專利名稱：：元胡止痛膠囊的質量控制方法
技術領域：
：本發明涉及一種元胡止痛膠囊的質量控制方法，屬于藥物制劑的質量控制
技術領域：
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背景技術：
：元胡止痛膠囊收載于《衛生部藥品標準中藥成方制劑》第8冊，由元胡、白芷兩味藥組成。方中元胡為君藥，元胡又名延胡索，為罌栗科紫堇屬植物元胡的干燥塊莖，其辛溫通散、入肝、脾、心經、又入血分，是行氣、活血、鎮靜、止痛、解痙之良藥，本藥再加醋制，能增強止痛功效。近代研究證明，元胡中可分離出15種生物堿，其中延胡索甲素、乙素、丑素、癸素均有鎮痛作用。藥理實驗表明，延胡索乙素的鎮痛作用最強，并且延胡索乙素在主要成分中的含量最高。白芷為傘形科當歸屬植物白芷或杭白芷的干燥根，為一常用中藥。白芷具有除風散濕、通竅止痛、消腫排膿等功效，用于感冒頭痛、眉棱骨痛、鼻塞、牙痛、瘡癰腫痛等癥。白芷中主要含有香豆素類和揮發油兩類有效成分，現代藥理實驗表明，白芷中所含的呋喃香豆素具有平喘、降壓、抗菌、解痙、活化交感系激素等多種藥理作用。白芷中總香豆素類為其鎮痛的主要成分，其中又以歐前胡素和異歐前胡素為最重要的兩種活性成分，歐前胡素和異歐前胡素的止痛效果已被充分肯定。延胡索、白芷均屬辛溫之品，有理氣止痛之功效，兩藥配伍，更能增強行氣止痛作用。用此兩種藥材制備的元胡止痛膠囊具有理氣、活血、止痛之功效，對于氣滯血淤的胃痛、肋痛、頭痛及月經痛等有較好的療效，為理想的中藥鎮痛劑。元胡止痛膠囊是以醋制元胡445g、白芷223g為原料藥材制得的半浸膏膠囊，其制備方法為取白芷166g，粉碎成細粉；剩余的白芷與元胡粉碎成粗粉，用60%乙醇作溶劑，將粗粉浸漬24小時后進行滲漉，收集滲漉液為生藥的8倍量，回收乙醇并濃縮成稠膏狀，加入上述白芷細粉，混勻，干燥，粉碎，過篩，混勻，裝入膠囊，制成1000粒，即得。在原質量控制方法中，元胡止痛膠囊的質量標準只有膠囊常規檢査項，僅針對藥材做定性鑒別，無含量測定指標，膠囊中有效成份的含量不能得到保證，為了保證藥物應有的臨床療效，有必要對元胡止痛膠囊中的有效成份進行定量檢測。
發明內容本發明的主要目的是提供一種元胡止痛膠囊的質量控制方法，在原有膠囊藥材的性狀鑒別基礎上，增加含量測定方法及相應的含量指標，使元胡止痛膠囊的質量控制更為準確有效，從而更有利于確保其臨床療效的發揮。本發明解決其技術問題所采用的技術方案是元胡止痛膠囊的質量控制方法，在傳統質量控制方法中的檢査項目及對元胡、白芷定性鑒別基礎上，增加采用薄層色譜法對延胡索乙素(C21H2304N)進行含量測定及相應的含量指標，相關條件及操作方法如下取元胡止痛膠囊樣品20粒的內容物，研細，精密稱定2g(M樣)，置于索氏提取器中，加甲醇90-110mL，加熱回流至提取液近無色，提取液蒸干，殘渣加10%醋酸溶液8-12mL溶解，濾過，殘渣及濾器用10。/。醋酸溶液10mL洗滌，洗液并入濾液中；濾液用乙醚萃取2次，萃取時乙醚與醋酸的體積比為2:23，合并乙醚液；揮干乙醚，殘渣用10。/。醋酸溶液5mL溶解，溶液加濃氨溶液調PH值至89，用乙醚萃取4次，萃取時乙醚用量分別為25mL、25mL、20mL、20mL;合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，轉移至5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取105r干燥至恒重的延胡索乙素對照品，加甲醇制成每lmL含O.15g延胡索乙素的溶液25mL，作為對照品溶液(M對)。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液4yL與8yL，對照品溶液2yL與4yL，分別交叉點于同一硅膠G板上，以正已烷-醋酸乙酯-氨水(6:4:0.2，體積比)為展開劑，展開，取出，涼干，碘熏10分鐘，取出，稍揮去碘，在10(TC烘15分鐘，取出，照色譜法(中國藥典2005—部附錄，薄層掃描法)進行掃描，波長入3=345皿，入^307nm，測量供試品吸收度積分值(A樣)與對照品吸收度(A對)，按公式[A樣XM對+25X(4+2)]+[A對XM樣+5X(8+4)]計算，即得元胡止痛膠囊內容物中延胡索乙素的含量。元胡止痛膠囊內容物中含延胡索按延胡索乙素計算，每粒不得少于20yg。元胡止痛膠囊由元胡和白芷兩味藥組成，方中元胡為君藥，元胡中含有的生物堿延胡索甲素、乙素、丑素、癸素均有鎮痛作用，其中延胡索乙素的鎮痛作用最強，并且在主要成分中的含量最高。因此，通過逐一分析比較及探索性的試驗研究，本發明擬對元胡浸膏中的主要有效成分延胡索乙素進行含量測定。首先選用高效液相色譜法對元胡止痛膠囊內容物中延胡索乙素的含量進行檢測。高效液相色譜法的實驗條件為(1)色譜條件C18柱；(2)流動相甲醇-水-10%乙酸(68:32:2，體積比)用15。/。氨水調節流動相的pH值至4.8;(3)對照品精密稱取延胡索對照品2mg置2ml量瓶中，加乙醇溶解定溶作為對照品；(4)供試品液取元胡止痛膠囊樣品10粒，精密稱取內容物lg，加甲醇適量，超聲30分鐘后，定容至50mL作為供試品；(5)檢測波4長285nm。將供試品注入液相色譜儀(Waters-600，美國沃特斯公司)中進行分析，實驗結果表明，在上述試驗條件下，延胡索乙素色譜峰與其它色譜峰不能分離。在上述流動相不能成功分離的情況下，發明人又對流動相的極性、酸度進行了改變，流動相的改變情況見表l。表l.高效液相色譜流動相的考察次數1234甲醇-水-10%乙酸60:40:255:45:250:50:250:50:2用15。/。氨水調節PHPH=4.8PH=4.8PH=5.6PH=3.0^在上述流動相條件下，將供試品注入高效液相色譜儀進行分析，試驗結果表明供試品中延胡索乙素色譜峰依然與其它峰的分離效果不好。在高效液相色譜法無法有效使延胡索乙素分離的情況下，發明人通過大量文獻分析及試驗研究，最終確定了以雙波長薄層掃描法對元胡止痛膠囊中主要有效成分延胡索乙素進行含量測定。為了盡可能準確地測定出延胡索乙素在元胡止痛膠囊中的含量，從而更精確的控制藥物質量，保證藥物的臨床療效，發明人對藥物的前處理方法及色譜條件等進行了大量的試驗研究及對比分析，現將一些主要的研究情況略舉如下1、所用的儀器及試劑CS-9000雙波長薄層掃描儀(日本島津公司)，XY-1自動點樣臺硅膠G薄層預制板(10x20cm)。對照品延胡索乙素，由中國藥品生物品檢定所提供。元胡止痛膠囊樣品由四川美大康藥業股份有限公司提供，批號為000201。水為重蒸餾水，試劑均為分析純。2、供試品的制備取元胡止痛膠囊樣品20粒的內容物，研細，精密稱定2g(M樣)，置于索氏提取器中，加甲醇100mL，加熱回流至提取液近無色，提取液蒸干，殘渣加10。/。醋酸溶液10mL溶解，濾過，殘渣及濾器用10。/。醋酸溶液10mL洗滌，洗液并入濾液中；濾液用乙醚萃取2次，萃取時乙醚與醋酸的體積比為2:23，合并乙醚液；揮干乙醚，殘渣用10。/。醋酸溶液5mL溶解，溶液加濃氨溶液調pH值至89，用乙醚萃取4次，乙醚用量分別為25mL、25mL、20mL、20mL;合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，轉移至5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。在制備供試品溶液的過程中，元胡止痛膠囊內容物置于索氏提取器中，用甲醇提取，提5取液液蒸干后殘渣加10%醋酸溶解，內容物中所含的延胡索乙素等生物堿及水溶性雜質均溶解于醋酸中，該醋酸溶液用乙醚萃取，由于生物堿在乙醚中的溶解度大于在醋酸中的溶解度，因此，延胡索乙素等生物堿轉移至乙醚中。揮干乙醚，殘渣用醋酸溶解，并用濃氨溶液調節溶液PH值至堿性，再用乙醚萃取，延胡索乙素在堿性條件下的乙醚中的溶解度增加，因此，延胡索乙素轉移至乙醚溶液中。揮干乙醚，殘渣加甲醇溶解即可制得供試品溶液。3、對照品的制備取105。C干燥至恒重的延胡索乙素對照品，加甲醇制成每lmL含O.15mg的溶液，作為對照品溶液。4、測定條件的選擇(1)薄層層析條件的選擇在確定展開劑時，發明人分別以正已烷-氯仿-甲醇(7.5:4:1，體積比)(藥典元胡止痛片鑒別(1)項下薄層色譜鑒別的展開劑條件)、正已烷-醋酸乙酯-氨水(6:4:0.2，體積比)為展開劑，進行試驗研究，結果后者分離度較好、斑點呈圓點狀、RF值適中、陰性對照在同一位置無干擾，而前者陰性對照在同一位置有干擾，見表2。因而選用正已烷-醋酸乙酯-氨水(6:4:0.2，體積比)為展開劑。表2.展開劑的考察展開系統薄層板展開情況正已烷-氯仿-甲醇分離度較好，斑點呈圓點狀，RF值適中，但陰性對7.5:4:1照在同一位置有干擾。正已烷-醋乙酯-氨水分離度較好，斑點呈圓點狀，RF值適中，陰性對照6:4:0.2在同一位置無干擾。(2)檢測波長的選取照薄層色譜法(中國藥典2000年一部附錄37頁)試驗，吸取供試品溶液4uL與8uL，對照品溶液2uL與4uL，分別點于同一硅膠G板上，以正已烷-醋酸乙酯-氨水(6:4:0.2，體積比)為展開劑，展開，取出，涼干，碘熏10分鐘，取出稍揮去碘，在10(TC烘15分鐘，取出，在200500nm波長范圍內掃描，結果延胡索乙素對照品與供試品在305310nm范圍內有最小吸收，在342348nm范圍內有最大吸收。故測定波長入s=345nm，參比波長入^307nm;掃描方式反射式鋸齒掃描線性參數SX二3;狹縫0.7X0.9，靈敏度XI。5、線性關系的考察精密稱取延胡索乙素對照品l.59mg，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，分別吸6取此溶液l.O、2.0、3.0、4.0、6.0yL點于硅膠G薄層板上，展開，晾干，碘熏10分鐘，取出稍揮去碘，在10(TC烘15分鐘，取出，掃描測定，測定波長入3=345皿，參比波長入1=307皿;掃描方式反射式鋸齒掃描，結果見表3。表3.線性關系考察<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>方程為Y二48871.6X-1959.5(r=0.9991)，上述結果表明，延胡索乙素在l-6yL范圍內有良好的線性關系。由于標準曲線未過原點，故采用外標兩點法計算延胡索乙素的含量。6、穩定性考察將延胡索乙素對照品與供試品，點于硅膠G薄層板上，按上述方法展開，顯色，取出，立即冷吹風吹干，用玻璃板蓋住，每隔30分鐘掃描一次，共測定5次，對照品與供試品峰面積結果見表4。表4.對照品與供試品峰面積測定結果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>以上結果表明，斑點顯色放置10分鐘后，在2小時后內穩定。7、精密度考察(1)儀器精密度試驗將延胡索乙素供試品，點于硅膠G薄層板上，按上述方法展開，顯色，取出，對同一斑點連續掃描5次，供試品峰面積結果見表5。表5.儀器精密度試驗結果峰面積值RSD(%)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>(2)板上精密度試驗在同一板上點相同濃度的延胡索乙素(0.115mg/ml)對照品5點，展開，顯色，掃描測定，結果見表6。表6.板上精密度試驗結果掃描次數峰面積RSD(%)111271.18211012.223.4311695.44411813.97由表5、表6可見，儀器精密度RSD為O.42%;板上精密度RSD為O.97%，表明精密度良好。8、加樣回收試驗取已知含量的樣品(批號為000201，含量75.6ul/g)5份，每份中分別加入延胡索乙素對照品溶液(0.148mg/ml)l.Oml，按供試品的處理方法操作，吸取此液、對照品液，點樣，展開，顯色后進行掃描測定，按下式計算回收率。回收率(％)=((測出延胡索乙素的量-樣品中延胡索乙素的量)+加入延胡索乙素的量}X100%。加樣回收試驗結果見表7:表7.加樣回收試驗結果序號稱樣量樣品中延胡索加入延胡索乙測出延胡索乙回收率平均回收RSD(%)乙素量(ug)素量(ug)素量(ug)(%)率(％)15.1742391.2148525.697.425.1983393.0148524.897.035.3214395.5148519.795.696.31.0345.1645390.4148511.395.055.0858384.5148514.696.6^經過三年的生產和留樣穩定性試驗表明該制劑質量穩定，留樣產品的延胡索乙素的含量均一穩定，證明經此發明質量控制方法可行，能有效保證藥物質量的穩定。與現有技術相比，本發明的有益效果是本發明在元胡止痛膠囊原質量標準定性鑒別的基礎上，增加了延胡索乙素的含量測定方法及相應的含量指標，使元胡止痛膠囊的質量控制更為準確有效，從而更有利于確保其臨床療效的發揮；并且該含量測定方法操作簡單，結果8準確，精密度、穩定性、重現性等良好。具體實施例方式下面結合具體實施方式對本發明作進一步的詳細描述。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于下述實施例。實施例l本實施例為采用本發明方法對6批元胡止痛膠囊(批號020301、020302、020304、020305、020306，均由四川美大康藥業股份有限公司提供)進行延胡索乙素含量測定，具體方法如下(1)取元胡止痛膠囊10粒的內容物，研細，置索氏提取器中，加甲醇100mL，加熱回流至提取液無色，提取液蒸干，殘渣加10%醋酸溶液分兩次溶解，濾過，濾液加濃氨溶液調pH值至89，用乙醚提取四次(25、25、20、20mL)，合并乙醚液，蒸干，殘渣加lmL甲醇使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索對照藥材lg，同上制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各23yL，分別點于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯-氨水(6:4:0.2，體積比)為展開劑展開，取出，晾干，以碘蒸氣熏至斑點顯色清晰，日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點，揮盡薄層板上吸附的碘后，置紫外燈(365nm)下檢視，顯相同顏色的熒光斑點。(2)取元胡止痛膠囊10粒的內容物，研碎，加石油醚(609CTC)20mL超聲處理20分鐘，濾過，濾液揮石油醚至約lmL，作為供試品溶液。另取白芷對照藥材O.lg，加石油醚(60-90°C)lmL，浸漬30分鐘，時時振搖，靜置，上清液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各5yL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(60-9CTC)-乙醚(3:2，體積比)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365nm及254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應原位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(3)取元胡止痛膠囊樣品20粒的內容物，研細，精密稱定2g(M樣)，置于索氏提取器中，加甲醇100mL，加熱回流至提取液近無色，提取液蒸干，殘渣加10。/。醋酸溶液10mL溶解，濾過，殘渣及濾器用10。/。醋酸溶液10mL洗滌，洗液并入濾液中；濾液用乙醚萃取2次，萃取時乙醚與醋酸的體積比為2:23，合并乙醚液；揮干乙醚，殘渣用10。/。醋酸溶液5mL溶解，溶液加濃氨溶液調pH值至89，用乙醚萃取4次，乙醚用量分別為25mL、25mL、20mL、20mL;合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，轉移至5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，9作為供試品溶液。另取延胡索乙素對照品，加甲醇制成每lml含O.15mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液4uL與8uL，對照品溶液2uL與4uL，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯-氨水(6:4:0.2，體積比)為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏約10分鐘，取出，稍揮去碘，在10(TC烘15分鐘，取出，放冷，照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VIB薄層掃描法)進行掃描，波長入s=345nm，入r=307nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算，即得元胡止痛膠囊內容物中延胡索乙素的含量，結果見表8。本品每粒含延胡索乙素(C21H2504N)計，不得少于20yg。表8.元胡止痛膠囊內容物中延胡索乙素的含量測定結果批號0203003020304020305020306延胡索乙素的量(yg/粒)23.624.525.291.288.687.4020304、020305、020306三批測定結果，含延胡索乙素的量為87.491.2yg/粒，020301、020302、020304，結果為23.625.2yg/粒。又用上述含量檢測方法對四批不同產地的藥材進行含量測定結果為0.008%、0.009%、0.010%、0.012%，差異很大。以延胡索乙素不低于O.008%為限，故本品理論值為35.6yg/粒，以本工藝延胡索乙素的轉移率為70。/。計算為25yg/粒，由于目前測定批次有限，限度暫定為20-200yg/粒。權利要求1.元胡止痛膠囊的質量控制方法，包括對元胡、白芷定性鑒別，其特征在于還采用薄層色譜法對延胡索乙素進行含量測定，相關條件及操作方法如下取元胡止痛膠囊樣品20粒的內容物，研細，精密稱定2g，置于索氏提取器中，加甲醇90-110mL，加熱回流至提取液近無色，提取液蒸干，殘渣加10％醋酸溶液8-12mL溶解，濾過，殘渣及濾器用10％醋酸溶液10mL洗滌，洗液并入濾液中；濾液用乙醚萃取2次，萃取時乙醚與醋酸的體積比為2∶2～3，合并乙醚液；揮干乙醚，殘渣用10％醋酸溶液5mL溶解，溶液加濃氨溶液調PH值至8～9，用乙醚萃取4次，乙醚用量分別為25mL、25mL、20mL、20mL；合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，轉移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取105℃干燥至恒重的延胡索乙素對照品，加甲醇制成每1mL含0.15g延胡索乙素的溶液25mL，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液4μL與8μL，對照品溶液2μL與4μL，分別交叉點于同一硅膠G板上，以體積比為6∶4∶0.2的正己烷-醋酸乙酯-氨水為展開劑，展開，取出，涼干，碘熏10分鐘，取出，揮去碘，在100℃烘15分鐘，取出，照色譜法進行掃描，波長λs＝345nm，λR＝307nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度，計算，即得元胡止痛膠囊內容物中延胡索乙素的含量。2.根據權利要求l所述的元胡止痛膠囊的質量控制方法，其特征在于:所述元胡止痛膠囊內容物中延胡索乙素的含量為20-200yg/粒。全文摘要本發明公開了一種元胡止痛膠囊的質量控制方法，屬于藥物制劑的質量控制
技術領域：
。本發明的元胡止痛膠囊的質量控制方法在現有膠囊藥材的性狀鑒別基礎上，采用薄層色譜法對延胡索乙素進行含量測定，精密吸取供試品、對照品溶液，點于同一硅膠G板上，以正己烷-醋酸乙酯-氨水(6∶4∶0.2，體積比)為展開劑，展開，顯色，取出，照色譜法進行掃描，波長λs＝345nm，λR＝307nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度，計算，即得元胡止痛膠囊內容物中延胡索乙素的含量。本發明的質量控制方法操作簡單，結果準確，精密度、穩定性、重現性良好，使元胡止痛膠囊的質量控制更為準確有效，從而更有利于確保其臨床療效的發揮。文檔編號A61K36/66GK101491592SQ20081030638公開日2009年7月29日申請日期2008年12月19日優先權日2008年12月19日發明者彥李,鐘昌珍申請人:四川美大康藥業股份有限公司