專利名稱：一種能夠保護豬腸道健康的微生物發酵飼料的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種能夠保護豬腸道健康的微生物發酵飼料的制備方法，主要用于改善豬腸道健康，屬于微生態制劑技術領域。
背景技術：
隨著人們生活水平的不斷提高，畜產品的質量需求不斷提高，養殖業正向規模化、 標準化方向發展。在養豬業中，豬的抗病能力、消化能力非常關鍵。目前，豬飼料中抗生素和激素的添加非常普遍，飼料微生態添加劑對高溫、胃酸和膽鹽不穩定，致使只有少數菌株進入腸道后具有活性，從而達不到發揮作用所需要的活菌數量，另外還有一些不穩定，保質期短的這些問題，從而影響了豬的生長效果。正確的飼養豬和科學的實施好方法至關重要， 要讓豬體內得到正常的發育、生長，防止消化不良以及對營養物質吸收不充分。

發明內容
本發明的目的是提供一種能夠保護豬腸道健康的微生物發酵飼料的制備方法，所得的微生物發酵飼料具有有效改善豬腸道環境，促進消化，提高豬的生長速度，提高抗病能力的作用，對養豬業的發展有著重要的意義。為了達到上述目的，本發明提供了一種微生物發酵飼料的制備方法，其特征在于， 包括將植物乳桿菌菌種和酪酸梭菌菌種經過活化、第一次液體發酵培養、第二次液體發酵培養以及固體發酵培養后，將所得的植物乳桿菌固體發酵培養物和酪酸梭菌固體發酵培養物冷凍干燥，并混合得到微生物發酵飼料。優選地，所述的植物乳桿菌菌種的活化步驟為將植物乳桿菌菌種接種到滅菌后的重量百分比濃度為0. 5% 1. 5%的生理鹽水中，震蕩使其充分混勻，靜置活化。優選地，所述的酪酸梭菌菌種的活化步驟為將酪酸梭菌菌種接種到滅菌后的重量百分比濃度為0. 5% 1. 5%的生理鹽水中，震蕩使其充分混勻，靜置活化。優選地，所述的植物乳桿菌菌種的第一次液體發酵培養的步驟為在麥芽汁中加入酵母膏和碳酸鈣得到液體發酵培養基，麥芽汁、酵母膏和碳酸鈣的重量比為100 0. 1 1 :0. 1 1，將液體發酵培養基滅菌，將活化后的植物乳桿菌菌種接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上進行液體發酵培養。優選地，所述的酪酸梭菌菌種的第一次液體發酵培養的步驟為在蒸餾水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣得到液體發酵培養基，蒸餾水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣的重量比為100 :0. 5 4 :0. 5 3 0. 1 1，將液體發酵培養基滅菌，將活化后的酪酸梭菌菌種接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上進行液體發酵培養。優選地，所述的植物乳桿菌菌種的第二次液體發酵培養的步驟為在麥芽汁中加入酵母膏和碳酸鈣得到液體發酵培養基，麥芽汁、酵母膏和碳酸鈣的重量比為100 0. 1 1 :ο. 1 1，將液體發酵培養基滅菌，將第一次液體發酵培養的產物接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上進行液體發酵培養。
優選地，所述的酪酸梭菌菌種的第二次液體發酵培養的步驟為在蒸餾水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣得到液體發酵培養基，蒸餾水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣的重量比為100 :0. 5 4 :0. 5 3 0. 1 1，將液體發酵培養基滅菌，將第一次液體發酵培養的產物接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上進行液體發酵培養。優選地，所述的植物乳桿菌菌種的固體發酵培養的步驟為將玉米粉、麩皮和豆粕混合得到固體混合物，玉米粉、麩皮和豆粕的重量比為50 60 20 25 15 20，將固體混合物與脫脂奶粉按重量比100 10 30混合，滅菌后，接種第二次液體發酵培養的產物， 混合均勻，將所得的混合物攤平，厚度保持在15 20cm，蓋上薄膜封好，在30 40°C下進行固體發酵培養。優選地，所述的酪酸梭菌菌種的固體發酵培養的步驟為將玉米粉、糖蜜、大豆餅粉和碳酸鈣混合得到固體混合物，玉米粉、糖蜜、大豆餅粉和碳酸鈣的重量比為30 40 30 40 10 15 5 10，將固體混合物與脫脂奶粉按重量比100 10 30混合，滅菌后， 接種第二次液體發酵培養的產物，混合均勻，將所得的混合物攤平，厚度保持在15 20cm， 蓋上薄膜封好，在30 40°C下進行固體發酵培養。優選地，所述的冷凍干燥后，植物乳桿菌固體發酵培養物和酪酸梭菌固體發酵培養物的水分重量含量皆低于10%。優選地，所述的植物乳桿菌固體發酵培養物和酪酸梭菌固體發酵培養物的混合重量比為10 18 12 15。本發明具有很好的生物學功能，能夠維持腸道微生態平衡作用，改善腸道菌群，抗突變作用，對豬的生長速度有很大的提高，有效降低了豬的腹瀉率及幼豬的死亡率，提高了產能并節約用藥成本，大大提高了養豬效率。本發明的制備方法簡單實用，功能強大，具有很好的市場前景。
具體實施例方式下面結合實施例來具體說明本發明。實施例1 微生物發酵飼料的制備方法
(1)活化將植物乳桿菌菌種(LactcAacillus planta，購自中國農業微生物保藏管理中心，保藏編號ACCCl 1118)以體積比2 100接種到經121 °C滅菌20分鐘并冷卻至25°C 的重量百分比濃度為0. 9%的生理鹽水IOml中，震蕩使其充分混勻，靜置活化30分鐘。將酪酸梭菌菌種(Clostridium butyricum，購自中國微生物菌種保藏中心，保藏編號CGMCC 1. 0209)以體積比2 100接種到經121°C滅菌20分鐘并冷卻至25°C的重量百分比濃度為 0. 9%的生理鹽水IOml中，震蕩使其充分混勻，靜置活化30分鐘。(2) —級種子的制備在麥芽汁中加入酵母膏和碳酸鈣得到液體發酵培養基，麥芽汁、酵母膏和碳酸鈣的重量比為100 0. 1 0. 1，將液體發酵培養基IOOml置于250ml三角瓶內，經121°C滅菌20分鐘并冷卻至25°C，將活化后的植物乳桿菌菌種以體積比1 :10接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上以37°C，搖床轉速180轉/分鐘厭氧培養M小時作為一級種子。在蒸餾水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣得到液體發酵培養基，蒸餾水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣的重量比為100 0. 5 0. 5 0. 1，將液體發酵培養基IOOml置于250ml三角瓶內，經121°C滅菌20分鐘并冷卻至25°C，將活化后的酪酸梭菌菌種以體積比1 10接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上以37°C，搖床轉速180轉/分鐘厭氧培養M小時作為一級種子。(3)二級種子的制備在麥芽汁中加入酵母膏和碳酸鈣得到液體發酵培養基，麥芽汁、酵母膏和碳酸鈣的重量比為100 0. 1 0. 1，將液體發酵培養基IOOml置于250ml三角瓶內，經121°C滅菌20分鐘并冷卻至25°C，將植物乳桿菌一級種子以體積比1 :10接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上以37°C，搖床轉速180轉/分鐘厭氧培養M小時作為二級種子。在蒸餾水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣得到液體發酵培養基，蒸餾水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣的重量比為100 0. 5 0. 5 0. 1，將液體發酵培養基IOOml置于250ml三角瓶內，經121 °C滅菌20分鐘并冷卻至25°C，將酪酸梭菌一級種子以體積比1 10接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上以37°C，搖床轉速180轉/分鐘厭氧培養M小時作為二級種子。(4)固體發酵培養將玉米粉、麩皮和豆粕混合得到固體混合物，玉米粉、麩皮和豆粕的重量比為50 25 :20，將固體混合物與脫脂奶粉按重量比100 10混合，在100°C溫度下蒸40分鐘，然后冷卻至25°C，按照體積比100 :5接種植物乳桿菌二級種子，混合均勻，將所得的混合物攤平，厚度保持在15cm，蓋上薄膜封好，在30°C下進行培養48h。將玉米粉、糖蜜、大豆餅粉和碳酸鈣混合得到固體混合物，玉米粉、糖蜜、大豆餅粉和碳酸鈣的重量比為30 40 15 :10，將固體混合物與脫脂奶粉按重量比100 10混合，在 100°C溫度下蒸40分鐘，然后冷卻至25°C，以體積比100 10接種酪酸梭菌二級種子，混合均勻，將所得的混合物攤平，厚度保持在15cm，蓋上薄膜封好，在30°C下進行培養48h。(5)植物乳桿菌固體發酵產物和酪酸梭菌固體發酵產物分別在冷凍干燥機里面凍干，直至固態混合物中的水分重量含量皆低于10%，即可停止干燥，經粉碎后，將植物乳桿菌固體發酵產物和酪酸梭菌固體發酵產物按重量比1. 5 2混合，得到微生物發酵飼料。實施例2 微生物發酵飼料的制備方法
(1)活化將植物乳桿菌菌種(LactcAacillus planta，購自中國農業微生物保藏管理中心，保藏編號ACCCl 1118)以體積比2 100接種到經121 °C滅菌20分鐘并冷卻至25°C 的重量百分比濃度為1. 5%的生理鹽水IOml中，震蕩使其充分混勻，靜置活化30分鐘。將酪酸梭菌菌種(Clostridium butyricum，購自中國微生物菌種保藏中心，保藏編號CGMCC 1. 0209)以體積比2 100接種到經121°C滅菌20分鐘并冷卻至25°C的重量百分比濃度為 1. 5%的生理鹽水IOml中，震蕩使其充分混勻，靜置活化30分鐘。(2) —級種子的制備在麥芽汁中加入酵母膏和碳酸鈣得到液體發酵培養基，麥芽汁、酵母膏和碳酸鈣的重量比為100 1 :1，將液體發酵培養基IOOml置于250ml三角瓶內， 經121°C滅菌20分鐘并冷卻至25°C，將活化后的植物乳桿菌菌種以體積比1 :10接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上以37°C，搖床轉速180轉/分鐘厭氧培養M小時作為一級種子。在蒸餾水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣得到液體發酵培養基，蒸餾水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣的重量比為100 4 3 :1，將液體發酵培養基IOOml置于250ml三角瓶內，經 121°C滅菌20分鐘并冷卻至25°C，將活化后的酪酸梭菌菌種以體積比1 :10接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上以37°C，搖床轉速180轉/分鐘厭氧培養M小時作為一級種子。(3)二級種子的制備在麥芽汁中加入酵母膏和碳酸鈣得到液體發酵培養基，麥芽汁、酵母膏和碳酸鈣的重量比為100 1 :1，將液體發酵培養基IOOml置于250ml三角瓶內， 經121°C滅菌20分鐘并冷卻至25°C，將植物乳桿菌一級種子以體積比1 :10接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上以37°C，搖床轉速180轉/分鐘厭氧培養24小時作為二級種子。在蒸餾水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣得到液體發酵培養基，蒸餾水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣的重量比為100 4 3 :1，將液體發酵培養基IOOml置于250ml三角瓶內，經 121°C滅菌20分鐘并冷卻至25°C，將酪酸梭菌一級種子以體積比1 :10接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上以37°C，搖床轉速180轉/分鐘厭氧培養M小時作為二級種子。(4)固體發酵培養將玉米粉、麩皮和豆粕混合得到固體混合物，玉米粉、麩皮和豆粕的重量比為60 20 :15，將固體混合物與脫脂奶粉按重量比100 30混合，在100°C溫度下蒸40分鐘，然后冷卻至25°C，按照體積比100 :5接種植物乳桿菌二級種子，混合均勻，將所得的混合物攤平，厚度保持在20cm，蓋上薄膜封好，在40°C下進行培養48h。將玉米粉、糖蜜、大豆餅粉和碳酸鈣混合得到固體混合物，玉米粉、糖蜜、大豆餅粉和碳酸鈣的重量比為40 30 10 :5，將固體混合物與脫脂奶粉按重量比100 30混合，在 100°C溫度下蒸40分鐘，然后冷卻至25°C，以體積比100 10接種酪酸梭菌二級種子，混合均勻，將所得的混合物攤平，厚度保持在20cm，蓋上薄膜封好，在40°C下進行培養48h。(5)植物乳桿菌固體發酵產物和酪酸梭菌固體發酵產物分別在冷凍干燥機里面凍干，直至固態混合物中的水分重量含量皆低于10%，即可停止干燥，經粉碎后，將植物乳桿菌固體發酵產物和酪酸梭菌固體發酵產物按重量比1. 8 1. 5混合，得到微生物發酵飼料。實施例3 微生物發酵飼料的制備方法
(1)活化將植物乳桿菌菌種(LactcAacillus planta，購自中國農業微生物保藏管理中心，保藏編號ACCCl 1118)以體積比2 100接種到經121 °C滅菌20分鐘并冷卻至25°C 的重量百分比濃度為0. 9%的生理鹽水IOml中，震蕩使其充分混勻，靜置活化30分鐘。將酪酸梭菌菌種(Clostridium butyricum，購自中國微生物菌種保藏中心，保藏編號CGMCC 1. 0209)以體積比2 100接種到經121°C滅菌20分鐘并冷卻至25°C的重量百分比濃度為 0. 9%的生理鹽水IOml中，震蕩使其充分混勻，靜置活化30分鐘。(2) —級種子的制備在麥芽汁中加入酵母膏和碳酸鈣得到液體發酵培養基，麥芽汁、酵母膏和碳酸鈣的重量比為100 0. 5 0. 6，將液體發酵培養基IOOml置于250ml三角瓶內，經121°C滅菌20分鐘并冷卻至25°C，將活化后的植物乳桿菌菌種以體積比1 :10接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上以37°C，搖床轉速180轉/分鐘厭氧培養M小時作為一級種子。在蒸餾水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣得到液體發酵培養基，蒸餾水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣的重量比為100 2 1.5 0. 2，將液體發酵培養基IOOml置于250ml三角瓶內，經121 °C滅菌20分鐘并冷卻至25°C，將活化后的酪酸梭菌菌種以體積比1 10接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上以37°C，搖床轉速180轉/分鐘厭氧培養M小時作為一級種子。
(3)二級種子的制備在麥芽汁中加入酵母膏和碳酸鈣得到液體發酵培養基，麥芽汁、酵母膏和碳酸鈣的重量比為100 0. 5 0. 6，將液體發酵培養基IOOml置于250ml三角瓶內，經121°C滅菌20分鐘并冷卻至25°C，將植物乳桿菌一級種子以體積比1 :10接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上以37°C，搖床轉速180轉/分鐘厭氧培養M小時作為二級種子。在蒸餾水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣得到液體發酵培養基，蒸餾水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣的重量比為100 2 1.5 0. 2，將液體發酵培養基IOOml置于250ml三角瓶內，經121 °C滅菌20分鐘并冷卻至25°C，將酪酸梭菌一級種子以體積比1 10接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上以37°C，搖床轉速180轉/分鐘厭氧培養M小時作為二級種子。(4)固體發酵培養將玉米粉、麩皮和豆粕混合得到固體混合物，玉米粉、麩皮和豆粕的重量比為陽25 :17，將固體混合物與脫脂奶粉按重量比100 20混合，在100°C溫度下蒸40分鐘，然后冷卻至25°C，按照體積比100 :5接種植物乳桿菌二級種子，混合均勻，將所得的混合物攤平，厚度保持在17cm，蓋上薄膜封好，在35°C下進行培養48h。將玉米粉、糖蜜、大豆餅粉和碳酸鈣混合得到固體混合物，玉米粉、糖蜜、大豆餅粉和碳酸鈣的重量比為35 35 12 :7，將固體混合物與脫脂奶粉按重量比100 20混合，在 100°C溫度下蒸40分鐘，然后冷卻至25°C，以體積比100 10接種酪酸梭菌二級種子，混合均勻，將所得的混合物攤平，厚度保持在17cm，蓋上薄膜封好，在35°C下進行培養48h。(5)植物乳桿菌固體發酵產物和酪酸梭菌固體發酵產物分別在冷凍干燥機里面凍干，直至固態混合物中的水分重量含量皆低于10%，即可停止干燥，經粉碎后，將植物乳桿菌固體發酵產物和酪酸梭菌固體發酵產物按重量比2 1. 5混合，得到微生物發酵飼料。應用例
1，材料本發明所得的微生物發酵飼料。2，試驗動物和分組選擇90日齡斷奶仔豬40頭，分成對照組和試驗組，每組20 頭。3，試驗方法
對照組飼喂基礎日糧+普通飼料，重量比為9 :1。試驗組飼喂基礎日糧+本發明所得的微生物發酵飼料，重量比為9 :1。以組為單位，每天早晨詳細記錄每窩仔豬重量、腹瀉等數據。最后計算全期的平均日增重、平均費用、腹瀉比例情況等性能指標，對比如下
組別頭數腹瀉比例％生病比例％頭均治療費用平均日增重豬舍氣味對照組20頭10%20%13. 50 元364g臭味重試驗組20頭0%5%6. 10 元545g臭味輕
結果分析本發明產品有效降低了育肥豬的腹瀉率和生病率，治療費用降低了 50%以上，有效提高了日增重量，減輕了排放糞便的臭味，差異性顯著。綜合提高了豬的生長速度， 提高了產能并節約用藥成本，大大提高了養豬效率。
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權利要求
1.一種微生物發酵飼料的制備方法，其特征在于，包括將植物乳桿菌菌種和酪酸梭菌菌種經過活化、第一次液體發酵培養、第二次液體發酵培養以及固體發酵培養后，將所得的植物乳桿菌固體發酵培養物和酪酸梭菌固體發酵培養物冷凍干燥，并混合得到微生物發酵飼料。
2.如權利要求1所述的微生物發酵飼料的制備方法，其特征在于，所述的植物乳桿菌菌種的活化步驟為將植物乳桿菌菌種接種到滅菌后的重量百分比濃度為0. 5% 1. 5%的生理鹽水中，震蕩使其充分混勻，靜置活化。
3.如權利要求1所述的微生物發酵飼料的制備方法，其特征在于，所述的酪酸梭菌菌種的活化步驟為將酪酸梭菌菌種接種到滅菌后的重量百分比濃度為0. 5% 1. 5%的生理鹽水中，震蕩使其充分混勻，靜置活化。
4.如權利要求1所述的微生物發酵飼料的制備方法，其特征在于，所述的植物乳桿菌菌種的第一次液體發酵培養的步驟為在麥芽汁中加入酵母膏和碳酸鈣得到液體發酵培養基，麥芽汁、酵母膏和碳酸鈣的重量比為100 :0. 1 1 :0. 1 1，將液體發酵培養基滅菌，將活化后的植物乳桿菌菌種接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上進行液體發酵培養。
5.如權利要求1所述的微生物發酵飼料的制備方法，其特征在于，所述的酪酸梭菌菌種的第一次液體發酵培養的步驟為在蒸餾水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣得到液體發酵培養基，蒸餾水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣的重量比為100 :0. 5 4 :0. 5 3 :0. 1 1，將液體發酵培養基滅菌，將活化后的酪酸梭菌菌種接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上進行液體發酵培養。
6.如權利要求1所述的微生物發酵飼料的制備方法，其特征在于，所述的植物乳桿菌菌種的第二次液體發酵培養的步驟為在麥芽汁中加入酵母膏和碳酸鈣得到液體發酵培養基，麥芽汁、酵母膏和碳酸鈣的重量比為100 :ο. 1 1 :0. 1 1，將液體發酵培養基滅菌， 將第一次液體發酵培養的產物接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上進行液體發酵培養。
7.如權利要求1所述的微生物發酵飼料的制備方法，其特征在于，所述的酪酸梭菌菌種的第二次液體發酵培養的步驟為在蒸餾水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣得到液體發酵培養基，蒸餾水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸鈣的重量比為100 :0. 5 4 :0. 5 3 :0. 1 1，將液體發酵培養基滅菌，將第一次液體發酵培養的產物接種到所述的液體發酵培養基中，在搖床上進行液體發酵培養。
8.如權利要求1所述的微生物發酵飼料的制備方法，其特征在于，所述的植物乳桿菌菌種的固體發酵培養的步驟為將玉米粉、麩皮和豆粕混合得到固體混合物，玉米粉、麩皮和豆粕的重量比為50 60 20 25 15 20，將固體混合物與脫脂奶粉按重量比100 10 30混合，滅菌后，接種第二次液體發酵培養的產物，混合均勻，將所得的混合物攤平， 厚度保持在15 20cm，蓋上薄膜封好，在30 40°C下進行固體發酵培養。
9.如權利要求1所述的微生物發酵飼料的制備方法，其特征在于，所述的酪酸梭菌菌種的固體發酵培養的步驟為將玉米粉、糖蜜、大豆餅粉和碳酸鈣混合得到固體混合物，玉米粉、糖蜜、大豆餅粉和碳酸鈣的重量比為30 40 30 40 10 15 :5 10，將固體混合物與脫脂奶粉按重量比100 10 30混合，滅菌后，接種第二次液體發酵培養的產物，混合均勻，將所得的混合物攤平，厚度保持在15 20cm，蓋上薄膜封好，在30 40°C下進行固體發酵培養。
10.如權利要求1所述的微生物發酵飼料的制備方法，其特征在于，所述的植物乳桿菌固體發酵培養物和酪酸梭菌固體發酵培養物的混合重量比為10 18 12 15。
全文摘要
本發明提供了一種微生物發酵飼料的制備方法，其特征在于，包括將植物乳桿菌菌種和酪酸梭菌菌種經過活化、第一次液體發酵培養、第二次液體發酵培養以及固體發酵培養后，將所得的植物乳桿菌固體發酵培養物和酪酸梭菌固體發酵培養物冷凍干燥，并混合得到微生物發酵飼料。本發明具有很好的生物學功能，能夠維持腸道微生態平衡作用，改善腸道菌群，抗突變作用，對豬的生長速度有很大的提高，有效降低了豬的腹瀉率及幼豬的死亡率，提高了產能并節約用藥成本，大大提高了養豬效率。本發明的制備方法簡單實用，功能強大，具有很好的市場前景。
文檔編號C12R1/145GK102406068SQ20111031652
公開日2012年4月11日 申請日期2011年10月18日 優先權日2011年10月18日
發明者江瀚, 馬正馳 申請人:上海創博生態工程有限公司