一種仔豬專用合生素飼料添加劑及應用的制作方法
【專利摘要】本發明提供了一種合生素飼料添加劑，其包括益生菌株植物乳桿菌（Lactobacillus?plantarum?ZLP001；保藏號為：CGMCC?No.7370）和低聚果糖。本發明將益生菌株植物乳桿菌和低聚果糖相結合且篩選出最優化的重量比，即可發揮兩種添加劑最佳的協同配伍效果，產生的作用高于兩種添加劑單獨使用時的效果。可以在家畜養殖產業領域廣泛推廣應用，具有良好的市場效應和社會效應。
【專利說明】一種仔豬專用合生素飼料添加劑及應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及畜禽養殖領域，具體涉及一種用于提高畜禽生產性能的飼料添加劑。【背景技術】
[0002]仔豬在斷奶后由于食物的突然轉換，環境的變化、以及自身消化系統和免疫系統不成熟等多重影響，極易產生斷奶應激，往往導致仔豬食欲降低、增重減緩甚至減重、腹瀉發病、生長嚴重受阻等。因此，在仔豬斷奶后應積極采取各種措施減少應激反應的發生，增強仔豬的腸道功能和免疫機能，提高仔豬日糧的采食量和消化率，減少仔豬腹瀉、生長受阻等疾病的發生，以保證其正常生長。
[0003]很長一段時間以來，都是通過在飼糧中添加抗生素來預防和解決仔豬斷奶應激的問題。隨著抗生素抗藥性及藥物殘留等問題的發現，研究者開始積極探索抗生素的替代品，力圖找到一種無毒副作用、無污染、無殘留、安全的新型飼料添加劑。乳酸菌制劑作為新型飼料添加劑在微生態制劑中是效果較好的一類，近年來受到廣泛關注。大量研究已證實這類微生物添加劑具有良好的生物學功能，在動物生產中應用，可以抑制腸道病原菌的繁殖，從而防止動物腹瀉，增加營養物質利用率，提高其生產性能。但是，這些益生作用顯著的菌株在通過動物胃腸道前消化道時易被酸性環境破壞，有著到達后腸段菌數少，有效存活率低，定植力弱的不足，而且飼料加工、運輸過程，以及保存方式等對其存活率也有很大程度的影響。因此，限制了乳酸菌類益生菌制劑益生作用的高效發揮。
[0004]有研究表明化學益生素寡糖雖本身不具有營養作用，不被動物消化道吸收利用，但其到達消化道腸段后能被其中的有益微生物選擇性地利用，從而促進腸道有益菌群的增殖，起到改善宿主健康，提高生產性能的作用。已有許多研究將寡糖作為乳酸菌的增殖促進劑來配合使用，借以提高乳酸菌在腸道內的存活率及定植能力，從而進一步提升乳酸菌的益生效果。
[0005]然而，簡單地將有益菌與寡糖進行組合盡管在某種程度上可提高有益菌的存活率及增殖能力，但由于未考慮益生菌與寡糖的雙向選擇性而使其配伍效果的作用不能最大程度發揮，因此不具備廣泛的適用性和高效性。而且到目前為止，尚無適合斷奶仔豬使用的改善仔豬健康狀況，提高生產性能的益生菌寡糖合生素專用產品。

【發明內容】

[0006]本發明的目的是針對現有技術不足提供一種合生素飼料添加劑。
[0007]本發明的另一目的在于提供上述合生素飼料添加劑在提高禽畜生產性能等方面的應用。
[0008]為實現上述目的，本發明采用如下技術方案:
[0009]一種合生素飼料添加劑，其包括植物乳桿菌和低聚果糖。
[0010]上述飼料添加劑，以植物乳桿菌按109CFU/g計與低聚果糖重量比為1:1.25?1: 5，優選植物乳桿菌和低聚果糖重量比為1:2.5。在飼料添加劑中，植物乳桿菌一般以凍干粉的方式加入，凍干粉中植物乳桿菌的含量一般為109CFU/g左右。
[0011]本發明包括含有上述的合生素飼料添加劑的預混料或飼料。所述飼料添加劑在飼料的含量以0.5%?1%為宜，優選為0.7%。在上述飼料中，優選植物乳桿菌的含量為IO6CFU/g飼糧，低聚果糖的含量為0.5%。
[0012]合生素飼料添加劑可有效降低家畜腹瀉率、明顯提高家畜日增重和飼料利用率，可用于提高禽畜生產性能。在應用時，可將所述飼料添加劑直接添加到畜禽飼料中，或將所述飼料添加劑與載體混合制成預混劑，或與其它飼料添加劑或飼料原料混合制成預混料、濃縮料形式飼喂畜禽。
[0013]本發明通過將植物乳桿菌與甘露寡糖、低聚異麥芽糖、低聚果糖、殼寡糖、木寡糖、大豆低聚糖、棉子低聚糖、菊粉等不同種類的寡糖配伍組合進行篩選，通過研究寡糖對植物乳桿菌增殖、產酸能力、代謝產物和抑菌特性的影響，結果發現，將植物乳酸桿菌和低聚果糖進行組合，可明顯促進植物乳桿菌的增殖，該組合的效果顯著優于其他組合。
[0014]設空白對照、植物乳桿菌對照和不同梯度的植物乳桿菌與寡糖配伍組合比例(1:1.25 ; 1:2.5 ; 1:3.75 ; 1:5)進行試驗，研究表明，該植物乳桿菌與低聚果糖在斷奶仔豬日糧中的配伍比例為1:2.5時，斷奶仔豬表現最好的生產性能。仔豬日糧中植物乳桿菌與寡糖配伍比例為1:2.5時，仔豬日增重達到397.7g/d，料重比為1.75，腹瀉指數為0.60。干物質、粗蛋白、鈣和磷的消化率分別為86.74%，85.85%，68.81%和55.32%。糞中乳酸菌的數量為9.20X 108CFU/g，大腸桿菌的數量為1.46X 106CFU/g。血液生化指標顯示其尿素氮水平為4.15mmol/L,白蛋白水平為26.47g/L，免疫球蛋白水平為315.2 μ g/mL，超氧化物歧化酶活性為179.50U/L。
[0015]本發明中所用植物乳桿菌系自主分離的一株高性能的益生菌。該菌株已于2013年3月27日保藏于微生物菌種保藏中心(地址:北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所，100101),分類命名為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)ZLP001,保藏號為CGMCCN0.7370。進而本發明還包括含有所述菌株的飼料添加劑、飼料等等。
[0016]本發明在改善禽畜生產性能上具有如下優點:
[0017]1、本發明添加劑組合物的原料成份分別來自健康動物腸道和天然植物，相比于抗生素類添加劑，它們無毒副作用、無殘留、無污染，是能夠提高畜禽生產性能和產品品質、抑制胃腸道有害菌繁殖、增強機體抗病力和免疫力的綠色飼料添加劑。
[0018]2、本發明添加劑使用方法簡便，只需將兩種綠色飼料添加劑按一定比例配合混勻，添加入禽畜日糧中即可發揮兩種添加劑的協同配伍效果，產生的作用高于兩種添加劑單獨使用時的效果。
[0019]3、本合生素有望替代禽畜飼料中的抗生素類添加劑，改進禽畜飼糧品質，避免抗生素殘留和耐藥性的發生。本合生素產品可提高禽畜日增重，降低料肉比，減輕腹瀉的發生；能增強日糧養分的消化率和機體抗應激能力和免疫能力。本發明能明顯提高禽畜生產性能，且有利于食品安全。
[0020]說明書附圖
[0021]圖1為低聚果糖作為碳源植物乳桿菌生長曲線。
【具體實施方式】[0022]以下實施例用于進一步說明本發明，但不應理解為對本發明的限制。在不背離本發明精神和實質的前提下，對本發明所作的修飾或者替換，均屬于本發明的范疇。
[0023]本發明中涉及到的百分號“％”，若未特別說明，是指質量百分比；但溶液的百分t匕，除另有規定外，是指溶液IOOmL中含有溶質若干克；液體之間的百分比，是指在20°C時容量的比例。
[0024]實施例1植物乳桿菌ZLP001
[0025]健康仔豬腸道中分離出的一株耐酸、耐膽鹽、抑菌性好的高性能益生菌。該菌在pH為3.0的酸性環境中存活率為90.49% ;在0.3%的膽鹽中存活率為87.02% ;對大腸桿菌、沙門氏菌和金色葡萄球菌均表現為中度敏感。經中國工業微生物菌種保藏管理中心鑒定，其為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum),將其命名為ZLP001,該菌株已于2013年3月27日保藏于微生物菌種保藏中心(地址:北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所，100101),分類命名為植物乳桿菌(LactobaciIIus plantarum)ZLPOOI,保藏號為CGMCCN0.7370。實驗表明該菌株生長繁殖快，且耐酸耐膽鹽能力強，同時具有明顯的抑制有害菌的作用。已成功研究采用凍干法將分離到的植物乳桿菌制成可以直接飼喂動物的微生態制劑。且飼喂斷奶仔豬研究得出，植物乳桿菌制劑的添加可降低仔豬腹瀉率、提高仔豬日增重和飼料利用率。
[0026]實施例2體外培養實驗
[0027]1.材料
[0028]益生菌:植物乳桿菌ZLP001 ;寡糖:甘露寡糖，低聚異麥芽糖，低聚果糖，殼寡糖，木寡糖，大豆低聚糖，棉子低聚糖，菊粉。
[0029]2.方法與結果
[0030]2.1試驗設計
[0031]分別以甘露寡糖，低聚異麥芽糖，低聚果糖，殼寡糖，木寡糖，大豆低聚糖，棉子低聚糖，菊粉做碳源添加到植物乳桿菌培養基中，篩選出植物乳桿菌生長表現最好的寡糖。
[0032]2.2試驗方法
[0033]活化:將植物乳桿菌凍存菌液以1%接種量接種于MRS液體培養基中，37°C恒溫培養18h備用(活菌數相當于109CFU/mL)。抑菌試驗指示菌(大腸埃希菌、豬霍亂沙門菌、金黃色葡萄球菌)種子菌液以1%接種量分別接種于營養肉湯培養基中，37°C恒溫培養18h備用(活菌數相當于I O9CFUAiL )。
[0034]增殖試驗:以不同種類的寡糖代替葡萄糖作為MRS培養基的碳源，添加濃度分別為1%，3%，5%，7% (m/V)，進行植物乳桿菌ZLP001的體外培養，溫度為37°C。分別于培養后的0、3、6、9、12和24h測定發酵液pH值、0D600nm值和乳酸生成量，并于24h測定活菌數。
[0035]生長曲線:按1%的接種量，將活化好的菌液接種到已滅菌的以1%低聚果糖為碳源的MRS液體培養基中，采用Bioscreen全自動生長曲線分析儀(謂載國際集團(香港)有限公司)連續測定48h。測定條件為37°C，每隔Ih測定一次菌液0D600nm。
[0036]抑菌試驗:在滅菌平板中，注入10mL2%滅菌瓊脂，冷凝后，放入已滅菌的牛津杯，再將含有1%已活化并稀釋至IO6指示菌的營養瓊脂培養基20mL注入平板，冷凝后取出牛津杯。孔中注入200 μ L已用葡萄糖和不同寡糖分別培養的植物乳桿菌發酵液，無糖培養基作為空白對照。平板放置在4°C擴散4h，37°C培養IOh后，測量抑菌圈直徑。[0037]指標的測定:
[0038]0D600的測定:于接種后0，3，6，9，12，24h取發酵液用UV-4802型紫外可見分光光度計(上海尤尼柯儀器有限公司)測0D600值，以未接種的培養基作為空白對照調零。
[0039]pH值的測定:于接種后0，3，6，9，12，24h使用pH213型酸度計(北京哈納公司)測定發酵液的pH值。
[0040]乳酸濃度的測定:乳酸濃度的測定參照張龍翔等(1997)的方法進行。分別取發酵0，3，6，9，12，24小時后的發酵液于_20°C保存，比色法測定乳酸濃度。
[0041]—平板計數:取一定時間的發酵液，采用10倍梯度倍比稀釋法對其進行稀釋，用MRS培養基以平板涂布法對植物乳桿菌進行計數。平板于37°C培養48小時計數。
[0042]2.3試驗結果
[0043]低聚糖篩選試驗結果表明，相比于其它低聚糖，植物乳桿菌對低聚果糖的利用效果最佳。表現為當低聚果糖的添加量為3%時，植物乳桿菌培養24小時，發酵液OD值為
1.847，pH可降到4.14，乳酸生成量達到69.86mmol/L，活菌數可達2.07 X 109CFU/g，上述指標均顯著優于添加其他種類的寡糖。發酵液對大腸桿菌、沙門氏菌和金色葡萄球菌均具有明顯的抑菌圈，說明能夠抑制病原菌的生長。從其生長曲線可以看出，低聚果糖作為碳源時，植物乳桿菌4小時進入對數期，18小時進入生長穩定期，24小時達到生長最高峰，且穩定期較長(見圖1)。
[0044]表1不同低聚糖發酵24h時OD值比較
【權利要求】
1.一種合生素飼料添加劑，其包括植物乳桿菌和低聚果糖。
2.如權利要求1所述的合生素飼料添加劑，其特征在于，所述的植物乳桿菌為植物乳桿菌 ZLP001，保藏號為 CGMCCN0.7370。
3.如權利要求1或2所述的合生素飼料添加劑，其特征在于，所述植物乳桿菌按109CFU/g計與低聚果糖重量比為1:1.25?1:5。
4.如權利要求3所述的合生素飼料添加劑，其特征在于，所述的植物乳桿菌和低聚果糖重量比為1:2.5。
5.含有權利要求1?4所述的合生素飼料添加劑的飼料。
6.根據權利要求5所述的飼料，其特征在于，所述合生素飼料添加劑的含量為0.5%?1%。
7.權利要求1?4任一項所述的合生素飼料添加劑在提高禽畜生產性能方面的應用。
8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，將所述飼料添加劑直接添加到畜禽飼料中，或將所述飼料添加劑與載體混合制成預混劑，或與其它飼料添加劑或飼料原料混合制成預混料、濃縮料形式飼喂畜禽。
9.植物乳桿菌ZLP001，其保藏號為CGMCCN0.7370。
10.含有權利要求9所述的飼料添加劑或飼料。
【文檔編號】A23K1/00GK103535559SQ201310534493
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2013年11月1日 優先權日:2013年11月1日
【發明者】王晶, 季海峰, 王四新, 張董燕, 劉輝, 王雅民 申請人:北京市農林科學院