一種家禽患h7n9病毒時的處理方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于動物疫情防控領域，具體涉及一種家禽患H7N9病毒時的處理方法。 技術背景
[0002] 禽流感病毒可引起禽類的呼吸器官或全身性感染。高致病性禽流感病毒可以直接 感染禽類，偶爾也能直接或間接感染人類。低致病性禽流感病毒可以經基因突變或基因重 配轉變成高致病性禽流感病毒。高致病性禽流感病毒是在人群中引發流感的一個潛在危險 因素，并會嚴重地威脅人類健康。H7N9禽流感病毒屬于正粘病毒科甲型流感病毒屬，與其他 甲型流感病毒一樣，H7N9禽流感病毒為有包膜分節段的單負鏈RNA病毒。
[0003] 近年來，H7N9禽流感病毒在全球范圍不斷暴發和蔓延，給畜牧業經濟帶來了重大 損失，給人類生命安全造成了嚴重威脅，而且這種威脅在未來仍會繼續存在。在未來相當 長的時期內，撲殺疫區（點）家禽仍將是撲滅禽流感疫情的最直接有效的措施。農業部 《高致病性禽流感疫情處置技術規范》（試行）中對患病禽群的捕殺有密封車輛或密封容器 或密封袋通入二氧化碳氣體室息法和扭頸法。前者需要專用設備和二氧化碳氣源并要逐個 抓活禽，目前基層難于配備、操作并導致塵埃飛揚。后者操作費事，需要耗費大量的人力，而 且一次性短時難于致死，家禽極力掙扎，粉塵飛揚更加嚴重，通過粉塵傳播疫病的風險大大 地增加，不利于捕殺操作人員的生物安全防護。
[0004] 中國專利CN104378992A，提供了 一種用于以人道方式大規模撲殺家禽和對飼養棚 進行滅菌的基于二氧化碳的方法和系統，雖然該方法和系統可行性高，但是該方法需要噴 施液體二氧化碳，對飼養棚進行滅菌需要借助系統通過噴施單獨來滅菌劑來完成，操作繁 瑣，成本比較高。

【發明內容】
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[0005] 本發明為了在家禽患流感病時，及時地切斷病毒源，殺滅病毒，為禽舍消毒，提供 一種家禽患傳染病時的處理方法，能夠一次性短時內致死家禽進而切斷病毒源，通過流感 病H7N9病毒檢測，確認消毒后的禽舍沒有殘留的活性病毒源，達到了對禽舍流感病病毒全 面殺滅的目的。
[0006] 為實現上述目的，本發明操作方法具體如下：
[0007] (1)配制消毒液：消毒劑使用的濃度應是平時消毒濃度的5倍左右，用10%濃度百 毒殺200倍稀釋、2. 5%噴霧靈200倍稀釋或抗毒威2. 5%濃度150倍稀釋，進行噴灑消毒。
[0008] (2)初步消毒：消毒人員進入禽舍前，要洗澡、更衣，穿戴好已消毒過的連體防護 月艮、手套、膠鞋，佩戴N95 口罩。對禽舍消毒要不留死角，用電動常量噴霧器帶禽噴霧消毒， 除塵，提高禽舍相對濕度達70% -75%。消毒人員離開禽舍后，對穿戴過的連體防護服、手 套、膠鞋、口罩以及噴霧器具再次消毒。
[0009] (3)福爾馬林氣體熏蒸：關閉門窗、進氣孔、排氣孔，對所有漏氣孔隙用膠帶粘貼 封堵嚴密，加溫使禽舍溫度達到25-28Γ。按禽舍空間計算福爾馬林和高錳酸鉀的用量：每 立方米用福爾馬林溶液40-42ml，高錳酸鉀21-23g，常水21-23ml。準備容積大于前三者總 容積約5-10倍的陶瓷或者搪瓷容器，先將高錳酸鉀用水化開，而后加入福爾馬林溶液，操 作人員快速離開，密閉熏蒸4-5小時。
[0010] ⑷去除福爾馬林氣體：在禽舍舍內放置氨氣釋放劑快速中和福爾馬林，30分鐘 后，同時打開禽舍門窗通風30-60分鐘，之后就可打開籠具門，撿拾家禽尸體統一進行無害 化處理。
[0011] (5)消毒后H7N9病毒檢測：采集禽舍地面、墻面、籠中、籠架、容器上面的標本，分 別提取樣本中的總RNA，用禽流感H7N9病毒檢測試劑盒檢測，檢測樣本中沒有殘留流感病 毒后，方可再次啟用禽舍進行家禽養殖。
[0012] 所述的步驟（4)氨氣釋放劑為每立方米用氯化銨5g，生石灰IOg, 75-80 °C熱水 l〇ml，混合后放入容器中即可產生氨氣。
[0013] 所述的步驟（5)采集禽舍地面、墻面、籠中、籠架、容器上面的標本為家禽濕容糞 便，家禽飲用水，地面污水，未干涸血漬，提取總RNA的方法為常規Trizol法，禽流感H7N9 病毒檢測試劑盒為設計有特異性探針的熒光定量RT-PCR檢測試劑盒，試劑盒為購買禽流 感H7N9病毒檢測專業試劑盒。
[0014] 本發明具有如下優點和有益效果：該方法能夠有效地適用于對家禽群患流感病后 及時處理，在滅菌殺毒處理家禽的同時，對禽舍也起到了消毒霉菌的目的。操作方法規范， 對規模養殖戶與散養戶都具有安全可靠、成本低、勞動強度小，并且對消毒后禽舍環境進行 了流感病毒的檢測，確保了養殖安全問題。
【具體實施方式】
[0015] 以下通過具體實施例對本發明作進一步說明，但是本發明所保護的權利范圍不僅 限于以下實施例。
[0016] 實施例1
[0017] 本實施例對已經患H7N9病毒的雞，利用一種家禽患H7N9病毒時的處理方法進行 處理，包括以下步驟完成：
[0018] (1)配制消毒液：消毒劑使用的濃度應是平時消毒濃度的5倍左右，用1抗毒威 2. 5%濃度150倍稀釋，進行噴灑消毒。
[0019] (2)初步消毒：消毒人員進入禽舍前，要洗澡、更衣，穿戴好已消毒過的連體防護 月艮、手套、膠鞋，佩戴N95 口罩。對禽舍消毒要不留死角，用電動常量噴霧器帶禽噴霧消毒， 除塵，提高禽舍相對濕度達70%。消毒人員離開禽舍后，對穿戴過的連體防護服、手套、膠 鞋、口罩以及噴霧器具再次消毒。
[0020] (3)福爾馬林氣體熏蒸：關閉門窗、進氣孔、排氣孔，對所有漏氣孔隙用膠帶粘貼 封堵嚴密，加溫使禽舍溫度達到28°C。按禽舍空間計算福爾馬林和高錳酸鉀的用量：每立 方米用福爾馬林溶液42ml，高錳酸鉀21g，常水23ml。準備容積大于前三者總容積約10倍的 陶瓷或者搪瓷容器，先將高錳酸鉀用水化開，而后加入福爾馬林溶液，操作人員快速離開， 密閉熏蒸5小時。
[0021] (4)去除福爾馬林氣體：在禽舍舍內放置氨氣釋放劑快速中和福爾馬林，氨氣釋 放劑為每立方米用氯化銨5g，生石灰10g，80°C熱水10ml，混合后放入容器中即可產生氨 氣。30分鐘后，同時打開禽舍門窗通風60分鐘，之后就可打開籠具門，撿拾家禽尸體統一進 行無害化處理。
[0022] (5)消毒后流感病毒檢測：采集禽舍地面、墻面、籠中、籠架、容器上面的標本為家 禽濕容糞便，家禽飲用水，地面污水，未干涸血漬，常規Trizol法分別提取樣本中的總RNA， 用設計有特異性探針的熒光定量RT-PCR試劑盒檢測樣本中沒有殘留禽流感H7N9病毒后， 再次啟用禽舍進行家禽養殖。
[0023] 實施例2
[0024] 采集禽舍籠中家禽濕容糞便（Cl)、家禽槽中家禽飲用水（C2)、籠中未干涸血漬 (C3)，禽舍地面污水（C4)，用常規Trizol法，提取樣本中的總RNA，由表一。
[0025] 表一樣本總RNA提取質量分析
[0028] 注：" + "表示經I. 0 %瓊脂糖凝膠電泳檢測有條帶。
[0029] 有18S和28S兩條帶說明RNA溶解充分，完整性良好，沒有降解。NAN0DR0P2000C 微量分光光度計測定樣品0D260/0D280在2. 0左右，無 DNA、蛋白質以及其他小分子，符合檢 測要求。
[0030] 選用上海輝睿生物科技有限公司的one stepRT-PCR Master Mix，Code :Q40101， 按說明書操作反應體系為25μ1，其中2X0ne St印RT-PCR Reaction Buffer7.5ul，脫氧 三磷酸核苷5ul，DNA聚合酶4U，MMLV逆轉錄酶200U，RNA酶抑制劑20U，上游引物與下游引 物（10 μ mol/L)各 1 μ 1，探針（10 μ mol/L) 0. 5 μ 1，樣本模板RNA 2-3 μ 1，反應體系中 MgCl2 濃度為5mmol/L (凈含量為1. 25 X 10 4mmol) DEPC水補足25 μ 1。
[0031] 用Rotor-Gene6000熒光檢測系統進行檢測，反應參數為：反應條件為50°C 30min， 95°C 5min進行逆轉錄，然后95°C 10s，55°C 30s，在55°C進行單點熒光檢測，共進行40個循 環，可獲得最低Ct值，進行數據分析。
[0032] 表二樣本中禽流感H7N9病毒檢測結果
[0033]
[0035] 實施例2,表二表面，采集禽舍籠中家禽濕容糞便（Cl)、家禽槽中家禽飲用水 (C2)、籠中未干涸血漬（C3)，禽舍地面污水（C4)，熒光檢測系統進行檢測，Ct值為0,對照禽 流感H7N9病毒3次重復都有Ct值，說明，采集禽舍籠中家禽濕容糞便（Cl)、家禽槽中家禽 飲用水（C2)、籠中未干涸血漬（C3)，禽舍地面污水（C4)中無 H7N9病毒存在，達到了預期的 效果。
【主權項】
1. 一種家禽患H7N9病毒時的處理方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 配制消毒液：消毒劑使用的濃度應是平時消毒濃度的5倍左右，用10%濃度百毒殺 200倍稀釋、2. 5%噴霧靈200倍稀釋或抗毒威2. 5%濃度150倍稀釋，進行噴灑消毒； (2) 初步消毒：消毒人員進入禽舍前，要洗澡、更衣，穿戴好已消毒過的連體防護服、手 套、膠鞋，佩戴N95 口罩。對禽舍消毒要不留死角，用電動常量噴霧器帶禽噴霧消毒，除塵， 提高禽舍相對濕度達70% -75%。消毒人員離開禽舍后，對穿戴過的連體防護服、手套、膠 鞋、口罩以及噴霧器具再次消毒； (3) 福爾馬林氣體熏蒸：關閉門窗、進氣孔、排氣孔，對所有漏氣孔隙用膠帶粘貼封堵 嚴密，加溫使禽舍溫度達到25-28Γ。按禽舍空間計算福爾馬林和高錳酸鉀的用量：每立方 米用福爾馬林溶液40-42ml，高錳酸鉀21-23g，常水21-23ml。準備容積大于前三者總容積 約5-10倍的陶瓷或者搪瓷容器，先將高錳酸鉀用水化開，而后加入福爾馬林溶液，操作人 員快速離開，密閉熏蒸4-5小時； (4) 去除福爾馬林氣體：在禽舍舍內放置氨氣釋放劑快速中和福爾馬林，30分鐘后，同 時打開禽舍門窗通風30-60分鐘，之后就可打開籠具門，撿拾家禽尸體統一進行無害化處 理； (5) 消毒后H7N9病毒檢測：采集禽舍地面、墻面、籠中、籠架、容器上面的標本，分別用 常規Trizol法提取樣本中的總RNA，用禽流感H7N9病毒檢測試劑盒檢測，檢測樣本中沒有 殘留流感病毒后，方可再次啟用禽舍進行家禽養殖。2. 根據權利要求1所述的一種家禽患H7N9病毒時的處理方法，其特征在于步驟（5)采 集禽舍地面、墻面、籠中、籠架、容器上面的標本為家禽濕容糞便，家禽飲用水，地面污水，未 干涸血漬。
【專利摘要】本發明公開了一種家禽患H7N9病毒時的處理方法，具體是通過(1)配制消毒液(2)初步消毒(3)福爾馬林氣體熏蒸(4)去除福爾馬林氣體(5)消毒后H7N9病毒檢測，5個步驟完成的。本發明克服了對患病禽群的處理時費事費力，安全性防護不足的問題。利用該方法能夠于對家禽群發病時有效處理患病家禽，安全可靠、操作簡單，成本低、勞動強度小,并且利用該方法可以同時對禽舍消毒，起到事半功倍的效果。
【IPC分類】A61L2/20, A61L2/22, A61L101/32, A01P1/00, A01N35/02, A01N59/16
【公開號】CN105268001
【申請號】CN201510734668
【發明人】岳軍堂
【申請人】岳軍堂
【公開日】2016年1月27日
【申請日】2015年11月3日