專利名稱：一種治療腎衰的藥物組合物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種治療腎病的藥物，具體是涉及一種治療腎衰的藥物組合物及其制備方法和應用。
二、技術背景到目前為止，世界范圍內對慢性腎衰還缺乏滿意的治療藥物及方法。主要靠血透、腹透、腎移植治療，而這些治療方法不僅存在許多目前還難以解決的醫療難題，并且耗資巨大，病人一旦出現腎衰就需靠透析維持生命，目前國內有相當一部分單位及個人不能承受其巨額耗資。特別是廣大農村，因一方面受醫療設備及技術條件限制，另一方面受經濟狀況的制約，絕大部分病人仍然靠非透析療法治療，但目前國內外都缺乏一種有效、副作用少、經濟的治療腎衰藥物。從全國范圍看，在慢性腎衰的治療中存在嚴重的缺醫少藥狀態。
慢性腎衰時，口服加速毒素排泄的藥物，可降低病人血尿素氮、肌酐及其他毒素，改善一般情況，緩解癥狀，延長生存期。
據文獻報道，以大黃、土茯苓、甘草、丹參、牡蠣、枳殼治療腎衰，在降血尿素氮、血肌酐，緩解尿毒癥癥狀方面療效較好。但是經過多年臨床實踐本申請的發明人發現將上述六種配方混合后用水提取或者將丹參用乙醇提取后與其它混合后用水提取的五味藥合并后制成的藥物療效不明顯。為此申請人作了大量的實驗，發現上述配方中大黃為方中的君藥，主含有蒽醌類、二苯乙烯苷類、色酮類、萘酚苷類等八大類成分，其中蒽醌類成分為其主要的藥效成分，大黃素、大黃酚為蒽醌類代表成分，大黃蒽醌有結合型和游離型兩種，其中結合型蒽醌在乙醇中能較好的溶解，若用水煎煮，只能提出蒽醌的一部分，而大黃蒽醌在乙醇中能較好的溶解。
本處方大黃能抑制蛋白分解，加速尿毒素的排泄，吸附中分子物質，抑制腸道細菌生長，刺激腸蠕動，使毒素排泄增加，血中毒素濃度降低。甘草、土茯苓對內源性毒素有解毒作用，牡蠣、枳殼可緩解大黃腹瀉、腹脹腹痛等副作用，并可補充鈣劑，改善慢性腎衰的鈣磷代謝障礙。丹參可作用于多種凝血因子，降低血小板聚集，促進纖溶，緩解腎衰的高凝狀態，改變血液流變性，改善微循環，增加腎血流，促進腎功能恢復。
本組合物中的原料大黃、茯苓、甘草、牡蠣、丹參、枳殼在《神農本草經》、《本草綱目》等本草古籍中均有記載，我國《藥典》2005年版一部亦均收入。現代中藥學專著記載了以上藥物經現代研究方法提取的主要藥理成分及作用機理，特別是近幾年結合腎炎、腎衰發病機理進行藥物研究的發現。如大黃抗腎系膜細胞增生，抑制腎小球纖維化，吸附尿毒素及中分子物質；甘草的抗炎作用，丹參的抗血小板聚集作用等，《中國中西醫結合雜志》、《中華腎病雜志》等都有系列報道。

發明內容
本發明的目的在于克服現有技術中的不足之處，提供一種治療腎衰的藥物組合物。
本發明的另一目的是提供一種治療腎衰的藥物組合物的制備方法。
本發明的又一目的在于提供一種治療腎衰的藥物組合物的應用。
本發明的治療腎衰的藥物組合物，由大黃、甘草、丹參、茯苓、枳殼和煅牡蠣組成，其中所述的所述大黃是單獨使用乙醇水溶液提取而成，其它組分混合用水提取而成，且組合物提取物中大黃的含量以有效成分大黃素和大黃酚的量計，不得少于0.25％，成品中大黃素和大黃酚含量不得少于配方總量的0.2％。
進一步的，本發明的組合物處方(重量百分比)是大黃1-50％、甘草1-30％、丹參1-20％、茯苓1-20％、枳殼0.1-20％和煅牡蠣0.1-20％。
更進一步的，本發明的組合物處方(重量百分比)是大黃20-40％、甘草10-20％、丹參10-20％、茯苓10-20％、枳殼1-20％和煅牡蠣1-20％。
優選的，所述組合物處方(重量百分比)是大黃20-30％、甘草15-20％、丹參15-20％、茯苓15-20％、枳殼5-10％和煅牡蠣5-10％。
最優選的，組合物處方是大黃521克、甘草417克、丹參417克、茯苓417克、枳殼209克和煅牡蠣209克。
為優選最佳浸提工藝，本發明人采用正交試驗法選取浸提次數，浸提時間及各次加溶劑量。試驗結果經統計處理、方差分析，確定大黃最佳提取工藝。
采用減壓薄膜濃縮，使提取液在較低溫度下(65～70℃)濃縮；用噴霧干燥法，干燥時間短，這樣均可減少有效成分的破壞和損失。
1.大黃提取工藝的試驗1.1大黃與其余五味藥材混合水煎煮取大黃10.42g，按處方比例與其余五味藥材混合，加12倍量水浸泡，煎煮1.5小時，濾過，藥渣加8倍量水煎煮1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至500ml，取本品15ml，加鹽酸2ml，氯仿30ml，回流提取1小時，放冷，轉移至分液漏斗中，分取氯仿液，繼用氯仿20ml振搖提取，和并氯仿液，蒸干，殘渣加甲醇定量轉移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液I。
另取大黃細粉0.178g，加甲醇25ml，回流提取30分鐘，放冷，濾過，取濾液5ml，蒸干，殘渣加水10ml，鹽酸1ml，氯仿20ml，回流1小時，分取氯仿液，繼用氯仿20ml振搖提取，合并氯仿液，蒸干，殘渣加乙醇定量轉移至10ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液II(當作藥材含量)。
根據高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)實驗色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸溶液(80:20)為流動相，檢測波長為254nm。理論板數按大黃素峰計算，應不低于3000。
對照品溶液的制備精密稱取大黃素11.36mg、大黃酚11.46mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻。精密量取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，作為對照品溶液。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定。結果見表1。
表1 大黃醇提與混合水煎含量測定比較表

由上表可知，混合煎煮使絕大多數大黃蒽醌未煎出或損失。
1.2大黃單獨煎煮工藝試驗取大黃細粉1.05g，加水50ml，煮沸20分鐘，放冷，濾過，濾液稀釋至200ml，精密量取10ml，加鹽酸2ml，氯仿20ml，回流1小時，分取氯仿液，蒸干，殘渣加乙醇溶解，并轉移至10ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，作供試液。照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)實驗，對照品及測試條件同上，結果見表2。
表2 大黃醇提與水單煎含量測定比較表

上表可知，大黃單煎蒽醌提取率也較低。
1.3大黃醇提工藝考察大黃蒽醌提取，多采用乙醇回流，回流提取過程中，乙醇濃度、乙醇用量、提取時間、提取次數和藥材顆粒的大小等均是影響提取效果的主要因素。現對顆粒大小因素進行單獨考察。
1.3.1大黃顆粒大小對提取效果的影響取大黃分別粉碎成最粗粉、粗粉、中粉，各取40g，用7倍量70％乙醇回流提取3次，每次1小時，濾過，和并濾液，轉入500ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，搖勻，精密量取2.5ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，精密量取5ml，蒸干，加水20ml，鹽酸2ml，氯仿20ml，回流1小時，防冷，分取氯仿液，繼用氯仿20ml振搖提取，合并氯仿液，蒸干，殘渣加乙醇定量轉移至5ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)實驗，對照品及測試條件同上，結果見表3。
表3 大黃顆粒大小對含量影響結果表

由上表可知，最粗粉和粗粉含量相差不大，中粉含量略有增加，但中粉顆粒太細，工業操作較為困難，最終選擇粗粉。
1.3.2大黃乙醇回流提取正交實驗將顆粒大小作為固定因素，對乙醇濃度等四個因素各取三個水平，進行L9(34)正交試驗，以大黃素、大黃酚的總和為評價指標，篩選最佳回流提取條件，見表4。
表4 大黃回流正交試驗因素水平表

1.3.2.1樣品的制備及測定取大黃粗粉共9份，每份40g，按L9(34)正交試驗表頭安排實驗，加乙醇回流提取，濾過，濾液定容至500ml，精密量取2.5ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，精密量取5ml，蒸干，加水20ml，鹽酸2ml，氯仿20ml，回流1小時，放冷，分取氯仿液，繼用氯仿20ml振搖提取，合并氯仿液，蒸干，殘渣加乙醇定量轉移至5ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)實驗，對照品及測試條件同上，結果見表5。
表5 大黃回流提取正交試驗含量測定結果表
1.3.2.2含量測定結果方差分析(見表6至表8)表6 大黃素含量測定結果方差分析

由表6直觀分析可知，影響大黃素回流效果的因素順序為D＞B＞A＞C，即回流次數影響最大，其次為乙醇用量，再次為乙醇濃度，回流時間影響極小，可當成方差分析的誤差；經方差分析，回流次數對大黃素回流提取有顯著性影響，其余三因素對大黃素的溶出均無顯著性影響。由此可得出大黃素最佳回流工藝條件為A3B2C2D3，即用7倍量85％的乙醇回流提取3次，每次提取1小時。
表7 大黃酚含量測定結果方差分析

由表7分析可知，影響大黃酚回流提取的因素順序為D＞A＞C＞B，即提取次數影響最大，其次為乙醇濃度，再次為提取時間，乙醇用量影響極小，可當成方差分析的誤差；經方差分析，四因素對大黃酚回流提取均無顯著性影響。由此可得出大黃素最佳回流工藝條件為A3B2C2D2，即用7倍量85％的乙醇回流提取2次，每次提取1小時。
表8 出膏率含量測定結果方差分析

由表8分析可知，影響大黃素回流效果的因素順序為D＞A＞C＞B，即回流次數影響最大，其次為乙醇濃度，再次為回流時間，乙醇用量影響極小，可當成方差分析的誤差；經方差分析，回流次數對大黃素回流提取有顯著性影響，其余三因素對大黃素的溶出均無顯著性影響。由此可得出大黃素最佳回流工藝條件為A2B3C2D3，即用9倍量70％的乙醇回流提取3次，每次提取1小時。
經上述正交實驗綜合分析，回流提取大黃蒽醌的最佳方案為A3B2C2D3。結合工業實際，乙醇濃度選用70％，即為A2B2C2D3。
1.3.3大黃回流提取驗證實驗取大黃粗粉共2份，每份100g，分別按①A3B2C2D3②A2B2C2D3方案回流提取，濾過，濾液濃縮并定容至500ml，精密量取1ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，精密量取5ml，蒸干，加水20ml，鹽酸2ml，氯仿20ml，回流1小時，放冷，分取氯仿液，繼用氯仿20ml振搖提取，合并氯仿液，蒸干，殘渣加乙醇定量轉移至5ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)試驗，對照品及測試條件同上，結果見表9。
表9 大黃回流方案驗證實驗

由表9可知，兩種驗證方案均可得到較滿意的結果，結合生產實際，選取2號驗證方案為最終大黃回流提取方案。
1.3.4結論及工藝驗證根據正交試驗結果，經數理統計處理，我們確定最佳醇提取工藝為加7倍量70％乙醇回流提取3次，每次提取1小時，合并煎液，濾過，濃縮噴干。按此最佳工藝條件放大試驗，投料3批(各521g)，進行工藝驗證，每批大黃素及大黃酚的總提取率分別為87.1％、88.6％和89.3％。結果表明該工藝提取最完全。
2.噴霧干燥條件選擇及制備工藝的確立其余五味處方量飲片，加12倍量水煎煮1.5小時，濾過，藥渣加8倍量水，煎煮1小時，濾過，藥液合并，大黃醇提液合并，板框過濾，濾液減壓薄膜濃縮至相對密度為1.08～1.10(50～60℃)的清膏，選取1.08～1.10(60℃)，干燥時霧化好，粒度適中。如濃度稀(如1.05～1.08)，則霧化液滴小，干燥后干浸膏顆粒太細，易隨干燥氣流跑出，干燥損失大。
噴霧干燥條件選擇是否適當，對產品質量(如顏色、口感、成分的保留、干浸膏粉的含水量等)都有較大影響。干燥條件包括干燥的進風溫度、出風溫度、塔內壓力、進料速度等。試驗結果表明噴霧干燥進風溫度應選180℃，溫度高則易產生焦化；出風溫度應選擇80℃左右，出風溫度低，則干浸膏粉的水分不合格(顆粒劑的水分應低于5.0％)。
綜上所述，本發明的藥物組合物的制備方法在于取大黃，粉碎成粗粉，加7倍量70％的乙醇回流提取3次，每次1小時，放冷，濾過，合并濾液；其余甘草等五味，水煎煮二次，第一次加12倍量水煎煮1.5小時，第二次加8倍量水煎煮1小時，合并煎液，濾過，濾液與上述醇提液合并，減壓濃縮成相對密度為1.08～1.10(50～60℃)的藥液，噴霧干燥，制成干膏粉藥理、藥效及毒理學研究結果主要藥效學試驗，本品8g/kg、4g/kg、2g/kg灌胃，觀察對大鼠2種腎衰模型的治療作用。結果表明，本品對大鼠腺嘌呤腎衰模型的血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)升高有顯著抑制作用，對腎衰大鼠血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血紅蛋白(HB)的下降亦有顯著改善。對5/6腎切除模型，能使BUN的升高顯著抑制，其他指標亦有改善但不顯著。對正常大鼠足跖炎性腫脹、小鼠耳廓炎性腫脹，有顯著的抗炎消腫作用。以上結果表明，本品對大鼠腎衰模型有治療作用。有效劑量折算成臨床用量，以成人每日服用顆粒32g或48g為宜小鼠急性毒性試驗，以本品大劑量灌服亦不致死。采用最大給藥量試驗，小鼠灌服本品100g/kg體重，相當于藥材量250g/kg，為臨床成人用量的217倍，觀察7日，未見明顯毒性反應。
大鼠長期毒性試驗，采用SD大鼠160只，3個劑量組ig本品40g/kg、20g/kg、10g/kg(相當于藥材量100g/kg、50g/kg、25g/kg，高劑量為臨床成人常用量的85倍)，連續6個月。經給藥期間一般觀察，給藥中期、給藥結束及恢復期末體重測定、血液學檢驗、血清生化檢驗、臟器系數測定及病理組織學檢驗，各項指標基本正常。結果表明，本品長期口服，實驗動物未出現明顯毒性反應。
實施例實施例1取大黃521g，粉碎成粗粉，加7倍量70％的乙醇回流提取3次，每次1小時，放冷，濾過，合并濾液；其余五味甘草417g，丹參417g，茯苓417g，枳殼209g，煅牡蠣209g飲片，水煎煮二次，第一次加12倍量水煎煮1.5小時，第二次加8倍量水煎煮1小時，合并煎液，濾過，濾液與上述醇提液合并，減壓濃縮成相對密度為1.08～1.10(50～60℃)的藥液，噴霧干燥，制成干膏粉878g，加糊精及微粉硅膠適量，混勻，制成顆粒，過篩，干燥，制成1000g顆粒，分裝成每袋16g。
實施例2實施例1中的干膏粉，加入適量硫酸鎂、糊精及微粉硅膠，混勻，制粒，整粒，壓片。
實施例3實施例1中的干膏粉，加入適量硫酸鎂、糊精及微粉硅膠，混勻，制粒，裝膠囊。
實施例4實施例1中的干膏粉，加入適量硫酸鎂、糊精及微粉硅膠，制粒，整粒，壓片。
實施例5實施例1中的濃縮液，加入適量糊精及微粉硅膠，混勻，制丸。
實施例5實施例1中的濃縮液，加入適量可溶性淀粉及蔗糖，混勻，制成口服液。
實施例6制備方法同實施例1，只是配方比例改為大黃30％，甘草15％，丹參15％，茯苓20％，枳殼10％，煅牡蠣10％。
實施例7制備方法同實施例1，只是配方比例改為大黃50％，甘草10％，丹參10％，茯苓15％，枳殼5％，煅牡蠣10％。
實施例8制備方法同實施例1，只是配方比例改為大黃10％，甘草20％，丹參20％，茯苓20％，枳殼15％，煅牡蠣15％。
權利要求
1.一種治療腎衰的藥物組合物，由大黃、甘草、丹參、茯苓、枳殼和煅牡蠣組成，其特征在于所述大黃是單獨使用乙醇水溶液提取而成，其它組分混合用水提取而成，且組合物提取物中大黃的含量以有效成分大黃素和大黃酚的量計，不得少于0.25％，成品中大黃素和大黃酚含量不得少于配方總量的0.2％。
2.根據權利要求1所述的治療腎衰的藥物組合物，其特征在于組合物處方(重量百分比)是大黃1-50％、甘草1-30％、丹參1-20％、茯苓1-20％、枳殼0.1-20％和煅牡蠣0.1-20％。
3.根據權利要求2所述的治療腎衰的藥物組合物，其特征在于組合物處方(重量百分比)是大黃20-40％、甘草10-20％、丹參10-20％、茯苓10-20％、枳殼1-20％和煅牡蠣1-20％。
4.根據權利要求3所述的治療腎衰的藥物組合物，其特征在于組合物處方(重量百分比)是大黃20-30％、甘草15-20％、丹參15-20％、茯苓15-20％、枳殼5-10％和煅牡蠣5-10％。
5.根據權利要求4所述的治療腎衰的藥物組合物，其特征在于組合物處方是大黃521克、甘草417克、丹參417克、茯苓417克、枳殼209克和煅牡蠣209克。
6.根據權利要求1-5之一所述的治療腎衰的藥物組合物的制備方法，其特征在于先取大黃，粉碎成粗粉，加7倍量70重量％的乙醇回流提取3次，每次1小時，放冷，濾過，合并濾液；其余五味用水煎煮二次，第一次加12倍量水煎煮1.5小時，第二次加8倍量水煎煮1小時，合并煎液，濾過，濾液與上述醇提液合并，減壓濃縮成藥液，噴霧干燥，制成干膏粉，加入輔料制成口服劑。
7.根據權利要求6所述的治療腎衰的藥物組合物的制備方法，其中所述的口服劑型為顆粒劑、片劑、膠囊劑、口服液和丸劑。
8.根據權利要求1所述的治療腎衰的藥物組合物的應用，用于慢性腎功能衰竭的早、中期的濕濁癥、水氣癥和血瘀癥的治療。
全文摘要
本發明公開了一種治療腎衰的組合物及其制備方法和應用，組合物處方(重量百分比)是大黃1－50％，甘草1－30％，丹參1－20％g，茯苓1－20％，枳殼0.1－20％，煅牡蠣0.1－20％。本品對大鼠腺嘌呤腎衰模型的血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)升高有顯著抑制作用，對腎衰大鼠血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血紅蛋白(HB)的下降亦有顯著改善。并具有活血化淤作用。小鼠急性毒性試驗，未見明顯毒性反應。大鼠長期毒性試驗，也未出現明顯毒性反應。
文檔編號A61K9/10GK1843429SQ20061000349
公開日2006年10月11日 申請日期2006年2月10日 優先權日2006年2月10日
發明者王毅清, 陳耀明 申請人:湖南達嘉維康醫藥有限公司