專利名稱：灰塵螨過敏原的鈍化方法
技術領域：
本發明涉及一種灰塵螨過敏原的鈍化方法。
已知各種過敏原通過空氣傳送來觸發人體反應。例如，很早我們就知道室內的灰塵可以觸發人體的過敏反應，例如哮喘和鼻炎。據報道，早在1928年就知道灰塵中的灰塵螨是導致過敏原反應的主要原因，但僅僅在20世紀60年代，研究人員才認識其重要性。
相信室內灰塵螨美洲家刺皮螨(Dermatophogoides farinae)(稱作Der-f)和歐洲家刺皮螨(Derma tophagoides pteronyssinus)(稱作Der-p)的糞便，觸發了人體的免疫反應，從而引起眾所周知的過敏原癥狀。有關這一點的回顧描述于Experimental and Applied Acarology，10(1991)167-186頁。
克服這些過敏原反應的一種方法是對表面進行真空吸塵，例如地毯，其常常到處布滿了灰塵螨及其糞便，但對這兩者的真空吸塵都是很費時間的(不得不一絲不茍地工作，以確保無過敏原環境)，且非常依賴于使用的真空吸塵器和過濾袋的效率，所述的過濾袋，例如是微米過濾袋或雙層真空袋。
建立無過敏原環境的另一個方法是使過敏原變性，例如，通過氣溶膠噴霧裝置將過敏原變性劑向空中飛散的過敏原噴霧。這樣的裝置當開啟時產生氣溶膠噴霧，這種噴霧可以朝向要處理的任何空間。
要處理的過敏原是在空中飛散的微粒，而使用公知的氣溶膠噴霧裝置，在過敏原變性劑和空中飛散的過敏原之間只會產生較低的碰撞機率。這樣低的碰撞機率的實際結果是過敏原變性劑必須大量使用才能有效。還會產生其它的結果，例如在一些情況下，氣溶膠噴霧組合物含有香水或香料，具有濃烈的香味或有限選擇的芳香。
PCT/GB98/02863描述了一種源自Der-f和/或Der-p灰塵螨過敏原的鈍化方法，其包括將過敏原與鈍化量的所述28種鈍化劑中的一種或多種接觸。指定使用的鈍化劑包括杉木油、日柏油和麝香草酚(6-異丙基-間-甲酚)。
對于室內灰塵螨Der-p過敏原，我們已經發現了一組新的過敏原鈍化劑，其源自天然油，且可以以蒸汽的形式傳送來鈍化過敏原。
因此，本發明提供了一種Der-p和/或Der-f過敏原的鈍化方法，其包括將鈍化量的選自白千層油(茶樹油)或包含一種或多種萜烯烴的油的揮發油揮發進一個要處理的空間。
可以用于本發明的合適的油包含一種或多種萜烯烴，這些油一般被稱為蒎腦，例如它們以商品名Unitene D和Unitene LE(Bush Boake Allen)出售。Unitene D和Unitene LE的主要成分包含作為其主要組分的檸檬烯。Unitene D含有大量的桉樹腦和萜品油烯，而Unitene LE含有大量的萜烯醇。
白千層油一般稱為茶樹油，由白千層(malaleuca leucandra)、Melaleucaquinquenervia或其它白千層屬得到。茶樹油的主要成分是桉樹腦和萜品烯-4-醇。
用于使揮發油揮發進空氣中的方法有多種，且這些傳送方法如下所述。
通過對油加熱使其氣化來使揮發油揮發。例如，將揮發油飄浮在燃油爐水中，或直接加熱燃油爐的揮發油。或者將加熱燈芯浸入揮發油貯藏罐中來使揮發油蒸發。
使揮發油揮發的另一個方法是源自超聲波噴霧器，該噴霧器含有水，而揮發油飄浮在水面上。
使揮發油揮發的另一種方法是使用離子風使揮發油源通風。離子風產生離子化空氣流，便于將揮發油蒸發和分散進空氣中。單極電荷被傳送至蒸發的油分子。選擇性地加熱揮發油源，以便于蒸發。離子風不僅便于揮發油的蒸發和分散，而且還有附加的好處，就是離子風發生裝置沒有運動的部件，由此其操作只產生非常低的噪聲。該離子風由此充作一個安靜的風扇。揮發油的帶電分子被吸引至空氣中的帶有相反電荷微粒或中性的微粒，與不帶電的分子相比，這樣可以更有效地使空氣中飛散的過敏原變性。帶電的分子也被吸引至正被處理的環境的表面，從而使表面上的過敏原也被處理。
分散揮發組合物，例如揮發油的方法和裝置公開于我們的PCT申請PCT/GB99/04312中。
應該理解為了實現將所需量的揮發油揮發進室內，需要考慮油的揮發速率、揮發油的揮發表面積和離子風速度。越高的離子風速度就能提供越快的揮發成分的揮發，且由此揮發油的揮發表面積需要與空氣流速相適應。
使用離子風產生的揮發油帶電分子的好處是雙重的。單獨的分子被吸引至過敏原微粒，且由于所有的分子具有同樣的電荷極性，它們彼此相斥。因此，與不帶電分子相比，分子趨向于展開到很大的程度。
過敏原微粒一般從其環境中電分離，且一般與其環境具有同樣的電位。處在帶電分子云中的分離的過敏原微粒可能使電場變形，使得帶電分子對過敏原微粒的吸引增強。
可以使用揮發油，或可以以其乳液的形式使用。一般，乳液是水包油乳液，其中含有至多5重量％的油。乳液的形成在本領域一般是公知的，且公開于例如“現代乳液科學”(Modern Aspects of Emulsion Science)，Bernard P.Binks編輯，The Royal Society of Chemistry，1998和“表面活性劑科學和技術”(Surfactant Science and Technology)，第二版，DrewMyers，1992，VCH出版社。
在本發明還有的另一個方面，將揮發油混入蠟燭中，使其在空間中燃燒從而得到處理。在實施本發明的這一方面中，燃燒的蠟燭一般含有至少2重量％的揮發油，優選至少5重量％的揮發油和更優選至少10重量％的揮發油。
本文所使用的術語″蠟燭″指的是可燃物料的固體、半固體或凝膠體，其中軸向植入可燃纖維燈芯。當蠟燭燈芯被點亮時，由此產生熱熔化了的可燃物料，且產生的液體通過毛細管作用沿著燈芯向上流，并燃燒。
一般，蠟燭可燃體可以是有機物料例如蜂蠟、石蠟、褐煤蠟、巴西棕櫚蠟、微晶蠟、脂肪醇、脂肪酸、脂肪酯或天然和合成樹脂的混合物。澄清的蠟燭可以含有作為可燃物料的凝膠，一種所述凝膠合有礦物油，該礦物油含有基于合成的熱塑性橡膠的二嵌段共聚物和三嵌段共聚物的混合物，另一種是通過將氫化的聚烯烴液體物料、膠凝劑和可選的膠凝增強劑混合得到的凝膠。
燈芯一般縱向通過蠟燭體。如果需要，可以使用一個以上的燈芯，但通常單個燈芯位于蠟燭體的中央。當點燃蠟燭燈芯時，燈芯逐漸燃燒，以便于燈芯和蠟燭體一起消耗。
一般，在要處理的特定空間中燃燒的蠟燭的重量依賴于要處理空間的實際體積，例如房間的體積。根據本發明方法，在用5個小時的時間，測試含5重量％揮發油之前，在25至30m3房間體積內燃燒約150g重量的蠟燭可以得到合適的過敏原變性效果。從燃燒的蠟燭釋放的揮發油的量可以通過每隔1小時對蠟燭稱重計算得到。
在要處理的空間中燃燒的蠟燭的時間長度一般至多2小時，一般至多5小時，雖然在一些情況下蠟燭可以燃燒更長的時間，例如10小時或更長。然而，本領域普通技術人員應該理解即使含有經選擇的揮發油的蠟燭燃燒更短的時間也能得到過敏原的變性效果。
揮發油也可以通過噴霧器的方式輸送，其中油飄浮在噴霧器中的水面上，或在噴霧器中作為水包油乳液。該噴霧器包含壓電陶瓷元件，能在液體中產生振動(2-5MHz)，且通過超聲波流產生液體羽流。非常小的液滴(＜5μm)的密集云接著從液體表面排出。使用風扇有助于噴霧液滴從容器中排出。
本發明將參照下述實施例進行進一步說明。對照的預處理過敏原水平當使用室內灰塵進行過敏原變性測試時，具有固有的困難，那就是在每一小樣品中過敏原數量的可變性，即使是取自同樣的灰塵儲藏處也是如此。預處理的樣品中灰塵的量必須精確評估，以便于確定任何過敏原的變性程度。在這些測試中，將灰塵樣品涂布于測試暴露表面，并接著將該表面一半的灰塵去除，以測定特定樣品的對照預處理過敏原水平。各對照樣品直接與各樣品相關聯，在暴露于合適的變性劑之前，對樣品中過敏原的水平提供盡可能準確的估計。
下述實施例均是對室內灰塵螨(歐洲家刺皮螨)過敏原-Der p1的降低進行測定。實施例1將室內灰塵通過一系列篩網，并收集小于53微米的部分。將0.1g的灰塵置于一小篩中，使其均勻地散布在整個測試表面上。該測試表面是0.6m×1m的鋁托盤。連續地移動篩通過該表面，將灰塵涂敷到托盤上。接著通過吸到一作業線內的過濾器上，將灰塵的一半去除，并記錄重量，這就是預處理對照樣品。接著將該托盤置于一塑料帶襯里的0.8m×0.8m×1.5m小隔間中。將一燃油裝置放置于該小隔間中，并將該小隔間密封，所述的燃油裝置中含有飄浮在6ml蒸餾水上的800μl的測試樣品。該燃油裝置蠟燭被點亮，并使其燃燒，直至所有的液體被蒸發(約1小時)。在小隔間中，該蠟燭接著被悶熄，而灰塵滯留于該小隔間中。在24小時之后，將托盤取出，將其中的灰塵收集起來，并記錄其重量。在進行同樣的化學品測試之間，用強洗滌劑對小隔間進行清洗；測試化學品之間的小隔間襯里進行更換。
評價的測試樣品是日柏油(比較)香茅油(比較)茶樹油蒎腦(Unitene D)蒎腦(Unitene LE)使用ELISA(酶連接免疫吸附劑鑒定)對測試樣品進行Der p1的鑒定，以確定過敏原含量。這就接著涉及已經存在于各個樣品中灰塵的重量。所有的樣品被繁殖起來，用以比較存在于0.1g樣品灰塵中過敏原的量。得到的對照樣品和揮發處理的樣品之間百分數的不同列于附


圖1中。
當采用上下限二頭t試驗進行比較時，與樣品中固有的損失相比較，在用燃油裝置釋放的任何揮發油揮發處理之后，過敏原降低的量的差異是明顯的。因此，在該試驗的條件下，經燃油裝置釋放的上述油揮發處理，在灰塵樣品中含有的過敏原明顯降低。實施例2將室內灰塵通過一系列篩網，并收集小于53微米的部分。將0.1g的灰塵置于一小篩中，使其均勻地散布在整個測試表面上。該測試表面是0.6m×1m的鋁托盤。連續地移動篩通過該表面，將灰塵涂敷到托盤上。接著通過吸到一作業線內的過濾器上，將灰塵的一半去除，并記錄重量，這就是預處理對照樣品。接著將該托盤置于一塑料帶襯里的0.8m×0.8m×1.5m小隔間中。
對于對照測試，將灰塵分布于托盤上，將預處理對照樣品進行收集，且該灰塵滯留于小隔間中24小時。接著取出托盤，從托盤中收集灰塵，并稱重。在后續測試中，將800μl的揮發油添加到噴霧器中的150ml蒸餾水中。接著如對照測試，完成該測試。在測試之間用強洗滌劑清洗小隔間。
評價的樣品是茶樹油蒎腦(Unitene D)蒎腦(Unitene LE)使用ELISA對收集的灰塵樣品進行Der p1的鑒定，以確定過敏原含量。這就接著涉及已經存在于各個樣品中灰塵的重量。所有的樣品被繁殖起來，用以比較存在于0.1g樣品灰塵中過敏原的量。得到的對照樣品和揮發處理的樣品之間百分數的不同列于附圖2中。
當采用上下限二頭t試驗進行比較時，與對照樣品中的損失相比較，在用噴霧器釋放的茶樹油或Unitene D揮發處理之后，過敏原降低的量的差異是明顯的(p＜0.05)。因此，在該試驗的條件下，經噴霧器釋放茶樹油或UniteneD揮發處理，在灰塵樣品中含有的過敏原明顯降低。實施例3從真空吸塵器袋中收集的灰塵，并通過低至53微米的一系列篩。將用于具有化學品測試的干凈的陪替氏培養皿作標簽，其中內襯過濾紙。在每個培養皿中添加0.3g的灰塵，并均勻地散布在過濾紙中。接著從過濾紙取出0.1g的灰塵，作為對照樣品。接著再將其余的灰塵均勻散布在過濾紙上，將2.4g+/-0.2g的測試化學品涂布在灰塵樣品上。該灰塵樣品開口放置，直至過濾紙干燥。將灰塵收集進微量離心機，并對收回的灰塵的重量進行測量。將1ml的1％牛血清白蛋白-磷酸鹽緩沖鹽水-吐溫(BSA-PBS-T)添加到對照樣品中。1ml的5％ BSA-PBS-T添加到測試樣品中。將樣品在電冰箱中放置過夜，并接著以13,000rpm離心5分鐘。上清液用吸量管吸移進微量離心機中，用于Der p1 ELISA的鑒定。
測試液體是蒸餾水蒸餾水中2％的茶樹油(加0.1％吐溫)蒸餾水中2％的香茅油(加0.10％吐溫)蒸餾水中1％的麝香草酚(加0.8％吐溫)蒸餾水中2％的日柏油(加0.1％吐溫)2％單寧酸對每個測試液體重復5次。每次重復的對照樣品的過敏原含量與測試樣品過敏原相比較。確定每一次重復對照樣品和測試樣品之間過敏原降低的百分數。所有5次重復的平均過敏原的降低列于附圖3中。
水測試顯示出平均過敏原的降低是34.2％。對灰塵添加茶樹油，過敏原又降低了29.6％，當進行t測驗比較時(t＝4.08)，差異是明顯的。麝香草酚降低的過敏原比單獨水測試多了23.6％，當進行t測驗比較時(t＝3.3)，差異是明顯的。向灰塵中添加單寧酸降低的過敏原，在測試中平均是99.15％。
考慮到水樣品中過敏原的降低，一些測試液體仍然明顯地降低灰塵樣品中的過敏原含量。由于其公知使過敏原變性，單寧酸用作正對照，且在測試中對其效果進行記錄。茶樹油明顯地降低了灰塵樣品中的過敏原含量。實施例4方法在28m3的測試房間中完成測試，該房間沒有窗戶和門，在測試期間完全封閉。房間中沒有任何家俱，只有簡單的、清潔過的不反應樹脂地板。用卷尺在每個房間的地板上量出0.7×0.7m的六個測試區域。每個測試區域被分成兩半。從家用真空吸塵器袋中得到測試灰塵。室內灰塵通過一系列篩網，并收集小于53微米的部分。將0.1g的灰塵置于一小篩中，使其均勻地散布在整個測試表面上。連續地移動篩通過該表面，將灰塵涂敷。通過一作業線內的玻璃纖維過濾器(2.5cm直徑)以201/min的抽吸，將6個測試區域的每一個的一半的灰塵去掉，并稱重記錄，這就是預處理對照樣品。在測試之前，將經選擇的約150g測試蠟燭點燃，并置于室內5小時。該蠟燭接著被悶熄，而灰塵滯留于該房間中16小時。接著收集灰塵作為對照并稱重。
通過Der p1 ELISA對收集的灰塵樣品進行鑒定，以確定過敏原含量。這就接著涉及已經存在于各個樣品中灰塵的重量。所有的樣品被繁殖起來，用以比較存在于0.1g樣品灰塵中過敏原的量。得到的對照樣品和揮發處理的樣品之間百分數的不同列于附圖4中。
在5個小時燃燒期間，每個蠟燭約燃燒掉了27g。對于蠟燭B和C實際上以低于270μl的揮發油每小時這樣的釋放速率。
完成的測試是測試描述A無香味蠟燭，室內相對濕度(rh)B5％w/w茶樹油蠟燭，室內rhC5％w/w Unitene LE蠟燭，室內rh
M未處理，室內rh在測試期間記錄的室內rh是50至57％。結果從附圖4可以看出，與未處理的對照樣品(t＝3.19和t＝2.38)相比，用茶樹油(36.5％)和Unitene LE(30.6％)蠟燭處理的灰塵的Der p1過敏原明顯降低(P＜0.05)。討論結果表明通過在室內燃燒5小時含茶樹油或Unitene LE的蠟燭，可以實現過敏原的明顯降低。實施例5方法將英國(含Der p1)或美洲(含Der f1)的室內灰塵通過一系列篩網，并收集小于53微米的部分。將0.1g的經選擇的產地灰塵置于一小篩中，使其均勻地散布在整個測試表面上。該測試表面是0.6m×1m的鋁托盤，可以容易地用強洗滌劑清洗。連續地移動篩通過該表面，將灰塵涂敷到托盤上。接著通過一作業線內的玻璃纖維過濾器(2.5cm直徑)以20L/min的抽吸，將灰塵的一半去掉，并稱重記錄，這就是預處理對照樣品。接著將該托盤置于一1m×0.7m×0.7m塑料小隔間中。
將約150g重量的測試蠟燭置于該小隔間中。將蠟燭點燃并將小隔間的門關閉。在約2個小時之后，測量小隔間中的溫度和濕度；使蠟燭總共燃燒5小時。接著將蠟燭悶熄，并將灰塵滯留于小隔間中17小時。接著將托盤取出，并讓小隔間通風。將托盤中的灰塵真空抽吸到過濾器上并稱重。
評價的測試蠟燭是對照蠟燭5％茶樹油蠟燭5％蒎腦(Unitene LE)蠟燭對于每種蠟燭重復六次單獨的處理。通過Der p1或Der f1 ELISA對收集的樣品進行鑒定，以確定過敏原含量。這就接著涉及已經存在于各個樣品中灰塵的重量。所有的樣品被繁殖起來，用以比較存在于0.1g樣品灰塵中過敏原的量。得到對照樣品和揮發處理的樣品之間百分數的差異。
Der p1的結果列于附圖5中，而Der f1的結果列于附圖6中。
在用茶樹油或Unitene LE蠟燭處理之后，在灰塵中的Der p1過敏原濃度的降低是明顯的，而在用茶樹油蠟燭處理之后灰塵中Der f1過敏原濃度的降低是明顯的。實施例6重復實施例5的一般步驟，但與含5％茶樹油的蠟燭燃燒5小時的一次處理或與對照蠟燭的一次處理相比，將含5％茶樹油蠟燭燃燒5小時重復三次(即總共燃燒15小時)。完成六次重復試驗。
在附圖7中給出結果。應注意的是重復處理還進一步降低了表面上灰塵的Der p1過敏原濃度。實施例7除了灰塵樣品在每個小隔間以同樣的時間處理以外，使用實施例5中所述的同樣的方法完成試驗。將0.025g的灰塵均勻分布在0.32m2的鋁托盤中。接著與實施例5中所述的對照樣品一樣，將其一半去除。該托盤接著置于小隔間中。以這種方式制備的其它5個托盤也置于小隔間中。含測試灰塵樣品的6個托盤在小隔間中用經選擇的蠟燭處理5小時。這些托盤再滯留于小隔間17個小時，接著收集測試灰塵樣品，并通過合適的ELISA鑒定。附圖8顯示了在用含0％(對照)或5％茶樹油的澄清的凝膠蠟燭處理之后，Der p1過敏原降低的百分數的比較。
在含茶樹油的凝膠蠟燭處理之后，灰塵中的過敏原濃度明顯降低。實施例8采用如實施例4中所述的同樣的方法，完成試驗。然而用噴霧器替代蠟燭燃燒來輸送揮發油。
將用于實施例2中的超聲波噴霧器用于這些室內測試。當將噴霧器的冷噴射流開啟時，超細噴霧就從貯罐的頂部噴出。測試的噴霧器中150ml去離子水頂部飄浮有5ml的茶樹油或Unitene D。
噴霧器開啟3小時。在測試結束時，不能精確地知道有多少揮發油被釋放，而一部分水/油混合物遺留在噴霧器中。對照測試只是用噴霧器中的去離子水完成。結果在附圖9中給出。
在用茶樹油或Unitene D處理之后，灰塵的過敏原含量明顯降低。實施例9如實施例1所述完成試驗，但用美洲室內灰塵。測試灰塵樣品用小隔間中的燃油裝置處理，所述的燃油裝置中含有飄浮在6ml去離子水上的800μl的茶樹油。這些是比較的樣品中的灰塵損失。在24小時之后，收集灰塵樣品，并通過Der f1 ELISA測定。結果列于附
圖10中。
在用茶樹油處理之后，灰塵的過敏原含量明顯降低。實施例10采用如實施例4中所述的同樣的方法，完成試驗。然而用燃油裝置替代蠟燭燃燒來輸送茶樹油。
采用兩種燃油裝置用于該測試中。將小燃油裝置用于小隔間測試(如實施例4中所述)和室內測試中的一種測試。該燃油裝置是陶瓷的，具有小盤其容量為15ml，用以放置水和揮發油。單獨的茶蠟燭置于懸浮的盤下，用于蒸發水和茶樹油。將大燃油裝置用于在28m3測試室內完成的其余測試。它們也是陶瓷的，且具有35ml容量的大盤，底部更寬，以便于三個茶蠟燭可以置于盤下，以更有效地蒸發大量的液體。該茶樹油也總是飄浮在燃油裝置的水面上，以此控制溫度和能夠控制茶樹油的釋放速率。
在大多數室內測試中，使用兩個大燃油裝置，以此擁有更大量的體積來輸送水和茶樹油。兩個大燃油裝置含有總共65ml的去離子水和指定的5ml的茶樹油。這并不是小隔間測試的直接轉移，實際上發現這是不切實際的(336ml水和44.8ml測試化學品)。將它們置于室內，并且使蠟燭燃燒直至所有的液體蒸發。用茶樹油進行測試。在燃油裝置中只用去離子水進行對照。為了測量用蠟燭的任何效果，單獨用6個茶蠟燭進行測試。一個測試也用含6ml的水和800μl的茶樹油的小燃油裝置進行，以便于與小隔間測試比較。
結果列于附
圖11。
在用茶樹油處理之后，灰塵的過敏原含量明顯降低。
權利要求
1.一種鈍化Der-p和/或Der-f過敏原的方法，其包括將鈍化量的選自白干層油(茶樹油)或包含一種或多種萜烯烴的油的揮發油揮發進一個要處理的空間。
2.根據權利要求1所述的方法，其中加熱揮發油，以便于使其揮發進空氣。
3.根據權利要求1所述的方法，其中通過將揮發油源用離子風通風，而使揮發油揮發進空氣。
4.根據權利要求1所述的方法，其中揮發油從超聲波噴霧器中揮發進空氣中。
5.根據權利要求2或3所述的方法，其中揮發油源包括浸入揮發油貯罐的燈芯。
6.根據前述權利要求中任一權利要求所述的方法，其中揮發油是水包油乳液的形式，含至多5重量％的揮發油。
7.根據權利要求1所述的方法，其中將揮發油混入蠟燭中，所述的蠟燭在要處理的空間中燃燒。
8.根據權利要求7所述的方法，其中燃燒的蠟燭含有至少2重量％的揮發油。
9.根據權利要求8所述的方法，其中蠟燭含有至少10重量％的揮發油。
10.根據權利要求7至9任一權利要求所述的方法，其中蠟燭燃燒2個小時或更長。
11.根據前述任一權利要求所述的方法，其中含有一種或多種萜烯烴的油是蒎腦。
全文摘要
一種鈍化Der－p和/或Der－f過敏原的方法，其包括將鈍化量的選自白千層油(茶樹油)或包含一種或多種萜烯烴的油的揮發油揮發進一個要處理的空間。
文檔編號A01N43/90GK1426277SQ0180853
公開日2003年6月25日 申請日期2001年4月9日 優先權日2000年4月7日
發明者馬爾科姆·湯姆·麥基奇尼, 約翰·法雷爾·休斯, 卡倫·路易絲·杰瑞姆 申請人:雷克特本克斯爾(英國)有限公司, 南安普敦大學