基于褐飛虱蜜露的轉基因抗除草劑水稻安全性的評價方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于轉基因作物生態風險評價技術領域，具體涉及基于褐飛虱蜜露的轉基因抗除草劑水稻安全性的評價方法，特別是基于褐飛虱蜜露的轉基因抗除草劑水稻對捕食性天敵黑肩綠盲蝽安全性評價方法。
【背景技術】
[0002]褐飛虱lugens (Stal) (Brown planthopper，簡稱 BPH)是我國及許多亞洲國家當前水稻生產上的首要害蟲。褐飛虱取食水稻后會排泄蜜露，蜜露排泄的多少與取食量成正比，取食越多，排泄的蜜露也相應增多，因此，褐飛虱蜜露排泄量常作為其對水稻致害性的指標，現也廣泛應用于施用農藥、肥料后，或氣候變化后褐飛虱與水稻的互作關系研宄上。
[0003]黑肩綠盲蝽lividipennis Reuter是水稻害蟲褐飛虱的重要天敵，在控制褐飛虱自然種群數量上發揮了很大作用。現有關轉基因水稻對黑肩綠盲蝽的安全性評價的研宄主要是在基因傳遞上和對黑肩綠盲蝽生物學特性的影響上，如轉Bt {Bacillusthuringiensis，蘇云金桿菌)基因水稻被褐飛虱取食后，黑肩綠盲蝽又取食褐飛虱卵，Bt^因在這一食物鏈中的傳遞；又如褐飛虱先取食轉基因水稻，黑肩綠盲蝽再捕食在轉基因水稻上生長發育的褐飛虱所產的卵，從而研宄轉基因水稻對黑肩綠盲蝽生物學特性的影響。現有資料中收集褐飛虱蜜露的是用膜將褐飛虱套在稻桿上，過一段時間再收集，每次收集到的蜜露很少，需在多根稻桿上套上膜，再將收集到的蜜露匯集，工序繁瑣、效率低?’另一方面，膜內常常有水蒸氣，容易影響所收集的蜜露的純度；稻桿豎著放置，收集的蜜露也容易漏出來。
[0004]褐飛虱取食水稻后，排泄的蜜露富含多種營養物質，天敵昆蟲會取食褐飛虱蜜露，但是褐飛虱取食轉基因水稻后分泌的蜜露對捕食性天敵黑肩綠盲蝽安全性評價，對于轉基因抗除草劑水稻環境釋放的生態風險評估也非常重要，目前還未見此類報道。

【發明內容】

[0005]本發明針對上述現狀，提供了一種基于褐飛虱蜜露的轉基因抗除草劑水稻安全性的評價方法，對黑肩綠盲蝽直接取食褐飛虱取食轉基因水稻后分泌的蜜露對黑肩綠盲蝽壽命和捕食能力等方面的影響進行評價，從而更全面、科學的評價抗除草劑轉基因水稻的生態安全性。
[0006]對此，本發明提供了一種基于褐飛虱蜜露的轉基因抗除草劑水稻的環境安全性評價方法，包括以下步驟:
步驟S1:確定比較樣本的水稻品種得到各比較樣本，分別收集所述各比較樣本水稻上飼養的褐飛虱分泌的蜜露，得到各比較樣本水稻的褐飛虱蜜露；
步驟S2:用載體分別吸收比較樣本水稻的褐飛虱蜜露，然后將吸收了褐飛虱蜜露的載體分別裝入喂食容器中得到各比較樣本褐飛虱蜜露的喂食容器，所述喂食容器的側壁設有通孔；準備與樣本數量相同的試驗箱，將所述各比較樣本褐飛虱蜜露的喂食容器分別放入各試驗箱中；
步驟S3:將24 h內羽化的黑肩綠盲蝽成蟲分別裝入到所述步驟S2裝有比較樣本褐飛虱蜜露喂食容器的各試驗箱中，定時檢查黑肩綠盲蝽成蟲的存活數，直到成蟲死亡；
步驟S4:準備帶有褐飛虱卵的各比較樣本的水稻稻莖；將帶有褐飛虱卵的各比較樣本的水稻稻莖放入到所述步驟S2裝有對應的比較樣本褐飛虱蜜露喂食容器的各試驗箱中，將24 h內羽化的黑肩綠盲蝽雌成蟲也裝入到所述各試驗箱中，24h后，解剖稻株，得到褐飛虱卵被黑肩綠盲蝽捕食的數量；
步驟S5:分析比較取食了各比較樣本褐飛虱蜜露的黑肩綠盲蝽的成蟲壽命，以及褐飛虱卵捕食量的差異顯著性，分析轉基因抗除草劑水稻對黑肩綠盲蝽生物學特性和捕食能力的影響。
[0007]上述技術方案，將載體裝入帶孔的喂食容器內，可以避免蟲與載體直接接觸，減少了影響因素。如果用載體吸收稻株傷流液直接來喂蟲子，蟲子接觸液體的面積大，容易沾濕翅膀、身體，影響實驗效果。
[0008]作為本發明的進一步改進，所述比較樣本水稻品種為三個，分別為轉基因抗除草劑水稻、非轉基因親本對照水稻和非轉基因感蟲對照水稻。
[0009]作為本發明的進一步改進，所述步驟SI中收集褐飛虱蜜露的方法為:將水稻稻桿放置在收集容器中，所述收集容器底部設有通孔，然后將褐飛虱放入所述收集容器中，用吸水透氣材料片或膜覆蓋收集容器的口部，從收集容器底部的通孔收集褐飛虱蜜露。所述吸水透氣材料片或膜優選濾紙。采用此種方案，將褐飛虱放入后，便于集中收集褐飛虱蜜露，操作簡單、效率高，且不容易漏出；采用濾紙覆蓋收集容器的口部，減少了水蒸氣的影響。
[0010]作為本發明的進一步改進，所述收集容器為漏斗形，所述收集容器的口部設有對稱的凹槽，所述水稻稻桿水平放入到對稱的凹槽中；所述收集容器在漏斗形的上部與傾斜部之間采用隔斷物分開，所述隔斷物上設有通孔。采用此技術方案，便于水稻稻桿的固定，避免褐飛虱跑出，同時又收集了蜜露。
[0011 ] 作為本發明的進一步改進，所述水稻稻桿與凹槽之間設有所述水稻稻桿與凹槽之間設有棉花、棉球或者棉布中至少一種。即將所述將水稻稻桿放置在收集容器中時，先在所述凹槽內墊上棉花、棉球或者棉布，然后將水稻稻桿水平放入到收集容器對稱的凹槽內；或者先在與凹槽對應的水稻稻桿的位置先用棉花、棉球或者棉布裹住稻桿，然后再水稻稻桿水平放入到收集容器對稱的凹槽內。采用此技術方案，棉花、棉球或者棉布裹住凹槽內的稻桿，減少了對稻桿的擠壓，同時能更好地固定水稻稻桿和密封收集容器，避免褐飛虱跑出。
[0012]作為本發明的進一步改進，所述收集容器的口部為方形。采用此技術方案，相對圓形口部的漏斗更容易固定稻桿，而且可以放長度相等的稻桿，實現定量收集。
[0013]作為本發明的進一步改進，所述隔斷物為紗網。采用此技術方案，避免褐飛虱跑出，同時便于更好地收集褐飛虱蜜露。
[0014]作為本發明的進一步改進，步驟S2中，所述喂食容器為圓柱形中空管。
[0015]作為本發明的進一步改進，所述步驟S3中，將24 h內羽化的黑肩綠盲蝽成蟲裝入到試驗箱后，定時用膠頭滴管給載體補充各比較樣本的褐飛虱蜜露，保證載體濕潤。
[0016]作為本發明的進一步改進，所述步驟S4中，準備帶有褐飛虱卵的各比較樣本水稻稻莖的方法為，將懷卵褐飛虱雌蟲分別在各比較樣本的稻莖上產卵24h，得到帶有褐飛虱卵的各比較樣本的水稻稻莖。
[0017]作為本發明的進一步改進，還包括以蒸餾水代替褐飛虱蜜露喂食作為對照，重復步驟S2到步驟S5的步驟，即還包括:
將浸泡蒸餾水的載體，裝入另外一個喂食容器中；將含有浸泡蒸餾水載體的喂食容器放入另外一個試驗箱中，定時檢查黑肩綠盲蝽成蟲的存活數，直到成蟲死亡；將帶有褐飛虱卵的任一比較樣本的水稻稻莖放入到所述裝有浸泡蒸餾水載體喂食容器的試驗箱中，將24h內羽化的黑肩綠盲蝽雌成蟲也裝入到試驗箱中，24h后，解剖稻株，得到褐飛虱卵被黑肩綠盲蝽捕食的數量，將得到的數據作為對照數據。
[0018]作為本發明的進一步改進，所述黑肩綠盲蝽為室內用TNl水稻品種飼養的實驗種群；所述褐飛虱為在TNl水稻上飼養一代后，再接入蟲籠中的不同水稻品種或品系上飼養得到的種群。
[0019]作為本發明的進一步改進，所述載體為棉球、海綿或棉布中至少一種。
[0020]與現有技術相比，本發明的有益效果為:
本發明提供了基于褐飛虱蜜露的轉基因抗除草劑水稻安全性的評價方法，特別是基于褐飛虱蜜露的轉基因抗除草劑水稻對捕食性天敵黑肩綠盲蝽安全性評價方法，該方法從另外一個角度研宄了褐飛虱取食轉基因水稻后分泌的蜜露對捕食性天敵黑肩綠盲蝽的影響；該方法可在室內測定，使用更加方便，易于控制，準確性高，周期性短，可以為轉基因水稻的環境釋放對天敵昆蟲是否安全提供新的評價方法。
【附圖說明】
[0021]圖1是本發明一種實施例褐飛虱蜜露收集容器的剖視結構示意圖；
圖2是本發明一種實施例褐飛虱蜜露收集容器的俯視圖；
圖3是本發明一種實施例的飼喂裝置的結構示意圖；
圖4是本發明一種實施例的三種褐飛虱蜜露對黑肩綠盲蝽雌成蟲壽命影響對比圖；
圖5是本發明一種實施例的三種褐飛虱蜜露對黑肩綠盲蝽雄成蟲壽命影響對比圖；
圖6是本發明一種實施例的三種褐飛虱蜜露和蒸餾水對黑肩綠盲蝽捕食褐飛虱卵能力的影響對比圖。
[0022]其中，CK:喂食蒸餾水的實驗處理；
HTNl:喂食TNl水稻的褐飛虱排泄的蜜露的實驗處理；
HD68:喂食D68水稻的褐飛虱排泄的蜜露的實驗處理；
HBar68-l:喂食Bar68_l水稻的褐飛虱排泄的蜜露的實驗處理；
圖中，a，b，ab，bc，c表不差異性，相同字母表不兩者差異不顯者，不同字母表不差異顯著。
【具體實施方式】
[0023]本發明提供了一種轉基因抗除草劑水稻對黑肩綠盲蝽環境安全性的評價方法，【具體實施方式】為，包括以下步驟:
步驟S1:分別收集轉基因抗除草劑水稻、非轉基因親本對照水稻和非轉基因感蟲對照水稻上飼養的褐飛虱分泌的蜜露，得到轉基因抗除草劑水稻、非轉基因親本對照水稻和非轉基因感蟲對照水稻的褐飛虱蜜露；
步驟S2:用棉球分別吸收轉基因抗除草劑水稻、非轉基因親本對照水稻和非轉基因感蟲對照水稻的褐飛虱蜜露，然后將吸收了褐飛虱蜜露的棉球分別裝入三個喂食容器中，所述喂食容器的側壁設有通孔；將三個喂食容器分別放入到三個試驗箱中；
步驟S3:將24 h內羽化的黑肩綠盲蝽成蟲分別裝入到三個試驗箱中，每6 h檢查黑肩綠盲蝽成蟲的存活數，直到成蟲死亡；
步驟S4:將懷卵褐飛虱雌蟲分別在轉基因抗除草劑水稻Bar68-1、非轉基因親本對照水稻D68和非轉基因感蟲對照水稻TNl稻莖上產卵24h，得到帶有褐飛虱卵的上述三種水稻稻莖；將這三種帶有褐飛虱卵的水稻稻莖分別放入到步驟S2裝有對應的比較樣本的褐飛虱蜜露喂食容器的三個試驗箱中，將24h內羽化的黑肩綠盲蝽雌成蟲分別裝入到這三個試驗箱中，24h后，解剖稻株，得到褐飛虱卵被黑肩綠盲蝽捕食的數量；
步驟S5:比較采用轉基因抗除草劑水稻的褐飛虱蜜露和非轉基因親本對照、非轉基因感蟲品種的褐飛虱蜜露喂食處理間，黑肩綠盲蝽的成蟲壽命以及褐飛虱卵捕食量的差異顯著性，分析轉基因抗除草劑水稻對黑肩綠盲蝽生物學特性和捕食能力的影響。
[0024]另外，還包括以蒸餾水代替褐飛虱蜜露喂食作為對照，重復步驟S2到步驟S5的內容。
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