專利名稱：瞬時連接于聚合物載體的干生長激素組合物的制作方法
瞬時連接于聚合物載體的干生長激素組合物本發明涉及rhGH聚合物前體藥物的干組合物、其制備方法以及包含所述組合物的容器和試劑盒。生長激素(GH)是在人類和其他動物中刺激生長和細胞繁殖的激素。其是在垂體前葉的側翼內通過促生長激素細胞合成、儲存和分泌的具有191個氨基酸的單鏈多肽激素。當提及由重組DNA技術產生的人類生長激素(hGH)時，該激素也通稱為促生長素，并簡稱為 “rhGH”。 生長激素在體內具有多種功能，最顯著的功能是在幼年期間增加高度，并且通過GH的治療性使用可以治療幾種疾病。由于生長激素產生不足引起的生長激素缺乏造成了多種負面影響。在嬰兒期和幼年期，最突出的特征是生長不足，導致身材矮小，而在成年期，其會造成瘦體重降低、骨密度減少以及其他物理和生理影響。生長激素缺乏的標準治療是在皮下或者肌肉中每日注射重組人類生長激素(rhGH)。為了使兒科患者群體免于每日注射的負擔，意圖提供長效生長激素組合物，以在幼年期治療生長激素缺乏。描述了長效的或者持續釋放人類生長激素的多種組合物。第一代生長激素長效藥劑基于高度黏性液體如蔗糖醋酸異丁酸酯(W0 01/78683,Genentech)或生物可降解PLGA(聚交酯/聚乙醇酸交酯)凝膠中的人類生長激素的緩慢釋放組合物。在US 5，645，010中，Alkermes描述了鋅復合hGH在PLGA中的組合物。對應的市售產品(Nutropin Depot)提供為單劑量可注射的組合物。出于多種原因，Nutropin Depot并沒有顯示出明顯的市場占有，并且已經停售。最新的基于聚合物的組合物使用透明質酸代替PLGA(US2008/0063727，LG LifeSciences) 0其他研發集中于生長激素的PEG綴合物，以延長注射后經由皮下組織的吸收期以及循環綴合物的終末半衰期二者(US 4，179，337描述了聚乙二醇化的促生長素，如WO03/044056，Pharmacia 和 TO 06/102659，Nektar)為目的。然而，對于如何配制聚乙二醇化的生長激素，僅可得到很少的詳細說明。由于PEG自身為高黏性物質，與未修飾的蛋白質比較，攜帶高分子量PEG鏈的相應蛋白質綴合物也表現出強烈增強的黏性。由于期望以比每日劑量更低的頻率提供充足物質而同時尋求最小化注射體積，該情況更為明顯。因此，長效聚乙二醇化生長激素的組合物比現存的未修飾生長激素的每日一次組合物更濃而且更黏稠。Ambrx的WO 2006/071840中詳述了摻入非天然氨基酸的聚乙二醇化生長激素變體的組合物。Novo的WO 2007/025988描述了通過肟鍵含有生長激素和PEG的組合物。Novo的US 26/257479詳述了 PLGA中PEG生長激素綴合物的組合物。最近，通過在前體藥物方法中使用可逆的連接體，引入了聚乙二醇化范圍的擴展。hGH的聚乙二醇化前體藥物表現出聚乙二醇化綴合物顯著降低的生物活性，但釋放自該綴合物的游離的生長激素表現出完全未受影響的生物學活性。此類hGH前體藥物的組合物，不僅僅需要考慮通過PEG組分引入的黏性，還必須提供足夠的前體藥物穩定性，以避免儲存期間過早的hGH釋放。如果PEG部分與藥物之間的可逆連接在儲存期間降解，那么則增加了立即可用的藥物濃度，其導致了超劑量的風險。此夕卜，在儲存期間釋放的任一藥物在施用給患者后都經歷快速的腎臟清除，因此，降低了長效組合物提供藥物的治療相關量的時間。這造成了不滿足醫療需求的風險。此外，已知rhGH在儲存條件下會經歷分解反應，其會產生相應組分的雜質。因此，應當強制鑒定合適的rhGH聚合物前體藥物組合物，其中rhGH應當顯示出可接受的雜質譜。因此，首先需要研發hG H聚合物前體藥物的組合物，其確保了 rhGH聚合物前體藥物化合物的穩定性。此外，期望提供此類hGH聚合物前體藥物的單劑量以及多劑量組合物。因此，本發明的目的是提供此類組合物。該目的通過包含治療有效量的rhGH聚合物前體藥物和一種或者多種凍干保護劑和任選地一種或多種可藥用賦形劑的干組合物實現，其中生長激素與聚合物載體瞬時連接。在本發明的上下文中，術語和短語使用如下。因為重組人類GH在序列上與天然人類GH相同，所以在本文中，術語重組人類生長激素(rhGH)也涉及所謂的生物起源等同物。因此，在本發明的含義內，術語rhGH和hGH可以同義使用。如本領域技術人員已知，對所關注的生物學物質(在本文中為GH)做出例如輕微氨基酸改變而不顯著影響生物學物質的活性，是目前的一項常規工作。除重組的人類生長激素和生物起源生長激素外，在本文中術語重組人類生長激素還涉及全部可能的rhGH多肽。可能的rhGH多肽的精確描述給自于Pharmacia公司的W0-A2005/079838第15頁第0043段一直到并且包括第0053段中。術語“hGH多肽或hGH蛋白質”當在本文中使用時，包括優選來自哺乳動物物種、更優選來自人類和鼠類物種的全部hGH多肽，以及它們的變體、類似物、直向同系物(orthologs)、同系物和衍生物及其片段，其特征在于在生長期促進生長并維持正常的身體組成、合成代謝和脂類代謝。任選地，術語“hGH多肽或hGH蛋白質”進一步包括與天然存在的hGH變體比較具有一個或多個其他氨基酸殘基的hGH，其中這些其他氨基酸殘基可以在氨末端、C-末端和/或內部。應當理解，術語“hGH多肽或hGH蛋白質”還指具有添加的、缺失的或者交換的氨基酸殘基的任意組合的hGH變體。優選地，術語“hGH多肽或hGH蛋白質”當在本文中使用時，包括優選來自哺乳動物物種、更優選來自人類和鼠類物種的全部hGH多肽，以及它們的變體、類似物、直向同系物、同系物和衍生物及其片段，其特征在于在生長期促進生長并維持正常的身體組成、合成代謝和脂類代謝。更優選地，hGH多肽或hGH蛋白質與以下給出的使用根據本領域技術人員已知的IUPAC-IUB的氨基酸單字母碼序列具有至少95%的同一性。FPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKYSFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGF術語“hGH多肽或hGH蛋白質”優選指具有如A. L. Grigorian等人，ProteinScience (2005) 14,902-913中公開的序列的22kDa hGH多肽，以及表現出基本上相同的生物學活性(在生長期促進生長并維持正常的身體組成、合成代謝和脂類代謝)的其變體、同系物和衍生物。更優選地，術語“hGH多肽或hGH蛋白質”指正好具有上述序列的多肽。如本文中所用的術語“hGH多肽或hGH蛋白質”指來自同一物種但不同于參考hGH多肽的多肽。通常，差異是有限的，以使參考和變體的氨基酸序列在整體上是非常類似的，并且在許多區域是相同的。優選地，hGH多肽與參考hGH多肽具有至少70%、80%、90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 的同一性，優選地，hGH 多肽具有如 A. L. Grigorian 等人，ProteinScience (2005)，14，902-913中所示的序列。就與查詢氨基酸序列具有至少例如95%“同一性”的氨基酸序列的多肽而言，其指除所指多肽序列可以包括查詢氨基酸序列的每一百個氨基酸中至多5個氨基酸改變外，所指多肽的氨基酸序列與查詢序列是相同的。參考序列的這些改變可以發生在參考氨基酸序列的氨基端或羧基端位置，或者這些末端位置之間的任何位置、個別地分散在參考序列的殘基之間或者分散在參考序列內一個或多個鄰近的群組中。查詢序列可以是參考序列的整個氨基酸序列或者如本文所述的任一特定片段。 此類hGH多肽變體可以是天然存在的變體，例如由占據生物體染色體上給定位置的一個或幾個交替形式的hGH編碼的天然存在的等位變體、或者由來源于單個初級轉錄物的天然存在的剪接變體編碼的同種型。備選地，hGH多肽變體可以是這樣的變體，其是已知并不天然存在的并可以使用本領域已知的誘變技術制備的變體。本領域已知，在沒有實質上丟失生物功能的情況下，可以從生物活性肽或蛋白質的N-末端或C-末端中缺失一個或多個氨基酸(參見例如Ron等人，(1993)，Biol. Chem.，268 2984-2988，所述公開在此處以其整體引入作為參考)。本領域技術人員還公認，在沒有顯著影響蛋白質的結構或功能的情況下，可以改變hGH多肽的一些氨基酸序列。此類突變包括根據本領域已知的一般規則選擇的缺失、插入、倒位、重復和取代，而幾乎對活性不產生影響。例如，在Bowie等人(1990), Science247 =1306-1310中提供了有關如何制備表型沉默氨基酸取代的指導，在此以其整體引入作為參考，其中作者指出存在兩種主要用于研究氨基酸序列耐受改變的方法。第一種方法依賴于進化的過程，其中通過自然選擇接受或者拒絕突變。第二種方法使用基因工程在克隆的hGH的特定位置引入氨基酸改變，并選擇或篩選以鑒定維持功能的序列。這些研究已經顯示，蛋白質可以出乎意料地耐受氨基酸取代。作者進一步表明，在蛋白質的某些位置處，什么樣的氨基酸改變可能是許可的。例如，大多數掩藏的氨基酸殘基需要非極性側鏈，而表面側鏈的極少數特征一般是保守的。其他此類表型沉默取代描述于上述Bowie等人，(1990)，以及其中所引用的參考文獻中。通常認為保守的取代是在脂肪族氨基酸Ala、Val、Leu和Phe間，用一個取代另一個，互換輕基殘基Ser和Thr、交換酸性殘基Asp和Glu、在酰胺殘基Asn和Gln之間取代、交換堿性殘基Lys和Arg，以及在芳香族殘基Phe、Tyr之間取代。此外，以下氨基酸群組通常代表等效改變(I) Ala、Pro、Gly、Glu、Asp、Gin、Asn、Ser> Thr ； (2) Cys> Ser> Tyr> Thr ； (3)Val、lie、Leu、Met、Ala、Phe ； (4) Lys、Arg、His ； (5) Phe、Tyr、Trp、His。 術語hGH多肽還包括由hGH類似物、直向同系物和/物種同系物編碼的所有hGH多肽。如本文中所用的術語“hGH類似物”指不同的和不相關的生物的hGH，其在各個生物中執行相同的功能，但其并非來源于生物祖先所共有的祖先結構。相反，類似的hGH獨立地產生，然后進化以執行相同的功能(或者類似的功能)。換言之，類似的hGH多肽是具有非常不同的氨基酸序列但執行相同的生物學活性即在生長期促進生長并維持正常的身體組成、合成代謝和脂類代謝的多肽。如本文中所用的術語“hGH直向同系物”指兩種不同物種內的hGH，其序列通過祖先物種中共同的同系hGH相互關聯，但已經進化變得相互不同。如本文中所用的術語“hGH同系物”指不同生物的hGH，其在各個生物中執行相同的功能，并來源于生物祖先所共有的祖先結構。換言之，同系hGH多肽是具有非常類似的氨基酸序列的多肽，其執行相同的生物學活性，即在生長期促進生長并維持正常的身體組成、合成代謝和脂類代謝。優選地，可以將hGH多肽同系物定義為顯示出與參考hGH多肽、優選具有如上所述序列的 hGH 多肽具有至少 40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98% 或 99%的同一丨I"生的多肽。因此，hGH多肽可以是例如⑴其中一個或多個氨基酸殘基用保守的或者非保守
的氨基酸殘基(優選地保守氨基酸殘基)取代的hGH多肽，并且該取代的氨基酸殘基可以是或者可以不是由遺傳密碼編碼的或者(ii)其中一個或多個氨基酸殘基包含取代基的hGH多肽或者(iii)其中hGH多肽與另一化合物、例如增加多肽半衰期的化合物(例如聚乙二醇)融合的hGH多肽或者(iv)其中其他的氨基酸與上述形式的多肽融合的hGH多肽，例如IgG Fe融合區肽，或者前導序列或分泌序列或者用于純化上述形式的多肽的序列或原蛋白序列。hGH多肽可以是單體或者多聚體。多聚體可以是二聚體、三聚體、四聚體或者包含至少5個單聚多肽單元的多聚體。多聚體還可以是同源二聚體或者異源二聚體。多聚體可以是疏水、親水、離子和/或共價結合的結果和/或可以通過例如脂質體形成間接連接。在一個實例中，共價結合在含hGH多肽或其片段的融合蛋白質所含的異源序列之間(參見例如美國專利號5，478，925，其公開在此處以其整體引入作為參考)。在另一實例中，hGH多肽或其片段通過肽連接體例如US. 5，073，627 (在此處引用作為參考)中所述那些與一個或多個可以為hGH多肽或者異源多肽的多肽連接。用于制備多聚體hGH多肽的另一方法涉及使用與已知促進蛋白質多聚化的亮氨酸拉鏈或異亮氨酸拉鏈多肽序列融合的hGH多肽，其中發現使用本領域技術人員已知的技術，包括WO 94/10308的教導。在另一實例中，hGH多肽可以通過在含Flag 多肽序列的融合hGH多肽中所含的Flag 多肽序列之間的相互作用結合。還可以使用本領域已知的化學技術產生hGH多聚體，例如使用本領域已知的連接體分子和連接體分子長度優化技術的交聯(參見例如US 5，478，925)、本領域已知在位于(期望含在多聚體內的)多肽序列內的半胱氨酸殘基之間形成一個或多個分子間交聯的技術(參見例如US 5，478，925)、將半胱氨酸或者生物素添加到hGH多肽的C-末端或N-末端，以及產生含有一個或多個以上這些修飾多肽的技術(參見例如US 5，478，925)或者產生含hGH多聚體的脂質體的30種技術的任意一種(參見例如美國專利號5，478，925)，所述公開以其整體引用作為參考。如本文中所用的術語“hGH多肽片段”指包含hGH多肽、優選具有上述序列的多肽的臨近跨度的一部分氨基酸序列的任意肽或者多肽，即其指與天然存在的變體比較，在N末端、C末端和/或內部具有至少一個氨基酸殘基的一個或多個缺失的hGH多肽。眾所周知，rhGH或其變體、綴合物或者衍生物可能經歷分解反應，其會產生雜質，例如
琥珀酰亞胺和異天冬氨酸降解產物(雜質):異天冬氨酰肽鍵的形成是肽和蛋白質在溫和條件下非酶促降解的最常見形式之一。對于hGH，琥珀酰亞胺形成和隨后水解成異天冬氨酸和天冬氨酸的主要位點是ASP130。 由于脫酰胺作用產生的降解產物(雜質)在溫和條件下，hGH的主要脫酰胺位點是 ASN149 和 ASN152。 由于氧化作用產生的降解產物(雜質)在溫和條件下，hGH的主要氧化位點是MET14。為了增強藥物如rhGH的體內物理化學或者藥物動力學性質，可以將該藥物與載體綴合。如果藥物與載體和/或連接體瞬時結合，通常將此類系統指定為載體-連接的前體藥物。根據 IUPAC 提供的定義(如在 //www. chem. qmul. ac. uk/iupac. medchem 給出，在2009年7月22日獲取)，載體連接的前體藥物是含有給定活性物質與瞬時載體基團的暫時連接的前體藥物，其產生改善的物理化學或者藥物動力學性質，并且通常通過水解 切割可以在體內容易地去除。在載體連接的前體藥物中使用的連接體是瞬時的，意為在生理學條件(pH7.4，37°C的含水緩沖液)下，其是非酶促水解可降解的(可切割的)，半衰期范圍為例如I小時至3個月。術語“瞬時的”和“可逆的”可同義使用。本領域技術人員明白，hGH聚合物前體藥物是共價綴合物，意為hGH部分通過可逆的連接體部分與聚合物共價連接。優選地，在hGH聚合物前體藥物中使用的連接體是無痕跡的，意為它們將hGH以其游離形式釋放。合適的載體是聚合物，并可以與連接體直接綴合或者通過不可切割的間隔區與連接體綴合。術語“hGH聚合物前體藥物”指hGH的載體連接的前體藥物，其中載體是聚合物。術語聚合物描述了由通過化學鍵、以線性、環狀、分枝狀、交聯或者樹狀聚體(dendrimeric)方式或它們的組合連接的重復結構單元組成的分子,其可以是合成來源或者生物來源或者二者的組合。通常，聚合物具有至少IkDa的分子量。聚合物優選地選自例如2-異丁烯酰基-氧乙基磷酰基膽堿、水凝膠、基于PEG的水凝膠、聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸酯)、聚(丙烯酰胺)、聚(烷氧基)聚合物、聚(酰胺)、聚(酰胺基胺)(poly (amidoamines))、聚(氨基酸)、聚(酐)、聚(天冬酰胺)、聚(丁酸)、聚(羥基乙酸)、聚對苯二甲酸丁二醇酯、聚(己內酯)、聚(碳酸酯)、聚(氰丙烯酸酯)、聚(二甲基丙烯酰胺)、聚(酯)、聚(乙烯)、聚(乙二醇)、聚(環氧乙烷)、聚(磷酸三乙酯)(poly (ethyl phosphates))、聚(乙基5惡唑啉)、聚(輕基乙酸)、聚(丙烯酸輕乙酯)、聚(羥基乙基^唑啉)、聚(羥基甲基丙烯酸脂)、聚(羥丙基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羥丙脂)、聚(羥丙基唑啉)、聚(亞氨基碳酸酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-羥基乙酸共聚物)、聚(甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸酯)、聚(甲基噴唑啉)、聚(有機膦腈)、聚(原酸酯)、聚(口€唑啉)、聚(丙二醇)、聚(硅氧烷)、聚(氨基甲酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯胺)、聚(乙烯甲基醚)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、硅酮、纖維素、羧甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲殼質、脫乙酰殼多糖、葡聚糖、糊精、明膠、透明質酸及衍生物、甘露聚糖、果膠、鼠李半乳糖醒酸聚糖(rhamnogalacturonans)、淀粉、輕燒基淀粉、輕乙基淀粉和其他基于碳水化合物的聚合物、木聚糖及其共聚物。
本文中所用的術語“PEG”或“聚乙二醇化殘基”用于示例以重復單元為特征的合適的水溶性聚合物。合適的聚合物可以選自聚烷氧基聚合物、透明質酸及其衍生物、聚乙烯醇、聚W惡唑啉、聚酐、聚(原酸酯)、聚碳酸酯、聚氨基甲酸酯、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚有機膦腈、聚硅氧烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚氰丙烯酸酯和聚酯。優選地是聚烷氧基聚合物，特別地含以重量計至少10%、更優選地以重量計至少25%、甚至更優選地以重量計至少50 %的環氧乙烷單元的聚乙二醇聚合物。“組合物”指兩種或兩種以上化學物質的混合物。藥物組合物包含藥物活性部分，或者以其游離形式或者作為前體藥物，以及可藥用賦形劑和/或載體。“干組合物”意為hGH聚合物前體藥物組合物以干的形式在容器中提供。用于干燥的合適方法是噴霧干燥和冷凍干燥(凍干)。該hGH聚合物前體藥物的干組合物具有最大10%、優選地小于5%和更優選地小于2% (根據Karl Fischer測定)的殘留水含量。干燥的優選方法是冷凍干燥。“冷凍干燥的組合物”意為首先冷凍hGH聚合物前體藥物組合物， 隨后通過減壓進行水減少。該術語并不排除在將組合物填充入最終容器之前在制備工藝中發生的其他干燥步驟。“冷凍干燥”(凍干)為脫水過程，其特征在于冷凍組合物，然后降低周圍壓力和任選地加熱，以允許組合物中冷凍的水直接從固相中升華成氣體。通常，通過凝華作用收集升華的水。“重構”意為添加液體以使組合物回到原來的形式，例如溶液。“重構溶液”指在施用給需要其的患者之前，用于重構rhGH聚合物前體藥物的干組合物的液體。“容器”意為任意容器，其中包含了 rhGH聚合物前體藥物組合物并可以儲存，直到重構。“穩定的”和“穩定性”意為在指定的儲存時間內，聚合物綴合物保持綴合并不會大量程度的水解，并表現出與rhGH相關的可接受的雜質譜。為了被視為穩定的，組合物含有少于5%的游離形式的藥物和少量的rhGH相關雜質，例如ASP130琥珀酰亞胺和異天冬氨酸形成、ASN140和ASN152脫酰胺，以及MET14氧化。可以將雜質定量為胰蛋白酶肽(trypticpeotides)，基于相對于相應未修飾胰蛋白酶肽的峰面積的它們的各個峰面積，并且“少量”可對應于該雜質存在的程度不大于20 %，優選地不大于10 %，甚至更優選地不大于5 % (每種雜質)。藥物的“游離形式”指藥物以其未修飾的、藥理學完全活性形式，例如從聚合物綴合物中釋放后。“治療有效量”意為足以治愈、緩解或者部分阻止給定疾病及其并發癥的臨床表征的量。將足夠實現其的量定義為“治療有效量”。每一目的的有效量取決于疾病或者損傷的嚴重程度，以及受試者的體重和一般狀態。應當理解，使用常規實驗、通過構建數值矩陣并測試矩陣中不同的點，可以實現合適劑量的測定，這都落入受訓醫師的普通技術內。在本發明的范圍內，治療有效量涉及旨在實現長期即3天或更長、例如I周或3周的治療效果的劑量。“緩沖液”或“緩沖劑”指維持pH在期望范圍內的化學化合物。生理上耐受的緩沖液為例如磷酸鈉、琥珀酸鹽、組氨酸、碳酸氫鹽、檸檬酸鹽和乙酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、氯化物、丙酮酸鹽。還可以使用解酸劑，例如Mg(0H)2*ZnC03。可以調整緩沖能力，以匹配對pH穩定性最敏感的條件。“賦形劑”指與治療劑一起施用的化合物，例如緩沖劑、等滲性改性劑、防腐劑、穩定劑、抗吸收劑、氧化保護劑或者其他輔助劑。然而，在一些情況下，一種賦形劑可以具有兩種或者二種功能。“凍干保護劑”是這樣的分子，當與目的蛋白質組合時，在一般干燥、并特別地在冷凍干燥和隨后的儲存期間，顯著防止或降低蛋白質的化學和/或物理不穩定性。示例性凍干保護劑包括糖，如蔗糖或海藻糖；氨基酸如谷氨酸單鈉或組氨酸或精氨酸；甲胺類，如甜菜堿；易溶鹽(lyotropic salt)，如硫酸鎂；多元醇，如三元或者更高級糖醇，例如甘油、赤蘚醇、丙三醇、阿糖醇、木糖醇、山梨醇和甘露醇；乙二醇；丙二醇；聚乙二醇；普朗尼克類(pluronics);輕燒基淀粉,例如輕乙基淀粉(HES)及其組合。優選地，“凍干保護劑”是這樣的分子，當與目的蛋白質組合時，在一般干燥、并特別地在冷凍干燥和隨后的儲存期間，顯著防止或降低蛋白質的化學和/或物理不穩定性。示例性凍干保護劑包括糖，如蔗糖或海藻糖；氨基酸，如谷氨酸單鈉或組氨酸；甲胺類，如甜菜堿；易溶鹽，如硫酸鎂；多元醇，如三元的或者更高級糖醇，例如甘油、赤蘚醇、丙三醇、阿糖醇、木糖醇、山梨醇和甘露醇；乙二醇；丙二醇；聚乙二醇；普朗尼克類；羥烷基淀粉，例如羥乙基淀粉(HES)及其組合。優選地，在干燥步驟前，將凍干保護劑以“凍干保護量”加入到組合物中，其意為，在凍干保護量的凍干保護劑存在下冷凍干燥蛋白質后，蛋白質在冷凍干燥和儲存期間，基本上保留其物理和化學穩定性和完整性。“表面活性劑”指降低流體表面張力的濕潤劑。“等滲性改性劑”指最小化由于細胞損傷產生的傷害的化合物，所述細胞損傷歸因于注射長效藥劑處滲透壓的差異。術語“穩定劑”指用于穩定聚合物前體藥物的化合物。通過加強穩定蛋白質的力、通過去穩定變性狀態或者通過將賦形劑與蛋白質直接結合，來實現穩定。“抗吸收劑”主要指離子或非離子表面活性劑或者其他蛋白質或可溶性聚合物，用于包被或者競爭性吸附于組合物容器的內表面。賦形劑的所選濃度和類型取決于要避免的影響，但通常恰在CMC值之上在界面形成表面活性劑的單層。“氧化保護劑”指抗氧化劑，如抗壞血酸、四氫甲基嘧啶羧酸(ectoine)、谷胱甘肽、甲硫氨酸、單硫代甘油、桑色素、聚氮丙啶(PEI)、沒食子酸丙酯、維生素E、螯合劑如檸檬酸、EDTA、六磷酸鹽(hexaphosphate)、巰基乙酸。“抗微生物劑”指殺死或抑制微生物如細菌、真菌、酵母、原生動物和/或破壞病毒的化學物質。“可藥用”意為包括不會干擾活性成分的生物學活性的有效性并且對所施用的宿主無毒的任意賦形劑和/或添加劑。“密封容器”意為以不透氣的方式封閉容器，不允許外部與內部之間的氣體交換，并保持內含物無菌。
以下部分進一步詳細描述了本發明。本發明組合物含有rhGH聚合物前體藥物。優選地，rhGH聚合物前體藥物具有(AB)中顯示的通式，hGH- (NH-L-S0)n (AB)，其中n為2、3或4 ;優選地2 ;hGH (-NH) n 表示 hGH 殘基；每個L為官能團1/，其通過自動切割誘導基團^是自身可水解的(自動可切割的)；和每個S°獨立地是聚合物鏈，具有至少5kDa的分子量，其中S°任選地通過包含至少第一分支結構BS1而支化，所述至少第一分支結構BS1包含具有至少4kDa分子量的至少第二聚合物鏈S1，其中S'BS1、S1的至少之一進一步包含自動切割誘導基團Ga，并且其 中無hGH-NH的前體藥物綴合物的分子量為至少25kDa和最多IOOOkDa,優選地至少25kDa和最多500kDa，甚至更優選地至少30kDa和最多250kDa，甚至更優選地至少30kDa和最多120kDa,甚至更優選地至少40kDa和最多lOOkDa。在優選的實施方案中，聚合物是PEG，且每個生長激素分子的總PEG載荷達到至少25kDa。一般地，總PEG載荷為小于1000kDa。優選地，PEG載荷為至少25kDa和最多500kDa，甚至更優選地至少30kDa和最多250kDa，甚至更優選地至少30kDa和最多120kDa，甚至更優選地至少40kDa和最多IOOkDa,甚至更優選地至少40kDa和最多90kDa。PEG可以通過一個或多個錨著點與hGH連接。在一個錨著點的情況下，hGH PEG前體藥物單綴合物中的相應PEG是分支的，并含有至少3個鏈。在一個以上錨著點的情況下，例如在雙綴合物中，hGH PEG前體藥物中的相應PEG可以是分支的或者線性的。雙綴合物可以含有線性的或者分支的PEG或者可以含有一個線性的和一個分支的PEG鏈的混合物。在使用分支的PEG的情況下，可以存在一個或多個分支單元。分支的PEG是由連接兩個或多個PEG鏈的分支點組成的PEG分子，以形成具有用于連接生長激素的一個錨著點的分子。其可以是兩個20kDaPEG鏈連接以形成一個分支的40kDa PEG分子。在其中分子含有兩個或三個分支點的情況下，該分子分別指3臂和4臂PEG。總而言之，并且在上述限制內，PEG聚合物并不局限于特定的結構，并且可以是線性的、分支的或者多臂的(例如分叉的PEG或者與多元醇核連接的PEG)、樹枝狀的或者具有可降解的連接體。天然人類GH的聚乙二醇化可以發生在幾個賴氨酸基團上或者在N末端胺(Fl)上，由Clark等人(本文中參考文獻2)在第21973頁表III描述。高反應性位置為位置Fl和LYS-140。中等反應性位置為LYS-115、LYS-38和LYS-70。低反應性位置為LYS-172、LYS-4ULYS-158和LYS-168。然而，聚乙二醇化可以發生在GH的任一賴氨酸殘基處和/或N末端胺處。本發明干組合物的rhGH聚合物前體藥物優選地在選自Lysl58、Lysl45、Lys38、Lysl40和Lys70的一個或多個賴氨酸處聚乙二醇化。更優選地，hGH部分的聚乙二醇化主要發生在位置Lysl58、Lysl45、Lys38和Lysl40處,甚至更優選地主要在位置Lysl58、Lysl45和Lys38處。優選地，本發明組合物全部生長激素部分的至少30%都在位置Lysl58處聚乙二醇化。在本文中，短語“聚乙二醇化主要發生在位置LysX處”意為rhGH聚合物前體藥物的全部rhGH部分的至少10%都在氨基酸位置X處聚乙二醇化。在更一般的情況下，通過合適的選擇所述聚合物，本文中所用的PEG與瞬時連接體組合可以降低脂肪萎縮(Iipoatrophy)的風險。然而,本發明的原理也應用于除PEG外的聚合物。因此，術語PEG僅在本文中用于示例合適的聚合物。因此，在優選的實施方案中，hGH PEG前體藥物是用其伯氨基之一綴合至自動可切割官能團La再綴合至聚合物鏈S°的單綴合物。該聚合物鏈S°具有至少5kDa的分子量，并包含至少一個分支結構BS1。分支結構BS1包含第二個聚合物鏈S1，其具有至少4 kDa的分子量。如上所述，需要第三個聚合物鏈S2以具有至少4kDa的分子量。聚合物鏈S2可以 是BS1的一部分或者可以是S°或S1的其他分支，產生其他分支結構BS2，其包含S2。任選地，本發明的干組合物中包含的前體藥物綴合物中存在3個以上、例如4、5、6、7或8個聚合物鏈。然而，每一另外的聚合物鏈具有至少4kDa的分子量。聚合物鏈的總數受最多IOOODa(無hGH-NH)的前體藥物綴合物總重量的限制。因此，本發明干組合物中包含的rhGH聚合物前體藥物的優選實施方案涉及前體藥物，其中分支結構BS1AS2的至少之一包含具有至少4 kDa分子量的另外第四個聚合物鏈S3，或者S°、S\S2之一包含含有具有至少4kDa分子量的至少第四個聚合物鏈S3的第三分支結構BS3。分支結構或聚合物鏈之一包含對于La的自動切割必需的自動切割誘導基團Ga。任選地，將分支結構之一用作基團G%以使分支結構由Ga組成(而不是包含所述基團)，其也被術語“包含”所涵蓋。圖I使用示例性hGH聚合物前體藥物說明了 La、Ga、S°、S1、S2、S3、BS1、BS2和BS3的含義。前體藥物綴合物(AA)的制備通常產生綴合物混合物，其中hGH的幾個伯氨基被綴合產生不同的單綴合、不同雙綴合、不同三綴合等的前體藥物。可以通過本領域已知的標準方法如柱層析等分離相應的單綴合、雙綴合或三綴合hGH PEG前提藥物。在hGH PEG前體藥物的單綴合物中，至少3個聚合物鏈S°、S1、S2含有“聚合物部分”，其特征在于一個或多個重復單元，它們可以是隨機、嵌段式或者交替分布的。此外，至少3個聚合物鏈S°、S1、S2顯示出端基，其通常是氫原子或者具有1-6個碳原子的烷基，所述端基可以是分支的或者不分支的如甲基，特別地，對于基于PEG的聚合物鏈，產生所謂的mPEG。如本文中所理解的術語“基于PEG的”應用于其中基于聚合物鏈的總重量PEG的質量比例為至少10%重量，優選地至少25%和更優選地至少50%。應當指出，至少3個聚合物鏈S'S1、#內的聚合物部分可以具有其他鏈樣取代基，其來源于重復單元并產生具有小于4kDa分子量的鏈，并且并不將其看作聚合物鏈Sc^S1A2等。優選地，至少3個聚合物鏈Sc^S1J2攜帶小于IOOODa分子量的取代基。S0的相關結構特點是其臨界距離。臨界距離定義了 S°與La的連接位點與第一分支結構BS1之間的最短距離，測量為連接的原子。臨界距離的長度對如在WO-A 2009/133137中描述的化合物33所討論的殘留活性具有影響，所述專利申請在此處引用作為參考。臨界距離優選地小于50，更優選地小于20和最優選的小于10。通常，至少3個聚合物鏈S°、S1和S2各自含有互連部分。Ga存在于至少一個互連部分中。對于非s°的聚合物鏈，互連部分是連接例如S1的聚合物部分與BS1和S2的聚合物部分與BS2的結構元件。對于S°，互連部分是連接La和BS1的結構元件。互連部分可以由C卜5(|烷基鏈組成，其是分支的或者不分支的，且其任選地被雜原子或官能團中斷或者終止，所述雜原子或官能團選自-0-;-S-;N(R) ；C(0) ；C(O)N(R)；N(R)C(O);一個或多個碳環或雜環，其中R是氫或CV2tl烷基鏈，其任選地被一個或多個上述原子或基團中斷或終止，其進一步具有作為端原子的氫；且其中碳環是苯基；萘基；茚基；茚滿基；四氫萘基(tetralinyl) ;C3_1(I環烷基；且其中雜環是4-7元雜環基；或者9-11元雜雙環基。“C3_1(l環烷基”或“C3_1(l環烷基環”意為具有3-10個碳原子的環烷基鏈，其可以具有
碳-碳雙鍵為至少部分飽和的，例如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環己烯基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基。環烷基碳的每個氫可以被取代基替換。術語“c3,環烷基”或“c3_1(l環烷基環”還包括橋接雙環，如降冰片烷或降冰片烯。“4-7元雜環基”或者“4-7元雜環”意為具有4、5、6或7個環原子的環，其可以含有不超過最大數目的雙鍵(完全、部分或者未飽和的芳族環或者非芳族環)，其中至少I個環原子至4個環原子被選自硫(包括-S (O)-、-S (O)2-)、氧和氮(包括=N(O)-)的雜原子取代，且其中該環通過碳或氮原子與分子的剩余部分連接。4-7元雜環的實例是氮雜環丁烷、氧雜環丁烷、硫雜環丁烷(thietane)、呋喃、噻吩、吡咯、吡咯啉、咪唑、咪唑啉、吡唑、批唑啉、p惡唑、惡唑啉、異^惡唑、異⑦惡唑啉、噻唑、噻唑啉、異噻唑、異噻唑啉、噻二唑、噻二唑啉、四氫呋喃、四氫噻吩、吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、'P惡唑烷、異5惡唑烷、噻唑烷、異噻唑烷、噻二唑烷、環丁砜、吡喃、二氫吡喃、四氫吡喃、咪唑烷、吡唆、噠嗪、吡嗪、嘧唆、哌嗪、哌啶、嗎啉、四唑、三唑、三唑烷、四唑烷、二氮雜環庚烷或高哌嗪。“9-11元雜雙環基”或“9-10元雜雙環”意為具有9-11個環原子的兩個環的雜環系統，其中兩個環公用至少一個環原子，且其可以包含不超過最大數目的雙鍵(完全、部分或者未飽和的芳族環或者非芳族環)，其中至少I個環原子至6個環原子被選自硫(包括-S(O)-、-S(O)2-)、氧和氮(包括=N(O)-)的雜原子取代，且其中該環通過碳或氮原子與分子的剩余部分連接。9-11元雜雙環的實例是吲哚、二氫吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并13惡唑、苯并異^唑、苯并噻唑、苯并異噻唑、苯并咪唑、苯并咪唑啉、喹啉、喹唑啉、二氫喹唑啉、喹啉、二氫喹啉、四氫喹啉、十氫喹啉、異喹啉、十氫異喹啉、四氫異喹啉、二氫異喹啉、苯并氮雜革、嘌呤或蝶啶。術語9-11元雜雙環還包括兩個環的螺結構如I，4-二氧雜-8-氮雜螺[4. 5]癸烷或者橋接的雜環如8-氮雜-雙環[3. 2. I]辛烷。碳環、雜環和雜雙環可以被C1J烷基取代，該C1J烷基任選地被選自-0- ；-S-；N(R) ；C(0) ；C(O)N(R) ；N(R) C(O)的雜原子或官能團中斷或者終止，其中R是氫或C1,烷基鏈，其任選地通過一個或多個上述原子或基團中斷或者終止，其進一步具有氫作為端原子。至少3個鏈S°、S1、S2的聚合物部分形成了鏈的主要部分，優選地每鏈分子量的至少90 %，更優選地至少95 %，甚至更優選地至少97.5%，甚至更優選地至少99 %。因此，鏈的基礎表現為聚合物部分。優選地，至少3個鏈S°、S1、S2獨立地基于選自下組的聚合物聚烷氧基聚合物、透明質酸及其衍生物、聚乙烯醇、聚5惡唑啉、聚酐、聚(原酸酯)、聚碳酸酯、聚氨基甲酸酯、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚有機膦腈、聚硅氧烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚氰丙烯酸酯和聚酯。優選地，至少3個鏈S°、S\S2基于相同的聚合物。優選地，至少3個鏈S°、S\S2基于聚烷氧基聚合物。甚至更優選地，至少3個鏈S°、S1、S2基于聚乙二醇。相應地，同樣地適用于其他鏈S3、S4、S5等。鏈Stl包含分支結構BS1，以使S1與Stl連接。對于S2連接，可以使用分支結構BS1或者存在另外的分支結構BS2，其可以是S°或S1的一部分。因此，當存在其他鏈時，可以存在其他分支結構。例如在存在鏈S3的情況下，其可以與BS^BS2或分支結構BS3連接。分支結構BS3，如果存在，可以是S°、S1或S2的一部分。總之，可以使用允許鏈分支的任意化學實體。優選地，分支結構獨立地選自至少3重取代的碳環、至少3重取代的雜環、叔碳原子、季碳原子和叔氮原子，其中術語碳環和雜環如上述所定義。在該領域的文獻中，有時將自動切割誘導基團稱為連接體，以將其結構與載體區分。然而，常常很難明確分別這兩種結構特征。因此，在本發明的含義內，認為切割誘導基團Ga是載體S的一部分，包含至少S°、S1、S2、BS1和任選地BS2。Ga化學性質的改變允許在很大程度上改造對應的連接載體的前體藥物的自切割特性的性質。如上所討論，聚乙二醇化前體藥物，其中該藥物例如為在專利申請WO-A2005/099768中所述的rhGH，且具有釋放特征，其在其中被描述為1，6切割系統，不會產生有毒的芳族化合物。在該文件中概括地描述了大量本文中相關的合適瞬時連接體結構，以得到相關的目的釋放譜。其他瞬時連接體結構分類/概括地描述于例如其他ComplexBiosystems GmbH 申請中，如 W0-A 2005/034909,WO-A 2005/099768,WO-A 2006/003014 和WO-A 2006/136586 中。更多瞬時連接體結構概括地描述于如WO-A 99/30727 (Enzon Inc)中。為了解決如本文中所述GH的當前問題，本發明人已經選擇了合適的優選瞬時連接體結構，以得到本文所述的rhGH聚乙二醇化前體藥物的相關功能特性。基于本文詳細描述的優選連接體結構，在技術人員的知識范圍內可以制備其他合適的優選瞬時連接體結構，其給予rhGH聚乙二醇化前體藥物以本文所述的相關功能特性。 特別地，可以選擇可自身水解的(可自動切割的)合適瞬時連接體結構用于摻入到Sci中。本文中所選擇的連接體結構詳述如下。為了將水解不穩定性引入官能團L如酰胺或氨基甲酸酯中，必需將結構性化學組分改造成載體，以例如作為接近官能團的鄰基發揮功能。將對前體藥物酰胺鍵的切割性進行控制的此類自動切割誘導化學結構稱為自動切割誘導基團Ga。自動切割誘導基團對給定官能團La的水解速率具有強烈的影響。優選的La選自C (0) -0-和C (0) _，其與hGH的伯氨基一起形成氨基甲酸酯或酰胺基。因此，優選本發明組合物，其中La選自C(O)-O-和C(O)-，其與hGH的伯氨基一起形成氨基甲酸酯或酰胺基，產生通式(AAl)或(AA2)hGH-NH-C (0) O-S0 (AAl)，hGH-NH-C (0)-S° (AA2)。
以下部分列出了可作為切割誘導基團Ga發揮功能的多種結構組分。基團Ga表示自動切割誘導基團。Ga可以就此存在或者作為級聯自動切割誘導基團，其通過其他水解或者酶促切割步驟去屏蔽而生效。如果Ga就此存在，那么其控制La的限速自動水解。Ga的實例A. J. Garman等人(A. J. Garman, S. B. Kalindjan, FEBS Lett. 1987,223(2) ,)使用PEG5000-馬來酸酐用于組織型纖溶酶原激活物和尿激酶中氨基的可逆修飾。經在PH7. 4的緩沖液中溫育、通過切割馬來酰胺酸連接而從PEG-uPA綴合物再生功能性酶，遵循一級動力學，半衰期為6. lh。簡單的芳族部分可能將不穩定性賦予連接的氨基甲酸酯鍵(W0-A01/47562)。例如，將取代的或未取代的芴基甲基基團用于活化前體藥物方法中多種生物活性劑的氨基甲酸酯連接體(Tsubery 等人，J Biol Chem279 (2004) 38118-24)。在 W0-A 2007/075534 中， 兩個PEG鏈與芴基部分連接。因此，Ga是與氨基甲酸酯官能團La直接連接的芳族環或芴基甲基。因此，優選本發明組合物，其中Ga是與由La和hGH的伯氨基形成的氨基甲酸酯官能團直接連接的芳族環或芴基甲基。備選地，Ga的轉化可以誘導S°內分子重排，例如1，4_或1，6_消除。重排使得La更不穩定，從而誘導其切割。Ga的轉化在級聯機制中是限速步驟。理論上，臨時連接的切割速率與給定治療情況中藥物分子的期望釋放速率相同。在該基于1，6_消除的級聯系統中，期望的是La的切割在其不穩定性受Ga的轉化誘導后是基本上瞬時的。此外，期望的是限速切割動力學在治療有用的時間范圍內進行，不需要其他酶促作用，以避免與上述主要酶促切割相關的缺點。R. B. Greenwald, A. Pendri, C. D. Conover, H. Zhao, Y. H. Choe，A. Martinez, K. Shum,S. Guan, J. Med. Chem.，1999，42，3657-3667 &PCT 專利申請 WO-A 99/30727 描述了基于 1，4-或1，6-芐基消除來合成含氨基小分子化合物的聚(乙二醇)前體藥物的方法。在該方法中，藥物分子的氨基通過氨基甲酸酯基與聚乙二醇化芐基部分連接。聚(乙二醇)通過酯、碳酸酯、氨基甲酸酯或酰胺鍵與芐基連接。PEG從藥物分子中的釋放通過自動水解聯合酶促切割而發生。在該方法中，引發釋放的掩蔽基團的切割后是經典和快速的1，4_或1，6-芐基消除。還可以將該連接體系統用于蛋白質的可釋放聚(乙二醇)綴合物(S.Lee，R. B. Greenwald 等人，Bioconj. Chem. 2001，12(2)，163-169)。將溶菌酶用作模式蛋白質，因為當聚乙二醇化在賴氨酸殘基的￡ -氨基上發生時，其失去了其活性。將多種量的PEG連接體與蛋白質綴合。天然蛋白質自PEG綴合物的再生發生在大鼠血漿中或者非生理性高pH緩沖液中。還參見 F. M. H. DeGroot 等人(TO-A2002/083180 和 WO-A 2004/043493)和 D. Shabat等人(W0-A 2004/019993)。因此，La是氨基甲酸酯官能團，所述基團的切割通過S°的1，4_或1，6芐基消除、由Ga的羥基或氨基誘導，其中Ga含經歷限速轉化的酯鍵、碳酸酯鍵、氨基甲酸酯鍵或酰胺鍵。實際上，Ga可以通過水解切割。因此，優選本發明組合物，其中La與hGH的氨基一起形成氨基甲酸酯官能團，所述基團的切割通過S°的1，4_或1，6芐基消除、由Ga的羥基或氨基誘導，其中Ga含經歷限速轉化的酯鍵、碳酸酯鍵、氨基甲酸酯鍵或酰胺鍵。^可以含有級聯切割系統，其通過由代表前述前體的結構組合組成的Ga的組分啟動。Ga的前體可以含有其他臨時連接，例如酰胺、酯或氨基甲酸酯。前體的臨時連接(例如氨基甲酸酯)的穩定性或者對水解的敏感性可以通過自動水解特性控制或者可能要求酶的活性。
Antczak等人(Bioorg Med Chem 9 (2001) 2843-48)描述了形成含胺藥物分子的大分子級聯前體藥物系統的基礎的試劑。在該方法中，將抗體用作為載體，用穩定的鍵連接抗體和活化基團，攜帶可切割的掩蔽基團。在去除酯連接的掩蔽基團后，La切割并釋放藥物化合物。D. Shabat 等人(Chem. Eur. 3. 2004，10,2626-2634)描述了基于扁桃酸活化基團的聚合物前體藥物系統。在該系統中，掩蔽基團通過氨基甲酸酯鍵與活化基團連接。活化基團通過酰胺鍵與聚丙烯酰胺聚合物永久綴合。通過催化抗體活化掩蔽基團后，掩蔽基團通過環化被切割，并釋放藥物。藥物釋放后，活化基團仍與聚丙烯酰胺聚合物連接。M. -R. Lee 等人描述了(Angew. Chem. 2004，116，1707-1710)基于扁桃酸活化基團和酯連接的掩蔽基團的類似前體藥物系統。然而，在這些連接中，1，6_消除步驟仍產生了高反應性的芳族中間物。即使芳族部分仍與聚合物載體永久連接，也可能產生具有潛在毒性或免疫原性影響的副反應。Greenwald等人在2000年公布了基于三甲基鎖內酯化作用的含氨基前體藥物的聚(乙二醇)藥物遞送系統(R. B. Greenwald 等人，J. Med. Chem. 2000,43 (3)，457-487 ；W0~A02/089789)。在該前體藥物系統中，取代的鄰羥苯基_ 二甲基丙酸通過酰胺鍵與藥物分子的氨基偶聯。羥基通過酯基、碳酸酯基或氨基甲酸酯基與PEG連接。藥物釋放中的決速步是這些官能團的酶促切割、繼之以通過內酯化作用的快速酰胺切割，釋出芳族內酯副產物。最近，R.B. Greenwald 等人(Greenwald 等人，J. Med. Chem. 2004,47, 726-734)描述了基于二-(N-2-羥乙基)甘氨酸酰胺(N-2-(羥乙基)甘氨酸酰胺)連接體的PEG前體藥物系統。在該系統中，兩個PEG分子與偶聯至藥物分子的氨基的N-2-(羥乙基)甘氨酸分子連接。前體藥物活化的前兩個步驟是兩個PEG分子的酶促切割。描述了 PEG和N-2-(羥乙基)甘氨酸之間的不同連接，產生了不同的前體藥物活化動力學。該系統的主要缺點是與藥物分子綴合的N-2-(羥乙基)甘氨酸酰胺較慢的水解速率(在磷酸緩沖液中t1/2 = 3h)，導致N-2-(羥乙基)甘氨酸修飾的前體藥物中間物的釋放，其與母體藥物分子比較可能顯示出不同的藥物動力學和藥效學特性。更特別地，下文描述了 S°的具有特定間隔區部分的優選基團La和Ga。根據WO-A 2005/099768的優選結構選自通式(I)和(II)
權利要求
1.干組合物，其包含治療有效量的rhGH聚合物前體藥物和一種或多種凍干保護劑，其中所述生長激素與聚合物載體瞬時連接。
2.根據權利要求I的組合物，其特征在于所述組合物是通過冷凍干燥干燥的。
3.根據權利要求I或2的干組合物，其特征在于所述干組合物當儲存在2-25°C時穩定至少I年。
4.根據權利要求1-3中任一項的組合物，其中所述凍干保護劑是海藻糖。
5.根據權利要求1-4中任一項的組合物，其特征在于所述組合物作為單劑量組合物提供。
6.根據權利權利要求1-4中任一項的組合物，其特征在于所述組合物作為多劑量組合物提供。
7.根據權利要求1-6中任一項的組合物，其中所述rhGH聚合物前體藥物具有(A)中所示的化學結構，
8.權利要求7的組合物，其中所述通式(K)的部分PEG—X+具有以下結構
9.根據權利要求1-8中任一項的組合物，其特征在于其含有一種或多種其他的生物學活性劑，或者以其游離形式或者作為前體藥物，且其中一種或多種其他的生物學活性劑選自IGF-1、促生長激素釋放肽或促生長激素釋放肽樣化合物、促性腺激素釋放激素激動劑和/或類似物、生長激素釋放因子和類似物、性腺類固醇、抗雄激素類、非留類芳香酶抑制劑、HIV聯合療法、游離脂肪酸調節物、促蛋白合成類固醇、雌激素激動劑/拮抗劑、普萘洛爾、食欲抑制劑、骨質疏松癥藥物、包括雙膦酸類化合物、骨形成劑、雌激素類、甲狀旁腺激素和選擇性受體調節劑和/或抗糖尿病藥物如胰島素、噻唑烷二酮類、磺酰脲類、腸降血糖素模擬物、美各里替尼類、雙胍類、α -葡糖苷酶抑制劑和糊精類似物。
10.根據權利要求1-9中任一項的組合物，其特征在于所述hGH聚合物前體藥物在組合物中的劑量足以在一次應用中提供用于至少3天的治療性有效量的rhGH劑量。
11.根據權利要求10的組合物，其特征在于所述hGH聚合物前體藥物的一次應用足以維持I周。
12.權利要求1-11中任一項的組合物，其中所述組合物包含一種或多種賦形劑。
13.權利要求1-12中任一項的組合物，其中所述組合物包含rhGH聚合物前體藥物1.1-92.1 %(w/w)號 白酸0.1-14.4 %(w/w)海藻糖，任選地作為二水合物 7.3_98.7%(w/w)三羥甲基氨基曱烷0.01-25.4%(w/w)。
14.權利要求1-13中任一項的組合物，其中所述組合物包含rhGH聚合物前體藥物7.8-85.5%(w/w)琥珀酸0.1-8.9%(w/w)海藻糖，任選地作為二水合物 13.6-90.3%(w/w)三羥曱基氨基曱烷0.03-15.7%(w/w).
15.權利要求1-14中任一項的組合物，其中所述組合物包含rhGH聚合物前體藥物25.3-46.5%(w/w)琥珀酸0.8-1.2%(w/w)海藻糖，任選地作為二水合物 52.4-72.8%(w/w)三羥甲基氨基曱烷0.4-2.3%(w/w)。
16.權利要求1-15中任一項的組合物，其中所述組合物的全部生長激素部分的至少30%是在位置Lysl58聚乙二醇化的。
17.包含權利要求1-16中任一項的組合物的容器。
18.根據權利要求17的容器，其特征在于所述容器是雙腔注射器。
19.權利要求18的雙腔注射器，其特征在于根據權利要求1-16中任一項的干組合物提供在所述雙腔注射器的第一個腔中，且重構溶液在雙腔注射器的第二個腔中提供。
20.制備根據權利要求1-16中任一項的組合物的方法，包括步驟(i)將rhGH聚合物前體藥物與一種或多種凍干保護劑和任選地一種或多種賦形劑混Π， (ii)將與期望數量的劑量等同的量的步驟(i)的混合物轉移到容器的合適的腔中， (iii)干燥該混合物，并 (iv)密封該容器。
21.制備根據權利要求1-16中任一項的組合物的方法，包括步驟 (i)將rhGH聚合物前體藥物與海藻糖二水合物和琥珀酸混合，以產生包含 rhGH聚合物前體藥物10-300mg/ml 琥珀酸5-50mM 海藻糖二水合物25-850mg/ml 的組合物， (ii)將步驟(i)的組合物的PH用三羥甲基氨基甲烷調整到pH4.O至pH6. 5， (iii)將與期望數量的劑量等同的量的步驟(i)的混合物轉移到容器的合適的腔中， (iv)干燥該混合物，并 (v)密封該容器； 其中可以改變步驟(ii)和(iii)的順序。
22.權利要求21的方法，其中所述步驟(i)的組合物包含 rhGH聚合物前體藥物10-300mg/ml 琥珀酸5-50mM 海藻糖二水合物30-150mg/ml。
23.權利要求21或22的方法，其中所述步驟(i)的組合物包含 rhGH聚合物前體藥物10-300mg/ml 琥珀酸5-50mM 海藻糖二水合物50-100mg/ml。
24.權利要求21或23中任一項的方法，其中所述步驟(i)的組合物包含 rhGH聚合物前體藥物30-60mg/ml 琥珀酸IOmM 海藻糖二水合物70-85mg/ml。
25.權利要求21或24中任一項的方法，其中在步驟(ii)中將pH調整至pH4.5至pH5. 5。
26.根據權利要求20-25中任一項的方法，其中所述容器是雙腔注射器，第一個腔具有所述混合物，所述方法進一步包括步驟 在密封容器前用重構溶液填充第二腔。
27.試劑盒，其包含針和含有根據權利要求1-16中任一項的組合物和任選地還含有重構溶液的容器，所述容器適合于與針一起使用。
28.根據權利要求27的試劑盒，其特征在于所述容器是雙腔注射器。
29.制備包含治療有效量的rhGH聚合物前體藥物和一種或多種凍干保護劑的重構組合物的方法，其中所述生長激素與聚合物載體瞬時連接，所述方法包括步驟 將權利要求1-16中任一項的組合物與重構溶液接觸。
30.重構組合物，其包含治療有效量的rhGH聚合物前體藥物和一種或多種凍干保護齊U，其中生長激素與聚合物載體瞬時連接，所述組合物可通過權利要求20的方法獲得。
31.權利要求30的重構組合物，其中所述重構組合物包含 rhGH聚合物前體藥物10-300mg/ml 琥珀酸5-50mM 海藻糖二水合物25-850mg/ml， 并具有ρΗ4· 5至ρΗ6的pH。
32.權利要求30或31的重構組合物，其中所述重構組合物包含 rhGH聚合物前體藥物10-300mg/ml 琥珀酸5-50mM 海藻糖二水合物30-150mg/ml， 并具有ρΗ4· 5至ρΗ6的pH。
33.權利要求30至32中任一項的重構組合物，其中所述重構組合物包含 rhGH聚合物前體藥物30-60mg/ml 琥珀酸IOmM 海藻糖二水合物70-85mg/ml， 并具有ρΗ4· 5至ρΗ5· 5的pH。
34.權利要求30-33中任一項的重構組合物，其中所述重構組合物還包含一種或多種防腐劑和/或抗微生物劑。
35.權利要求30或34的重構組合物，其中所述重構組合物還包含一種或多種賦形劑。
全文摘要
本發明涉及含有凍干保護劑和任選地一種或一種以上賦形劑的rhGH聚合物前體藥物的干組合物。此類組合物當儲存在2-8℃時穩定至少1年。本發明還涉及制備所述組合物的方法、包含此類組合物的容器，以及試劑盒。
文檔編號A61K9/00GK102711733SQ201080057256
公開日2012年10月3日 申請日期2010年12月15日 優先權日2009年12月15日
發明者G·N·拉斯姆森, H·拉烏, S·金德曼, T·韋格 申請人:阿森迪斯藥物股份有限公司