專利名稱：烯還原酶基因和蛋白及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物工程技術領域，尤其涉及烯還原酶基因和蛋白及其應用。
背景技術：
α, β-不飽和羰基化合物及其衍生物還原為手性化合物的反應是藥物化學和有 機合成中的重要反應。α，β-不飽和羰基化合物及其衍生物的還原，一般有兩種途徑一 種是發生1，4-還原得飽和羰基化合物；另一種是發生1，2_還原得烯丙醇。在現代工業生 產中，常需要使α，不飽和羰基化合物進行選擇還原，即僅還原α，碳碳雙鍵或碳 氧雙鍵，另一官能團則不受影響。這對催化劑的選擇提出了很高的要求。目前，α，β -不飽和羰基化合物的手性還原主要采用化學方法。利用化學方法還 原通常需要Pb/c、純氫及手性拆分，不僅成本高，操作繁瑣費時，且容易造成環境污染。利用酶促反應的生物加工和轉化是近年來新興的生物工程技術，可以在較為溫和 條件下以經濟、高效的方法轉化加工獲得高純度的產品，目前已經在生物化工領域得到應 用。烯還原酶或具有類似功能的酶蛋白的發現使α，β-不飽和羰基化合物(烯醛、烯酮) 及其衍生物(酯、內酯、環型酰亞胺、環型酸酐)酶法手性還原的生物轉化成為可能。但是， 目前仍缺少高效、專一的烯還原酶，對α，β _不飽和羰基化合物及其衍生物能進行選擇地 手性還原。
發明內容
本發明要解決缺少高效、專一的烯還原酶的技術問題，提供一種烯還原酶基因和 蛋白，該烯還原酶可有效催化α，β-不飽和羰基化合物及其衍生物的碳碳雙鍵的手性還原。此外，還需要提供一種烯還原酶在還原α，β _不飽和羰基化合物及其衍生物的 生產中的應用。為了解決上述技術問題，本發明通過如下技術方案實現在本發明的一個方面，提供了一種烯還原酶，包含SEQ ID NO. 1 3中任意一條
氨基酸序列。在本發明中，包含SEQ ID NO. 1的烯還原酶來源于Pichia guilliermondii JCM 1539 菌株；包含 SEQ ID NO. 2 的烯還原酶來源于 Schizosaccharomyces pombe ATCC 24751 菌株；包含 SEQ ID NO. 3 的烯還原酶來源于 Vanderwaltozyma polyspora NRRL Y-8283 菌株。在本發明的另一方面，提供了一種烯還原酶基因，包含編碼SEQ ID NO. 1 3中 任意一條氨基酸序列的核苷酸序列。優選的，所述烯還原酶基因包含SEQ ID N0. 4 6中任意一條核苷酸序列。在本發明的另一方面，還提供了一種包含上述烯還原酶基因的重組載體。所述重組載體包括重組克隆載體或重組表達載體，重組表達載體包括重組原核表達載體、重組真核表達載體。在本發明的另一方面，還提供了一種宿主細胞，該宿主細胞包含上述重組載體，或 已用上述烯還原酶基因序列轉化或轉染。在本發明的另一方面，還提供了一種上述烯還原酶的用途，用于還原α，β-不飽 和羰基化合物及其衍生物。優選的，用于選擇地手性還原α，β _不飽和羰基化合物及其衍生物的碳碳雙鍵。在本發明的另一方面，還提供了一種烯還原酶基因在制備還原α，不飽和羰 基化合物及其衍生物的產品中的應用。優選的，所述α，β _不飽和羰基化合物及其衍生物包括
權利要求
一種烯還原酶，其特征在于，包含SEQ ID NO.1～3中任意一條氨基酸序列。
2.一種烯還原酶基因，其特征在于，包含編碼SEQ ID NO. 1 3中任意一條氨基酸序 列的核苷酸序列。
3.根據權利要求2所述的烯還原酶基因，其特征在于，所述烯還原酶基因包含SEQ IDN0. 4 6中任意一條核苷酸序列。
4.一種重組載體，其特征在于，包含權利要求2所述的烯還原酶基因。
5.一種宿主細胞，其特征在于，包含權利要求4所述的重組載體，或已用權利要求2所 述烯還原酶基因序列轉化或轉染。
6.權利要求1所述烯還原酶的用途，其特征在于，用于還原α，β-不飽和羰基化合物 及其衍生物。
7.根據權利要求6所述的用途，其特征在于，用于手性還原α，不飽和羰基化合物 及其衍生物的碳碳雙鍵。
8.根據權利要求6所述的用途，其特征在于，所述α，β_不飽和羰基化合物及其衍生
9.權利要求2所述的烯還原酶基因在制備還原α，β_不飽和羰基化合物及其衍生物 的產品中的應用。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述α，β_不飽和羰基化合物及其衍其中，R 禾口 包括!1、^0)(^扒吣2、八1-、卩、(1、81~、-01 = CH(CH2)nCH3、或-(CH2)nCH3。物包括生物包括
全文摘要
本發明公開了一種烯還原酶，包含SEQ ID NO.1～3中任意一條氨基酸序列。本發明還公開了烯還原酶基因，其包含編碼上述烯還原酶的核苷酸序列。本發明還公開了上述烯還原酶用于還原α，β-不飽和羰基化合物及其衍生物的用途。本發明烯還原酶，能高效地催化α，β-不飽和羰基化合物及其衍生物的碳碳雙鍵的手性還原，對于醫藥、食品添加劑、農業化學產品等物質的工業生產具有重要意義。
文檔編號C12N1/15GK101935639SQ20101021643
公開日2011年1月5日 申請日期2010年6月30日 優先權日2010年6月30日
發明者余允東, 孫勇, 王曉霞, 祝俊, 陶軍華 申請人:尚科生物醫藥(上海)有限公司