專利名稱：一種蛋氨酸的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥領域。具體地涉及蛋氨酸在制備治療或預防內耳前庭毛細 胞的藥物性損傷的組合物中的用途。
背景技術：
許多累及內耳的疾病往往在引起耳聾的同時還伴有前庭系統的損害。前庭 系統的損害往往會直接導致人喪失行動能力。前庭系統癥狀往往是病人到五官 科求診的第一原因。因此前庭毛細胞損傷是種嚴重影響人類健康的疾病。
許多抗腫瘤化學制劑，以及各種神經毒素和噪聲等對耳蝸和前庭都具有一 定的毒性損害作用。鉑(Platinum)是一種常用、有效的臨床化療藥劑中的有 效成份。鉑被大量用于抗腫瘤鉑制劑中。但是臨床化療上大量使用的卡鉑
(Carb叩latin)和順鉑(Cisplatin)對內耳、腎臟、胃腸道、骨髓、性腺、 外周神經系統和免疫系統有嚴重的毒副作用，其毒性機理是Carb叩latin (卡 鉑)和Cisplatin (順鉑)會直接殺死內耳毛細胞。
內耳毛細胞的損傷直接造成病人聽力損失形成耳聾和耳鳴。前庭毛細胞損 傷可引起病人平衡失調，直接導致人眩暈并喪失行動能力。例如中毒性耳聾、 梅尼埃病、遲發性膜迷路積水、病毒性、化膿性迷路炎、特發性耳聾、噪聲性 損傷等。梅尼埃病是一以膜迷路積水為主要病理特征的內耳病。臨床表現為反 復發作性眩暈，感音神經性耳聾，耳鳴，可有耳內漲滿感。膜迷路積水主要出 現于蝸管和球囊，當膜迷路水腫加重時，內淋巴壓力明顯升高，則引起前庭膜、 球囊膜或基底膜破裂，導致內外淋巴液混淆，致使原浸浴于外淋巴液中的聽神 經纖維和毛細胞的外環境發生重要變化。造成內耳及前庭毛細胞損傷、死亡， 引起耳鳴、耳聾、眩暈等癥狀。
許多藥物和化學試劑具有耳毒性，也可引起耳蝸和前庭中毒性損傷，造成 耳聾和(或)前庭功能障礙。
引起耳聾和前庭功能障礙的原因有很多，例如現代人普遍生活規律不正 常，多數人過度疲勞，導致耳的免疫功能降低；都市的"聲污染"增加；精神
3壓力過重，心理因素刺激，尤其是醫療治療上不規范使用抗生素及化療藥物， 都是引起耳聾和前庭功能障礙的重要的因素。
內耳前庭感覺終器是機體負責平衡的重要感覺器官。內耳毛細胞死亡之后 不可再生。
因此本領域迫切需要提供一種保護內耳前庭感覺終器中的毛細胞的方法。

發明內容
本發明旨在提供蛋氨酸在治療或預防內耳前庭毛細胞疾病中的用途。 本發明的另一個目的是提供一種保護內耳前庭毛細胞的方法。
在本發明的第一方面，提供了一種蛋氨酸在制備治療或預防內耳前庭毛細胞
疾病的組合物中的用途。
在另一優選例中，所述的內耳前庭毛細胞疾病選自梅尼埃病(Meniere
disease)，中毒性耳聾，噪聲性損傷，或特發性耳聾。
在另一優選例中，所述的內耳前庭毛細胞疾病由化療藥物引起。 在另一優選例中，所述的化療藥物是含鉑制劑；優選卡鉑、順鉑或其混合。 在另一優選例中，所述的組合物是藥物組合物，保健品組合物或食品組合物。
在另一優選例中，所述的藥物組合物中含有
(a) 50 — 200重量份蛋氨酸和/或其多肽；
(b) 400 — 2000重量份藥學上可接受的載體；
且(a) + (b)的重量是藥物組合物總重量的50 — 99% 。 在另一優選例中，所述的藥物組合物中含有-
(a) 75—150重量份蛋氨酸和/或其多肽；
(b) 600—1500重量份藥學上可接受的載體。
在另一優選例中，所述的藥物組合物中還含有輔助性活性成分，所述的輔
助性活性成分選自維生素類物質；優選B族維生素。
在另一優選例中，所述的藥物組合物是固體制劑或液體制劑。 在另一優選例中，所述的固態制劑包括片劑、丸劑、膠囊、散劑、顆粒劑；
所述的液體制劑包括乳濁劑、溶液劑、懸浮劑、糖漿劑、滴劑。在本發明的第二方面，提供了一種保護內耳前庭毛細胞的方法，就是施用 含有蛋氨酸的組合物。所述的組合物可以是藥物組合物，保健品組合物，或食 品組合物。
據此，本發明提供了一種保護內耳前庭感覺終器中的毛細胞的方法。


圖1顯示了前庭誘發眼震持續時間監測結果。 圖2顯示了耳聾病毛細胞損害特征；
其中A顯示正常對照組，B顯示注射卡鉑48小時后，毛細胞質膜下的堿性
磷酸酶活性增強的情況。
圖3顯示了使用蛋氨酸后內耳前庭毛細胞損傷改善的情況；
其中A顯示了順鉑和蛋氨酸聯合培養前庭的情況，B顯示了順鉑單獨培養
前庭的情況。
具體實施例方式
發明人經過廣泛而深入的研究，意外地發現蛋氨酸對內耳前庭毛細胞具有 保護作用，因此，可將它用于治療或預防內耳前庭毛細胞的損傷，尤其可用于 恢復耳毒性耳聾患者的聽力。
定義
如本文所用，"蛋氨酸(Methionine)"是一種人體必需的氨基酸，其結
構式為 N& 。
如本文所用，"蛋氨酸多肽"是指含有2 — 30個蛋氨酸殘基的肽鏈，其中 蛋氨酸殘基的重量占整條肽鏈重量的30—100%，較佳地是70—100%，更佳 地是90—100%。
如本文所用，"內耳前庭毛細胞疾病"和"內耳前庭毛細胞損傷"可互換 使用，都是指內耳前庭毛細胞受到損害，甚至是死亡。這可以是各種因素所造 成的，只要是使內耳前庭毛細胞受到了傷害。所述的疾病或損傷包括梅尼埃病(Meniere disease)，中毒性耳聾，噪聲性損傷和/或特發性耳聾，尤其是由 藥物引起的內耳前庭毛細胞損傷，特別是用于化療的鉑制劑，如卡鉑、順鉑等。
用途
本發明將含有蛋氨酸的組合物用于治療或預防內耳前庭毛細胞損傷。所述 的組合物可以是藥物組合物、保健品組合物或食品組合物。
所述組合物中的活性成分含有蛋氨酸，蛋氨酸多肽，還可以含有其它具有 保護耳功能的輔助活性成分，例如但不限于維生素類物質。也可以將治療有效 量的蛋氨酸同具有耳毒性的藥物(例如但不限于順鉑(Cisplatin)、卡鉑 (Carboplatin )、 螺鈾(Spiroplatin )、 洛鈾(Lobaplatin )、 司鉬 (Sebriplatin)、右奧馬鈿(Dexormaplatin)、恩洛鉬(Enl叩latin)、異 丙鈾(Iproplatin)、奧馬鉛(0濯platin)、奧沙利鉬(Oxaliplatin)、 奈達鉑(Nedaplatin)、折尼鉑(Zeniplatin))聯合使用，以減少這些藥物 的副作用。
所述的組合物中還可以含有藥學上或食品學上可接受的載體賦形劑或稀 釋劑。這類載體包括(但并不限于)鹽水、緩沖液、水、甘油、乙醇、及其組合。
本發明的經口給藥的固體組合物可采用片劑、丸劑、膠囊劑、散劑、顆粒 劑、滴劑等形式。這些固體組合物中混合了一種或一種以上的活性物質和至少 一種惰性稀釋劑，例如，乳糖、甘露醇糖、葡萄糖、羥丙基纖維素、微晶纖維 素、淀粉、聚乙烯吡咯皖酮、瓊脂、果膠、硅鋁酸鎂、鋁酸鎂。還可按照常用 方法使組合物中含有除了惰性劑之外的添加劑，例如，乳糖穩定劑、谷氨酸或 天冬酸等助溶劑。如是片劑或丸劑，還可根據需要，在其外部包裹上蔗糖、明 膠、羥丙基纖維素、羥丙甲基纖維素或胃溶性、腸溶性薄膜。
經口給藥的液體組合物包括藥劑上允許的乳濁劑、溶液劑、懸浮劑、糖漿 劑等，通常使用的惰性稀釋劑包括精制水、乙醇。該組合物中除了惰性稀釋劑 之外，還包括濕潤劑、懸浮劑、等助劑，甜味劑、矯味劑、芳香劑和防腐劑。
非經口給藥的注射劑包括無菌水性或非水性溶液劑、懸浮劑和乳濁劑。水 性溶液劑和懸浮劑中包含注射用蒸餾水及生理鹽水。非水性溶液劑和懸浮劑中 包含丙二醇、聚乙二醇、可可脂、橄欖油、蓖麻油、等植物油。這些組合物中 還可包含等滲劑、防腐劑、濕潤劑、乳化劑、分散劑、穩定劑、助溶劑。在本發明中，對蛋氨酸的劑量沒有特殊的限制，可用任何合適的劑量。載 體的類型以及數量也可以很不相同，這取決于溫血動物或人的種類、體重、和 待治療的毛細胞損害程度等。 一般，合適的含量是蛋氨酸占藥物組合物總重量 的0.01%-99%，較佳地O. 1%-99%。作為藥物治療或作為保健品、食品保養時， 蛋氨酸的有效劑量范圍通常為0. 01-800毫克/千克/天或更高，較佳的為 0. 1-500毫克/千克/天，更佳的為0. 5-200毫克/千克/天。
劑量單元包括一種蛋氨酸化合物，或者該蛋氨酸化合物與其他耳聾、耳鳴 治療劑所形成的混合物。劑量單元還可含有稀釋劑、填充劑、載體等。劑量單 元是固體或凝膠形式，如丸劑、片劑、膠囊等，或者是液體形式，它們適合口 服給藥、局部給藥或腸胃給藥、或者靜脈內給藥。
本發明提供的用于改善耳聾、耳鳴患者的保健品，其中含有l 0 0mg蛋氨 酸化合物/克保健品。
配制好的藥物組合物可以通過常規途徑進行給藥，其中包括肌內、腹膜 內、靜脈內、皮下、皮內、口服、或局部給藥。此外，蛋氨酸還可以與其他治 療耳聾的治療齊'J (Brain-derived neurotrophic factor) —起使用。
本發明提到的上述特征，或實施例提到的特征可以任意組合。本案說明書所 揭示的所有特征可與任何組合物形式并用，說明書中所揭示的各個特征，可以任何 可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說明，所揭示的特 征僅為均等或相似特征的一般性例子。
本發明的主要優點在于
1、 蛋氨酸可有效改善耳聾病人耳蝸及前庭毛細胞損害，從而糾正聽力下 降、耳鳴、眩暈癥狀。
2、 蛋氨酸是一種條件氨基酸，故使用時安全性好。
3、 蛋氨酸可與其它治療耳聾的藥物合并使用，并可經常規途徑給藥，使 用方便。4、 蛋氨酸是一種被廣泛接受的營養素，并具有一定發藥理作用，因此使 用于藥品和保健品的商品化。
5、 現階段，我國因使用順鉑或卡鉑而耳聾的病患約1770萬(1987年全國 殘疾人抽樣調査)，因此蛋氨酸具有廣泛的市場前景。
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說 明本發明而不用于限制本發明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方 法，通常按照常規條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則所 有的百分比和份數按重量計。
除非另行定義，文中所使用的所有專業與科學用語與本領域熟練人員所熟 悉的意義相同。此外，任何與所記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用于 本發明方法中。文中所述的較佳實施方法與材料僅作示范之用。
實施例1
耳聾病毛細胞損害特征-毛細胞內的酶細胞化學反應
方法
5只成年灰鼠(體重在534-689g)按照每公斤體重100mg的劑量腹腔注射 卡鉑，用藥后48h處死。另外3只成年灰鼠作為正常對照。
麻醉動物被斷頭后，迅速取出聽泡。用固定液在4'C冰箱內固定1小時。 在PBS溶液中分離取出基底膜。將基底膜切成幾個片段以分別用于不同的酶細 胞化學孵育反應。
結果
如圖2所示。
結果表明，轉離子激活的ATP酶在正常灰鼠的內外毛細胞中很少，而在卡 鉑耳中毒灰鼠的內外毛細胞中明顯增多。
實施例2
前庭誘發眼震持續時間監測 方法
24只體重在475-641克的成年灰鼠平均分為三組，每組8只。第一組為正 常對照組；第二組為早期病變組；第三組為晚期病變組。
8病變組在腹腔注射蛋氨酸(50mg/kg)后皮下注射卡鉑(100mg/kg)，或 在皮下同時注射蛋氨酸(50mg/kg)和卡鉑(100mg/kg)。
注射卡鉑后24小時和72小時各處死4只，此組為早期病變組；注射卡鉑后 30天處死8只為晚期病變組。
在使用蛋氨酸前和處死前均檢測誘發眼震，前庭終器行鋪片檢査。
結果
如圖1所示。
正常對照組及使用蛋氨酸前(圖中的"之前"點)，灰鼠誘發眼震持續時 間為61. 0±7. 26秒，使用蛋氨酸30天后為13. 5±5. 61秒。晚期病變組測量值與正 常對照組及早期病變組(l天和3天)比較，均有顯著差異(P值均小于0.05)。
結果表明，蛋氨酸對于前庭功能損傷具有預防和治療作用。
實施例3
使用蛋氨酸后改善的癥狀
利用cisplatin和cisplatin+蛋氨酸對產后三天小鼠的耳蝸及前庭48小 時培養的比較。 方法
無菌條件下從產后三天的小鼠內耳中解剖出耳蝸和前庭，將解剖出的耳蝸 及前庭用含有2mM Cisplatin的培養液培養，48小時后將其染色并鋪片觀察。
無菌條件下從產后三天的小鼠內耳中解剖出耳蝸和前庭，將解剖出的耳蝸 及前庭用含有2mM Cisplatin和蛋氨酸的培養液培養，48小時后將其染色并鋪 片觀察。
結果
如圖3所示。
結果表明，單獨使用Cisplatin和聯合使用Cisplatin和蛋氨酸對小鼠耳 蝸無影響；
單獨使用Cisplatin后，前庭系統的毛細胞尤其是球囊的毛細胞全部被損 傷破壞，而使用Cisplatin +蛋氨酸后，前庭系統的毛細胞尤其是球囊的毛細胞 部分被損傷破壞，表明使用蛋氨酸能保護毛細胞。
以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，并非用以限定本發明的實質技術內容范圍，本發明的實質技術內容是廣義地定義于申請的權利要求范圍中，任 何他人完成的技術實體或方法，若是與申請的權利要求范圍所定義的完全相 同，也或是一種等效的變更，均將被視為涵蓋于該權利要求范圍之中。
權利要求
1. 蛋氨酸在制備治療或預防內耳前庭毛細胞疾病的組合物中的用途。
2. 如權利要求l所述的用途，其特征在于，所述的內耳前庭毛細胞疾病選 自梅尼埃病，中毒性耳聾，噪聲性損傷，或特發性耳聾。
3. 如權利要求l所述的用途，其特征在于，所述的內耳前庭毛細胞疾病由 化療藥物引起。
4. 如權利要求3所述的用途，其特征在于，所述的化療藥物是含鉑制劑； 優選卡鉑、順鉑或其混合。
5. 如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的組合物是藥物組合物， 保健品組合物或食品組合物。
6. 如權利要求5所述的用途，其特征在于，所述的藥物組合物中含有(a) 50 — 200重量份蛋氨酸和/或其多肽；(b) 400 — 2000重量份藥學上可接受的載體；且(a) + (b)的重量是藥物組合物總重量的50 — 99% 。
7. 如權利要求6所述的用途，其特征在于，所述的藥物組合物中含有(a) 75 — 150重量份蛋氨酸和/或其多肽；(b) 600—1500重量份藥學上可接受的載體。
8. 如權利要求6所述的用途，其特征在于，所述的藥物組合物中還含有輔 助性活性成分，所述的輔助性活性成分選自維生素類物質；優選B族維生素。
9. 如權利要求6所述的用途，其特征在于，所述的藥物組合物是固體制劑 或液體制劑。
10. 如權利要求9所述的用途，其特征在于，所述的固態制劑包括片劑、 丸劑、膠囊、散劑、顆粒劑；所述的液體制劑包括乳濁劑、溶液劑、懸浮劑、 糖漿劑、滴劑。
全文摘要
本發明公開了蛋氨酸在制備治療或預防內耳前庭毛細胞疾病的組合物中的用途。本發明還公開了將蛋氨酸作為內耳前庭毛細胞疾病治療劑或預防劑的使用方法。
文檔編號A61K31/185GK101480385SQ200810032590
公開日2009年7月15日 申請日期2008年1月11日 優先權日2008年1月11日
發明者史春夢, 雁 曲 申請人:曲 雁;史春夢