專利名稱：固定化β－環糊精及移除膽固醇與三酸甘油酯的方法
技術領域：
本發明是關于β-環糊精(beta-cyclodextrin)的固定化方法，及一種以固定化β-環糊精來移除一生物物質中的膽固醇及三酸甘油酯的方法。
背景技術：
飲食膽固醇(cholesterol)和總血清膽固醇之間的關系一直被廣泛的討論，而且醫學界也已經證實血液中含有過高的膽固醇和三酸甘油酯將容易引起血管硬化等疾病。因此，除了使用藥物降低體內膽固醇量的方法以外，在食物中降低膽固醇含量也成為預防血管硬化疾病的途徑之一，也就是所謂的「食物療法」。但由于服用藥物對大部分的人來說，對身體既具有負擔，其副作用對身體卻也是另一種傷害，因此在食物中降低膽固醇含量或是從血液中進行體外(in vitro)去除膽固醇即成為一種最好的方法。
目前已知被使用來去除膽固醇的技術包括了超臨界流體萃取法(supercritical fluid extraction)、溶劑萃取法(solvent extraction)、蒸汽蒸餾法(steam distillation)、熔體結晶法(melt crystallization)、物理吸附法、肥皂苷處理法(saponin treatment)及酶轉換法(enzymeconversion)等。而使用β-環糊精來吸附膽固醇則具有吸附效率高及低操作成本等優點，因此被廣泛的應用在膽固醇吸附的研究上。
β-環糊精是一個由七個單元葡萄糖以β-(1，4)鍵結的環狀寡醣，由于其分子中心具有和其它化合物可兼容的空隙，因此在1995年時，即有吸附膽固醇應用的相關研究報導出現。學者也曾指出，β-環糊精在蛋黃去除膽固醇上不但具有相當高的選擇性，而且學者曾指出，其具無毒性、可食性以及化學性質穩定等優點，因此近年來一直被廣泛討論用在食品中膽固醇的去除問題。在一些國家，如日本、匈牙利、法國、西班牙及荷蘭等國家已經允許使用β-環糊精來當做食品添加物使用。但是，由于β-環糊精的價格較高，且其屬于水溶性化合物，在吸附膽固醇之后即無法回收再利用，因此其經濟價值就顯的較低了。
已經調查到的相關專利有USP Nos.5,484,624；5,487,912；5,498,437；5,750,164；6,110,517；及6,129,945。相關的論文有G.H，Yen and L.J.Tsai，(1995)Cholesterol Removal from a Lard-water Mixture with β-Cyclodextrin，J.Food Sci.，60(3)561-564；K.Sreenivasan，(1998)Synthesis and Preliminary Studies on a β-Cyclodextrin Coupled Chitosan as a Novel Adsorbent Matrix，J.Appli.Polym.Sci，691051-1055；F.Tanida，et al.，(1998)Novel Synthesis of a Water-solubleCyclodextrin-polymer Having Chitosan Skeleton，Polymer，39(21)5261-5263；J.Ahn and H.S.Kwak，(1999)Optimizing Cholesterol Removal inCream Using β-Cyclodextrin and Response Surface Methodology，J.Food Sci.，64(4)629-632；P.Rao，et al.，(2000)Safety Aspects of Residual β-Cyclodextrin inEgg Treated for Cholesterol Removal，Eur.Food Res.Technol，211393-395；E.J.Chang，et al.，(2001)Optimization of Cholesterol RemovalCondition from Homogenized Milk by Treatment with Saponin，Asian-Aust.J.Anim.Sci，14(6)844-849.
在前述美國的專利中，已經有使用β-環糊精來吸附食品中膽固醇的例子(如蛋黃、牛奶及奶油等)，其在進行吸附之后，再利用離心分離的方法將β-環糊精從食物中取出，此方法雖然是能夠有效的降低食品中的膽固醇含量，但是經過離心分離后的β-環糊精則是無任何利用價值而被丟棄，造成應用價值降低，且應用范圍狹隘的缺點(僅能應用在食品吸附上)。
脫乙酰殼多糖(chitosan)是一種具高抗菌性以及生物降解性的聚寡醣天然生物材料。因為其具有帶正電荷的胺基，因此，在近年來也有人以口服脫乙酰殼多糖的方式來吸附體內的膽鹽，進而達到降低體內膽固醇含量的目的。除此之外，脫乙酰殼多糖也已經被應用在當作藥物輸送系統的母體材料以及固定化的載體材料上，而且都具有相當好的效果。
在1998年時，Sreenivasan曾經以脫乙酰殼多糖粉末來進行β-環糊精固定化，但是由于在高溫以及長時間的劇烈反應過程中(60℃，6小時)，會導致脫乙酰殼多糖的快速膨脹(swelling)成為膠體狀物質，此物質應用在膽固醇吸附上反而造成非常大的阻礙，因而也降低了其商業上的應用價值。

發明內容
本發明的目的之一在于提供一種固定化β-環糊精。
本發明的另一目的在于提供一種β-環糊精的固定化方法。
本發明的又一目的在于提供一種以固定化β-環糊精來移除一生物物質中的膽固醇及三酸甘油酯(triglycerides)的方法。
本發明的另外又一目的在于提供一種將吸附有膽固醇或三酸甘油酯的固定化β-環糊精加予脫附，而獲得膽固醇及三酸甘油酯與一恢復吸附能力的固定化β-環糊精的方法。
我們提出了一個新型的固定化技術(包含了化學接枝法和物理摻合(blending)法)，此技術不但能將β-環糊精固定在載體上來進行膽固醇及三酸甘油酯的吸附行為，另外，可借著脫附技術，將三酸甘油酯及膽固醇從幾丁聚醣載體上的β-環糊精脫附。經脫附后的三酸甘油酯及膽固醇則可被回收進行副產品的開發及利用(例如作為飼料)，而已完成脫附的脫乙酰殼多糖載體則可以繼續被使用來進行三酸甘油酯及膽固醇的吸附。由于此載體的顆粒較一般粉末大，且質地堅硬，吸水膨脹率低，因此，其也具有載體和食品間容易分離的優點(不需經過離心即可輕易分離)。另外，此發明的載體不僅可使用在食品上(如蛋黃)三酸甘油酯及膽固醇的去除，若制成為填充柱(packingcolumn)后亦可以在體外進行人體血液的三酸甘油酯及膽固醇去除。
發明的詳細說明本發明揭示了一種固定化β-環糊精，包含β-環糊精固定于其上的粒徑介于500-1500微米的脫乙酰殼多糖顆粒。
一適合用于制備本發明的固定化β-環糊精的方法包含下列步驟a)將脫乙酰殼多糖溶解于一酸性水溶液，較佳的一醋酸水溶液；b)將步驟a)所獲得的脫乙酰殼多糖溶液加入在一堿液中以形成脫乙酰殼多糖顆粒；c)從步驟b)的混合物中移出脫乙酰殼多糖顆粒并水洗及干燥之，而獲得粒徑介于500-1500微米的脫乙酰殼多糖顆粒；d)將步驟c)的脫乙酰殼多糖顆粒與多異氰酸酯反應，而獲得接枝有異氰酸酯基的脫乙酰殼多糖顆粒；及e)將步驟d)的接枝有異氰酸酯基的脫乙酰殼多糖顆粒與β-環糊精反應，而獲得β-環糊精固定于其上的脫乙酰殼多糖顆粒。
另一種適合用于制備本發明的固定化β-環糊精的方法，包含下列步驟A)將脫乙酰殼多糖粉末溶解于一β-環糊精的酸性水懸浮液中，較佳的該酸性水懸浮液含有醋酸；B)將步驟A)所獲得的溶解有脫乙酰殼多糖的懸浮液加入在一堿液而形成一粒徑介于500-1500微米且固定有β-環糊精的脫乙酰殼多糖顆粒；及C)從步驟B)的混合物中移出該固定有β-環糊精的脫乙酰殼多糖顆粒，水洗及干燥之。
適用于本發明的脫乙酰殼多糖較佳的具有一介于80-98的去乙酰度，及一介于500-1200K道爾頓(Dalton)的分子量。
適用于本發明的堿液為一包含一堿金屬氫氧化物水溶液及一作為改變該水溶液比重作用的有機溶劑的均一相溶液。較佳的，該有機溶劑為乙醇。
較佳的，在步驟b)中該脫乙酰殼多糖溶液是通過一針頭編號介于23-27G的針頭以一滴一滴的方式被加入于該堿液中。
較佳的，步驟d)的接枝反應是在一有機溶劑中及一觸媒的存在下進行。該觸媒可以為任何適用于多異氰酸酯與一活性氫反應的觸媒，包括(但不限于)有機錫鹽或叔胺。步驟d)的多異氰酸酯基例如可以為1，6-己二異氰酸酯(hexamethylene diisocyanate)，環己烷二異氰酸酯(cyclo hexamethylene diisocyanate)，甲苯二異氰酸酯(TDI)，4，4’-二苯甲烷二異氰酸酯(MDI)或它們的混合物。較佳的，步驟d)進一步包含將該被接枝的脫乙酰殼多糖顆粒在接枝反應完成后與該有機溶劑分離并干燥該被接枝的脫乙酰殼多糖顆粒。較佳的，步驟e)包含將該被接枝的脫乙酰殼多糖顆粒與一β-環糊精的水溶液在一觸媒的存在下進行反應，其中該觸媒較佳的與步驟d)的接枝反應所使用者相同。較佳的，步驟e)進一步包含將該β-環糊精固定在其上的脫乙酰殼多糖顆粒在反應完成后從該水溶液中移出，清洗及干燥之。
較佳的，步驟A)的該β-環糊精的酸性水懸浮液是將過飽和量的β-環糊精粉末與醋酸水溶液混合而形成。
較佳的，于步驟B)中該溶解有脫乙酰殼多糖的懸浮液是通過一針頭編號介于23-27G的針頭以一滴一滴的方式被加入于該堿液中。
本發明亦提供一種從液態生物物質進料(例如食物或血漿)移除一種或多種選自三酸甘油酯及膽固醇所組成族群的脂肪物質的方法，包含下列步驟i)將該液態生物物質進料與一固定在脫乙酰殼多糖顆粒上的固定化β-環糊精接觸一段時間，而獲得吸附有該一種或多種脂肪物質的固定化β-環糊精及一具有降低的該一種或多種脂肪物質的液態生物物質產物，較佳的，及ii)脫附該吸附有該一種或多種脂肪物質的固定化β-環糊精，而獲得一再生的固定化β-環糊精及一適于后續處理的該一種或多種脂肪物質，其中該再生的固定化β-環糊精可被再循環用于步驟i)。
如果情況需要，于步驟ii)之前，進一步包含步驟i′)分離該具有降低的該一種或多種脂肪物質的液態生物物質產物與該吸附有該一種或多種脂肪物質的固定化β-環糊精。
較佳的，其中步驟i)的固定化β-環糊精是被留置于一容器中，而該液態生物物質是被導入該容器與該固定化β-環糊精接觸，于是該具有降低的該一種或多種脂肪物質的液態生物物質產物從該容器的一出口流出。
較佳的，步驟ii)的脫附包含將該吸附有該一種或多種脂肪物質的固定化β-環糊精置于一包含一有機溶劑(例如乙醇)的液體中，并且攪拌或超音波振蕩所獲得的混合物。
本發明將借助以下實施例被進一步了解，這些實施例僅作為說明之用，而非用于限制本發明范圍。
在以下實施例，我們除了使用脫乙酰殼多糖來進行β-環糊精固定化，并且使用固定化β-環糊精對蛋黃中的膽固醇與三酸甘油酯(兩者是結合于蛋黃中的脂蛋白(lipoprotein))進行吸附，以及對吸附后的固定化β-環糊精進行脫附，并且再循環使用脫附后的固定化β-環糊精。除此之外，我們亦利用此固定化β-環糊精進行人體血漿中的膽固醇與三酸甘油酯(兩者是結合于血漿中的脂蛋白)去除試驗。


圖1.顯示在不同的蛋黃稀釋濃度下，吸附時間和蛋黃中膽固醇與三酸甘油酯殘余量的關系。(■)表示蛋黃稀釋10倍；(●)表示蛋黃稀釋20倍；(▲)表示蛋黃稀釋30倍。
圖2.顯示脫乙酰殼多糖載體的再生次數與膽固醇及三酸甘油酯的吸附量和脫附量的關系，其中使用高轉速的攪拌機攪拌60分鐘進行再生，及(○)表示膽固醇吸附量；(●)表示膽固醇脫附量。
具體實施例方式
實施例1脫乙酰殼多糖載體的制備將脫乙酰殼多糖粉末(去乙酰度86％，分子量800k Dalton)以3∶100(w/v)(g/ml)的比例溶解于1wt％醋酸溶液中，經攪拌均勻后，將其以注射方式(針頭編號為27G)徐徐滴入含26wt％乙醇的1N氫氧化鈉水溶液中而形成白色膠體顆粒沉淀。將此膠體顆粒以去離子水清洗至中性，并且在室溫下干燥36小時以上，即可制得大小約為600～750μm的金黃色脫乙酰殼多糖載體。所使用乙醇具有改變液體比重，使所形成的膠體能迅速沉入溶液底部的作用，避免膠體漂浮溶液液面而互相粘結的情形。
針頭編號為23-27G的針頭可用于形成大小約為500～1200μm的金黃色脫乙酰殼多糖載體。
實施例2β-環糊精溶液的制備方法將β-環糊精溶解至N，N-二甲基甲酰胺(N，N-dimethylformamide)溶劑中形成β-環糊精溶液，此溶液的總濃度(w/v)(g/ml)被制備成為與其反應的脫乙酰殼多糖載體的用量(克重)的2倍。
實施例3脫乙酰殼多糖載體固定β-環糊精的方法在進行固定化之前，先將實施例1所制備的脫乙酰殼多糖載體以甲苯溶劑清洗一次，然后置入一液面足以蓋過脫乙酰殼多糖載體的甲苯溶劑中。將液態1，6-二異氰酸酯基己烷(1，6-diisocyanatohexane)添加于含載體的甲苯溶劑中，使其總濃度(v/v)和脫乙酰殼多糖載體的比例為5∶1(％/w)，并加入10滴的2-乙基己酸亞錫(stannous 2-ethylhexanote)催化劑，經室溫下反應40分鐘后再將溶液倒出，并以氮氣將脫乙酰殼多糖載體吹干。
將實施例2所制備的β-環糊精溶液倒在上述已完成1，6-二異氰酸酯基己烷接枝反應的載體上，并加入10滴的2-乙基己酸亞錫催化劑，在室溫下反應90分鐘后將溶液倒出，依順序分別使用去離子水、乙醇、去離子水各清洗3次，最后再經過干燥即可制得。
實施例41，6-二異氰酸酯基己烷及β-環糊精的添加量對固定化量的影響(表一)添加不同量的1，6-二異氰酸酯基己烷于含脫乙酰殼多糖載體的甲苯溶劑中，使其總濃度(v/v)與載體用量(克重)的比值分別為1、3、5、7、10(％/w)，再加入總濃度(w/v)與載體的重量(克重)比例為1∶1(％/w)的β-環糊精溶液，經過實施例3所述的固定化反應后發現，當添加1，6-二異氰酸酯基己烷的總濃度與載體間的比值為5以上時，在室溫下反應40分鐘后，β-環糊精的固定化量維持在0.34g/g-脫乙酰殼多糖左右。結果列于表一。
若我們將1，6-二異氰酸酯基己烷添加的總濃度與載體用量(克重)間的比值維持在5，而改變β-環糊精溶液濃度(w/v)與載體用量(克重)間的比值分別為1、2、3、4、5(％/w)時發現，當添加β-環糊精溶液的總濃度與載體間的比值為2以上時，在室溫下反應90分鐘后，β-環糊精的固定化量則維持在0.44g/g-脫乙酰殼多糖左右。結果列于表一。
β-環糊精的固定化量的測得是分別取反應前與反應后的β-環糊精溶液2ml，加入0.5ml的濃硫酸及1.5ml的苯酚(phenol)試劑，于100℃下加熱30分鐘，以波長640nm的分光光度計測量吸光值，再計算得出。
表一

實施例5時間與溫度對β-環糊精固定化量的影響我們將脫乙酰殼多糖載體和1，6-二異氰酸酯基己烷以及β-環糊精的反應時間分別設定為20、40、60、90及120分鐘；反應溫度則設定為RT(室溫)、30、40、50及60℃。實驗結果發現，當脫乙酰殼多糖載體和1，6-二異氰酸酯基己烷的反應時間為40分鐘以上，而β-環糊精的反應時間則為60分鐘以上(均為在室溫下)時，β-環糊精的固定化量均維持在0.44g/g-脫乙酰殼多糖左右。若在上述的固定化時間條件下改變溫度，β-環糊精固定化量則隨溫度升高而稍微增加，但增加的量并不是很顯著，因此我們判定，溫度的提高僅會使反應的時間加快，而對β-環糊精的固定量并不是有很大的影響。
實施例6載體對蛋黃中膽固醇及三酸甘油酯去除的影響(圖1)為了在吸附反應時降低質傳阻力，因此我們將蛋黃由蛋中分離后，分別以去離子水稀釋成10、20及30倍。當添加1％的固定化載體(w/v)于蛋黃溶液中進行吸附時發現，如圖1所示，若載體在稀釋10倍的蛋黃中進行吸附，經30分鐘后，膽固醇及三酸甘油酯的殘余量約為78％；若載體在稀釋20倍的蛋黃中進行吸附，經60分鐘后，膽固醇及三酸甘油酯的殘余量約為40％；若載體在稀釋30倍的蛋黃中進行吸附，經120分鐘后，膽固醇及三酸甘油酯的殘余量約為8％。因此可以發現，蛋黃的稀釋倍數愈高，有助于降低質傳阻力，并且達到最佳的吸附效率。
膽固醇及三酸甘油酯的殘余量的測得是分別取吸附前與吸附后的蛋黃溶液1ml，以2ml的氯仿(chloroform)萃取30分鐘，取出氯仿萃取液并以HPLC分析其中所含的膽固醇及三酸甘油酯的量。HPLC分析的移動相為己烷/異丙醇＝4∶5，固定相為甲醇，UV吸收波長為205nm。
實施例7載體對血漿中膽固醇及三酸甘油酯去除的影響(表二)我們采集了兩位健康人血，將血液經過高速離心(250×g)分離出血漿。以每100ml血漿5克脫乙酰殼多糖載體(5％，w/v)的比例在血漿中加入脫乙酰殼多糖載體，經過60分鐘的吸附反應之后發現，在檢體一和檢體二的血漿中，平均約有55％的膽固醇及三酸甘油酯被去除。因此我們可以證實，固定在脫乙酰殼多糖載體的固定化β-環糊精對血漿中的膽固醇及三酸甘油酯仍具有效的去除能力。結果列于表二。
表二 實施例8脫乙酰殼多糖載體的脫附反應及回收再利用測試(圖2)實驗中我們發現，有機溶劑的使用以及高能量攪拌功率的條件下可以有效的使膽固醇及三酸甘油酯從固定有β-環糊精的脫乙酰殼多糖載體上脫附；因此我們將已在蛋黃中完成吸附膽固醇及三酸甘油酯的固定化β-環糊精載體以1∶50(w/v)的比例置入酒精中，并且分別在高轉速的攪拌機中進行攪拌以及110瓦功率的超音波均質機震蕩下進行脫附，分別經過60及30分鐘后發現膽固醇及三酸甘油酯脫附效率均可高達98％以上。因此我們使用此脫附技術來進行膽固醇及三酸甘油酯的脫附，并且使脫附后的固定有β-環糊精的脫乙酰殼多糖載體繼續吸附蛋黃中的膽固醇及三酸甘油酯。如圖2所示，經過12次的吸附及脫附循環后，固定有β-環糊精的脫乙酰殼多糖載體仍可維持80％以上的膽固醇及三酸甘油酯的吸附量。
實施例9使用摻合(blending)的方法制備脫乙酰殼多糖載體此方法是利用β-環糊精和脫乙酰殼多糖進行摻合作用，使β-環糊精附在脫乙酰殼多糖載體表面上而達到吸附膽固醇的目的。首先，將過量的β-環糊精粉末置于1％的醋酸溶液中(濃度需超過2.5％)，形成懸浮溶液，再加入3％的脫乙酰殼多糖粉末，并攪拌至形成一均勻懸浮溶液。將此懸浮溶液以注射方式(針頭編號為27G)徐徐滴入含26wt％乙醇的1N氫氧化鈉水溶液中，形成膠體顆粒，經干燥可制得固定有β-環糊精的脫乙酰殼多糖載體。將此載體進行膽固醇及三酸甘油酯吸附試驗時，發現其具有吸附膽固醇及三酸甘油酯的效果，吸附能力隨著β-環糊精添加量的增加而增加(最多到曾使用5％)。此外，經過如實施例8所述的吸附-脫附循環12次后，固定有β-環糊精的脫乙酰殼多糖載體仍可維持80％以上的膽固醇及三酸甘油酯的吸附量。
權利要求
1.一種固定化β-環糊精，包含β-環糊精固定于其上的粒徑介于500-1500微米的脫乙酰殼多糖顆粒。
2.如權利要求1所述的固定化β-環糊精，其是通過下列步驟而制備a)將脫乙酰殼多糖溶解于一酸性水溶液；b)將步驟a)所獲得的脫乙酰殼多糖溶液加入在一堿液中以形成脫乙酰殼多糖顆粒；c)從步驟b)的混合物中移出脫乙酰殼多糖顆粒并水洗及干燥之，而獲得粒徑介于500-1500微米的脫乙酰殼多糖顆粒；d)將步驟c)的脫乙酰殼多糖顆粒與多異氰酸酯反應，而獲得接枝有異氰酸酯基的脫乙酰殼多糖顆粒；及e)將步驟d)的接枝有異氰酸酯基的脫乙酰殼多糖顆粒與β-環糊精反應，而獲得β-環糊精固定于其上的脫乙酰殼多糖顆粒。
3.如權利要求1所述的固定化β-環糊精，其是通過下列步驟而制備A)將脫乙酰殼多糖粉末溶解于一β-環糊精的酸性水懸浮液中；B)將步驟A)所獲得的溶解有脫乙酰殼多糖的懸浮液加入在一堿液而形成一粒徑介于500-1500微米且固定有β-環糊精的脫乙酰殼多糖顆粒；及C)從步驟B)的混合物中移出該固定有β-環糊精的脫乙酰殼多糖顆粒，水洗及干燥之。
4.一種從液態生物物質進料移除一種或多種選自三酸甘油酯及膽固醇所組成族群的脂肪物質的方法，包含下列步驟i)將該液態生物物質進料與一固定在脫乙酰殼多糖顆粒上的固定化β-環糊精接觸一段時間，而獲得吸附有該一種或多種脂肪物質的固定化β-環糊精及一具有降低的該一種或多種脂肪物質的液態生物物質產物。
5.如權利要求4所述的方法，進一步包含以下步驟ii)ii)脫附該吸附有該一種或多種脂肪物質的固定化β-環糊精，而獲得一再生的固定化β-環糊精及一適于后續處理的該一種或多種脂肪物質，其中該再生的固定化β-環糊精可被再循環用于步驟i)。
6.如權利要求4所述的方法，進一步包含以下步驟i′)i′)分離該具有降低的該一種或多種脂肪物質的液態生物物質產物與該吸附有該一種或多種脂肪物質的固定化β-環糊精。
7.如權利要求2所述的固定化β-環糊精，其中步驟a)的脫乙酰殼多糖具有一介于80-98的去乙酰度，及一介于500-1200K道爾頓的分子量。
8.如權利要求2所述的固定化β-環糊精，其中步驟a)的酸性水溶液為醋酸水溶液。
9.如權利要求2所述的固定化β-環糊精，其中于步驟b)中該脫乙酰殼多糖溶液是通過一針頭編號介于23-27G的針頭以一滴一滴的方式被加入于該堿液中。
10.如權利要求2所述的固定化β-環糊精，其中該堿液為一包含一堿金屬氫氧化物水溶液及一作為改變該水溶液比重作用的有機溶劑的均一相溶液。
11.如權利要求10所述的固定化β-環糊精，其中該有機溶劑為乙醇。
12.如權利要求2所述的固定化β-環糊精，其中步驟d)的接枝反應是在一有機溶劑中及一觸媒的存在下進行。
13.如權利要求2所述的固定化β-環糊精，其中步驟d)的多異氰酸酯基為1，6-己二異氰酸酯、環己烷二異氰酸酯、甲苯二異氰酸酯、4，4’-二苯甲烷二異氰酸酯或它們的混合物。
14.如權利要求12所述的固定化β-環糊精，其中步驟d)進一步包含將該被接枝的脫乙酰殼多糖顆粒在接枝反應完成后與該有機溶劑分離并干燥該被接枝的脫乙酰殼多糖顆粒。
15.如權利要求2所述的固定化β-環糊精，其中步驟e)包含將該被接枝的脫乙酰殼多糖顆粒與一β-環糊精的水溶液在一觸媒的存在下進行反應。
16.如權利要求12或15所述的固定化β-環糊精，其中該觸媒是有機錫鹽或叔胺。
17.如權利要求15所述的固定化β-環糊精，其中步驟e)進一步包含將該β-環糊精固定于其上的脫乙酰殼多糖顆粒在反應完成后從該水溶液中移出，清洗及干燥之。
18.如權利要求3所述的固定化β-環糊精，其中步驟A)的脫乙酰殼多糖粉末具有一介于80-98的去乙酰度，及一介于500-1200K道爾頓的分子量。
19.如權利要求3所述的固定化β-環糊精，其中步驟A)的β-環糊精的酸性水懸浮液包含醋酸。
20.如權利要求3所述的固定化β-環糊精，其中步驟A)的該β-環糊精的酸性水懸浮液是將過飽和量的β-環糊精粉末與醋酸水溶液混合而形成。
21.如權利要求3所述的固定化β-環糊精，其中于步驟B)中該溶解有脫乙酰殼多糖的懸浮液是通過一針頭編號介于23-27G的針頭以一滴一滴的方式被加入于該堿液中。
22.如權利要求21所述的固定化β-環糊精，其中該液態堿為一包含一堿金屬氫氧化物水溶液及一作為改變該水溶液比重作用的有機溶劑的均一相溶液。
23.如權利要求2所述項的固定化β-環糊精，其中該有機溶劑為乙醇。
24.如權利要求4所述的方法，其中該液態生物物質為食物或血漿。
25.如權利要求4所述的方法，其中步驟i)的固定化β-環糊精是被留置于一容器中，而該液態生物物質是被導入該容器與該固定化β-環糊精接觸，于是該具有降低的該一種或多種脂肪物質的液態生物物質產物從該容器的一出口流出。
26.如權利要求5所述的方法，其中步驟ii)的脫附包含將該吸附有該一種或多種脂肪物質的固定化β-環糊精置于一包含一有機溶劑的液體中，并且攪拌或超音波振蕩所獲得的混合物。
27.如權利要求26所述的方法，該有機溶劑為乙醇。
全文摘要
本發明是關于β－環糊精(beta－cyclodextrin)的固定化方法，及一種以固定化β－環糊精來移除一生物物質中的膽固醇及三酸甘油酯的方法。β－環糊精的固定化技術(包含了化學接枝法和物理摻合(blending)法)，不但能將β－環糊精固定在脫乙酰殼多糖(chitosan)載體上來吸附食物或血漿中的膽固醇及三酸甘油酯，另外，可借著脫附技術，將三酸甘油酯及膽固醇從脫乙酰殼多糖載體上的β－環糊精脫附。經脫附后的三酸甘油酯及膽固醇則可被回收進行副產品的開發及利用(例如作為飼料)，而已完成脫附的脫乙酰殼多糖載體則可以繼續被使用來進行三酸甘油酯及膽固醇的吸附。
文檔編號B01J20/22GK1411904SQ0114168
公開日2003年4月23日 申請日期2001年10月8日 優先權日2001年10月8日
發明者吳文騰, 鐘次文, 邱少華 申請人:吳文騰