本發(fa)明涉(she)及植物保護(hu)，具體來說涉(she)及一種(zhong)成團泛(fan)菌fj2，同時還(huan)涉(she)及該成團泛(fan)菌fj2在防治煙草白(bai)粉病(bing)方面的用途。

背景技術：

1、煙(yan)(yan)(yan)草(cao)白(bai)粉(fen)病(bing)(bing)（tobacco?white?powder）是(shi)煙(yan)(yan)(yan)草(cao)生產(chan)上危害(hai)性很強的(de)病(bing)(bing)害(hai)，致病(bing)(bing)菌為 erysiphe?cichoracearumdc，其寄(ji)主范圍(wei)廣和(he)危害(hai)性強，屬氣(qi)傳真菌性病(bing)(bing)害(hai)，該病(bing)(bing)害(hai)在(zai)漂浮育苗至(zhi)烤煙(yan)(yan)(yan)整個(ge)生育期都有發生。它(ta)在(zai)中(zhong)(zhong)國以華(hua)南、西南和(he)華(hua)中(zhong)(zhong)煙(yan)(yan)(yan)區(qu)最為普(pu)遍(bian)，發病(bing)(bing)株率可達100%，發病(bing)(bing)葉率一(yi)般在(zai)10%~20%，嚴重(zhong)的(de)可達80%以上，在(zai)煙(yan)(yan)(yan)葉旺長期，煙(yan)(yan)(yan)草(cao)白(bai)粉(fen)病(bing)(bing)常危害(hai)嚴重(zhong)，給(gei)煙(yan)(yan)(yan)農(nong)造成嚴重(zhong)經(jing)濟損失(shi)。

2、長期(qi)以(yi)來，生(sheng)產(chan)上(shang)主要靠化學防(fang)治(zhi)藥劑(ji)來防(fang)治(zhi)煙草白(bai)粉(fen)病(bing)。20世紀(ji)80年(nian)代(dai)以(yi)來，在(zai)中國(guo)以(yi)多菌(jun)靈為(wei)代(dai)表(biao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)苯(ben)(ben)并咪(mi)唑類(lei)(lei)殺(sha)菌(jun)劑(ji)被用(yong)(yong)(yong)于(yu)白(bai)粉(fen)病(bing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)防(fang)治(zhi)，經過30多年(nian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)應用(yong)(yong)(yong)，許多病(bing)原(yuan)菌(jun)對這類(lei)(lei)藥劑(ji)已經產(chan)生(sheng)了嚴(yan)重(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)性(xing)(xing)。隨后，以(yi)三唑酮、苯(ben)(ben)醚甲環(huan)唑為(wei)代(dai)表(biao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)三唑類(lei)(lei)殺(sha)菌(jun)劑(ji)取(qu)代(dai)了多菌(jun)靈的(de)(de)(de)(de)(de)(de)主導地位；然而(er)(er)，三唑類(lei)(lei)殺(sha)菌(jun)劑(ji)由(you)于(yu)對作物(wu)(wu)安(an)全(quan)(quan)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)問題而(er)(er)使其(qi)應用(yong)(yong)(yong)受到限制(zhi)。以(yi)甲氧基丙烯(xi)酸酯類(lei)(lei)為(wei)代(dai)表(biao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)第三代(dai)化學殺(sha)菌(jun)劑(ji)未被大面積用(yong)(yong)(yong)于(yu)煙草白(bai)粉(fen)病(bing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)防(fang)治(zhi)。由(you)于(yu)煙草白(bai)粉(fen)病(bing)菌(jun)具(ju)(ju)有(you)(you)繁(fan)殖速率高、遺傳變異大和(he)適合度高的(de)(de)(de)(de)(de)(de)特(te)性(xing)(xing),?化學藥劑(ji)對它(ta)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)防(fang)治(zhi)越(yue)來越(yue)困難。微(wei)生(sheng)物(wu)(wu)菌(jun)劑(ji)可(ke)以(yi)與病(bing)原(yuan)菌(jun)競爭營養、空間位點(dian)，誘導植物(wu)(wu)產(chan)生(sheng)抗(kang)病(bing)性(xing)(xing)，其(qi)次生(sheng)代(dai)謝產(chan)物(wu)(wu)對病(bing)原(yuan)菌(jun)具(ju)(ju)有(you)(you)抑(yi)制(zhi)作用(yong)(yong)(yong)、對植物(wu)(wu)具(ju)(ju)有(you)(you)促(cu)生(sheng)作用(yong)(yong)(yong)，且綠色、環(huan)保、安(an)全(quan)(quan)，在(zai)植物(wu)(wu)病(bing)害的(de)(de)(de)(de)(de)(de)防(fang)治(zhi)中具(ju)(ju)有(you)(you)重(zhong)要的(de)(de)(de)(de)(de)(de)應用(yong)(yong)(yong)價值。因此，尋找環(huan)境(jing)友好的(de)(de)(de)(de)(de)(de)、高效(xiao)、安(an)全(quan)(quan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)微(wei)生(sheng)物(wu)(wu)菌(jun)劑(ji)，將其(qi)用(yong)(yong)(yong)于(yu)煙草白(bai)粉(fen)病(bing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)防(fang)治(zhi)具(ju)(ju)有(you)(you)廣闊的(de)(de)(de)(de)(de)(de)發(fa)展空間，同時也是(shi)農(nong)業(ye)安(an)全(quan)(quan)可(ke)持(chi)續發(fa)展的(de)(de)(de)(de)(de)(de)需要。

技術實現思路

1、本發明的(de)目(mu)的(de)在于(yu)克服上述(shu)問題(ti)而提供的(de)一種(zhong)對煙草白(bai)粉病具有(you)較(jiao)好(hao)(hao)的(de)防(fang)治(zhi)效果，且有(you)較(jiao)好(hao)(hao)的(de)預防(fang)作(zuo)用(yong)，環(huan)境友好(hao)(hao)的(de)成團泛(fan)菌fj2。

2、本發明(ming)的(de)(de)另一目的(de)(de)在于(yu)提供該(gai)成團泛菌(jun)fj2在防治煙草白粉病(bing)方面的(de)(de)用途(tu)。

3、本發(fa)明(ming)(ming)的一種成團泛菌(jun)（ pantoea?agglomerans）fj2，其(qi)(qi)形態特(te)征：na培養基(ji)上培養24?小時后產(chan)(chan)生單(dan)菌(jun)落(luo)，菌(jun)落(luo)為(wei)圓形、淺(qian)黃(huang)色(se)、粘稠(chou)、不(bu)透(tou)明(ming)(ming)，革蘭氏陰性(xing)細菌(jun)，以(yi)周生鞭毛運動(dong)，能產(chan)(chan)生黃(huang)色(se)素。兼(jian)性(xing)厭氧(yang)，是具有(you)代(dai)謝和發(fa)酵類(lei)型的化能異(yi)養菌(jun)。最(zui)適溫度30℃。發(fa)酵d-葡萄糖和其(qi)(qi)它糖類(lei)可產(chan)(chan)酸，但不(bu)產(chan)(chan)氣(qi)。該菌(jun)種已于2024年4月24日保藏(zang)在中國典(dian)型培養物保藏(zang)中心（地址(zhi)：湖(hu)北省武漢市武昌珞(luo)珈山(shan)，武漢大學），保藏(zang)號：cctcc?no：m?2024772，名稱為(wei)：成團泛菌(jun)( pantoea?agglomerans)?fj2。

4、（一）成團泛菌(  pantoea?agglomerans)?fj2的分離步(bu)驟：

5、采用(yong)“稀(xi)釋(shi)(shi)分(fen)離法(fa)”稱取(qu)10g煙(yan)草葉片于(yu)潔(jie)凈燒(shao)杯中(zhong)，加(jia)于(yu)90?ml無菌(jun)(jun)水(shui)，磁力攪拌使其充分(fen)混勻，靜(jing)置20分(fen)鐘后吸取(qu)0.5?ml上(shang)(shang)清(qing)液(ye)(ye)于(yu)15×150mm潔(jie)凈試管中(zhong)，添加(jia)4.5?ml無菌(jun)(jun)水(shui)充分(fen)混勻得(de)10-1濃(nong)度母液(ye)(ye)，再(zai)(zai)從稀(xi)釋(shi)(shi)后的試管中(zhong)吸取(qu)0.5?ml上(shang)(shang)清(qing)液(ye)(ye)，再(zai)(zai)加(jia)入4.5?ml無菌(jun)(jun)水(shui)充分(fen)混勻制得(de)10-2濃(nong)度溶液(ye)(ye)，依次稀(xi)釋(shi)(shi)至10-9不同濃(nong)度的土(tu)壤溶液(ye)(ye)待(dai)用(yong)。分(fen)別吸取(qu)上(shang)(shang)述不同濃(nong)度土(tu)壤溶液(ye)(ye)100?μl，均勻涂(tu)布于(yu)培(pei)養(yang)細菌(jun)(jun)的na平板上(shang)(shang)，28℃黑暗培(pei)養(yang)，待(dai)細菌(jun)(jun)長出(chu)后挑取(qu)單菌(jun)(jun)落純化。

6、（二）培養基：

7、牛肉(rou)膏蛋(dan)白(bai)(bai)胨固體培養基（na）：牛肉(rou)膏3g，蛋(dan)白(bai)(bai)胨10g，瓊脂粉16g，水1000ml，ph6.8～7.2。

8、牛肉膏蛋白(bai)胨液體(ti)培養基（nb）：牛肉膏3g，蛋白(bai)胨10g，水1000ml，ph?6.8～7.2。

9、（三）菌種(zhong)的保種(zhong)和傳代：

10、用18×180?mm的試管，盛na培養(yang)基9?ml，做成斜(xie)面，接種(zhong)(zhong)細菌，28℃培養(yang)2-3天，置4℃保存(cun)，3個月(yue)轉種(zhong)(zhong)一次。

11、將純化后的(de)(de)細菌(jun)(jun)(jun)在na培養基上(shang)劃線培養，待細菌(jun)(jun)(jun)長(chang)出后挑(tiao)出單菌(jun)(jun)(jun)落(luo)，用滅菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)牙簽將細菌(jun)(jun)(jun)單菌(jun)(jun)(jun)落(luo)挑(tiao)至裝有(you)5?ml?nb培養基的(de)(de)試管(guan)（15×150mm）里搖培24h，吸取700?μl菌(jun)(jun)(jun)液至2?ml菌(jun)(jun)(jun)株保存管(guan)中(zhong)(zhong)，再向保存管(guan)中(zhong)(zhong)添加700?μl30%滅菌(jun)(jun)(jun)甘油，置于(yu)-20℃冰柜中(zhong)(zhong)長(chang)期保存。

12、（四）菌種的性態特征(zheng)：

13、該(gai)菌(jun)形成的菌(jun)落(luo)(luo)在(zai)na平板(ban)上(shang)，培養(yang)24?小時后(hou)產生單菌(jun)落(luo)(luo)，菌(jun)落(luo)(luo)為(wei)圓形，淺黃色，粘稠，不透明(ming)，革蘭氏陰(yin)性細(xi)菌(jun)，周(zhou)生鞭(bian)毛運動，能產生黃色素(su)。經(jing)細(xi)菌(jun)鑒(jian)定(ding)(ding)手冊(ce)描述，結(jie)合biolog鑒(jian)定(ding)(ding)結(jie)果及16s?rdna序(xu)列(lie)分析結(jie)果，將(jiang)這一菌(jun)株(zhu)記為(wei)成團(tuan)泛菌(jun)?( pantoea? agglomerans)?fj2。

14、（五(wu)）菌種的(de)培養特性(xing)

15、培(pei)養溫度(du)20?~?50℃，最適溫度(du)范圍30?~?37℃；培(pei)養初始ph4.0?~?9.0，最適6.0?~7.0；培(pei)養鹽濃度(du)0.5?~?5%，最佳(jia)0.5%；可培(pei)養碳源有葡萄糖、蔗糖、果(guo)糖、半乳(ru)糖、乳(ru)糖、麥芽糖、纖維二塘、淀粉，其(qi)(qi)中葡萄糖最佳(jia)；可培(pei)養氮源有牛肉膏、蛋白胨(dong)、kno3、nh4no3、(nh4)2so4和nano2，其(qi)(qi)中牛肉膏和蛋白胨(dong)最佳(jia)。

16、本發明(ming)(ming)與(yu)現有(you)(you)(you)技(ji)術(shu)相比，具有(you)(you)(you)明(ming)(ming)顯的有(you)(you)(you)益(yi)效果，從以上(shang)技(ji)術(shu)方案可知：本發明(ming)(ming)經煙草(cao)防治實驗(yan)表明(ming)(ming)：該(gai)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)劑能夠顯著降低由病原菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)煙草(cao)白粉(fen)病菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)引起(qi)的煙草(cao)白粉(fen)病的發生(sheng)，并具有(you)(you)(you)較(jiao)好的預防作用。該(gai)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)劑用濕菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)與(yu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)種保藏(zang)(zang)液配(pei)制而成，菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)體保藏(zang)(zang)液為0.01?mol/l磷酸鹽緩沖液、及?0.001mol/l的tween?40非離子型表面活性劑。該(gai)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)劑可以直接噴霧煙葉。本發明(ming)(ming)是(shi)微生(sheng)物(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)劑，對(dui)環(huan)境友(you)好，完全(quan)沒(mei)有(you)(you)(you)因化學農(nong)藥的使(shi)用所帶來的一(yi)系列問題，有(you)(you)(you)利于(yu)無公(gong)害(hai)生(sheng)產、有(you)(you)(you)機生(sheng)產。

技術特征：

1.一種成團泛菌?(pantoea?agglomerans)?fj2，其(qi)特征在于(yu)：所述菌種的保藏號為cctcc?no：m?2024772。

2.如權利要求1所述(shu)的成團泛菌fj2在防治煙草(cao)白粉(fen)病(bing)方面(mian)的用途。

技術總結
本發明公開了一種成團泛菌及其用途，其形態特征：成團泛菌(Pantoea?agglomerans)FJ2在NA培養基上培養24小時后產生單菌落，菌落為圓形、淺黃色、粘稠、不透明，革蘭氏陰性細菌，以周生鞭毛運動，能產生黃色素。兼性厭氧，具有代謝和發酵類型的化能異養菌。最適溫度30℃，發酵D?葡萄糖和其它糖類可產酸，但不產氣。本發明對煙草白粉病具有較好的防治效果，且有較好的預防作用，環境友好。

技術研發人員：汪漢成,王豐,張興紅,張藝,蔡劉體,孟建玉,陸寧,陳興江,曹毅,陳麗莉
受保護的技術使用者：貴州省煙草科學研究院
技術研發日：
技術公布日：2024/9/19