專利名稱：一種食、藥用外生菌根菌制種和人工栽培方法
技術領域：
本發明屬于食藥用菌制種及人工栽培技術領域，尤其涉及食藥用外生菌根菌制種及人工栽培方法。
目前沒有成功的人工栽培美味牛肝菌(Boletus edulis)、松乳菇(Lactrius deliciosus)、多汁乳菇(Lactarius volemus)、雞油菌(Cantharellus vibarius)、綠菇(Russula virescens)等食藥用外生菌根菌的方法。所見報道有1、方平夷的《對松乳菇人工栽培的嘗試》(《食用菌》1994年第3期)。其采用的方法是(1)采用MS基本培養基，除去植物生長素和細胞分裂素，補充3克蛋白胨、2克酵母浸膏、20克瓊脂作為分離菌種、母種培養和保存培養基；(2)原種培養基采用小麥或牛糞粉與大米的混合物；(3)子實體形成培養基為棉子殼腐爛茅草和蔗糖；(4)分離培養母種方法是選取菌柄或菌柄著生處的部分菌蓋，于斜面培養基上培養，挑選菌絲轉接培養成母種，再擴原種，最后進行子實體培養。其實驗結果是人工栽培條件下可以形成子實體，但不易形成，就是形成也不易長大。2、發明《松乳菇母種培養基及松乳菇人工栽培方法》(C1240572A)所提供的是半人工栽培方法，所用培養基菌絲生長緩慢，生長周期長，從制種到出菇需4-5年，同時需栽種馬尾松。
本發明的目的是提供一種開發新菌株特別是食、藥用外生菌根菌的制種和高產穩產人工栽培方法，拓寬食藥用菌人工栽培領域，實現美味牛肝菌、松乳菇、多汁乳菇等食藥用外生菌根菌當年栽培當年可產多批菇、一年栽培多年出菇。
本發明的目的是采用以下技術方案實現的栽培工序包括取種-制母種-制原種-制栽培種-制栽培袋-出菇管理。本發明的主要特點是(1.1)采種時用無菌保鮮液在采集地就地處理子實體，組織分離在無菌無毒環境中取靠近菌索的菌柄基部黃豆大組織塊，轉入母種培養基上，于22-32℃中培養，待組織塊萌發菌絲后提純轉管；(1.1.1)無菌保鮮液配制方法，配方為食用明礬10克、加碘食鹽20克、3％呋喃丹30克、水1000毫升，配制方法為將明礬和呋喃丹分別加水加熱溶解后，過濾，取濾液混合，加食鹽熔解后裝瓶滅菌，用時搖勻；(1.1.2)食、藥用外生菌根菌母種培養基配制方法A.制松樹汁取鮮馬尾松無節木質部為原料剁或粉碎成顆粒，加水煮沸后改文火熬制2小時，1千克木料加水1升熬至0.5
升用紗布過濾備用；B.制馬鈴薯汁將0.25千克去皮馬鈴薯加水0.7升，用文火熬至0.5升過濾，備用；C.磷酸二氫鉀1.5克，硫酸鎂1克，用少量熱水溶解；D.將上述三種溶液混合，加瓊脂20克、蔗糖20克，煮沸溶解后文火煮干至1000毫升，分裝試管，每管10毫升。試管棉塞內端包微孔防潮膜，然后7支1捆，捆緊后包牛皮紙；E.滅菌時必須先將高壓鍋內冷空氣排出，滅菌壓力為1.2-1.5千克/平方厘米，滅菌45分鐘，壓力回0后開鍋，讓余熱烘干棉塞，于50℃溫度左右擺斜面。擺斜面時試管上下需蓋保溫材料，待斜面凝固后立即將試管豎直讓冷凝水重新回到斜面內；(1.2)原種、栽培種使用稻谷顆粒種，其制備方法是將發芽破胸的稻谷用馬鈴薯20％、白糖2％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％混液煮沸殺青，拌入3％石膏粉，用鹽水瓶分裝滅菌；冷卻后接種，置22-32℃溫度下培養，三天后進行第一次搖瓶，以后每天搖一次瓶并檢查純度，直至菌絲充滿谷粒，栽培種用同樣的方法擴大培養1次；(1.3)栽培袋的制作方法是(1.3.1)栽培料配方是馬尾松新鮮木屑400千克、棉殼100千克、麥麩100千克、白糖10千克、磷酸二氫鉀0.75千克、硫酸鎂0.5千克、馬尾松林地腐殖質土100千克、明礬5千克，含水量60％，PH自然；(1.3.2)培養料采用兩次滅菌方法培養料混合拌勻調濕后，迅速裝入75cm*45cm纖維袋中，離地建堆，堆四周用塑料膜密封，設保溫層，保溫層外加通過地腳螺栓固定的雙層密網，利用風機加壓使高壓蒸汽在蒸汽發生器和培養料中快速循環加熱，培養料在1個小時達到55℃，2小時達到70℃，3小時達到85℃，并保持4小時，經這樣預蒸，干濕均勻的培養料翻涼后，分裝塑料袋，十袋裝入一纖維袋；再進行第二次蒸汽消毒，保持溫度100℃10小時；(1.3.3)接種方法為接種前將菌種搖散，火焰消毒瓶口，打開塑料袋后，用手指隔膜在基料面上挖一小孔，菌種倒入孔內，用手指隔膜擠捏培養料蓋嚴菌種，再用扁形環套口，袋口反折后用橡皮筋扎口，接種后的菌袋袋口朝下，就地接種就地培養，培養溫度為22-32℃，濕度為70％，菌絲基本布滿培養料，氣溫穩定在32℃以下時打孔通氣；
(1.3.4)打孔通氣的方法是將長滿菌絲的菌筒用特制的高溫電烙鐵在菌筒的下部打三至四個手指粗的孔通氣，打孔后的菌筒排放在底鋪有塑料膜的干凈河沙上，堅持早晚噴灑消毒殺蟲殺螨劑，溫度保持在25-32℃；(1.3.5)消毒殺蟲殺螨劑的配制方法配比為40％甲醛溶液900毫升、無水乙醇50毫升、40％樂果20毫升、80％敵敵畏20毫升、20％三氯殺螨醇10毫升，配制方法是將樂果、敵敵畏、三氯殺螨醇分別量取，倒入一個非金屬容器中，加入酒精，搖勻后加入甲醛，充分搖勻后裝瓶密封，置陰涼干燥處避光保存，用時搖勻；(1.4)出菇管理方式是將發好菌的菌筒脫袋，排放在消毒過的出菇場地上，每袋菌筒間留間隙4cm，邊排邊蓋好塑料膜。待菌筒恢復傷口并長菌絲時分4次蓋發酵料土和松林土每次1-2厘米后，蓋土后噴殺蟲殺螨劑，菌絲長出土表再在箱面種植禾本科植物，待草長到二葉一心時噴霧狀水，采用白天蓋膜，晚上蓋無紡布，早晨6-8時不蓋物，促進子實體的形成和生長；(1.4.1)制作發酵料土選田土或菜土曬干過篩，每1000千克放人糞100千克、過磷酸鈣20千克、馬尾松樹木屑100千克、明礬10千克、呋喃丹10千克，拌勻調水至含水量60％，堆成長條，上蓋透明塑料膜，利用太陽光照發熱發酵半個月，建堆后第七天進行第一次翻堆至預先消毒殺蟲的空地上，表面噴灑5％的消毒殺蟲殺螨劑，打通氣孔至料底蓋塑料膜，第10天將料土二次翻堆，15天后曬干備用；(1.4.2)出菇場地消毒選排水良好座北朝南的空地，搭建陰蓬開好排水溝，氣溫穩定在35℃以下后，場地整箱噴灑消毒殺蟲殺螨劑，蓋膜48小時進行場地消毒。
食、藥用外生菌跟菌因其獨特的風味和藥用功能備受人們關注，但一直不能大量生產，本發明具有生產工藝簡單、產量高、產品品質好的優點，并解決了人工批量生產的技術問題。
以松乳菇人工栽培為實施例作詳細說明松乳菇人工栽培生產工藝流程是取種-制母種-制原種-制栽培種-制栽培袋-出菇管理。
取種和制母種時先配制無菌保鮮液，配方為食用明礬10克、加碘食鹽20克、3％呋喃丹3克、水1000毫升，配制方法為將明礬和呋喃丹分別加水加熱溶解后，過濾，取濾液混合，加食鹽熔解后裝瓶滅菌，用時搖勻；做母種培養基，其配制方法
A.制松樹汁取鮮馬尾松無節木質部為原料剁或粉碎成顆粒，加水煮沸后改文火熬制2小時，1千克木料加水1升熬至0.5升用紗布過濾，備用；B.制馬鈴薯汁將0.25千克去皮馬鈴薯加水0.7升，用文火熬至0.5升過濾，備用；C.磷酸二氫鉀1.5克，硫酸鎂1克，用少量熱水溶解；D.將上述三種溶液混合，加瓊脂20克、蔗糖20克，煮沸溶解后文火煮干至1000毫升，分裝試管，每管10毫升。試管棉塞內端包微孔防潮膜，然后7支1捆，捆緊后包牛皮紙；E.滅菌時必須先將高壓鍋內冷空氣排出，滅菌壓力為1.2-1.5千克/平方厘米，滅菌45分鐘，壓力回0后開鍋，讓余熱烘干棉塞，于50度溫度左右擺斜面。擺斜面時試管上下需蓋保溫材料，待斜面凝固后立即將試管豎直讓冷凝水重新回到斜面內；采種時用無菌保鮮液在采集地就地處理子實體，組織分離在無菌無毒環境中取靠近菌索的菌柄基部黃豆大組織塊，轉入母種培養基上，于22-32℃中培養。待組織塊萌發菌絲后提純轉管；原種、栽培種使用稻谷顆粒種，其制備方法是將發芽破胸的稻谷用馬鈴薯20％、白糖2％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％混合液煮沸殺青，拌入3％石膏粉，用鹽水瓶分裝滅菌；冷卻后接種，置22-32℃溫度下培養，三天后進行第一次搖瓶，以后每天搖一次瓶并檢查純度，直至菌絲充滿谷粒，栽培種用同樣的方法擴大培養1次；栽培袋的制作方法是栽培料取馬尾松新鮮木屑400千克、棉殼100千克、麥麩100千克、白糖10千克、磷酸二氫鉀0.75千克、硫酸鎂0.5千克、馬尾松林地腐殖質土100千克、明礬5千克，含水量60％，PH自然；配制消毒殺蟲殺螨劑配比為40％甲醛溶液900毫升、無水乙醇50毫升、40％樂果20毫升、80％敵敵畏20毫升、20％三氯殺螨醇10毫升，配制方法是將樂果、敵敵畏、三氯殺螨醇分別量取，倒入一個非金屬容器中，加入酒精，搖勻后加入甲醛，充分搖勻后裝瓶密封，置陰涼干燥處避光保存，用時搖勻。
培養料采用兩次滅菌方法。培養料混合拌勻調濕后，迅速裝入75cm*45cm纖維袋中，離地建堆，堆四周用塑料膜密封，設保溫層，保溫層外加通過地腳螺栓固定的雙層密網，利用風機加壓使高壓蒸汽在蒸汽發生器和培養料中快速循環加熱，培養料在1個小時達到55℃，2小時達到70℃，3小時達到85℃，并保持4小時，經這樣預蒸，干濕均勻的培養料翻涼后，分裝塑料袋，十袋裝入一纖維袋；再進行第二次蒸汽消毒，保持溫度100℃10小時；接種方法為接種前將菌種搖散，火焰消毒瓶口，打開塑料袋后，用手指隔膜在基料面上挖一小孔，菌種倒入孔內，用手指隔膜擠捏培養料蓋嚴菌種，再用扁形環套口，袋口反折后用橡皮筋扎口，接種后的菌袋袋口朝下，就地接種就地培養。培養溫度為22-32℃，濕度為70％，菌絲基本布滿培養料，氣溫穩定在32℃以下時打孔通氣；打孔通氣的方法是將長滿菌絲的菌筒用特制的高溫電烙鐵在菌筒的下部打三至四個手指粗的孔通氣，打孔后的菌筒排放在底鋪有塑料膜的干凈河沙上，堅持早晚噴灑消毒殺蟲殺螨劑，溫度保持在25-32℃。
出菇管理1.制作發酵料土 選田土或菜土曬干過篩，每1000千克土放人糞100千克、過磷酸鈣20千克、馬尾松樹木屑100千克、明礬10千克、呋喃丹10千克，拌勻調水至含水量60％，堆成長條，上蓋透明塑料膜，利用太陽光照發熱發酵半個月，建堆后第七天進行第一次翻堆至預先消毒殺蟲的空地上，表面噴灑5％的消毒殺蟲殺螨劑，打通氣孔至料底，蓋塑料膜，第10天將料土二次翻堆，15天后曬干備用；2.出菇場地消毒 選排水良好座北朝南的空地，搭建陰蓬，開好排水溝，氣溫穩定在35度以下后，場地整箱噴灑消毒殺蟲殺螨劑，蓋膜48小時進行場地消毒；3.覆土出菇 發好菌后將菌筒脫袋，排放在消毒過的出菇場地上，每袋菌筒間留間隙4cm，邊排邊蓋好塑料膜。待菌筒恢復傷口并長菌絲時掀膜蓋發酵調濕的料土2cm，土面噴5％的消毒殺蟲殺螨劑，蓋膜，菌絲再次長出土表時，掀膜蓋一層發酵料土和耕作層以下新土各50％的混合土2cm，噴3％的消毒殺蟲殺螨劑，蓋膜，箱面長滿菌絲時，掀膜，蓋蠶豆大小不含腐殖的松林土2cm，土壤含水量為20％，再噴2％的消毒殺蟲殺螨劑，蓋膜培養菌絲，進入此層土壤的菌絲粗壯濃白，待菌絲長到接近土表時，箱面種植消毒發芽的禾本科植物草籽，蓋蠶豆大小的松林土1cm，濕度控制在60％，并噴1％的消毒殺蟲殺螨劑，再蓋膜，當土面出現菌絲時，用消毒過的竹片將塑料膜架高，并噴0.5％尿素、0.15％磷酸二氫鉀、0.1％硫酸鎂營養液促進禾本科植物生長，待草長到二葉一心時噴霧狀水，采用白天蓋膜，晚上蓋無紡布，早晨6-8時不蓋物，創造有利出菇的條件，促進子實體的形成和生長。草長至四葉一心時，進行割鞘處理，由于所施營養液對藻類植物生長有促進作用，床面很快會長出綠藻，此時可將禾本科植物剪稀。外生菌根菌，特別是乳菌類外生菌根菌，菌絲脆易斷，出菇要求高而恒定的濕度。出菇時覆土并種植禾本科植物或綠藻避免噴水時傷菌絲，并調節濕度。
權利要求
1.一種食、藥用外生菌根菌制種和人工栽培方法，采用常規食用菌人工栽培工序即取種-制母種-制原種-制栽培種-制栽培袋-出菇管理，本發明的特征是(1.1)采種時用無菌保鮮液在采集地就地處理子實體，組織分離在無菌無毒環境中取靠近菌索的菌柄基部黃豆大組織塊，轉入母種培養基上，于22-32℃中培養，待組織塊萌發菌絲后提純轉管；(1.1.1)無菌保鮮液配制方法，配方為食用明礬10克、加碘食鹽20克、3％呋喃丹30克、水1000毫升，配制方法為將明礬和呋喃丹分別加水加熱溶解后，過濾，取濾液混合，加食鹽熔解后裝瓶滅菌，用時搖勻；(1.1.2)食、藥用外生菌根菌母種培養基配制方法A.制松樹汁取鮮馬尾松無節木質部為原料剁或粉碎成顆粒，加水煮沸后改文火熬制2小時，1千克木料加水1升熬至0.5升用紗布過濾備用；B.制馬鈴薯汁將0.25千克去皮馬鈴薯加水0.7升，用文火熬至0.5升，過濾，備用；C.磷酸二氫鉀1.5克，硫酸鎂1克，用少量熱水溶解；D.將上述三種溶液混合，加瓊脂20克、蔗糖20克，煮沸溶解后文火煮干至1000毫升，分裝試管，每管10毫升。試管棉塞內端包微孔防潮膜，然后7支1捆，捆緊后包牛皮紙；E.滅菌時必須先將高壓鍋內冷空氣排出，滅菌壓力為1.2-1.5千克/平方厘米，滅菌45分鐘，壓力回0后開鍋，讓余熱烘干棉塞，于50℃溫度左右擺斜面。擺斜面時試管上下需蓋保溫材料，待斜面凝固后立即將試管豎直讓冷凝水重新回到斜面內；(1.2)原種、栽培種使用稻谷顆粒種，其制備方法是將發芽破胸的稻谷用馬鈴薯20％、白糖2％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％混合液煮沸殺青，拌入3％石膏粉，用鹽水瓶分裝滅菌；冷卻后接種，置22-32℃溫度下培養，三天后進行第一次搖瓶，以后每天搖一次瓶并檢查純度，直至菌絲充滿谷粒，栽培種用同樣的方法擴大培養1次；(1.3)栽培袋的制作方法是(1.3.1)栽培料配方是馬尾松新鮮木屑400千克、棉殼100千克、麥麩100千克、白糖10千克、磷酸二氫鉀0.75千克、硫酸鎂0.5千克、馬尾松林地腐殖質土100千克、明礬5千克，含水量60％，PH自然；(1.3.2)培養料采用兩次滅菌方法培養料混合拌勻調濕后，迅速裝入75cm*45cm纖維袋中，離地建堆，堆四周用塑料膜密封，設保溫層，保溫層外加通過地腳螺栓固定的雙層密網，利用風機加壓使高壓蒸汽在蒸汽發生器和培養料中快速循環加熱，培養料在1個小時達到55℃，2小時達到70℃，3小時達到85℃，并保持4小時，經這樣預蒸，干濕均勻的培養料翻涼后，分裝塑料袋，十袋裝入一纖維袋；再進行第二次蒸汽消毒，保持溫度100℃10小時；(1.3.3)接種方法為接種前將菌種搖散，火焰消毒瓶口，打開塑料袋后，用手指隔膜在基料面上挖一小孔，菌種倒入孔內，用手指隔膜擠捏培養料蓋嚴菌種，再用扁形環套口，袋口反折后用橡皮筋扎口，接種后的菌袋袋口朝下，就地接種就地培養。培養溫度為22-32℃，濕度為70％，菌絲基本布滿培養料，氣溫穩定在32℃以下時打孔通氣；(1.3.4)打孔通氣的方法是將長滿菌絲的菌筒用特制的高溫電烙鐵在菌筒的下部打三至四個手指粗的孔通氣，打孔后的菌筒排放在底鋪有塑料膜的干凈河沙上，堅持早晚噴灑消毒殺蟲殺螨劑，溫度保持在25-32℃；(1.3.5)消毒殺蟲殺螨劑的配制方法配比為40％甲醛溶液900毫升、無水乙醇50毫升、40％樂果20毫升、80％敵敵畏20毫升、20％三氯殺螨醇10毫升，配制方法是將樂果、敵敵畏、三氯殺螨醇分別量取，倒入一個非金屬容器中，加入酒精，搖勻后加入甲醛，充分搖勻后裝瓶密封，置陰涼干燥處避光保存，用時搖勻；(1.4)出菇管理方式是；將發好菌的菌筒脫袋，排放在消毒過的出菇場地上，每袋菌筒間留間隙4cm，邊排邊蓋好塑料膜。待菌筒恢復傷口并長菌絲時分4次蓋發酵料土和松林土每次1-2厘米后，蓋土后噴殺蟲螨劑，菌絲長出土表再在箱面種植禾本科植物，待草長到二葉一心時噴霧狀水，采用白天蓋膜，晚上蓋無紡布，早晨6-8時不蓋物，促進子實體的形成和生長；(1.4.1)制作發酵料土。選田土或菜土曬干過篩，每1000千克放人糞100千克、過磷酸鈣20千克、馬尾松樹木屑100千克、明礬10千克、呋喃丹10千克，拌勻調水至含水量60％，堆成長條，上蓋透明塑料膜，利用太陽光照發熱發酵半個月，建堆后第七天進行第一次翻堆至預先消毒殺蟲的空地上，表面噴灑5％的消毒殺蟲殺螨劑，打通氣孔至料底，蓋塑料膜，第10天將料土二次翻堆，15天后曬干備用；(1.4.2)出菇場地消毒，選排水良好座北朝南的空地，搭建陰蓬開好排水溝，氣溫穩定在35℃以下后，場地整箱噴灑消毒殺蟲殺螨劑，蓋膜48小時進行場地消毒。
全文摘要
一種食、藥用外生菌根菌制種和人工栽培方法,采用常規食用菌人工栽培工序即取種－制母種－制原種－制栽培種－制栽培袋－出菇管理,本發明的特點是:在取種時使用無菌保鮮液處理子實體,取靠近菌索的菌柄基部組織塊,組織分離和母種培養基采用PDA培養基加松樹汁,原種和栽培種采用稻谷顆粒種,栽培方法用塑料袋栽培覆土出菇,配合補水補液實現外生菌根菌一次栽培多年多季節出菇。
文檔編號A01G1/04GK1338509SQ0011361
公開日2002年3月6日 申請日期2000年8月15日 優先權日2000年8月15日
發明者陳德良, 楊愛芝 申請人:陳德良, 楊愛芝