專利名稱：小刺猴頭多糖藥用成份、其制備方法和以該化合物為活性成份的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發明公開一種小刺猴頭多糖藥用成份，同時提供了其制備方法和以該化合物為活性成份的藥物組合物，屬于中藥有效成份提取及應用技術領域。
背景技術：
本發明所述的小刺猴頭Hericium Caput-medusae(Bull.ex Fr)Pers，是和治療胃潰瘍、慢性萎縮性胃炎的藥物“胃樂新”為同一菌株。“胃樂新”是將小刺猴頭菌經深層發酵、然后發酵液經濃縮后制造而成。由于未經提取，含有多種培養基成份，有效物質成份不清，藥物的質量標準可控性不強，并且藥物中還含有大量的糖分，給糖尿病人的應用帶來諸多不便，其治療應用受到了很大的限制。

發明內容
本發明提供了一種小刺猴頭多糖藥用成份(以下減稱HP)。
本發明進一步提供了從HP中提取有效成分HP I和HP II。
本發明還提供了從小刺猴頭中提取上述物質的制備方法，適用于工業化生產。
本發明進一步提供了以小刺猴頭多糖組份為主要藥物或與其它藥物組方用于慢性萎縮性胃炎、淺表性胃炎、消化性胃潰瘍、十二指腸球部潰瘍、免疫力低下、腫瘤等疾病的治療以及鎮痛、抗炎作用等。
小刺猴頭多糖有效成份的結構式如下HP I分子式 其中，A-1Fuc4-；B-(-1Glc3-)2-；C-(-1Glc6-)3-。HP II分子式 其中，A-(-1Glc3-)2-；B-1Gal6-。
小刺猴頭多糖是通過以下提取方法獲得的方法1以小刺猴頭子實體為原料，用水煎1～3次，每次時間為1～3小時，濾過，合并濾液，濃縮，加入酶0～3g進行酶解反應，調溫45～60℃，PH值5～7，除去蛋白；精濾后加乙醇進行醇沉，最終濃度為70％，過濾收集沉淀，水溶，離心除渣，取上清液醇沉至醇濃度為70％，醇沉2-3次，收集沉淀的小刺猴頭多糖(HP)。
方法2以小刺猴頭為原料，用20％乙醇回流提取3次，每次時間為3小時，合并提取液，減壓濃縮，濃縮液加乙醇至含醇量為80％，醇沉2-3次，靜置24小時，抽濾，沉淀物以無水乙醇適量洗滌，干燥，粉碎成細粉，得小刺猴頭多糖(HP)。
將方法1或方法2所得多糖(HP)水溶后上DEAE-SepharoseCL-6B柱純化，0.1mol.L-1+0.15mol.L-1NaCl常規洗脫，經透析、濃縮、凍干得HP I。再用0.1mol.L-1+4.5mol.L-1NaCl梯度洗脫，經透析、濃縮、凍干得HP II。
按藥劑學方法，可以將本發明的小刺猴頭多糖制備成多種臨床藥物劑型作為慢性萎縮性胃炎、淺表性胃炎、消化性胃潰瘍、十二指腸球部潰瘍、免疫力低下、腫瘤等疾病的治療和鎮痛抗炎的藥物，所說的藥劑是任何一種藥劑學上所說的劑型。其中，口服制劑選自于片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸制劑中的任何一種。
本發明的藥物優選含有1％-99％的小刺猴頭多糖和99％-1％的賦形劑(包括其它配伍的藥物)，優選含有30％-80％的小刺猴頭多糖和70％-20％的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)，最好含有60％-70％的小刺猴頭多糖和40％-30％的賦形劑(包括其它配伍用的藥物)。
本發明的藥物中的輔料是指常規的賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、粘合劑等。本發明藥物中的其它配伍用的藥物，指的是以有效劑量的小刺猴頭多糖為一定的藥物原料，再配伍其它可允許合用的中藥或化學藥品。
下述的藥理實驗證實了小刺猴頭多糖藥物制劑具有治療慢性萎縮性胃炎、淺表性胃炎、消化性胃潰瘍、十二指腸球部潰瘍等疾病和鎮痛等藥理活性表1小刺猴頭子實體有效部位及有效成份對氨水引起的慢性萎縮性胃炎大鼠胃液成份的影響(X±S)

模型組與正常對照組比較△P＜0.05；△△△P＜0.001，給藥組與模型組比較*P＜0.05；**P＜0.01。
由表1結果分析，飲用氨水90天可造成大鼠慢性萎縮性胃炎，造型組與正常對照組比較，胃液中游離酸度降低(P＜0.05)，而各給藥組給藥治療30天后均有不同程度的好轉，使游離酸度及胃蛋白酶消化活性增加，血清胃泌素含量降低。
表2小刺猴頭子實體有效部位及有效成份對氨水引起的慢性萎縮性胃炎大鼠血漿中cAMP及cGMP含量的影響(X±S)

模型組與正常組比較△P＜0.05；給藥組與模型組比較*P＜0.05。由表2結果表明，小刺猴頭子實體無論是有效成份還是有效部位均可以降低cGMP的含量，升高cAMP的含量(P＜0.05)。
表3小刺猴頭子實體有效部位及有效成份對氨水引起的慢性萎縮性胃炎大鼠胃粘膜肌層及胃粘膜肌層厚度的影響(X±Sμm)

模型組與對照組比較△P＜0.05；△△△P＜0.001；給藥組與模型組比較*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。
由表3結果表明，小刺猴頭子實體有效成份及有效部位各組均可明顯抑制胃竇及胃體粘膜的萎縮變薄，與模型對照組比較有非常顯著的差異。
表4小刺猴頭子實體有效部位及有效成份對實驗性萎縮性胃炎病理檢查結果(X±S)

注每只動物(胃竇、胃體)檢驗觀察4個視野，即8只動物觀察32個視野，10只動物觀察40個視野作為最后判斷胃炎程度的結果，其余兩個部位(竇體交界處及前胃、胃腺交界處)每只動物觀察一個視野。
表4結果可證明因服用氨水引發的慢性萎縮性胃炎各給藥組均可使炎癥減輕，幽門螺旋桿菌數量較模型組明顯減少，表明該多糖對實驗性慢性胃炎有明顯的治療作用。
表5小刺猴頭子實體有效部位及有效成份對氨水引起的慢性萎縮性胃炎幽門螺旋桿菌數量的影響(X±S)

模型組與對照組比較△△△P＜0.001給藥組與模型組比較**P＜0.01；***P＜0.001表5結果可證明因服用氨水引發的慢性萎縮性胃炎各給藥組均可使炎癥減輕，幽門螺旋桿菌數量較模型組明顯減少，表明該多糖對實驗性慢性胃炎有明顯的治療作用。
表6小刺猴頭子實體有效部位及有效成份對綜合法造成的萎縮性胃炎大鼠胃液成份的影響(X±S)

模型組與正常對照組比較△P＜0.05；△△P＜0.01給藥組與模型組比較*P＜0.05；**P＜0.01表6結果表明，采用主動免疫和膽汁及熱水灌胃的綜合法造成的萎縮性胃炎模型成立，造模后大鼠胃液游離酸降低，胃蛋白酶活性減弱，血清胃泌素含量明顯升高(P＜0.01)，而給藥一個月后，各給藥組均有不同程度的治療作用，使胃酸及胃蛋白酶活性增強而血清胃泌素含量較模型組降低(P＜0.05，P＜0.01)。
表7小刺猴頭子實體有效部位及有效成份對綜合法造成的萎縮性胃炎大鼠血漿中cAMP及cGMP含量的影響(X±S)

給藥組與模型組比較*P＜0.05；**P＜0.01由表7結果可見，模型組較正常對照組血漿cAMP有明顯的下降趨勢，而對cGMP影響不大，各給藥組(除有效成份組外)血漿cAMP均較模型對照組升高，尤其是小刺猴頭子實體有效部位高、中劑量組明顯使血漿cAMP含量升高(P＜0.01，P＜0.05)。
表8小刺猴頭子實體有效部位及有效成份對綜合法造成的萎縮性胃炎大鼠胃粘膜層及胃粘膜肌層厚度的影響(X±Sμm)

模型組與對照組比較△△＜0.01；給藥組與模型組比較*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001由表8結果表明，小刺猴頭子實體有效成份及有效部位各組均明顯抑制胃竇及胃體粘膜的萎縮變薄，與模型對照組比較有非常顯著的差異。
表9小刺猴頭子實體有效部位及有效成份對綜合法造成的萎縮性胃炎大鼠的病理檢查結果(X±S)

注每只動物胃竇和胃體各觀察4個視野，即8只動物共觀察32個視野，10只動物則觀察40個視野作為最后判斷胃炎程度的結果，其余兩個部位(竇體交界處及前胃、胃腺交界處)每只動物觀察一個視野。
表9結果可證明綜合法造成的萎縮性胃炎各給藥組均可使炎癥減輕，幽門螺旋桿菌數量較模型組明顯減少，表明該多糖對萎縮性胃炎有明顯的治療作用。
表10小刺猴頭子實體有效部位及有效成份對綜合法引起的慢性萎縮性胃炎幽門螺旋桿菌數量的影響(X±S)

模型組與對照組比較△△△P＜0.001；給藥組與模型組比較*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。
表10結果可證明綜合法造成的萎縮性胃炎各給藥組均可使炎癥減輕，幽門螺旋桿菌數量較模型組明顯減少，表明該多糖對萎縮性胃炎有明顯的治療作用。
表11小刺猴頭子實體有效部位及有效成份對小鼠全胃腸推進功能的影響(X±S)

與對照組比較**P＜0.01；***P＜0.001表11結果可見，各給藥組均非常明顯地增強小鼠胃腸的推進功能(P＜0.01，P＜0.001)。
表12小刺猴頭子實體有效部位及有效成份的鎮痛作用(X±S)

與對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01由表12可見，小刺猴頭子實體有效部位及有效成份有明顯的抑制冰醋酸致小鼠扭體反應。
表13小刺猴頭子實體有效部位及有效成份對小鼠棉球肉芽腫的影響(X±S)

與對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01
表13結果表明，胃樂新與小刺猴頭子實體多糖200mg/kg組均有明顯的抑制小鼠棉球肉芽腫的增生，其它給藥組亦有抑制增生的趨勢。
本發明的積極效果在于藥用成分療效顯著，無毒副作用，服用劑量小，可用于治療慢性萎縮性胃炎、淺表性胃炎、消化性胃潰瘍和十二指腸球部潰瘍或其它原因引起的胃痛、胃酸過多等疾病，并具有鎮痛、抗炎作用。
具體實施例方式實施例1稱取小刺猴頭子實體1Kg，加水20Kg，95℃反復提取3次，每次1小時。合并提取液，過濾，減壓真空濃縮，熱測比重1.04，精濾。加食用乙醇醇沉，最終濃度達70％。過濾，收集沉淀，水溶。離心除渣，取上清醇沉(醇濃度70％)2-3次，收集沉淀—多糖(HP)70g。
實施例2稱取小刺猴頭菌絲體1Kg，加水20Kg，98℃提取3次，每次1小時。合并提取液，過濾，減壓真空濃縮，熱測比重1.04，精濾。加食用乙醇醇沉，最終濃度達80％。過濾，收集沉淀，水溶。離心除渣，取上清醇沉(醇濃度80％)2-3次，收集沉淀—多糖(HP)50g。
實施例3稱取小刺猴頭子實體1Kg，加水20Kg，96℃反復提取3次，每次1小時。合并提取液，過濾，減壓真空濃縮，熱測比重1.06，精濾。加入酶2g，調溫35-60℃，PH值5-7，水解除蛋白。精濾，加食用乙醇醇沉，最終濃度達60％。過濾，收集沉淀，水溶，醇沉反復2-3次，收集沉淀—多糖(HP)70g。
實施例4稱取小刺猴頭菌絲體1Kg，加水20Kg，98℃反復提取3次，每次1小時。合并提取液，過濾，減壓真空濃縮，熱測比重1.02，精濾。加入酶3g，調溫35-55℃，PH值3-5，水解除蛋白，精濾。加食用乙醇醇沉，最終濃度達70％。過濾，收集沉淀，水溶，醇沉反復2-3次，收集沉淀—多糖(HP)50g。
實施例5將實施例1至4任意方法所得的多糖(HP)水溶后上DEAE-Sepharose CL-6B柱純化，0.1mol.L-1+0.15mol.L-1NaCl常規洗脫，經透析、濃縮、凍干得HP I 13.5g或9.6g。再用0.1mol.L-1+4.5mol.L-1NaCl梯度洗脫，經透析、濃縮、凍干得HP II4.7g或3.3g。
實施例6片劑取小刺猴頭多糖(HP)200g，藥用淀粉100g，糊精10g，混合均勻，用適量95％乙醇制粒，經整粒機整粒，壓片，每片300mg，口服，每次1-2片，每日兩次，其它項目應符合中華人民共和國藥典2000版片劑項目有關要求。
實施例7膠囊劑取小刺猴頭多糖(HP)200g，藥用淀粉100g，混合均勻，裝得膠囊1000粒，(每粒重300mg)，口服一日4-6粒。
其它項目應符合中華人民共和國藥典2000版膠囊劑項目有關要求。
實施例8沖劑取小刺猴頭多糖(HP)400g，藥用淀粉2200g，糊精1400g，95％乙醇適量，10目篩制粒，60度干燥，分裝1000袋。口服一次一袋，每日二袋。
其它項目應符合中華人民共和國藥典2000版沖劑項目有關要求。
實施例9片劑取小刺猴頭多糖(HP I或HP II)90g，藥用淀粉160g，混合均勻，用適量95％乙醇制粒，壓片1000片，片重250mg。口服一次兩片，每日二次。
其它項目應符合中華人民共和國藥典2000版片劑項目有關要求。
實施例10膠囊劑取小刺猴頭多糖(HP I或HP II)90g，藥用淀粉160g，混合均勻，裝膠囊1000粒(每粒重250mg)。口服一次兩粒，每日二次。
其它項目應符合中華人民共和國藥典2000版膠囊劑項目有關要求。
實施例11沖劑取小刺猴頭多糖(HP I或HP II)175g，藥用淀粉1750g，精糊1075g，95％乙醇適量，10目篩制粒，60℃干燥，分裝1000袋，口服一次一袋，每日二袋。
其它項目應符合中華人民共和國藥典2000版膠囊劑項目有關要求。
權利要求
1.一種小刺猴頭多糖藥用成份，是通過以下步驟提取的以小刺猴頭子實體包括菌絲體為原料，用水煎1～3次，每次時間為1～3小時，濾過，合并濾液，濃縮，加入0-3g酶，調溫35～60℃，PH值5～7，水解除去蛋白；精濾后加乙醇進行醇沉，最終濃度為70％，過濾收集沉淀，水溶，離心除渣，取上清液醇沉至醇濃度為70％，收集沉淀，得小刺猴頭多糖HP；
2.一種小刺猴頭多糖藥用成份，是通過以下步驟提取的以小刺猴頭子實體包括菌絲體為原料，用20％乙醇回流提取3次，每次時間為3小時，合并提取液，減壓濃縮，濃縮液加乙醇至含醇量為80％，醇沉2-3次，靜置24小時，抽濾，沉淀物以無水乙醇適量洗滌，干燥，粉碎成細粉，得小刺猴頭多糖HP。
3.一種從小刺猴頭多糖HP提取的有效成分HP I，具有以下結構 其中，A-1Fuc4-；B-(-1Glc3-)2-；C-(-1Glc6-)3-
4.一種從小刺猴頭多糖HP提取的有效成分HP II，具有以下結構 其中，A-(-1Glc3-)2-；B-1Gal6-。
5.權利要求3所述的小刺猴頭多糖有效成份HP I，是通過以下步驟提取的將權利要求1或2所得多糖HP水溶后上DEAE-Sepharose CL-6B柱純化，0.1mol.L-1+0.15mol.L-1NaCl常規洗脫，經透析、濃縮、凍干得HP I。
6.權利要求4所述的小刺猴頭多糖有效成份HP II，是通過以下步驟提取的將權利要求1或2所得多糖HP，用0.1mol.L-1+4.5mol.L-1NaCl梯度洗脫，經透析、濃縮、凍干得HP II。
7.權利要求1或2或3或4所述的小刺猴頭多糖藥用成份，在治療慢性萎縮性胃炎、淺表性胃炎、消化性胃潰瘍和十二指腸球部潰瘍或其它原因引起的胃痛、胃酸過多等疾病，并具有鎮痛、抗炎作用的藥物中的應用。
8.用于治療慢性萎縮性胃炎、淺表性胃炎、消化性胃潰瘍和十二指腸球部潰瘍等疾病，并具有鎮痛、抗炎作用的藥物組合物，其中含有治療有效量的HP或HP I或HP II或它們的混合物和藥學上可接受的載體。
9.根據權利要求7、8所述的藥物，其特征在于所說的藥劑是任何一種藥劑學上所說的劑型。
全文摘要
本發明提供一種小刺猴頭多糖，同時提供了其制備方法和以該化合物為活性份的藥物組合物，以小刺猴頭子實體包括菌絲體為原料，用水煎1～3次，每次時間為1～3小時，濾過，合并濾液，濃縮，加入0－3g酶，調溫35～60℃，pH值5～7，除去蛋白；精濾后加乙醇進行醇沉，最終濃度為70％，過濾收集沉淀，水溶，離心除渣，取上清液醇沉至醇濃度為70％，收集沉淀的小刺猴頭多糖；同時提供了以活性小刺猴頭多糖組份為主要藥物或與其它藥物組方，可用于治療慢性萎縮性胃炎、淺表性胃炎、消化性胃潰瘍和十二指腸球部潰瘍或其它原因引起的胃痛、胃酸過多等疾病，并具有鎮痛、抗炎作用。
文檔編號C08B37/00GK1453295SQ0312703
公開日2003年11月5日 申請日期2003年5月21日 優先權日2003年5月21日
發明者張金亭, 周東亞, 黃勇, 李敬軒, 李金花, 于文斌, 趙麗茹 申請人:吉林省生物研究所