前仍有肝炎癥狀、體征及肝功能異常者。我國是慢性乙型肝炎高發地區，據統計，有7.5億人曾感染過HBV(占全國人口 57. 6% )，其中慢性HBV感染者約1. 2億，慢性感染者中15% 25%最終也將死于與HBV相關的肝病，如肝硬化和肝癌。我國每年約30萬例因慢性乙型肝炎或相關疾病死亡，占傳染病死亡第一位。由于西醫缺乏有效治療措施，在我國，中醫及中西醫結合治療是目前的主要方法，且取得了較好的臨床效果。但目前仍有許多關鍵問題亟待解決，尤其是對慢性乙型肝炎的中醫證候及辨證體系缺乏規范化研究。據統計，慢性乙型肝炎中肝膽濕熱證約占37. 1%，對該證型的深入研究有著重要意義。按照《內科學》及國家技術監督管理局發布的《中醫臨床診療術語》(GB/T16751-1997) 的診斷標準，慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的辨證有以下若干要素組成口干、口苦、大便不調、尿黃、脅肋脹痛、脅下痞塊、厭油膩、惡心嘔吐、身目發黃、頭身沉重、食欲減退、發熱、 陰部瘙癢、睪丸脹痛、帶下黃臭等。但是，通過“望、聞、問、切”四診對以上信息很難量化，導致對于肝膽濕熱證的判斷很大程度上依賴于醫生的診療水平與經驗，這在一定意義上客觀地制約了臨床醫生對疾病本質的把握，進一步影響中醫及中西醫結合療法對于慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證患者的治療效果。因此，對于慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的診斷迫切需要一種準確的、快捷的與可定量的診斷方法。表達譜基因芯片為從分子水平進行疾病診斷提供了有力工具，通過平行考察上萬種基因的表達情況，得到每個患者基因表達的分子圖譜。然后利用多種聚類分析，如層次聚類、自組織分析、主成分分析等方法將具有不同基因表達譜的疾病進行區分歸類，進而為疾病診斷提供可靠的分子水平依據。目前，國際上已有文獻報道，通過基因表達譜的研究可以顯著區分疾病及疾病分型。如Golub等闡述了將基因芯片技術應用于白血病分型，顯示出了快速、簡便和高特異性等優點。他們設計出的DNA芯片成功地分析了急性髓細胞性白血病(AML)和急性淋巴細胞性白血病(ALL)，為人類的慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證疾病分型及早期診斷奠定了基礎(Science. 286 :531-7)。在國內研究中，馬曉娟等通過對比冠心病血瘀證和非血瘀證患者的靜脈血白細胞表達譜找到48條基因，為血瘀證的診斷提供了基因層面的依據(中西醫結合學報，6 ) :355-360)。但是，目前仍沒有關于輔助診斷慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的基因序列的任何報道。
發明內容
本發明要解決缺乏客觀準確的輔助診斷慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的分子依據的技術問題，提供一組與慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證相關的基因序列的應用，該組基因序列為診斷慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證提供可靠的分子水平依據。為了解決上述技術問題，本發明通過如下技術方案實現在本發明的一個方面，提供了一組基因序列的用途，用于制備輔助診斷慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的產品，該組基因序列為SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 9所示的序列。優選的，所述輔助診斷慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的產品包括用基因芯片檢測、實時定量PCR或免疫檢測診斷慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的產品。在本發明的另一方面，還提供了一種用于輔助診斷慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的基因芯片，所述基因芯片包含與SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 9所示各基因序列和/或其互補序列特異性雜交的探針。在本發明中，所述探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其它衍生物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性結合即可。在本發明中，利用基因芯片或實時定量PCR診斷慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的方法是通過檢測SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 9基因在同一樣本中相對于其內參基因匪 001101 (ACTB)的表達變化進行辨證，其參考相對表達值如下表1 表ISEQ ID No. 1 SEQ ID No. 9基因相對于內參基因的表達值
權利要求
1.一組基因序列的用途，其特征在于，用于制備輔助診斷慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的產品，該組基因序列為SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 9所示的序列。
2.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，所述輔助診斷慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的產品包括用基因芯片檢測、實時定量PCR或免疫檢測診斷慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的產品。
3.一種用于輔助診斷慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的基因芯片，其特征在于，所述基因芯片包含與SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 9所示各基因序列和/或其互補序列特異性雜交的探針。
4.一種用于輔助診斷慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含特異性針對SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 9所示各基因序列的引物或探針。
5.一種用于輔助診斷慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 9所示基因序列各表達蛋白的特異性抗體。
6.一種權利要求3所述基因芯片的使用方法，其特征在于，包括如下步驟從人外周靜脈血白細胞中抽提總mRNA ；反轉錄標記mRNA ；選取權利要求3所述的基因芯片，在適于與該芯片進行雜交的條件下，加入經標記的 mRNA，并使其反應足夠時間；洗滌后檢測雜交反應的結果。
7.一種基因序列的用途，其特征在于，用于制備治療慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的藥物，所述基因序列選自SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 9所示的序列。
8.一種基因序列的用途，其特征在于，用于篩選治療慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的藥物，所述基因序列選自SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 9所示的序列。
9.一種蛋白質的用途，其特征在于，用于篩選治療慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的藥物，所述蛋白質的基因序列選自SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 9所示的序列。
全文摘要
本發明公開了一組與慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證相關的基因序列的應用，用于制備輔助診斷慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的產品。利用本發明的一組基因序列，可從分子水平對慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證進行準確辨證，并可作為治療慢性乙型肝炎中醫肝膽濕熱證的藥物靶標。
文檔編號A61K45/00GK102417923SQ20111014196
公開日2012年4月18日 申請日期2011年5月27日 優先權日2011年4月18日
發明者張慶華, 彭景華, 王世東, 王珂, 胡義揚, 趙瑜, 魏婷 申請人:上海中醫藥大學附屬曙光醫院, 上海生物芯片有限公司