一種通過分離純化測定黃酒酵母生長曲線的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種通過分離純化測定黃酒酵母生長曲線的方法，屬于黃酒釀造的技 術領域。
【背景技術】
[0002] 酵母不僅是黃酒釀造中的糖化劑，小部分發酵劑，同時還賦予黃酒獨特的風味。由 于酵母在黃酒釀造中占有極其重要的地位，其質量的優劣，直接影響到黃酒的質量和產量， 因此被形象地喻為"酒之骨"。因此，準備測定酵母的生長曲線、掌握酵母的生產狀態是十 分必要的。本發明由此產生。

【發明內容】

[0003] 針對現有技術的上述技術問題，本發明的目的是提供一種通過分離純化測定黃酒 酵母生長曲線的方法，準確測定酵母的生長曲線、掌握酵母的生產狀態，為釀造優質黃酒奠 定基礎。
[0004] 為達到上述目的，本發明是通過以下技術方案實現的： 一種通過分離純化測定黃酒酵母生長曲線的方法，包括以下步驟： (1) 分離純化的步驟： a、 取保藏菌株，在麥芽汁加2%瓊脂滅菌平板上劃線分離，30°C培養兩天，再重復劃線 分離一次，然后轉接到相同培養基的斜面上，于冰箱中保藏； b、 取斜面中菌株接入250mL滅菌麥汁中，lOOrpm、溫度30°C搖床培養每隔2小時取樣 5mL，其中lmL用測定吸光度法確定生長曲線，另外4mL用于菌體干重法確定生長曲線； (2) 吸光度的測定：取樣lmL稀釋20倍于620m處測定吸光度，以同樣稀釋度的麥汁作 為空白； 所述的測定方法為菌體干重法：離心管編號干燥稱重，取樣4mL于4000rpm離心5分 鐘，棄去上清夜，稀鹽酸洗滌菌體，離心后繼續用蒸餾水洗滌離心，于50°C烘干10小時稱 重； (3) 加入各組分于25mL比色管中，定容至25mL，沸水浴5分鐘，冷卻到室溫，于520m下 測定吸光度； 吸光度與標準葡萄糖濃度的線性表達式為y=l. 2289X-0. 4568， R2=0. 9966, X為標準葡萄糖濃度（mg/mL)，y為吸光度； (4) 接種酵母于170ml麥芽汁培養基中，同時做一空白對照，30°C培養，以此為起始時 間，記錄起始溶液的細胞數，并在培養，2,4,6,8,10，12,14,16, 20, 22, 24小時測定酵母菌 在660nm處的吸光值；然后以酵母菌細胞吸光質作縱坐標，生長時間作橫坐標，繪制生長曲 線。
[0005] 本發明的有益效果如下： 本發明一種通過分離純化測定黃酒酵母生長曲線的方法，能夠準確測定酵母的生長曲 線、掌握酵母的生產狀態，為釀造優質黃酒奠定基礎。
【附圖說明】
[0006] 圖1為本發明的酵母的生長曲線圖。
【具體實施方式】
[0007] 下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明，但本發明的保護范圍并不限于 此。
[0008] 本發明通過分離純化測定黃酒酵母生長曲線的方法，包括以下步驟： (1) 分離純化的步驟： a、 取保藏菌株，在麥芽汁加2%瓊脂滅菌平板上劃線分離，30°C培養兩天，再重復劃線 分離一次，然后轉接到相同培養基的斜面上，于冰箱中保藏； b、 取斜面中菌株接入250mL滅菌麥汁中，lOOrpm、溫度30°C搖床培養每隔2小時取樣 5mL，其中lmL用測定吸光度法確定生長曲線，另外4mL用于菌體干重法確定生長曲線； (2) 吸光度的測定：取樣lmL稀釋20倍于620m處測定吸光度，以同樣稀釋度的麥汁作 為空白； 所述的測定方法為菌體干重法：離心管編號干燥稱重，取樣4mL于4000rpm離心5分 鐘，棄去上清夜，稀鹽酸洗滌菌體，離心后繼續用蒸餾水洗滌離心，于50°C烘干10小時稱 重； (3) 按下表1加入各組分于25mL比色管中，定容至25mL，沸水浴5分鐘，冷卻到室溫， 于520m下測定吸光度；
吸光度與標準葡萄糖濃度的線性表達式為y=l. 2289X-0. 4568， R2=0. 9966, X為標準葡萄糖濃度（mg/mL)，y為吸光度； (4) 接種酵母于170ml麥芽汁培養基中，同時做一空白對照，30°C培養，以此為起始時 間，記錄起始溶液的細胞數，并在培養，2,4,6,8,10，12,14,16, 20, 22, 24小時測定酵母菌 在660nm處的吸光值；然后以酵母菌細胞吸光質作縱坐標，生長時間作橫坐標，制得如圖1 所示的生長曲線。
[0009] 本發明一種通過分離純化測定黃酒酵母生長曲線的方法，能夠準確測定酵母的生 長曲線、掌握酵母的生產狀態，為釀造優質黃酒奠定基礎。
[0010] 上述實施例僅用于解釋說明本發明的發明構思，而非對本發明權利保護的限定， 凡利用此構思對本發明進行非實質性的改動，均應落入本發明的保護范圍。
【主權項】
1. 一種通過分離純化測定黃酒酵母生長曲線的方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 分離純化的步驟： a、 取保藏菌株，在麥芽汁加2%瓊脂滅菌平板上劃線分離，30°C培養兩天，再重復劃線 分離一次，然后轉接到相同培養基的斜面上，于冰箱中保藏； b、 取斜面中菌株接入250mL滅菌麥汁中，lOOrpm、溫度30°C搖床培養每隔2小時取樣 5mL，其中ImL用測定吸光度法確定生長曲線，另外4mL用于菌體干重法確定生長曲線； (2) 吸光度的測定：取樣ImL稀釋20倍于620m處測定吸光度，以同樣稀釋度的麥汁作 為空白； 所述的測定方法為菌體干重法：離心管編號干燥稱重，取樣4mL于4000rpm離心5分 鐘，棄去上清夜，稀鹽酸洗滌菌體，離心后繼續用蒸餾水洗滌離心，于50°C烘干10小時稱 重； (3) 加入各組分于25mL比色管中，定容至25mL，沸水浴5分鐘，冷卻到室溫，于520m下 測定吸光度； 吸光度與標準葡萄糖濃度的線性表達式為y=l. 2289X-0. 4568， R2=0. 9966,X為標準葡萄糖濃度（mg/mL)，y為吸光度； (4) 接種酵母于170ml麥芽汁培養基中，同時做一空白對照，30°C培養，以此為起始時 間，記錄起始溶液的細胞數，并在培養，2,4,6,8,10，12,14,16, 20, 22, 24小時測定酵母菌 在660nm處的吸光值；然后以酵母菌細胞吸光質作縱坐標，生長時間作橫坐標，繪制生長曲 線。
【專利摘要】本發明涉及一種通過分離純化測定黃酒酵母生長曲線的方法，包括以下步驟：（1）分離純化的步驟（2）吸光度的測定：測定方法為菌體干重法：離心管編號干燥稱重，取樣4mL于4000rpm離心5分鐘，棄去上清夜，稀鹽酸洗滌菌體，離心后繼續用蒸餾水洗滌離心，于50℃烘干10小時稱重；（3）加入各組分于25mL比色管中，定容至25mL，沸水浴5分鐘，冷卻到室溫，于520m下測定吸光度；吸光度與標準葡萄糖濃度的線性表達式為y=1.2289X-0.4568，R2=0.9966，X為標準葡萄糖濃度(mg/mL)，y為吸光度。本發明能夠準確測定酵母的生長曲線、掌握酵母的生產狀態，為釀造優質黃酒奠定基礎。
【IPC分類】G01N21/31
【公開號】CN104931443
【申請號】CN201510353721
【發明人】張蘇敏, 張新華, 何紹木, 魯志康
【申請人】紹興文理學院
【公開日】2015年9月23日
【申請日】2015年6月25日