一種利用降解處理四環素后的菌渣生產酵母浸膏的方法
【專利摘要】本發明公開了一種利用降解處理四環素后的菌渣生產酵母浸膏的方法，屬于微生物發酵【技術領域】。它包括：釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級種子的制備，黑曲霉種子的制備，菌渣培養基制備和酵母浸膏的制備幾個步驟，其中酵母浸膏的制備是將制備好的幾種菌進行接種培養，然后再按質量百分比為0.03％的量加入酵母抽提酶，水解16-24h，升溫到80℃使酶失活，待其冷卻后，4000r／min離心10min，濾液經減壓濃縮控制其水分為15-20％，即為酵母浸膏。該方法生產成本低、制備工藝簡單獨特、生產周期短，并且可使四環素菌渣得以高值轉化。
【專利說明】—種利用降解處理四環素后的菌渣生產酵母浸膏的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種微生物發酵領域，尤其是涉及一種利用降解處理四環素后的菌渣生產酵母浸膏的方法。
【背景技術】
[0002]酵母浸膏是以酵母為原料，利用現代生物技術通過酵母細胞自溶破壁和酵母自身的酶系對酵母細胞質進行水解或以酶制劑進行水解，再經一系列的抽提、濃縮等工序得到的粉狀或膏狀或液體的產品，含有豐富的氨基酸、功能性多肽、抗衰老活性因子、膳食纖維和甘露糖，還含有人體不可缺少的核酸、核苷酸和鈣，富含B族維生素及磷、鎂、錳、鋅、硒等多種微量元素。酵母浸膏被廣泛應用于生物發酵、生物工程、生物醫藥等領域，具體地說，可廣泛用于發酵法生產抗生素、氨基酸、有機酸、酶制劑、生物防腐劑、生物材料、維生素、透明質酸等的培養基配制以及生物工程、生物醫藥等領域。我國目前生產酵母浸膏的廠家較少，但市場需求量較大。由于酵母浸膏生產原料主要是以小麥等糧食作物為原料，價格偏高，因而造成酵母浸膏的生產成本還處在一個比較高的水平，難以達到實際且實惠的應用。
[0003]四環素菌渣是發酵法生產四環素過程中，發酵醪液進行固液分離時形成的菌餅部分，由于其蛋白質、礦物質等養分含量豐富，是一種良好的可再用資源。目前還沒有一種能利用降解處理四環素后的菌渣生產酵母浸膏的方法。

【發明內容】

[0004]本發明所要解決的技術問題是:提供一種利用降解處理四環素后的菌渣生產酵母浸膏的方法。
[0005]為解決上述技術問題，本發明的技術方案是: [0006]一種利用降解處理四環素后的菌渣生產酵母浸膏的方法，其特征在于:包括如下步驟:
[0007]S1:釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級種子的制備:
[0008]a.種子活化培養:分別從釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露保存管中挑取一環，分別接入種子活化擴大培養基中，30~35°C，100~140r / min下好氧培養36~48h，可分別得到活化的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子；所述種子濃度為IO7CFU / mL ；
[0009]b.一級種子制備:將上述步驟a制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子按質量百分比為I~5%的接種量，分別接種于種子活化擴大培養基中，30~35°C，100~140r / min下好氧培養36~48h,可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級種子;
[0010]C.二級種子制備:將上述步驟b制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級種子按質量百分比為I~5%的接種量 ，分別接種于種子活化擴大培養基中，30~35°C，100~140r/min下好氧培養36~48h,可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級種子。[0011]S2:黑曲霉種子的制備:
[0012](I)黑曲霉活化培養:從黑曲霉保存管中挑取一環，在霉菌活化培養基制備的斜面上劃上斜線，在溫度30~35°C、濕度75~80%下好氧培養60_72h，可得到黑曲霉斜面孢子;
[0013](2)黑曲霉擴大培養:將上述步驟(1)得到的黑曲霉斜面管中的孢子用PH7.0的磷酸鹽緩沖溶液洗下，取孢子懸液按質量百分比為1-5%的接種量，接種于霉菌擴大培養基中，在溫度30-35°C、濕度75-80%下好氧培養96_120h，可得到黑曲霉種子。
[0014]S3:菌渣培養基制備:
[0015]按下述重量比的原料混合即可得菌渣培養基:水分含量為80~85%的降解處理四環素后的菌渣100kg，玉米淀粉1.4kg，硫酸銨0.6kg，葡萄糖0.5kg，充分混合；
[0016]水分含量為80-85%的降解處理四環素后的菌渣的制備方法如下:取四環素新鮮菌渣1001^，1211:濕熱滅菌20-301^11 ;然后加入質量百分比為I %的有效氯為10%的次氯酸鈉溶液，充分攪拌Ih ;再加入草酸，充分攪拌30min ;所述次氯酸鈉與草酸的摩爾比為1:1，最后將水分含量調節為80-85 %。
[0017]S4:酵母浸膏的制備:
[0018]將上述步驟Slc中制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級種子以及步驟S2(2)中制備的黑曲霉種子，分別按質量百分比為I~10%接種量接入上述步驟S3制備的菌渣培養基中，30~35°C，40-80r / min下好氧培養3~5d，然后調節pH為6.0~7.0，在55°C水浴中按質量百分比為0.03%的量加入酵母抽提酶，水解16-24h，升溫到80°C使酶失活，待其冷卻后，4000r/min，離心lOmin，濾液經減壓濃縮控制其水分為15_20%，即為酵母浸膏。
[0019]所述種子活化擴大培養基、霉菌活`化培養基，霉菌擴大培養基的制備方法分別是:
[0020]I)種子活化擴大培養基制備:按下述重量比的原料混合即可得種子活化擴大培養基:蛋白胨20g，酵母浸膏IOg,葡萄糖20g,水1000ml ；
[0021]2)霉菌活化培養基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌活化培養基:取新鮮去皮土豆200g,切碎至粒度小于5mmX5mmX5mm,加1000ml水煮沸20分鐘,過濾后濾液用水稀釋至1000ml，然后再加入葡萄糖20g，瓊脂20g即可；
[0022]3)霉菌擴大培養基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌擴大培養基:麩皮1000g,水 1000ml。
[0023]優選的:所述步驟S4中的接種量為5%。
[0024]優選的:所述步驟Slb中的接種量為3%。
[0025]優選的:所述步驟Slc中的接種量為3%。
[0026]優選的:所述步驟S2 (2)中的接種量為3%。
[0027]采用了上述技術方案，本發明的有益效果為:
[0028]I)制備工藝簡單獨特:本發明提供的一種利用降解處理四環素后的菌渣生產酵母浸膏的方法，包括種子制備、菌渣培養基制備，然后將制備的種子，按質量百分比為I~10%的接種量接種于菌渣培養基中，經好氧發酵、酶解、離心、減壓濃縮等步驟，即可得酵母
浸膏；[0029]2)生產的酵母浸膏營養豐富:利用本發明提供的方法制得的酵母浸膏具有較高的蛋白質、氨基酸和核苷酸含量。本發明產品的真蛋白，氨基酸態氮及核苷酸含量相對較高，同時氨基酸種類較多，不僅適用于生物發酵行業，而且還適用于生物工程、生物醫藥等領域；
[0030]3)提高菌渣的經濟附加值:本發明在原料的選擇上主要是以降解處理四環素后的菌渣為主，一方面，消除了因殘留的四環素對發酵過程中微生物及其后續酵母浸膏產品質量的影響，另一方面，可實現菌渣的高值轉化；
[0031]4)生產的產品質量高:本發明針對目前降解處理四環素后的菌渣的利用現狀，以選育優化的釀酒酵母、熱帶假絲酵母、EM原露為酵母浸膏生產菌株，所產生的酵母浸膏中蛋白質、氨基酸與核苷酸含量較高，其中氨基酸種類較多，同時還提高菌渣資源化利用的經濟附加值，本發明酵母浸膏中水分含量15~20%，銨鹽含量1.0~2.4%,pH6.0~7.0，真蛋白含量35~45 %，氨基酸態氮含量4.5~7.5 %，核苷酸含量8~14 μ g/g ;
[0032]5)采用本發明提供的方法得到的酵母浸膏，可以達到以下指標:
[0033]1.感官指標:棕黃色膏狀，有特殊的酵母香味。
[0034]2.衛生指標:總菌落，酵母浸膏為陰性；重金屬未檢出。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0035]附圖1是本發明菌渣中殘留四環素降解處理前的高效液相色譜圖；
[0036]附圖2是本發明菌渣中殘留四環素降解處理后的高效液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0037]下面結合附圖和實施例對本發明進一步說明。
[0038]實施例1:
[0039]一種利用降解處理四環素后的菌渣生產酵母浸膏的方法，包括如下步驟:
[0040]S1:釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級種子的制備:
[0041]a.種子活化培養:分別從釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露保存管中挑取一環，分別接入種子活化擴大培養基中，30°C，IOOr / min下好氧培養48h，可分別得到活化的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子；所述種子濃度為IO7CFU / mL ；
[0042]b.一級種子制備:將上述步驟a制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子按質量百分比為1%的接種量，分別接種于種子活化擴大培養基中，30°C，100r / min下好氧培養48h，可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級種子；
[0043]c.二級種子制備:將上述步驟b制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級種子按質量百分比為1%的接種量，分別接種于種子活化擴大培養基中，30°C，100r / min下好氧培養48h，可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級種子；
[0044]S2:黑曲霉種子的制備:
[0045](I)黑曲霉活化培養:從黑曲霉保存管中挑取一環，在霉菌活化培養基制備的斜面上劃上斜線，在溫度30°C、濕度75%下好氧培養72h，可得到黑曲霉斜面孢子；
[0046](2)黑曲霉擴大培養:將上述步驟(1)得到的黑曲霉斜面管中的孢子用PH7.0的磷酸鹽緩沖溶液洗下，取孢子懸液按質量百分比為I %的接種量，接種于霉菌擴大培養基中，在溫度30°C、濕度75%下好氧培養120h，可得到黑曲霉種子；
[0047]S3:菌渣培養基制備:
[0048]按下述重量比的原料混合即可得菌渣培養基:水分含量為80~85%的降解處理四環素后的菌渣100kg，玉米淀粉1.4kg，硫酸銨0.6kg，葡萄糖0.5kg，充分混合；
[0049]水分含量為80~85%的降解處理四環素后的菌渣的制備方法如下:取四環素新鮮菌渣100kg，121°C濕熱滅菌20~30min;然后加入質量百分比為I %的有效氯為10%的次氯酸鈉溶液，充分攪拌Ih ;再加入草酸，充分攪拌30min ;所述次氯酸鈉與草酸的摩爾比為1:1，最后將水分含量調節為80-85% ;對菌渣中殘留四環素降解處理前后進行高效液相色譜分析可知，降解處理四環素后的菌渣，經高效液相色譜法未檢出殘留四環素的存在；如附圖1和2所示。
[0050]S4:酵母浸膏的制備:
[0051]將上述步驟Slc中制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級種子以及步驟S2(2)中制備的黑曲霉種子，分別按質量百分比為2%接種量接入上述步驟S3制備的菌渣培養基中，30°C，40r / min下好氧培養5d，然后調節pH為6.0，在55°C水浴中按質量百分比為0.03%的量加入酵母抽提酶，水解16h，升溫到80°C使酶失活，待其冷卻后，4000r / min,離心lOmin，濾液經減壓濃縮控制其水分為15-20%，即為酵母浸膏。
[0052]經測定:酵母浸膏中水分含量19%，銨鹽含量2.2%，pH6.4，真蛋白含量41.8%，氨基酸態氮含量6.5%，核苷酸含量10.2 ng/g。
[0053]其中:
[0054]1)種子活化擴大培養基制備:按下述重量比的原料混合即可得種子活化擴大培養基:蛋白胨20g，酵母浸膏IOg,葡萄糖20g,水1000ml ；
[0055]2)霉菌活化培養基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌活化培養基:取新鮮去皮土豆200g,切碎至粒度小于5mmX5mmX5mm,加1000ml水煮沸20分鐘，過濾后濾液用水稀釋至1000ml，然后再加入葡萄糖20g，瓊脂20g即可；
[0056]3)霉菌擴大培養基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌擴大培養基:麩皮1000g,水 1000ml。
[0057]實施例2:
[0058]一種利用降解處理四環素后的菌渣生產酵母浸膏的方法，包括如下步驟:
[0059]S1:釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級種子的制備:
[0060]a.種子活化培養:分別從釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露保存管中挑取一環，分別接入種子活化擴大培養基中，33°C，120r / min下好氧培養42h，可分別得到活化的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子；所述種子濃度為IO7CFU / mL ；
[0061]b.一級種子制備:將上述步驟a制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子按質量百分比為3%的接種量，分別接種于種子活化擴大培養基中，33°C，120r / min下好氧培養42h，可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級種子；
[0062]c.二級種子制備:將上述步驟b制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級種子按質量百分比為3%的接種量，分別接種于種子活化擴大培養基中，33°C，120r / min下好氧培養42h，可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級種子；
[0063]S2:黑曲霉種子的制備:[0064](I)黑曲霉活化培養:從黑曲霉保存管中挑取一環，在霉菌活化培養基制備的斜面上劃上斜線，在溫度33°C、濕度78%下好氧培養66h，可得到黑曲霉斜面孢子；
[0065](2)黑曲霉擴大培養:將上述步驟(1)得到的黑曲霉斜面管中的孢子用PH7.0的磷酸鹽緩沖溶液洗下，取孢子懸液按質量百分比為3%的接種量，接種于霉菌擴大培養基中，在溫度33°C、濕度78%下好氧培養108h，可得到黑曲霉種子；
[0066]S3:菌渣培養基制備:[0067]按下述重量比的原料混合即可得菌渣培養基:水分含量為80-85%的降解處理四環素后的菌渣100kg，玉米淀粉1.4kg，硫酸銨0.6kg，葡萄糖0.5kg，充分混合；
[0068]水分含量為80-85%的降解處理四環素后的菌渣的制備方法如下:取四環素新鮮菌渣100kg，12rC濕熱滅菌20-30min ;然后加入質量百分比為I %的有效氯為10%的次氯酸鈉溶液，充分攪拌Ih ;再加入草酸，充分攪拌30min ;所述次氯酸鈉與草酸的摩爾比為1:1，最后將水分含量調節為80-85% ;對菌渣中殘留四環素降解處理前后進行高效液相色譜分析可知，降解處理四環素后的菌渣，經高效液相色譜法未檢出殘留四環素的存在；如附圖1和2所示。
[0069]S4:酵母浸膏的制備:
[0070]將上述步驟Slc中制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級種子以及步驟
S2(2)中制備的黑曲霉種子，分別按質量百分比為5%接種量接入上述步驟S3制備的菌渣培養基中，33°C，60r / min下好氧培養4d，然后調節pH為6.5，在55°C水浴中按質量百分比為0.03%的量加入酵母抽提酶，水解20h，升溫到80°C使酶失活，待其冷卻后，4000r / min,離心lOmin，濾液經減壓濃縮控制其水分為15-20%，即為酵母浸膏。
[0071]經測定:酵母浸膏中水分含量18%，銨鹽含量2.1%, pH6.5，真蛋白含量42.6%，氨基酸態氮含量6.9%,核苷酸含量11.3 μ g / go
[0072]其中:
[0073]I)種子活化擴大培養基制備:按下述重量比的原料混合即可得種子活化擴大培養基:蛋白胨20g，酵母浸膏IOg,葡萄糖20g,水1000ml ；
[0074]2)霉菌活化培養基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌活化培養基:取新鮮去皮土豆200g,切碎至粒度小于5mmX5mmX5mm,加1000ml水煮沸20分鐘,過濾后濾液用水稀釋至1000ml，然后再加入葡萄糖20g，瓊脂20g即可；
[0075]3)霉菌擴大培養基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌擴大培養基:麩皮1000g,水 1000ml。
[0076]實施例3:
[0077]一種利用降解處理四環素后的菌渣生產酵母浸膏的方法，包括如下步驟:
[0078]S1:釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級種子的制備:
[0079]a.種子活化培養:分別從釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露保存管中挑取一環，分別接入種子活化擴大培養基中，35°C，140r/min下好氧培養36h，可分別得到活化的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子；所述種子濃度為IO7CFU / mL ；
[0080]b.一級種子制備:將上述步驟a制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子按質量百分比為5%的接種量，分別接種于種子活化擴大培養基中，35°C，140r / min下好氧培養36h，可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級種子；[0081]c.二級種子制備:將上述步驟b制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級種子按質量百分比為5%的接種量，分別接種于種子活化擴大培養基中，35°C，140r / min下好氧培養36h，可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級種子；
[0082]S2:黑曲霉種子的制備:
[0083](1)黑曲霉活化培養:從黑曲霉保存管中挑取一環，在霉菌活化培養基制備的斜面上劃上斜線，在溫度35°C、濕度80%下好氧培養60h，可得到黑曲霉斜面孢子；
[0084](2)黑曲霉擴大培養:將上述步驟(1)得到的黑曲霉斜面管中的孢子用PH7.0的磷酸鹽緩沖溶液洗下，取孢子懸液按質量百分比為5%的接種量，接種于霉菌擴大培養基中，在溫度35°C、濕度80%下好氧培養96h，可得到黑曲霉種子；
[0085]S3:菌渣培養基制備:
[0086]按下述重量比的原料混合即可得菌渣培養基:水分含量為80-85%的降解處理四環素后的菌渣100kg，玉米淀粉1.4kg，硫酸銨0.6kg，葡萄糖0.5kg，充分混合；
[0087]水分含量為80-85%的降解處理四環素后的菌渣的制備方法如下:取四環素新鮮菌渣100kg，12rC濕熱滅菌20-30min ;然后加入質量百分比為I %的有效氯為10%的次氯酸鈉溶液，充分攪拌Ih ;再加入草酸，充分攪拌30min ;所述次氯酸鈉與草酸的摩爾比為1:1，最后將水分含量調節為80-85% ;對菌渣中殘留四環素降解處理前后進行高效液相色譜分析可知，降解處理四環素后的菌渣，經高效液相色譜法未檢出殘留四環素的存在；如附圖1和2所示。
[0088]S4:酵母浸膏的制備:
[0089]將上述步驟Slc中制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級種子以及步驟S2(2)中制備的黑曲霉種子，分別按質量百分比為8%接種量接入上述步驟S3制備的菌渣培養基中，35°C，80r / min下好氧培養3d，然后調節pH為7.0，在55°C水浴中按質量百分比為0.03%的量加入酵母抽提酶，水解24h，升溫到80°C使酶失活，待其冷卻后，4000r / min,離心lOmin，濾液經減壓濃縮控制其水分為15-20%，即為酵母浸膏。
[0090]經測定:酵母浸膏中水分含量17%，銨鹽含量2.0%，pH6.5，真蛋白含量40.2%，氨基酸態氮含量6.2%，核苷酸含量9.6 μ g/g。
[0091]其中:
[0092]I)種子活化擴大培養基制備:按下述重量比的原料混合即可得種子活化擴大培養基:蛋白胨20g，酵母浸膏IOg,葡萄糖20g,水1000ml ；
[0093]2)霉菌活化培養基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌活化培養基:取新鮮去皮土豆200g,切碎至粒度小于5mmX5mmX5mm,加1000ml水煮沸20分鐘,過濾后濾液用水稀釋至1000ml，然后再加入葡萄糖20g，瓊脂20g即可；
[0094]3)霉菌擴大培養基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌擴大培養基:麩皮1000g,水 1000ml。
[0095]上述酵母抽提酶是由木瓜蛋白酶和5’ -磷酸二酯酶組成，其中木瓜蛋白酶活力900000U / g，5，-磷酸二酯酶活力 120U/g。
[0096]采用本發明提供的方法得到的酵母浸膏，可以達到以下指標:
[0097]1.感官指標:棕黃色膏狀，有特殊的酵母香味。
[0098]2.衛生指標:總菌落，酵母浸膏為陰性；重金屬未檢出。[0099]本發明生產酵母浸膏所用菌種是釀酒酵母(Saccharomyces CerevisiaeCGMCC2.1418)、熱帶假絲酵母(Candida tropicalis CGMCC2.587)、EM 原露、黑曲霉(Aspergillus niger CGMCC3.4628),均保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。
[0100]本發明不局限于上述具體的實施方式，本領域的普通技術人員從上述構思出發，不經過創造性的勞動，所做出的種種變換，均落在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種利用降解處理四環素后的菌渣生產酵母浸膏的方法，其特征在于:包括如下步驟: 51:釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級種子的制備: a.種子活化培養:分別從釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露保存管中挑取一環，分別接入種子活化擴大培養基中，30~35°C，100~140r / min下好氧培養36~48h，可分別得到活化的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子；所述種子濃度為IO7CFU / mL ； b.一級種子制備:將上述步驟a制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子按質量百分比為1-5%的接種量，分別接種于種子活化擴大培養基中，30~35°C，100~140r /min下好氧培養36~48h，可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級種子； c.二級種子制備:將上述步驟b制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級種子按質量百分比為I~5%的接種量，分別接種于種子活化擴大培養基中，30~35°C，100~140r / min下好氧培養36~48h,可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級種子。 52:黑曲霉種子的制備: (1)黑曲霉活化培養:從黑曲霉保存管中挑取一環，在霉菌活化培養基制備的斜面上劃上斜線，在溫度30~35°C、濕度75~80%下好氧培養60~72h，可得到黑曲霉斜面孢子; (2)黑曲霉擴大培養:將上述步驟(1)得到的黑曲霉斜面管中的孢子用pH7.0的磷酸鹽緩沖溶液洗下，取孢子懸液按質量百分比為I~5%的接種量，接種于霉菌擴大培養基中，在溫度30~35°C、濕度75~80%下好氧培養96~120h，可得到黑曲霉種子。 53:菌渣培養基制備: 按下述重量比的原料混合即可得菌渣培養基:水分含量為80~85%的降解處理四環素后的菌洛100kg,玉米淀粉1.4kg,硫酸銨0.6kg,葡萄糖0.5kg,充分混合； 水分含量為80~85%的降解處理四環素后的菌渣的制備方法如下:取四環素新鮮菌渣100kg，12rC濕熱滅菌20~30min;然后加入質量百分比為I %的有效氯為10%的次氯酸鈉溶液，充分攪拌Ih ;再加入草酸，充分攪拌30min ;所述次氯酸鈉與草酸的摩爾比為1:1，最后將水分含量調節為80-85 %。 54:酵母浸膏的制備: 將上述步驟Slc中制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級種子以及步驟S2 (2)中制備的黑曲霉種子，分別按質量百分比為I~10%接種量接入上述步驟S3制備的菌渣培養基中，30~35°C，40~80r / min下好氧培養3~5d，然后調節pH為6.0-7.0，在55°C水浴中按質量百分比為0.03%的量加入酵母抽提酶，水解16~24h，升溫到80°C使酶失活，待其冷卻后，4000r / min，離心lOmin，濾液經減壓濃縮控制其水分為15~20%，即為酵母浸膏。
2.根據權利要求1所述的一種利用降解處理四環素后的菌渣生產酵母浸膏的方法，其特征在于: 所述種子活化擴大培養基、霉菌活化培養基，霉菌擴大培養基的制備方法分別是: 1)種子活化擴大培養基制備:按下述重量比的原料混合即可得種子活化擴大培養基:蛋白胨20g，酵母浸膏IOg,葡萄糖20g,水1000ml ； 2)霉菌活化培養基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌活化培養基:取新鮮去皮土豆200g,切碎至粒度小于5mmX5mmX5mm,加1000ml水煮沸20分鐘,過濾后濾液用水稀釋至1000ml，然后再加入葡萄糖20g，瓊脂20g即可； 3)霉菌擴大培養基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌擴大培養基:麩皮1000g,水 1000ml。
3.根據權利要求1所述的一種利用降解處理四環素后的菌渣生產酵母浸膏的方法，其特征在于:所述步驟S4中的接種量為5%。
4.根據權利要求1所述的一種利用降解處理四環素后的菌渣生產酵母浸膏的方法，其特征在于:所述步驟Slb中的接種量為3 %。
5.根據權利要求1所述的一種利用降解處理四環素后的菌渣生產酵母浸膏的方法，其特征在于:所述步驟Slc中的接種量為3%。
6.根據權利要求1所述的一種利用降解處理四環素后的菌渣生產酵母浸膏的方法，其特征在于:所述步驟S2(2)中的接種量為3%。
【文檔編號】C12R1/865GK103555583SQ201310525034
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月22日 優先權日:2013年10月22日
【發明者】馬玉龍, 馬凌, 王敏, 馬琳 申請人:寧夏大學