4- [2-[[5-甲基-1-(2-萘基)- 1h-吡唑-3-基]氧基]乙基]嗎啉鹽的制作方法
【專利摘要】本發明涉及4?[2?[[5?甲基?1?（2?萘基）?1H?吡唑?3?基]氧基]乙基]嗎啉鹽，特別是鹽酸鹽，還涉及包括它們的藥物組合物，以及其用于治療和/或預防σ受體相關疾病的用途。
【技術領域】
[00011 本發明涉及一些4-[2-[ [5-甲基-1-(2-萘基)-1Η-吡唑-3-基]氧基]乙基]嗎啉鹽， 以及包含所述鹽的藥物組合物，還涉及其在治療和/或預防σ受體關聯疾病中的用途。 4- [2-[[5-甲基-1-(2-萘基)-1H-吡唑-3-基]氧基]乙基]嗎 啉鹽
【背景技術】
[0002] 近年來，通過對與目標疾病相關的蛋白質和其它生物分子的結構的更透徹的理 解，為新治療劑的探索提供極大的幫助。這些蛋白質中的一個重要的種類是西格瑪（σ)受 體，其是中樞神經系統(CNS)的細胞表面受體，可能與阿片樣物質導致煩躁不安、致幻覺效 果和強心作用相關。通過對σ受體的生物學及功能的研究，已經證實 〇受體配體可以用于精 神病和運動障礙(如肌張力障礙和遲發性運動障礙，和與亨廷頓氏舞蹈病或抽動穢語綜合 征和帕金森病相關的運動障礙）的治療(Walker,J·Μ·等,PharmacoIogical Reviews，1990， 42,355)。據報道已知的σ受體配體林卡唑顯示了對精神病治療的臨床效果（Snyder，S.Η.， Largent ,B.L.J.Neuropsychiatry 1989,1，7)。〇結合位點對于某些阿片苯基嗎啡類藥物的 右旋異構體(如( + )SKF 10047、（ + )環佐辛和(+ )鎮痛新）以及一些發作性睡病的藥物(如氟 哌啶醇)具有優先的親和性。
[0003] 〇受體具有至少兩個亞型，這些亞型可能是由這些具有藥物活性的藥物的立體選 擇性異構體來區分的。SKF 10047對于sigma Ι(σ-Ι)位點具有納摩爾親和力，對于sigma 2 (σ-2)位點具有微摩爾親和力。氟哌啶醇對于兩種亞型具有相似的親和力。內源的σ配體還 未知，雖然已經表明黃體酮可能是σ配體中的一種。可能的σ-位點-介導的藥物作用包括谷 氨酸受體功能的調節、神經遞質應答、神經保護、行為以及認知（Quirion,R.等，Trends Pharmacol. Sci .，1992,13:85-86)。大多數的研究暗示了σ結合位點（受體)是信號轉導級聯 的細胞膜基礎。已報道的作為選擇性σ配體的藥物已經評為抗精神病藥(Hanner，Μ.等， Proc .Natl .Acad. Sci .，1996，93:8072-8077) XNS、免疫和內分泌系統中σ受體的存在表明 它可能充當三個系統的連接。
[0004] 考慮到〇受體的激動劑或拮抗劑的潛在的治療應用，在尋找選擇性配體方面做了 巨大的努力。因此，現有技術公開了不同的σ受體配體。4-[2_[ [5-甲基-1-(2-萘基)-1Η-吡 唑-3-基]氧基]乙基]嗎啉是這些已知的σ受體配體中的一種。在WO 2006/021462中公開了 該化合物及其合成。
[0005] 4-[2-[[5-甲基-1-(2-萘基）-1!1-吡唑-3-基]氧基]乙基]嗎啉是高選擇性的 sigma-Uo-l)受體拮抗劑，其在治療和預防慢性和急性疼痛、特別是神經性疼痛中顯示了 很強的鎮痛活性。該化合物分子量為337.42uma。該化合物的結構式為：
[0006]
[0007] 為了進行藥物研發及實現其潛力，本領域需要研究4-[2_[ [5-甲基-1-(2-萘基_ IH-吡唑-3-基]氧基]乙基]嗎啉的其它形式，這些形式將有利于該活性藥物組分較優配方 的制備。此外，化合物的新形式還可能改進化合物本身的生產、加工、存儲特性及其治療效 果，例如藥理學性質。
[0008] 就此而言，化合物的可選形式也許具有迥然不同的性質，例如，舉例來說，增強的 熱力學穩定性、較高的純度或改進的生物利用率(例如，更好的吸收、溶解模式）。特定的化 合物形式還會利于化合物制劑的制備(例如增強流動性）、加工和存儲(例如不吸潮、貯存期 長)或允許治療劑較低劑量的應用，從而減少其潛在的副作用。因此，提供上述對于藥物應 用有著所需性質的這些形式是很重要的。
[0009] 發明概述
[0010] 本發明的發明人，在對4-[2-[ [5-甲基-1-(2-萘基)-1Η-啦挫-3-基]氧基]乙基]嗎 啉(本文中稱為"化合物63"）的不同形式進行廣泛研究之后，出乎意料地發現并證明了其鹽 類中的一些、特別是其鹽酸鹽，具有有利的生產、加工、存儲和/或治療的性質。
[0011] 因此，本發明的第一方面涉及4-[2-[ [5-甲基-1-(2-萘基)-1Η-吡唑-3-基]氧基] 乙基]嗎啉鹽，其選自由乙磺酸鹽、延胡索酸鹽、鹽酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽和甲 磺酸鹽組成的組中。
[0012] 在優選的實施方案中，本發明涉及4-[2-[[5_甲基-卜(2-萘基)-1Η-啦挫-3-基]氧 基]乙基]嗎啉的鹽酸鹽(本文中是指"P027"或"實施例Γ)。
[0013] P027化合物分子量為373 · 88uma，pKa為6 · 73，熔點為194 · 2°C。該化合物極易溶于 水，易溶于甲醇、IN鹽酸和二甲基亞砜。難溶于乙醇，微溶于丙酮，并且幾乎不溶于乙酸乙酯 和IN氫氧化鈉。該產物在體內顯示了比其相關的基底化合物更好的溶解和吸收特性。
[0014] 另一方面，本發明涉及4-[2-[ [5-甲基-1-(2-萘基)-1Η-吡唑-3-基]氧基]乙基]嗎 啉的鹽酸鹽的制備方法，其包括：
[0015] a)混合4-[2-[ [5-甲基-1-(2-萘基)-1Η-啦唑-3-基]氧基]乙基]嗎啉與包含鹽酸 的溶液，以及
[0016] b)分離獲得的鹽酸鹽。
[0017] 本發明的另一方面包括藥物組合物，其包含4-[2-[[5_甲基-1-(2-萘基）-IH-吡 唑-3-基]氧基]乙基]嗎啉鹽酸鹽以及藥學上可接受的載體、佐劑或賦形劑。
[0018] 本發明的另一方面涉及4-[2-[ [5-甲基-1-(2-萘基)-1Η-吡唑-3-基]氧基]乙基] 嗎啉鹽酸鹽作為藥物的用途，優選作為σ配體，即，用于治療和/或預防 〇受體介導的疾病或 癥狀。
[0019] 本發明的另一方面涉及治療和/或預防σ受體介導的疾病的方法，其包括對需要所 述治療的病人施用治療有效量的上述限定的化合物或包含該化合物的藥物組合物。
[0020] 這些方面及其優選實施方案在權利要求中也進行了進一步的確定。
【附圖說明】
[0021] 圖1:實施例1的差示掃描量熱法(DSC)
[0022] 圖2:實施例1的熱重量分析法(TGA)
[0023]圖3:實施例1的質子核磁共振(1HNMR)
[0024]圖4:化合物63的質子核磁共振(1HNMR)
[0025]圖5:實施例2的質子核磁共振(1HNMR)
[0026]圖6:實施例2的差示掃描量熱法(DSC)
[0027] 圖7:實施例2的熱重量分析法(TGA)
[0028] 圖8:實施例2的傅里葉轉換紅外光譜分析 [0029]圖9:實施例3的質子核磁共振(1HNMR)
[0030]圖10:實施例3的差示掃描量熱法(DSC)
[0031]圖11:實施例3的熱重量分析法(TGA)
[0032]圖12:實施例3的傅里葉轉換紅外光譜分析 [0033]圖13:實施例4的質子核磁共振(1HNMR)
[0034]圖14:實施例4的差示掃描量熱法(DSC)
[0035] 圖15:實施例4的熱重量分析法(TGA)
[0036] 圖16:實施例4的傅里葉轉換紅外光譜分析 [0037]圖17:實施例5的質子核磁共振(1HNMR)
[0038]圖18:實施例5的差示掃描量熱法(DSC)
[0039] 圖19:實施例5的熱重量分析法(TGA)
[0040] 圖20:實施例5的傅里葉轉換紅外光譜分析 [00411圖21:實施例6的質子核磁共振(1HNMR)
[0042]圖22:實施例6的差示掃描量熱法(DSC)
[0043] 圖23:實施例6的熱重量分析法(TGA)
[0044] 圖24:實施例6的傅里葉轉換紅外光譜分析 [0045]圖25:實施例7的質子核磁共振(1HNMR)
[0046]圖26:實施例7的差示掃描量熱法(DSC)
[0047]圖27:實施例7的熱重量分析法(TGA)
[0048]圖28:實施例7的傅里葉轉換紅外光譜分析 [0049]圖29:實施例1的熱力學溶解度校正曲線。
[0050]圖30:實施例1中大鼠的血漿濃度
[00511發明詳述
[0052] 發明人發現了化合物P027,4-[2-[[5-甲基-1-(2-萘基)-1Η-吡唑-3-基]氧基]乙 基]嗎啉的鹽酸鹽具有優點，特別地，由于事實上它是結晶固體，因此簡化了分離、提純和加 工。
[0053] 實際上，在對鹽類進行廣泛篩選后，發明人注意到，當與4-[2-[[5_甲基-1-(2-萘 基)-1H-吡唑-3-基]氧基]乙基]嗎啉混合時，許多酸類(例如硫酸或L-酒石酸)沒有形成固 體，而是形成油狀物。此外，在適于獲得固態鹽的酸中，鹽酸是在制備、物理穩定性、放大實 驗、可溶性等方面提供較好結果的物質。
[0054] 因此，本發明涉及4-[2-[ [5-甲基-1-(2-萘基）-1Η-吡唑-3-基]氧基]乙基]嗎啉 鹽，其選自由乙磺酸鹽、延胡索酸鹽、鹽酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽和甲磺酸鹽組 成的組中。這些鹽類能夠提供結晶固體。
[0055] 優選地，本發明涉及4-[2_[ [5-甲基-1-(2-萘基)-1Η-吡唑-3-基]氧基]乙基]嗎啉 鹽酸鹽(P027)。
[0056] 4-[2-[ [5-甲基-1-(2-萘基)-1Η-吡唑-3-基]氧基]乙基]嗎啉的鹽酸鹽可以通過 將鹽酸溶液加入溶于適當的溶劑中的其相應的堿中制備。在【具體實施方式】中，通過將游離 堿化合物溶于用HCl飽和的乙醇中，可以很容易地獲得P027化合物。
[0057] 如前所述，據報道4-[2_[ [5-甲基-1-(2-萘基)-1Η-吡唑-3-基]氧基]乙基]嗎啉是 一種高選擇性的sigma-l(o-l)受體拮抗劑，在治療和預防慢性和急性疼痛、特別是神經性 疼痛痛中顯示了很強的鎮痛活性（參見WO 2006/021462)。已經發現了4-[2-[ [5-甲基-ΙΟ-萘基 )-1Η-吡唑-3-基] 氧基] 乙基] 嗎啉的鹽酸鹽特別適合用作藥物制劑。因此 ，本發明 進一步提供了施用于病人的藥物制劑或藥物組合物，其包含4-[2-[[5_甲基-1-(2-萘基)-IH-吡唑-3-基]氧基]乙基]嗎啉鹽酸鹽以及藥學上可接受的載體、佐劑或賦形劑。
[0058] 更具體地，P027化合物在治療和/或預防〇受體介導的疾病或癥狀中是有效的。
[0059] 在更優選的實施方案中，P027化合物用于制備治療和/或預防疾病的藥物制劑，所 述疾病選自由以下疾病組成的組中：腹瀉;脂蛋白紊亂;偏頭痛;肥胖;關節炎;高血壓;心律 不齊;潰瘍;學習、記憶力和注意力不足;認識障礙;神經退行性疾病;脫髓鞘疾病;藥物和化 學物質（包括古柯堿、安非他明、酒精和尼古丁）成癮;遲發性運動障礙;缺血性中風；癲癇 癥；中風;緊張;癌癥;精神病癥狀，特別是抑郁癥、憂慮癥或精神分裂癥;炎癥;或自身免疫 疾病。
[0060] 根據本發明的藥物組合物中的輔料或添加劑可以選自載體、賦形劑、支撐材料、潤 滑劑、填料、溶劑、稀釋劑、著色劑、調味劑(例如糖）、抗氧化劑、結合劑、粘合劑、崩解劑、防 粘劑、助流劑和/或粘合劑。對于栓劑，可理解為用于胃腸外應用的蠟或脂肪酸酯或防腐劑、 乳化劑和/或載體。輔料和/或添加劑的選擇和用量將依賴于藥物組合物的施用形式。
[0061] 根據本發明的藥物制劑或藥物組合物可以是適于施用于人和/或動物的任意形 式，優選施用于人，包括孕婦、兒童和成人，并且本領域技術人員可以通過已知的標準程序 制備。因此，根據本發明的制劑配方可能適合于局部的或系統的施用，特別地適用于表皮 的、經皮的、皮下的、肌肉的、關節的、腹膜內的、靜脈內的、動脈內的、膀胱內的、骨內的、海 綿體的、肺的、口腔的、舌下的、眼的、玻璃體內的、鼻內的、經皮的、直腸的、陰道的、口服的、 硬膜外的、鞘內的、心室內的、腦內的、腦室內的、腦池內的、脊柱內的、髓周的、顱內的，通過 有或沒有栗裝置的針或導管遞送，或其它的給藥途徑。
[0062] 提到的劑型將使用標準方法制備，例如在西班牙和美國藥典以及相似的參考文獻 中描述或涉及的方法。
[0063] 在本發明的一個實施方式中，優選P027化合物以治療有效劑量使用。醫生確定最 合適的使用的治療劑的劑量，并且劑量會根據給藥的形式和具體選擇的化合物而變化，此 外，其會隨著進行治療的病人、病人的年齡、治療的疾病種類或癥狀而改變。當組合物口服 給藥時，需要更多量的活性劑才能達到與較小的腸胃外給藥劑量相同的效果。與可比較的 治療劑以相同的方式使用該化合物是有效的，并且劑量水平與通常施用的其他的治療劑為 同一數量級。典型地，有效化合物一天施用一次或多次，例如每日1、2、3或4次，典型的每日 總劑量為〇 · l-l〇〇〇mg/kg/日。
[0064]以下實施例僅用于說明本發明的特定的【具體實施方式】而不以任何形式限制本發 明。
【具體實施方式】 [0065]分析技術
[0066]以下技術用于本發明鑒定獲得的化合物63的不同的鹽：
[0067]-差不掃描量熱法分析(DSC)
[0068] DSC分析記錄在Mettler Toledo DSC822e中。稱重l-2mg樣品，加入到帶針孔蓋的 40yL鋁坩堝中，在氮環境下(50mL/分），以10°C/分的加熱速度，從30°C加熱到300°C。使用軟 件STARe進行數據收集和評估。
[0069] -熱重量分析(TGA)
[0070] 熱重分析記錄在Mettler Toledo SDTA851e中。稱重3_4mg樣品（使用microscale MX5，MettIer)，加入到敞口的40yL鋁坩堝中，在氮環境(80mL/分）下，以10 °C/分的加熱速 度，在30 °C到300 °C之間加熱。使用軟件STARe進行數據收集和評估。
[0071]-質子核磁共振(1H-NMR)
[0072]質子核磁共振分析在Bruker Avance 400Ultrashield核磁共振波譜儀中的氖代 氯仿或甲醇中記錄，該核磁共振波譜儀中裝備有用ATM標記的Z-梯度5mm BBO(寬帶觀察)探 針和自動BACS-120自動進樣器。通過在0.7mL的氘化溶劑中溶解2-1 Omg樣品獲得光譜。 [0073]-傅里葉轉換紅外光譜學(FTIR)
[0074]使用Bruker Tensor 27記錄FTIR光譜，該Bruker Tensor 27裝有MKII金門單個反 射ATR系統、作為激發光源的中紅外源和DTGS檢波器。光譜在分辨率為4CHT1的32掃描中獲 得。進行該分析不需要樣品制備。
[0075] 實施例1 4-{2-[5_甲基-1-(萘-2-基)-1Η-吡唑-3-基氧基]乙基}嗎啉(化合物63) 及其鹽酸鹽的合成(例1)
[0076:
[0077」化合物63Π 」以按照之前的甲請W02006/021462中公升的內容進行制備。可以通過 以下步驟獲得其鹽酸鹽：
[0078]化合物63(6.39g)溶于HCl飽和的乙醇中，攪拌混合物幾分鐘，并蒸發直至干燥。殘 留物從異丙醇中結晶。來自第一次結晶的母液通過濃縮進行第二次結晶。兩次結晶一共產 生5.24g(63%)相應的鹽酸鹽(熔點= 197-199°C)。
[0079] 1H-NMR(DMSO-Cl6)Sppm: 10,85(bs，lH)，7,95(m，4H)，7,7(dd，J = 2,2,8,8Hz，lH)，7， 55(m，2H)，5,9(s，lH)，4,55(m，2H)，3,95(m，2H)，3,75(m，2H)，3,55-3,4(m，4H)，3,2(m，2H), 2,35(s,3H)〇
[0080] HPLC 純度：99.8%。
[0081] 使用該方法，獲得的鹽酸鹽為結晶固體，且產率很高。此外，其高熔點對于藥物是 特別方便的，因為其暗示了該產品具有好的物理穩定性。
[0082]從其鹽酸鹽(例1)中抽提化合物63
[0083]本發明中使用的樣品是例1。基底(化合物63)使用CH2Cl 2從例1的堿性水溶液中抽 提(pH>10，使用0.5M的NaOH水溶液），提出橙油。
[0084]化合物63的其它鹽類結晶的一般方法
[0085] 鹽類的制備最初是將甲醇中的ImL 0.107M化合物63的溶液，即先前獲得的橙油 (參見例1)，與甲醇中的ImL 0.107M相應的平衡離子混合。混合物攪拌1小時，并在真空中蒸 發溶劑(Genevac，8mm Hg)，獲得基于所述鹽的油狀物或白色固體。
[0086] 將最初制備獲得的產品在其沸點溫度或最高75°C下溶于最低量的結晶溶劑中。如 果添加4ml溶劑后，鹽沒有完全溶解，則將懸浮液在高溫下攪拌30分鐘，通過熱過濾或離心 分離殘留物。將母液冷卻至室溫，保存24小時。
[0087] 當形成固體時，進行分離(過濾或離心）。如果沒有形成固體，將溶液在冰箱中（4 °C)保存幾天。如果形成固體，則從溶液中分離。如果沒有形成固體，則將溶液在冷凍室中（-2ΓΟ保存幾天。如果形成固體，則從溶液中分離固體。如果在這些操作之后仍然沒有獲得 固體，則將溶液進行蒸發直至干燥。
[0088]所有獲得的固體在真空干燥箱中，40°C(10mm Hg)下，干燥4小時，如果獲得足夠量 的固體，對其進行檢測。其最初的特性通過1H-NMR分析來確定鹽的合成。本發明中使用的溶 劑在表1中列出。
[0089]表1.本發明使用的溶劑
[0090]
[0091] 用于研究化合物63的結晶鹽的酸按照以下標準選擇(表2):
[0092]-酸的?1(&比化合物63(?1(&6.7)的至少低3個單位
[0093]-酸為藥學上可接受的化合物
[0094]雖然選擇的酸類中的一些具有兩個或甚至三個(檸檬酸)酸性位點，原則上，只有 硫酸具有第二個質子酸性，足夠與化合物63形成雙鹽。因此總共可能形成11種不同的鹽。 [0095]表2.選作平衡離子的酸.
[0096]
[0097] 研究化合物63的結晶鹽類的一般策略可以分成三個步驟：
[0098]-步驟1:鹽結晶篩選；
[0099]-步驟2:鹽的優化與表征；
[0100]-步驟3:大規模制備選擇的鹽。
[0101] 首先，使用表2中所示的平衡離子進行結晶篩選，以尋找想要的結晶鹽。使用廣泛 的結晶溶劑(表1)和不同的結晶方法，篩選以小標度（ SCale)(40mg化合物63)來進行。在篩 選過程中，沒有嚴格監控結晶狀態，且使用1H-NMR表征獲得的固體。核磁共振譜學對鹽的形 成提供了很好的觀測，因為鹽的 1H-NMR光譜與酸和堿混合物的光譜有著實質上的不同。可 以觀察到接近于質子化氮的、與氫相關的信號清晰的移動。此外，當酸平衡離子在 1H-NMR中 有特征信號時，其是可以鑒定的，從而確定鹽的化學當量并對鹽純度定性。
[0102] 在第二步中，將所有的結晶鹽在溶劑中放大制備到100-500mg標度從而在篩選步 驟中提供最好的結果。此外，使用適用于工業生產的結晶方法。獲得的鹽使用 1H_NMR、DSC、 TGA和FTIR進行完全的表征。該步驟的目的是，首先設計可控程序來制備選擇出的具有優化 產量的鹽，其次對其進行完全的表征。
[0103] 最后，從化合物63起始，以2-3g的標度，制備選擇出的具有足夠的固態特性(結晶 度和熱穩定性)的結晶鹽。
[0104] 從鹽結晶篩選到大規模制備(步驟1-3)
[0105] 首先，以40mg標度，使用表2中的10種平衡離子對化合物63的結晶進行篩選，10種 溶劑如下:丙酮、乙酸乙酯、氯仿、N，N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、異丙醇、2-丁醇、乙腈和四 氫呋喃。制作步驟以從已知濃度的甲醇溶解制備等摩爾的化合物63和不同的酸平衡離子的 混合物開始。甲醇蒸發后，形成的粗產物是從前述的熱溶劑中結晶出的。根據各種酸和化合 物63混合物的溶解度來使用不同的結晶策略，因此，使用不同的方案來獲得固體。對于一些 酸，混合物不溶于熱結晶溶劑，獲得的是膏狀固體。在另一些情況中，室溫下冷卻溶液，固體 就會結晶，或在4°C或在-18°C幾天后就會形成結晶。最后，在一些結晶的嘗試中，室溫下緩 慢蒸發溶劑后形成固體。在一些情況中，嘗試每個結晶中獲得不止一種固體。
[0106] 從最初的結晶篩選(表3)，可以得出以下的觀測結果：
[0107] -化合物63與延胡索酸和馬來酸獲得的結晶鹽在大部分分析溶劑中都可以獲得。 對于兩種酸平衡離子，可以獲得一些包含溶劑的結晶固體。所有的固體對應于等分子的鹽。
[0108] -等摩爾的化合物63和檸檬酸混合物在大多數分析溶劑中都是易溶的。因此，大部 分固體是在溶劑完全蒸發之后才獲得的。此外，獲得的固體結晶度低或包含明顯量的殘留 溶劑。低結晶固體最有可能來自去溶劑化的溶劑。
[0109] -等摩爾的化合物63和羥基乙酸混合物在大多數分析溶劑中是易溶的。因此，大部 分固體以及一些固體混合物是在溶劑完全蒸發之后才獲得的。
[0110]-化合物63與甲磺酸、L-蘋果酸和丙二酸的結晶鹽僅在一種或兩種高度濃縮的分 析溶劑中獲得。大部分固體在溶劑完全蒸發完之后獲得。 -化合物63與硫酸、甲烷磺酸和L-酒石酸沒有獲得結晶固體。堿與酸的混合物在所 有分析溶劑中都是易溶的，并且在溶劑完全蒸發后，獲得油狀物或非結晶固體。
[0112]
[0113]考慮到這些結果，在另外9種溶劑中進行第二輪結晶篩選。選擇低極性溶劑(醋酸 異丁酯、碳酸二甲酯、氯苯、環己烷、3-戊酮、甲苯、甲基叔丁基醚、二異丙醚)和水從而減少 鹽的溶解度(表4)。
[0114]表4用9種酸平衡離子進行二次結晶篩選的結果
[0116] 從第二次結晶篩選中，可以得出如下觀察結果：
[0117] -雖然等摩爾的化合物63和羥基乙酸混合物不易溶于第二組的溶劑中，但其反應 與第一組結晶十分類似。可以獲得一些對應于固體混合物的固體。固體1僅在溶劑完全蒸發 后才能獲得，且不能完全表征。
[0118] -化合物63與L-蘋果酸、丙二酸和檸檬酸的結晶鹽僅可在一種溶劑中獲得，獲得已 知的固體。
[0119]-化合物63與乙磺酸產生的結晶鹽可在幾種溶劑中獲得，在所有情況下，獲得與初 始結晶篩選不同的新的固體。
[0120]-對應于化合物63與甲磺酸產生的結晶鹽的固體可在甲苯中獲得。
[0121]-在第二輪溶劑篩選中沒有獲得化合物63與硫酸和L-酒石酸的結晶固體。
[0122] 考慮已描述的兩次結晶篩選過程的結果，我們對最佳表征的化合物63與延胡索 酸、馬來酸、甲磺酸、乙磺酸、L-馬來酸和丙二酸的非溶劑化鹽的制備進行優化。優化的放大 試驗從I OOmg化合物63開始。放大方案同樣對延胡索酸、馬來酸、甲磺酸、乙磺酸、L-馬來酸 和丙二酸鹽進行優化。
[0123] 最終，6種選出的平衡離子的鹽的制備放大到2_3g，并被完全表征。本發明的整個 過程概括如下表所述。
[0124] 表5.化合物63的結晶鹽的結晶過程概述.
[0126] 實施例2:化合物63的延胡索酸鹽的制備
[0127] 在最初的篩選過程中在10種不同的溶劑中嘗試獲得延胡索酸鹽的結晶。使用不同 的結晶技術:膏劑、冷卻飽和溶液或在完全蒸發溶劑之后，在除DMF和氯仿外的其他所有溶 劑中獲得對應于鹽的結晶固體。在氯仿中，回收最初的酸，而在DMF中，鹽以橙油形式分離獲 得。獲得兩種非溶劑化物的固體，第一種在甲醇、異丙醇和丁醇中獲得，第二種只在乙醇中 獲得。最終，在丙酮、乙酸乙酯和THF中獲得溶劑化物，并且在乙腈中產生兩種固體的混合 物。
[0128] 選擇不溶結晶固體（原則上是在篩選過程中獲得的任意固體)進行放大實驗。最 初，在乙腈中嘗試進行放大，因為乙腈是呈現結晶產物的溶劑，并且在所述結晶產品中，鹽 是難溶的。雖然鹽類的產率很高(83% )，但是對于放大試驗來說，此過程不是最優的，因為 酸不溶于乙腈并且來自于化合物63的混合物的最終鹽析出物為油狀物，而延胡索酸為固 體，兩者都懸浮在溶劑中。隨后嘗試在乙醇中結晶從而產生純的固體S5。非常令人失望的 是，在乙醇的放大實驗中，產生了低產率的新的結晶差的固體。最終，添加溶于醇（乙醇或異 丙醇）中的酸，在乙腈中進行結晶。當延胡索酸溶于乙醇并且在室溫下進行添加時獲得稍好 的結果(表6)。另一方面，4°C下保存懸浮液兩天獲得混合相(表6，條目4)。
[0129] 表6:化合物63的延胡索酸鹽的放大實驗
[0131 ] 1 -)起始例1。2-)溶解化合物63的溶劑。3_)溶解延胡索酸的溶劑;4-)酸和堿混合 的溫度。5_)獲得最終固體的溫度。6_)觀察所有的實驗。
[0132] 用于制備0.5g標度(表6條目2)的延胡索酸鹽的實驗步驟如下：
[0133] 室溫下將2mL乙醇中溶解的延胡索酸（I53mg，1.32mmo 1)溶液緩慢的添加到溶于 5mL乙腈的化合物63(456mg，1.35mm〇l)的溶液中。可以觀察到產生的黃色溶液并且在在室 溫下攪拌15分鐘。容易地獲得大量的白色固體沉淀物。產生的懸浮液在在室溫下攪拌15小 時。過濾獲得的固體，用ImL乙腈清洗，并在真空環境下（10mm Hg)，45°C干燥6小時，從而使 延胡索酸鹽成為白色固體(350mg，59%)。
[0134]鹽的結構可以很容易地使用1H-匪R光譜進行表征，其與游離堿相比發生了實質上 的變化。對于延胡索酸鹽，來自靠近堿性氮的氫原子的信號（下述分子式中的氫1和2)清晰 地移動到了前場(表7)。能夠觀察到來自遠離氮的氫原子(圖C中的氫3和4)的信號的小的移 動。另外，來自延胡索酸的信號顯示了預期的化學位移0:6.72ppm)。對應于陰離子和陽離 子的信號積累清楚地證實了形成了等摩爾的鹽，而不是二鹽（圖5)。
[0135
[0136]形成鹽之后在1H-NMR光譜中發生移動的氫指不的化合物63的分子式。
[0137] 以10°C/分的熱速率的DSC分析顯示了一個小的吸熱峰，隨后有一個小的放熱峰和 一個強的吸熱信號（圖6)。強信號出現在142°C，對應于固體S5的熔點。小峰出現在131°C，對 應于結晶固體S3的熔點。該峰非常弱，最可能是因為在DSC分析的加熱過程中固體S3部分轉 化成固體S5。因此，對應于剩余的S3的融化的峰離開熔化溫度，易于結晶成S5 (小的放熱 峰）。根據具體的樣品，基本上純的固體S3樣品的熔融峰有不同的強度。很可能是，根據晶體 慣態和結晶大小，S3到S5固-固相轉移發生至不同的延展度。因此，純的S3結晶固體樣品將 顯示如圖6所示形狀的DSC圖。
[0138] 在TG分析中，由于分解作用，可觀察到在120和150°C之間發生0.3%的小的重量損 失，并且從190°C開始發生大幅的重量損失。
[0139] 延胡索酸鹽的特征如下（圖5-8):
[0140] 1H-匪 R(400MHz，d4-甲醇）S:2.35(s，3H)，2.92-3.00(m，4H)，3.17(t，J = 5Hz，2H)， 3.80(t ,J = 5Hz,4H) ,4.44( t, J = 5Hz , 2H), 5.83(s , 1H), 6.72( s , 2H), 7.52-7.62(m, 3H), 7.89-7.96(m,3H),8.00(d ,J = 9Hz,lH)〇
[0141] 1H-NMR檢測殘余溶劑:0.2 % w/w乙腈。
[0142] FTIR(ATR)U：3435,3148,3037,2943,2855,1876,1731,1664,1650,1559,1509, 1488,1446,1394,1372,1314,1236,1186,1166,1133,1098,1081,1047, 1014,981,932, 917，859，816，787，769和748cm-1。
[0143] DSC(10°C/min):兩個吸熱熔峰發生于131和142°C。
[0144] TGA(10°C/min):120-150°C 的 0.3% 的重量損失。分解過程起始于 190°C。
[0145] 實施例3:化合物63的馬來酸鹽的制備
[0146] 在最初的篩選過程中在10種不同的溶劑中嘗試馬來酸鹽的結晶。鹽在所有分析的 溶劑中均很是易溶的。觀察到溶解度在50至200mg/mL之間，除了在乙酸乙酯中鹽具有20mg/ ml的溶解度。在將溶液冷卻至室溫后的所有的溶劑中，或對于氯仿、甲醇和DMF，在溶劑完全 蒸發后，均可獲得結晶固體。檢測四種不同的固體。在大多數結晶中獲得非溶劑化的晶體 相。另外，在THF中產生溶劑化物并且在3個實驗中獲得兩種其他的不能被完全表征的固相。
[0147] 考慮到沸點以及結晶所需的溶劑量(66mg/mL)，選擇異丙醇進行放大試驗和結晶 鹽的合成。最初嘗試冷卻馬來酸和溶于異丙醇的化合物63的混合物，從60 °C至室溫，從而獲 得油狀的鹽(表7)。該油狀物在60°C時再次攪拌幾個小時之后結晶。在更稀釋的狀態下以相 似的方法直接獲得固體鹽。最終，對該過程進行優化，在室溫下，在化合物63的異丙醇溶液 中添加酸的異丙醇溶液之后，直接產生鹽沉淀。
[0148] 表7.化合物63的馬來酸鹽的放大實驗
[0150] 1指的是起始實施例1。
[0151] 用于制備2.5g標度的馬來酸鹽的實驗步驟如下：
[0152] 室溫下將溶于15ml異丙醇的馬來酸溶液(772mg，6.65mm〇l)緩慢地加入溶于15ml 異丙醇的化合物63的溶液(2.26g，6.69mmol)中。很容易地析出大量白色固體沉淀。獲得的 懸浮液在室溫下攪拌2天，然后過濾。獲得的固體用異丙醇清洗，并真空干燥（10mm Hg)，45 °(：下10小時，55°C下6小時，70°C下17小時，從而使馬來酸鹽成為白色固體（2.82g，96% ; 1H-NMR分析包含1.1 %異丙醇）。
[0153] 馬來酸鹽的結構可以用1H-匪R光譜很容易地表征（圖9)，其以與在延胡索酸鹽中 已經詳細描述過的相同的方式變化。另外，馬來酸鹽的信號顯示預期的6.30ppm的化學位 移。對應于陰離子和陽離子的信號積累無疑地證實了形成了等摩爾的鹽，而不是二鹽。
[0154] DSC分析（圖10)，在加熱速率為10°C/min條件下，于對應于熔點的139°C顯示了強 烈的吸熱峰（101J/g)。在TGA(圖11)中觀察到熔點附近有1%的重量損失，可能是由于殘留 異丙醇的損失。在高于150°C時可觀察到清晰的鹽分解。
[0155] 馬來酸鹽的特性如下（圖9-12):
[0156] 1H-NMRHOOMHzj-氯仿）δ :2.35(s，3H)，3.02-3.64(m，6H)，3.99(t，J = 5Hz，4H)， 4.61-4.66(m，2H)，5.70(s，lH)，6.30(s，2H),7.50-7.58(m，3H),7.79-7.82(m，lH),7.84-7.95(m,3H)〇
[0157] 1H-NMR檢測殘余溶劑：I. l%w/w異丙醇。
[0158] FTIR(ATR)U:3043,2853,1707,1619,1599,1557,1487,1445 1374,1357,1340, 1302,1237,1163,1135,1096,1041,1022,930,919,861,817,762and750cm _1〇
[0159] DSC(10°C/min):于 139°C 的吸熱融峰。
[0160] TGA( 10 °C /min): 110-150 °C 的 1.0 % 的重量損失。分解過程起始于150 °C。
[0161] 實施例4:化合物63的甲磺酸鹽的制備
[0162] 在最初的用第一組10種溶劑進行的篩選中，甲磺酸鹽不能結晶。該鹽易溶于所有 分析的溶劑(>200mg/mL)，溶劑完全蒸發后獲得油狀物。在用第二組9種非極性溶劑中嘗試 結晶時，在大多數的實驗中，或者在溶劑蒸發后，重新獲得油狀物，或者油狀鹽沒有溶解，仍 然獲得油狀物。然而，對應于鹽的結晶固體從分離剩余的油狀鹽后在-18°C冷卻的甲苯溶液 中獲得。因此，選擇甲苯進行該鹽的合成的優化以及放大實驗。
[0163] 在第一輪放大實驗中，甲磺酸直接地添加到化合物63的甲苯溶液中，但是該鹽迅 速分散變成油狀物。室溫下該油狀物與溶劑共同攪拌幾小時后結晶。為了促使固體鹽直接 結晶，在鹽的晶種存在的條件下重復該過程。此外，為了改善鹽的顏色，使用之前蒸餾甲磺 酸（18(TC，lmBar) 〇
[0164] 用于制備2.5g標度的甲磺酸鹽的實驗步驟如下：
[0165] 在晶種存在的條件下，室溫下將甲磺酸(0.45mL，6.94mmol)緩慢地加入溶于25mL 甲苯的化合物63 (2.36g，6.98mmo 1)的溶液中。可以很容易地獲得大量白色固體。獲得的懸 浮液在〇°C下攪拌8小時，然后過濾。獲得的固體用甲苯洗滌，并真空干燥（10mm Hg)，45°C下 2天，55°C下6小時，從而使甲磺酸鹽成為白色固體（2.858,98%;?-匪R檢測包含0.6%甲 苯)。
[0166] 甲磺酸鹽可以使用1H-WR光譜很容易地進行表征（圖13 )，其以與在延胡索酸鹽中 已經詳細描述過的相同的方式變化。此外，甲磺酸鹽的信號顯示出2.84ppm的化學位移。
[0167] DSC分析（圖14)，在加熱速率為HTC/min條件下，于對應于熔點的145°C顯示了強 烈的吸熱峰(84J/g)。在TGA(圖15)中觀察到熔點附近有0.5%的重量損失，可能是由于殘留 甲苯的損失。在高于250°C可以觀察到清晰的鹽分解。
[0168] 甲磺酸鹽的特征如下（圖13-16):
[0169] 1H-匪 R(400MHz，d-氯仿）3:2.36(8,3!1)，2.84(8,3!1)，3.03-3.15(111，2!1)，3.54-3.61(m,2H),3.63-3.71(m,2H),3.97-4.05(m,2H),4.10-4.20(m,2H), 4.71-4.76(m,2H), 5·75(s，1H)，7·50-7·59(m，3H)，7·79-7·82(m，1H)，7·84-7·95(m，3H)。
[0170] 1H-NMR檢測殘余溶劑:0 · 58 %w/w甲苯。
[0171] FTIR(ATR)U:3018,2957,2920,2865,2693,2627,1634,1602,1562,1509,1485, 1435,1392,1376,1265,1221,1164,1131,1098,1049,1033,1007,934,914,862,822,772和 759cm-、
[0172] DSC(10°C/min):于 145°C 的吸熱融峰。
[0173] TGA(10°C/min):120-160°C 的 0.5% 的重量損失。分解過程起始于 260°C。
[0174] 實施例5:化合物63的乙磺酸鹽的制備
[0175] 在最初的使用第一組10種溶劑的篩選過程中，乙磺酸鹽只在乙腈中結晶。但是，由 于該鹽易溶于所有分析的溶劑中（>200mg/mL)，僅在溶劑完全蒸發后才能獲得該固體。在其 余的實驗中，溶劑完全蒸發完后獲得油狀物。在第二組9種非極性溶劑中嘗試結晶時，在與 油狀鹽混合的甲基叔丁基醚，醋酸異丁酯和甲苯中獲得三種固體。在這些實驗中，油狀鹽沒 有完全溶解。選擇甲苯進行該鹽的合成的優化和放大實驗。
[0176] 在最初的乙磺酸鹽的放大中，油狀鹽懸浮在熱甲苯中，然后使其冷卻。鹽沒有結 晶，仍保持油狀。在第二輪嘗試中，將乙磺酸緩慢的加入化合物63的甲苯溶液中，冷卻時分 離獲得棕色固體。室溫下重復同樣的步驟時，油狀物與溶劑共同攪拌幾天后很容易出現緩 慢的結晶。為了促使鹽直接結晶，在鹽的晶種存在的條件下，室溫重復同樣的步驟。此外，為 了改善鹽的顏色，使用前蒸餾乙磺酸(200 °C，ImBar)。
[0177] 用于制備2.5g標度的乙磺酸鹽的實驗步驟如下：
[0178] 在晶種存在的條件下，室溫下，將乙磺酸（0.58mL，6.79mmo 1)緩慢的加入到溶于 40ml甲苯的化合物63 (2.29g，6.79mmol)的溶液中。很容易地獲得大量白色固體沉淀物。獲 得的懸浮液在(TC下攪拌12小時，然后過濾。獲得的固體使用甲苯清洗并真空干燥（IOmm Hg)，45 °C下8小時，55 °C下6小時，從而使乙磺酸鹽成為白色固體(2.90g，99 % )。
[0179] 乙磺酸鹽的結構能夠由1H-匪R光譜很容易地鑒定（圖17)，與起始化合物63相比， 乙磺酸鹽的結構以在延胡索酸鹽中已經詳細描述過相同的方式變化。此外，乙磺酸鹽的信 號顯示出1.37和2.93ppm的化學位移。
[0180] DSC分析（圖18)，在加熱速率為10°C/min條件下，于對應于熔點的133°C顯示了強 烈的吸熱峰(85J/g)。在TGA(圖19)中觀察到熔點附近有0.3%的重量損失，可能是由于殘留 甲苯的損失。在高于280°C時可以觀察到清晰的鹽分解。
[0181] 乙磺酸鹽的特性如下（圖17-20):
[0182] 1H-匪R(400MHz，d_氯仿）δ: 1.37(t，J = 7Hz，3H)，2.36(s，3H)，2.93(q，J = 7Hz， 2H)，3.03-3·15(m，2H)，3.55-3.62(m，2H)，3.64-3.72(m，2H)，3.96-4.04(m，2H),4.11-4.21 (m,2H),4.71-4.77(m,2H),5.75(s,lH),7.50-7.59(m,3H),7.79-7.83(m,lH),7.84-7.95 (m，3H)〇
[0183] 1H-NMR檢測殘余溶劑:0 · 35 %w/w甲苯。
[0184] FTIR(ATR)U:3021,2958,2924,2863,2625,2488,1633,1603,1565,1508,1485, 1470,1437,1391,1376,1353,1334,1265,1242,1210,1160,1149,1131,1098,1027,1008, 978,934,916,856,819,776,and 739cm-1O
[0185] DSC(IOtVmin):于 133Γ 的吸熱融峰。
[0186] TGA(10°C/min):110-160°C 的 0.3% 的重量損失。分解過程起始于 280°C。
[0187] 實施例6:化合物63的蘋果酸鹽的制備
[0188] 在最初的使用第一組10種溶劑的篩選過程中，蘋果酸鹽在乙腈和異丙醇中發生結 晶。然而，該鹽在這兩種溶劑中都是易溶的（>200mg/mL)，并且兩種固體僅在完全蒸發后才 能獲得。在其余的實驗中，溶劑完全蒸發后產生油狀物質。在第二組9種非極性溶劑中進行 結晶嘗試時，雖然鹽難溶，但僅在3-戊酮中獲得結晶固體。其它實驗獲得油狀物。考慮到這 些結果，選擇3-戊酮進行該鹽的合成的優化和放大實驗。
[0189] 鹽制備的最初的放大實驗在50至70°C將3-戊酮中溶解的L-蘋果酸溶液添加到同 樣溶于3-戊酮的化合物63的溶液中。使用該步驟在冷卻時分離的鹽有時會成為油狀物。在 與溶劑共同在50°C下攪拌幾小時后該油狀物很容易結晶。結晶鹽的直接產生可以將通過晶 種誘導，其在如下用于制備2.5g標度的蘋果酸鹽的步驟中進行了描述：
[0190] 在晶種存在的條件下，在50°C溫度下，將溶于IOmL 3-戊酮的L-蘋果酸（933mg， 6 · 9 5mmo 1)緩慢的添加至溶于I Om 1的3 -戊酮的化合物6 3 (2 · 3 5 g，6 · 9 5mmo 1)的溶液中。很容 易獲得大量白色固體沉淀物，獲得的懸浮液用另外IOmL的3-戊酮進行稀釋，緩慢冷卻至室 溫，攪拌12小時，并過濾。獲得的固體用3-戊酮清洗，并在真空干燥（10mm Hg)，45°C下15小 時，55°C下6小時，從而使蘋果酸鹽成為白色固體(3.03g，95 % )。
[0191] 蘋果酸鹽的組成可以由1H-匪R光譜很容易地推斷（圖21)，其與起始化合物63相比 發生了顯著的變化，與在延胡索酸鹽中已經詳細描述的方法相同。此外，蘋果酸鹽的信號顯 示出2.59、2.79和4.3 Ippm的化學位移。
[0192] DSC分析（圖22)，在加熱速率為10°C/min條件下，于對應于熔點的125°C觀察到強 烈的吸熱峰（119J/g)。此外，在TGA分析（圖23)中觀察到在熔點以下時不顯示任何重量損 失，表明沒有揮發。殘留溶劑的缺失同樣可以由 1H-NMR光譜證實。
[0193] 蘋果酸鹽的特征如下（圖21-24):
[0194] 1H-匪 R(400MHz，d4-甲醇）δ: 2.35(s，3H) ,2.59((1(1,11 = 16Hz，J2 = 7Hz，1H) ,2.79 (dd J1 = IeHz ,J3 = 5Hz,lH),2.89-2.97(m,4H) ,3.13(t ,J = 5Hz,2H),3.80(t ,J = 5Hz,4H), 4.39(ddJ2 = 7HzJ3 = 5Hz,lH),4.43(t,J = 5Hz,2H),5.83(s,lH),7.52-7.61(m,3H),7.89-7.96(m,3H),8.00(d ,J = 9Hz,lH)〇
[0195] FTIR(ATR)U:3171,3003,2874,1718,1597,1556,1487,1468,1440,1360,1268, 1142,1126,1097,1050,1022,1010,986,950,920,902,863,822,797,770,746和742cm-、
[0196] DSC(10°C/min):于 125°C 的吸熱融峰。
[0197] TGA(10°C/min):由于分解作用起始于150°C的重量損失。
[0198] 實施例7:化合物63的丙二酸鹽的制備
[0199] 在最初的使用第一組10種溶劑進行篩選的過程中，丙二酸鹽僅在異丙醇中結晶。 然而，該鹽易溶于該溶劑(>200mg/mL)，其預示了在放大實驗中存在的問題。因此，嘗試在第 二組非極性溶劑中進行結晶。在第二組實驗中，僅從甲基叔丁基醚中獲得結晶固體，其通過 在高溫下分離大量的油狀鹽后將飽和溶液冷卻至_18°C獲得。
[0200] 考慮到這些結果，丙二酸鹽的放大實驗最初在異丙醇中進行第一次嘗試。非常令 人失望的是，酸和化合物63混合后馬上發生了油狀物分離。油狀物與溶劑共同攪拌幾個小 時后結晶產率很低。當油狀物析出后的結晶過程中添加甲基叔丁基醚時可以提高產率。為 了避免產生最初油狀的鹽并提高產率，對結晶過程進行改進。將溶于異丙醇的丙二酸溶液 添加到溶于甲基叔丁基醚的化合物63的溶液中。使用該方案，鹽直接產生為固體，但仍可觀 察到一些游離的油析。最后，鹽的直接并完全的結晶可以通過晶種獲得，如以下步驟所述： [0 201 ] 0°C下，溶于IOml異丙醇的丙二酸（736mg，7.07mmol)溶液緩慢地加入溶于15ml具 有晶種的甲基叔丁基醚的化合物63(2.38g，7.06mmo 1)溶液中。很容易獲得大量白色固體沉 淀物。獲得的懸浮液首先在室溫下攪拌12小時，隨后在(TC下攪拌2小時，然后過濾。獲得的 固體用甲基叔丁基醚清洗，并真空干燥（IOmm Hg)，45°C下7小時，55°C小6小時，從而使丙二 酸鹽成為白色固體(2.42g，80%)。
[0202]丙二酸鹽的結構可以由1H-匪R光譜很容易地推斷（圖2 5 )，與起始化合物6 3相比， 其以在延胡索酸鹽中進行了詳細描述的相同的方式變化，。此外，丙二酸鹽的信號顯示出 3.23ppm的化學位移。
[0203] DSC分析（圖26)，在加熱速率為HTC/min條件下，于對應于熔點的90°C觀察到強 烈的吸熱峰(85J/g)。在TGA分析(圖27)中，在低于熔點時，未觀察到重量損失。然而，殘留溶 劑(0.2 % w/w異丙醇和0.2 %甲基叔丁基醚)可以通過1H-NMR光譜檢測。
[0204] 丙二酸鹽的特征如下（圖25-28):
[0205] 1H-匪 R(400MHz，d-氯仿）3:2.35(8,3!1)，3.10-3.40(111，4!1)，3.23(8,2!1)，3.40- 3.46(m，2H)，3.97(t，J=5Hz，4H)，4·59-4.64(m，2H)，5.70(s，1H),7.49-7.58(m，3H),7.79- 7.82(m,lH),7.84-7.95(m,3H)〇
[0206] 1H-NMR檢測殘余溶劑:0.2%w/w異丙醇和0.2%甲基叔丁基醚。
[0207] FTIR(ATR)U：3148,3027,2942,2857,1718,1621,1599,1561,1488,1443,1374, 1343,1308,1260,1165,1135,1097,1080,1046,1022,1011,932,918,863,819和752cm- 1O
[0208] DSC(10°C/min):于 90°C 的吸熱融峰。
[0209] TGA( 10°C/min):由于分解作用起始于100°C的重量損失。
[0210]鹽結晶篩選總結
[0211]嘗試用化合物63與硫酸和L-酒石酸形成的鹽結晶是不成功的，只能獲得油狀物 質。
[0212]其它的鹽，雖然是固態，但與鹽酸鹽合成的實驗部分比較只能通過復雜的合成過 程獲得，或是在特定的實驗條件下才能獲得。另外，經常獲得非晶體固體，而不是使用鹽酸 鹽時獲得的晶體形式。這些弊端暗示了相關的合成過程的放大實驗室很復雜的。
[0213] 在下面表8中總結了本發明涉及的大規模的每種固體鹽的制備的關鍵數據:結晶 度的等級、結晶溶劑、產率和熔點。
[0214] 表8
[0217] ⑷制得兩種結晶（參見實施例1)
[0218] 由上表可以觀察到，鹽酸鹽總能獲得結晶固體，并且產率很好(包含結晶），并且在 其它的鹽中具有高于50°C的熔點，其清楚地暗示了與物理穩定性相關的優點。此外，在比較 TGA分析時，鹽酸鹽有著清晰的曲線，并且沒有檢測到溶劑損失。
[0219] 另外，進行實施例1(ρ027)的一些附加的實驗(熱力學溶解度，藥物代謝動力學）用 于確認該化合物對于藥物用途的適性。
[0220] 實施例8:熱力學溶解度
[0221] pH 7.4和pH 2時熱力學溶解度的一般方案如下所述：
[0222] 厶)?!17.4的熱力學溶解度
[0223] 緩沖液pH 7.4(50mM)
[0224] pH7.4的磷酸鹽緩沖液如下制備：
[0225] -制備 25mM 的 Na2HP〇4.12H20 溶液(對于 IL 水，稱重 8.96g，）
[0226] -制備 25mM 的 KH2P〇4(對于 IL 水，稱重 3.4g)。
[0227] -812ml磷酸二鈉溶液與182ml磷酸鉀溶液混合，檢驗pH為7.4。
[0228] 樣品平衡
[0229] 樣品平衡使用：
[0230] -Eppendorf 的攪拌恒溫混勾器：25 °C 1250rpm [0231 ]-有pH復合電極的酸度計
[0232] 方案 [0233]問題化合物
[0234] 在HPLC小瓶中裝2mg(-式兩份)進行稱重，加入1ml緩沖液。小瓶在攪拌恒溫混勻 器中維持在25 °C，持續24小時。然后4000rpm離心15分鐘。
[0235] 使用玻璃移液管收集獲得的上層，并轉移到HPLC瓶中。再次離心，將注射器設置在 2.7mm高度。
[0236] 標準樣品（一式兩份）
[0237] 溶液 A: 5ml 甲醇中 2mg (400ug/ml)
[0238] 溶液B:用甲醇將Iml溶液A稀釋到IOml (40ug/ml)
[0239] 溶液C:用甲醇將5ml溶液B稀釋到50ml (4ug/ml)
[0240] 溶液D:用甲醇將4ml溶液C稀釋到IOml (1.6ug/ml)
[0241] 溶液E:用甲醇將5ml溶液D稀釋到25ml (0 · 32ug/ml)
[0242] 注入10μ1所有制備的溶液，以更稀釋的標準品起始。同樣注入空白，來檢測是否有 污染。
[0243 ] 繪制了標準校準曲線(參見圖29)。Y =面積y X=yg注射標準品
[0244] 注入10μ1問題化合物溶液，一式兩份，并插入在標準曲線（參見表9、10、11以及下 述實施例）的平均峰面積(如果可以計量）
[0245] 色譜條件
[0246] -柱體:XBridge C18(或類似的）2·5μπι 4.6X50mm
[0247] -溫度：35 Γ
[0248] -流動相:ACN/碳酸氫銨IOmM。
[0249] -梯度:0-3 · 5分鐘：從 15 % ACN到95 % ACN
[0250] 3.5-5 分鐘：95% ACN
[0251] 5-6 分鐘：95a 15 % ACN
[0252] 6-8 分鐘：15%ACN
[0253] -流速：1.5ml/min
[0254] -檢測:在紫外線最大吸收值附近
[0255] B)pH 2的熱力學溶解度
[0256] 之前的過程用0.OlN HCl完成。
[0257] 實施例1的熱力學溶解度
[0258] 根據描述的過程，獲得227μg/ml(pH=7.4)。參見圖29的相關圖示。
[0259] 表 9
[0260] 校準 [0261] 峰:樣本
[0267] 表11
[0268] 樣品
[0269] 樣本：ρΗ7·4

[0271] 實施例9:藥物代謝動力學參數Cmax和AUC
[0272] 檢測在Wistar Hannover大鼠中單次口服施用25mg/kg的實施例1 (化合物63)的藥 物代謝動力學。為此，在不同的時間點收集血漿樣品，并使用帶有熒光檢測的HPLC(高壓液 相色譜法)進行分析。
[0273] 樣品獲得
[0274]該實驗中使用兩組。組1接受賦形劑，組2接受25mg/kg的實施例1，給藥體積為 10mL/kg〇
[0275] 在以下時間點從眼部后區取出血樣:給藥前，15分鐘、30分鐘、1小時、1.5小時、2小 時、3小時、4小時、5小時、6小時、8小時和24小時。血液隨后轉移到包含肝素的塑料管中。4 °C 下約3000rpm離心10分鐘獲得血漿。將這些血漿樣品進行標記并在約-65°C凍存直到進行分 析。
[0276] 樣品分析
[0277] 使用之前確定的分析方法對樣品進行分析。簡言之，大鼠血漿樣品在室溫下解凍， 并在約4°C下，以3000rpm離心10分鐘。將300μ1血漿樣品放入小瓶中，并用30μ1內標工作溶 液封閉。將小瓶加蓋并完全混合。
[0278] 以下固相提取法用于提取實施例1。
[0279] 1 ·柱體用甲醇活化1分鐘，以1 · 5ml/min。
[0280] 2 ·柱體用水活化2分鐘，以1 · 5ml/min。
[0281] 3.裝有水的柱體中裝載樣品(80μ1) 1.5分鐘，以1.0 ml/min。
[0282] 4.用水/ACN(90/10，v/v)沖洗30s，以1.5ml/min。
[0283] 5 ·用流動相洗脫樣品1分鐘，以0 · 5ml/min。
[0284] 6.用水和甲醇清洗柱體和毛細管。
[0285] 室溫下，樣品隨后進行色譜分析，使用20mM pH為3的磷酸鉀和乙腈(70-73% )A和 (30-27%)B(v/v)的混合物作為流動相。使用的流速為0.5ml/min，分析時間在17分鐘左右。
[0286] 對應于實施例1的峰值以及其內標通過熒光檢測在260nm的激發波長和360nm的發 射波長進行定量。其余的參數為:響應時間：>0.2分鐘(4s標準)和PMT增益8。
[0287] 藥物代謝動力學參數
[0288] 藥物代謝動力學參數從平均血漿水平曲線中獲得，通過使用軟件程序WinNonlin 專業版5.0.1進行非間隔動力學來獲得。
[0289] 頂點血漿濃度值(Cmax)和達到所述濃度的時間（Uax)可以直接從實驗數據中獲得。 消除常數(k el)由曲線的最后階段的線性回歸計算(濃度比時間的log值）。消除半衰期(t1/2) 由表達式ti/2 = 0.693/kei確定。通過梯形法計算低于曲線的血衆水平的面積與從0至Ij最后確 定的時間的比值(AUCo-t)。計算低于曲線的血漿水平的面積與從0到無窮大的時間的比值 (AUCo-〇〇)，使用表達式AUCq^o=AUCq-t+Ci ast/kei，其中Ciast指的是最后一次測量的血漿濃度。 [0290]實施例1的藥物代謝動力學參數Cmax和AUC
[0291 ]根據描述的方案得到Cmax: 1152 · 8ng/ml，AUC〇-t: 1218 · 4ng · h/ml 以及AUCo-〇〇: 1249.6ng.h/ml。參見圖30所示的相關圖示。
[0292]在最后兩個測試中（溶解度和藥物代謝動力學)獲得的結果證實鹽酸鹽對于化合 物63的相關制劑和臨床研究來說是更優的鹽。
【主權項】
1. 4-[2-[[5-甲基-1-(2-萘基)-1Η-吡唑-3-基]氧基]乙基]嗎啉的鹽酸鹽。2. -種制備根據權利要求1所述的鹽酸鹽的方法，包括： a) 混合4-[2-[ [5-甲基-1-(2-萘基）-1Η-吡唑-3-基]氧基]乙基]嗎啉與包含鹽酸的溶 液，以及 b) 分離獲得的鹽酸鹽。3. -種包含根據權利要求1所述的鹽酸鹽的藥物組合物。4. 根據權利要求1所述的鹽酸鹽在制備治療和/或預防〇受體介導的疾病或癥狀的藥物 中的用途。5. 根據權利要求4所述的用途，其中〇受體介導的疾病或癥狀選自：腹瀉；脂蛋白紊亂； 偏頭痛;肥胖;關節炎;高血壓;心律不齊;潰瘍;學習、記憶力和注意力不足;認識障礙;神經 退行性疾病;脫髓鞘疾病;藥物和化學物質成癮，所述化學物質包括古柯堿、安非他明、酒精 和尼古丁;遲發性運動障礙;缺血性中風;癲癇癥；中風;緊張;癌癥;精神病癥狀;和自身免 疫疾病。6. 根據權利要求4所述的用途，其中所述〇受體介導的疾病或癥狀是抑郁癥、憂慮癥或 精神分裂癥。
【文檔編號】A61P25/18GK105859624SQ201610172899
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2010年11月25日
【發明人】瑪麗亞羅莎·庫韋爾斯-阿爾蒂森特, 路易·索拉-卡蘭德利, 烏爾·加西亞-科塞羅
【申請人】埃斯特韋實驗室有限公司